果胶酶(pectinase )试剂盒说明书

果胶酶检测
果胶酶（Pectase）是分解果胶的一类酶的总称，广泛分布于高等植物和微生物中，另外在某些原生动物和昆虫中也有发现。

根据其作用底物的不同，可分为果胶酯酶、聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶。

其中果胶酯酶和聚半乳糖醛酸酶存在于高等植物和微生物中，果胶裂解酶存在于微生物，特别是某些感染植物的致病微生物中。

果胶酶是水果加工中最重要的酶，可加速果汁过滤，促进澄清等。

迪信泰检测平台采用生化法检测果胶酶，结合相应的试剂盒，可高效、精准的检测果胶系列物质的变化。

此外，我们还提供其他果胶类的检测服务，以满足您的不同需求。

生化法测定果胶酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关参数（中英文）
3. 图片
4. 原始数据
5. 果胶酶含量/活性信息。

一、实验目的1. 学习果胶酶的提取方法。

2. 探究不同提取条件对果胶酶活性的影响。

3. 测定果胶酶的活性。

二、实验原理果胶酶是一种复合酶，主要包括果胶分解酶、果胶酯酶和果胶酶等。

它们能将果胶分解为低聚果胶、果胶酸和果胶单糖等，从而降低果胶的粘度，提高果汁的澄清度。

本实验通过提取果胶酶，并测定其活性，旨在了解果胶酶的提取方法和活性。

三、实验材料1. 材料：新鲜柑橘皮、硫酸铵、吐温-80、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、葡萄糖标准液、蒸馏水等。

2. 仪器：电子天平、高速离心机、恒温水浴锅、分光光度计、烧杯、量筒、移液器、试管等。

四、实验方法1. 果胶酶的提取（1）将新鲜柑橘皮洗净，去皮，切成小块。

（2）将柑橘皮与蒸馏水按1:10（质量比）的比例混合，置于高速离心机中，以4000 r/min离心10分钟。

（3）取上清液，加入硫酸铵，使硫酸铵的终浓度为0.5 mol/L，置于4℃冰箱中沉淀过夜。

（4）将沉淀物重新溶解于蒸馏水中，加入吐温-80，使吐温-80的终浓度为1%，混匀后置于高速离心机中，以4000 r/min离心10分钟。

（5）取上清液，用0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH 6.0）透析，去除硫酸铵，透析时间为4小时。

（6）透析后的溶液即为果胶酶提取液。

2. 果胶酶活性测定（1）绘制标准曲线：以葡萄糖标准液为参比，采用紫外分光光度法测定葡萄糖浓度，绘制标准曲线。

（2）酶活性测定：取1 mL果胶酶提取液，加入0.5 mL 0.5%果胶溶液，混匀后置于恒温水浴锅中，在40℃下反应30分钟。

（3）终止反应：向反应体系中加入1 mL 1 mol/L NaOH溶液，混匀。

（4）测定吸光度：用分光光度计测定反应体系的吸光度，根据标准曲线计算葡萄糖浓度。

（5）计算酶活性：根据葡萄糖浓度和反应体系体积，计算果胶酶活性。

五、实验结果与分析1. 果胶酶提取结果通过实验，成功提取了果胶酶，提取液呈淡黄色，说明果胶酶提取成功。

果胶甲酯化程度试剂盒说明书 微量法100T/96S注　意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：植物细胞壁中的果胶是植物初生细胞壁的主要成分，除了起结构支撑、物质运输等作用外，还具有抵抗逆境的作用。

果胶甲酯化程度影响了细胞壁的坚韧程度及其抗性。

测定原理：果胶甲酯键经皂化处理后释放出甲醇，甲醇与2,4-戊二酮反应显色，在412nm 下测定吸光值；同时半乳糖醛酸在70℃下与浓硫酸反应生成5-甲酰基-2-呋喃甲酸，5-甲酰基-2-呋喃甲酸与3,5-二甲基苯酚反应产生有色物质，在450nm 下有最大吸光值。

以甲醇生成量与半乳糖醛酸含量的比值代表果胶甲酯化程度。

自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、酶标仪、96 孔板、恒温水浴锅、蒸馏水、硫酸。

试剂组成和配制：提取液：液体100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体3mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体3mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体3mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体 2.5mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂五：粉剂×1 瓶，4℃避光保存；临用前加入22mL 试剂六充分溶解待用，用不完的试剂4℃避光保存。

试剂六：液体25mL×1 瓶，4℃保存。

试剂七：液体3mL×1 瓶，4℃保存。

试剂八：液体 2.5mL×1 瓶，4℃避光保存。

酶液提取：称取约0.1g 组织，加入1mL 蒸馏水，进行冰浴匀浆。

10000g 4℃离心10min，弃上清，留沉淀。

沉淀中加入1mL 提取液，混匀后90℃水浴2h，冷却至室温，10000g4℃离心10min，取上清待测。

测定操作表：1．甲醇生成量测定：试剂名称（μL）空白管测定管样本50提取液50试剂一25 25混匀，室温静置30min试剂二25 25试剂三20 20混匀，冰浴至紫色褪去，约需要15-30min试剂四20 20水60 60试剂五200 200混匀，60℃反应15min。

货号: QS2628 规格：20样果胶酯酶（pectinesterase，PE）试剂盒说明书电位滴定法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：果胶酯酶属果胶酶系，催化水解果胶中甲氧基生成果胶酸，从而增加果胶在水中的溶解度，广泛存在于高等植物和可以降解细胞壁的细菌和真菌中，起内源调控植物细胞壁上及细胞之间果胶含量的作用，在食品工业中具有及其重要的作用和开发前景。

测定原理：果胶酯酶催化水解果胶分子释放H+，是反应体系的的pH下降，用碱液保持体系的pH始终保持在7，通过碱消耗的量反映果胶酯酶的活性。

需自备的仪器和用品：天平、研钵、常温离心机、自动电位滴定仪。

试剂的组成和配制：提取液：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前每瓶加双蒸水100mL充分溶解。

试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加少量蒸馏水于50℃加热溶解，冷却后转入1L容量瓶，用蒸馏水定容。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加少量蒸馏水溶解，转入1L容量瓶，用蒸馏水定容。

样品处理：将组织样品捣碎，按照样品质量(g)和提取液体积(mL)为1: 10的比列（建议取约0.5g样品，加入5mL提取液）冰浴研磨，再于8000g、4℃离心15min，取上清液待测。

测定操作：1.试剂一于50℃保温10min，同时打开电位滴定仪，用蒸馏水清洗仪器。

2.用试剂二补液，补液结束后用取50mL试剂一，用试剂二滴定到pH为7。

3.加入待测样品5mL，将滴定延迟时间设为180s，用试剂二滴定至pH为7。

4.滴定结束后记录消耗的试剂二体积V（mL）和滴定至终点所需时间T（S）。

计算公式：酶活定义：每g组织每秒钟消耗NaOH的量定义为一个酶活单位。

PE活性（U/g 鲜重）= V/(T-180)×F/WV：滴定所消耗的NaOH的量，mL；T-180：反应时间，S；F：样品稀释倍数；W：样品质量，g注意事项：1.补液结束后检查输液管中是否有气泡，有气泡要补液清除气泡后再进行样品滴定。

一、实验目的1. 了解果胶酶在果汁生产中的应用及其作用原理。

2. 探究不同果胶酶用量对果汁产量和品质的影响。

3. 确定果胶酶的最适用量，为果汁生产提供理论依据。

二、实验材料1. 材料：苹果泥、果胶酶溶液、蒸馏水、pH试纸、恒温水浴装置、试管、漏斗、滤纸、量筒、试管夹。

2. 试剂：质量分数为2%的果胶酶溶液、体积分数为0.1%的缓冲液。

三、实验方法1. 实验分组：将实验分为6组，分别编号为1～6。

2. 苹果泥处理：取等量的苹果泥，用pH试纸测定其pH值，调节至4.8。

3. 果胶酶溶液添加：向1～6号试管分别加入不同体积的果胶酶溶液（如：0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL）。

4. 恒温水浴：将装有苹果泥和果胶酶溶液的试管放入45℃恒温水浴装置中，保温相同时间（如：30分钟）。

5. 过滤：使用漏斗和滤纸将苹果泥过滤，收集果汁。

6. 果汁体积测量：使用量筒测量过滤得到的果汁体积，记录数据。

四、实验结果与分析1. 实验结果：通过实验，得到以下数据（单位：mL）：组号果胶酶用量（mL）果汁体积（mL）1 0.1 302 0.2 403 0.3 504 0.4 605 0.5 656 0.6 652. 结果分析：（1）随着果胶酶用量的增加，果汁体积逐渐增加。

当果胶酶用量达到0.5mL时，果汁体积达到最大值，之后继续增加果胶酶用量，果汁体积不再增加。

说明果胶酶用量在一定范围内对果汁产量有显著影响。

（2）在实验中，果胶酶用量为0.1mL时，果汁产量较低，可能是因为果胶酶用量不足，未能充分发挥其催化作用。

随着果胶酶用量的增加，果汁产量逐渐提高，但超过0.5mL后，果汁产量增加不明显，可能是因为酶活性已经达到饱和，继续增加果胶酶用量对果汁产量影响不大。

（3）从实验结果可以看出，果胶酶的最适用量为0.5mL。

在此用量下，果汁产量较高，且能保证果汁品质。

五、实验结论通过本实验，我们得出以下结论：1. 果胶酶在果汁生产中具有重要作用，可以提高果汁产量和品质。

果胶酶（pectinase）试剂盒说明书微量法100T/48S注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：果胶酶（pectinase）是一类分解果胶质酶类的总称，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于植物果实和微生物中，主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。

测定原理：果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与DNS试剂反应生成红棕色物质，在540nm有特征吸收峰，测定540nm 处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制：提取液：液体100m L×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体20m L×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前加入7.5mL试剂一，50℃加热溶解，用不完的试剂4℃保存一周。

试剂三：液体20m L×1瓶，4℃避光保存。

酶液提取：1．组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2．细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 细胞培养液等：直接检测。

测定操作表：对照管测定管试剂二（µL）120 12050℃水浴温育5min样本（µL）30煮沸样本（µL）30混匀，50℃水浴反应30min试剂三（µL）150 150沸水浴5min，冰浴冷却终止反应，8000g，4℃，离心10min，蒸馏水调零，取上清于微量石英比色皿或96孔板测定540nm处吸光值A，△A=A测定管-A对照管。

果胶酯酶（PE ）活性检测试剂盒说明书NaOH 滴定法货号：BC2700规格：50T/48S 、100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称50T 规格100T 规格保存条件提取液粉剂×1瓶粉剂×2瓶室温保存试剂一粉剂×1瓶粉剂×1瓶室温保存试剂二液体1.5mL×1支液体3mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体10mL×1瓶液体20mL×1瓶2-8℃保存50T 溶液的配制：1、提取液：临用前加入100mL 蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂4℃避光可保存3个月；2、试剂一：临用前加入100mL 蒸馏水，磁力搅拌50℃加热溶解3小时左右至完全溶解，转移至250mL 容量瓶，蒸馏水定容至250mL ；用不完的试剂4℃可保存8周；（因试剂一较难配制，建议客户提前制备）3、试剂三工作液：临用前根据样本量取出部分试剂三，用蒸馏水稀释16倍得到试剂三工作液备用，现配现用，用不完的试剂4℃可保存1周；100T 溶液的配制：1、提取液：临用前取1瓶加入100 mL 蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂4℃避光可保存3个月；2、试剂一：临用前加入100mL 蒸馏水，磁力搅拌50℃加热溶解3小时左右至完全溶解，转移至500mL 容量瓶，蒸馏水定容至500mL；用不完的试剂4℃可保存8周；（因试剂一较难配制，建议客户提前制备）3、试剂三工作液：临用前根据样本量取出部分试剂三，用蒸馏水稀释16倍得到试剂三工作液备用，现配现用，用不完的试剂4℃可保存1周；产品说明：果胶酯酶（Pectinesterase ，PE ），又称果胶甲基酯酶、果胶氧化酶，广泛存在于植物及微生物中。

果胶是构成植物细胞壁的主要成分之一，而果胶酯酶催化果胶的甲氧酯水解产生果胶酸和甲醇，在植物果实成熟的细胞壁代谢过程中发挥着重要作用，在食品工业中具有极其重要的作用和开发前景。

正文果胶酶的固定化及其活力测定一、目的：果胶酶（EC.3.2.1.15）广泛存在于植物界，参与果实的成熟及其它代谢过程。

在果品加工业中，果胶酶主要用于果汁的澄清和提高榨汁率。

果胶酶的固定化将有助于提高酶的利用率，同时还可减少外源物质对果制品的污染。

果胶酶需求量大，且多为一次性使用，既造成了很大的浪费，又大大提高了产品生产成本。

固定化果胶酶可以重复多次使用，能够减少果胶酶的使用量，节约生产成本。

通过本实验，了解载体的制备方法，掌握酶的固定化原理及方法。

二、原理：本实验固定化方法为共价结合法。

以壳聚糖为载体，通过戊二醛共价交联固定化果胶酶。

壳聚糖是从蟹、虾外壳中提取的一种氨基多糖（α-氨基-1.4-β-葡萄糖多聚物），对人和动物无毒副作用，是一种具有网状结构，机械性能好，化学性质稳定，耐热性好的酶固定化载体材料，特别是壳聚糖分子中含有游离的氨基，通过化学交联剂（如戊二醛）很容易与酶发生间接共价结合，使酶牢固地固定在壳聚糖分子上。

果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸,可用DNS法定量：3,5-二硝基水杨酸与醛糖共热能产生棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和含有呈色氨基化合物的反应液颜色深浅成正比，在540nm下测其吸光度，从而可计算出果胶酶活力。

三、试剂及仪器仪器：冷冻离心机分光光光度计比色皿（8只）摇床水浴箱混合振荡器天平瓷盘药匙剪刀(1把) 记号笔（1支）通风橱吸水纸具塞刻度试管（4支）三角瓶（2支）烧杯（100ml×3个）试管架（1个）试管（6支）量筒（100ml×1个）滴管（16个）离心管(5ml×2个,50ml×1个)移液管架(1个) 移液管(2ml×3个,5ml×1个) 注射器（1支）滴管(1个)吸耳球（1个）洗瓶（1个）玻棒（1个）烧杯(300 ml×5个)试剂：乙酸－乙酸钠缓冲液（0.2mol/L,pH5.0）磷酸缓冲液(0.1mol/L,pH7.0) 3,5－二硝基水杨酸氢氧化钠冰醋酸丙三醇戊二醛无水乙醇浓盐酸果胶酶果胶半乳糖醛酸壳聚糖蒸馏水若干桶四、方法步骤1 载体的制备1.1取壳聚糖4g加入180ml的3%的乙酸中，加20ml甘油搅拌溶解，制得壳聚糖溶液。

1.材料与方法
1.1材料
1.1.1．试剂半乳糖醛酸（分析纯）DNS试剂果胶（sigma公司）novo液态高效果胶酶C6H8O7.H2O Na2HPO4.12H2O
1.1.2．DNS试剂用400ml蒸馏水溶解3.15g 3,5二硝基水杨酸，逐步加入200mlNaHO（0.5mol/l）再加入91g酒石酸钾.4H2O
2.5g苯酚2.5g无水亚硫酸钠，温水浴（不超过48°）不断搅拌，直至溶液清澈透明，用蒸馏水定容至1000ml。

保存在棕色瓶中，与二氧化碳隔绝，储存期6个月
1.1.3．PH5.0磷酸-柠檬酸缓冲溶液：取Na2HPO4.12H2O 71.6g C6H8O7.H2O 21.01g分别定容在1000ml按10.3:9.7混合即可
1.1.4．底物称取1.00果胶（sigma）用PH=5.0缓冲溶液溶解，恒速（600r/min）搅拌1.5小时，用缓冲溶液定容至100ml存放0-4°冰箱里，有效期3天
1.2测定方法：标准曲线制作，精确称取1.0000半乳糖醛酸，用缓冲溶液定容至1000ml获得1mg/ml的半乳糖醛酸溶液取9支25ml刻度试管编号，并按下表加入各种试剂
试剂试管号
室温，加蒸馏水定容至25ml（以1号试管为空白调零）在540nm波长下比色测定吸光度。

以吸光度为纵坐标。

半乳糖醛酸含量为横坐标绘制曲线。

酶活单位1g或1ml酶液在50°的条件下1h分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活单位
酶活测定步骤：1.于甲乙两支25ml试管中分别加入果胶底物5ml。

在50°水浴中预热5min。

2.于甲乙试管中分别加入4ml磷酸-柠檬酸缓冲溶液，甲管中加入1ml。

ENDOZYM ®Pectofruit果啤或果汁脱胶酶制剂技术说明Endozym Pectofruit 产品可直接用于果啤，果汁或预浓缩果汁（糖度12-16°），能够促进果胶降解，从而通过粘度的快速降低，提高果汁澄清效果。

优点：果胶的快速降解：降解时间为1-2小时，取决于用量。

果胶的完全降解，可使以下生产步骤得到优化：a. 使用膨润土、明胶、硅溶胶进行的传统澄清b. 超滤c. 浓度控制：避免可能产生的混浊；产品标准化。

成分和技术特征酶制剂。

从天然黑曲霉菌中提取的微生物。

用量2-5 g/hL.温度：45-50°C。

接触时间：60分钟。

使用说明建议先将其在软化水中稀释至10倍体积，然后再添加到要处理的果啤或果汁中。

添加方法：· 鲜榨果汁：通过压榨机出口的计量添加泵，直接在线添加；· 预浓缩果汁：在注入果汁前添加至储罐。

理想环境：· 最佳pH值：4-5· 最佳温度：45-50°CR e f e r e n c e : E N D O Z Y M _E N D O Z Y M _P E C T O F R U I T _T D S _C N _0290916_C I D E R _C h i n a果啤胶体澄清酶制剂其他信息符合欧盟法规，符合OMS（世界卫生组织WHO）、联合国粮食及农业组织FAO、食品添加剂联合专家委员会JECFA 和美国食品化学法典FCC关于食品级酶制剂的要求。

从天然黑曲霉菌（不含转基因生物，非自身克隆）中提取的微生物。

重金属含量:镉：<0.5毫克/千克汞：<0.5毫克/千克砷：<3毫克/千克铅：<5毫克/千克微生物纯净度：活性中温好氧微生物：<50.000/克肠杆菌：<10/克大肠杆菌：<30/克沙门氏菌：阴性（25克）金黄色葡萄球菌：无（1克）抑菌活性：阴性霉菌毒素：无还原硫酸盐：<30/克储存方法和包装形式存放于低温干燥处，避免阳光直射和高温。