圆二色谱原理与应用共54页
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圆二色谱原理
圆二色谱是一种用于分析物质结构和对手性化合物的光学活性的技术。
它是利用物质对左右旋光的吸收差异来进行分析的,对于手性分子的研究具有非常重要的意义。
在圆二色谱的原理中,主要涉及到两个概念,旋光度和比旋度。
旋光度是指物质溶液对圆偏振光旋转的程度,它是圆二色谱分析的基础。
当圆偏振光通过手性分子溶液时,由于分子的对称性不同,左旋光和右旋光会被不同程度地吸收,从而导致光的旋转。
这种旋转的程度就是旋光度,通常用角度表示。
比旋度是指单位长度内的旋光度,它是一个物质的固有性质,与浓度和物质的性质有关。
可以通过比旋度来判断物质的对手性程度,从而进行对手性分析。
圆二色谱的原理是基于这两个概念的。
当圆偏振光通过样品溶液时,左旋光和右旋光会被不同程度地吸收,从而形成一个圆二色信号。
通过检测这个信号的强度和波长,就可以得到样品的圆二色谱图谱。
在图谱中,不同的吸收峰代表不同的对手性分子,通过比较不同样品的圆二色谱图谱,可以进行对手性分析和结构分析。
圆二色谱的应用非常广泛,特别是在药物研发和生物化学领域。
通过圆二色谱分析,可以确定化合物的对手性纯度,从而保证药物
的有效性和安全性。
此外,圆二色谱还可以用于蛋白质的结构分析,对于研究生物大分子的结构和功能具有重要意义。
总之,圆二色谱是一种非常重要的分析技术,它通过测量物质
对圆偏振光的吸收差异来进行对手性分析和结构分析。
在化学、药
物和生物领域都有着广泛的应用前景,对于推动科学研究和技术发
展具有重要意义。
实验二圆二色光谱一、实验目的1.学习和了解圆二色光谱的原理2.掌握圆二色光谱的的操作和分析二、实验原理1.圆偏振光振幅保持不变,而方向随前进方向随周期性变化,电场矢量绕绕传播方向螺旋前进2.圆二色性当光通过光学活性的物质时,介质对左右旋的圆偏振光的吸收率不同,二者的差值称为该物质的圆二色性(circular dichroism,简称CD)3.圆二色谱图光学活性物质对左右圆偏振光的吸收率之差为Δε=εL-εR是随入射偏振光的波长变化而变化的以Δε或有关量为纵坐标,波长为横坐标得到的谱图称为圆二色谱图,由于Δε绝对值很小,常用摩尔椭圆[θ]度来代替,二者的关系是[θ] =3300Δε当光学活性物质对光没有特性吸收时,在谱图中仅为一条近似的直线,当光学活性物质对光存在特征性吸收时通常有两种情况:当εL>εR得到一个正的圆二色谱图,当εL<εR得到一个负的圆二色谱图三、实验内容1.实验仪器及构造圆二色谱仪的基本构造:2.圆二色谱的应用蛋白质的圆二色性(1)由氨基酸通过肽键连接而成;(2)光学活性基团:肽键、芳香氨基酸残基、二硫桥键;(3)蛋白质有多个结构层次,相同的氨基酸序列,因蛋白质的折叠结构不同,基团的光学活性受到影响。
蛋白质的圆二色特征(1)光学活性基团及折叠结构;(2)250nm以下的光谱区,肽键的电子跃迁引起;(3)250~300nm光谱区,侧链芳香基团的电子跃迁引起;(4)300~700nm光谱区,蛋白质辅基等外在生色基团引起。
3.实验内容分别测定左旋和右旋苯丙氨酸的圆二色光谱三、实验结论可以通过圆二色光谱来分析化合物的手性结构。
从图中可知,左旋异构体对右旋的圆偏振光的吸收要比左旋圆偏振光大;同理,右旋异构体对左旋圆偏振光的吸收要比右旋圆偏振光要大。
故在分析位置样品时,若谱线峰值大于零,则为左旋,反之,则为左旋。
圆二色谱实验报告圆二色谱应用技术一、实验目的1、了解圆二色(CD)光谱的工作原理。
2、学会运用圆二色谱测氨基酸,蛋白质,DNA。
二、实验原理对R和L两种圆偏振光吸收程度不同的现象。
这种吸收程度的不同与波长的关系称圆二色谱,是一种测定分子不对称结构的光谱法。
圆二色光谱是一种差光谱,样品在左旋偏振光照射下的吸收光谱与其在右旋吸收光谱照射下的偏振光之差。
物质的吸收光谱决定物质的颜色。
如果一个物质对左旋偏振光和对右旋偏振光的吸收不同,那么称该物质具有圆二色性(circulardi2chroism,简称CD)。
同样,如果一个物质对于不同方向的线偏振光的吸收不同,那么该物质具有线二色性。
很多各向异性的晶体具有线二色性;而很多生物大分子和有机分子具有圆二色性在分子生物学领域中主要用于测定蛋白质的立体结构,也可用来测定核酸和多糖的立体结构。
圆二色谱仪由光源、单色器、起偏器、圆偏振发生器、试样室和光电倍增管组成。
三、实验步骤1.通高纯氮气45min后,开机2.点亮氙灯:打开主机电源INSTRUMENTPOWER;打开氙灯电源XENONLMAPPOWER;等待LMAPready 灯亮;按红色IGNITELMAP 按钮3.打开主板电源INSTRUMENTPOWER4.打开Thermocubechiller(开关在冷却器左边)5.打开软件,设置参数,选择数据保存设置;选择保存位置;开始实验,保存数据6关软件TerminateCDSProgram 中关闭7关氙灯电源XENONLMAPPOWER8关闭Thermocubechiller9等待10min 后关闭高纯氮气(可先行下述步骤)10清洗比色皿、注射泵及其他附件11光盘刻录数据12关闭主机电源INSTRUMENTPOWER四、试验结果和数据处 180200220240260280300-250-200-150-100-50050D e s c r i p t i o nWavelength(nm)a180200220240260280300-10-55101520D e s c r i p t i o n Wanelength(nm)b图:a为稀释前曲线,b为稀释20倍后曲线在蛋白质分子中,肽链的不同部分可分别形成α-螺旋、β-折叠、β-转角等特定的立体结构。
圆二色光谱基本原理圆二色光谱是一种用于研究物质结构和手性性质的实验技术,它基于光在手性分子中引起的旋光现象。
在圆二色光谱实验中,通过测量右旋圆偏振光和左旋圆偏振光在物质中的吸收差异,可以获取关于物质的结构和手性性质的信息。
下面将详细介绍圆二色光谱的基本原理。
1. 手性分子和旋光现象:手性分子是一类分子具有非对称性的特征,即它们的镜像不能通过旋转和平移重合。
手性分子对圆偏振光具有旋光现象,即它们可以使光的平面偏振方向发生旋转。
2. 圆二色光谱的实验装置:圆二色光谱实验通常使用光源、样品室、检测器和数据采集系统组成的装置。
光源发出的线偏振光通过样品室,样品室中的手性分子吸收其中的一种圆偏振光,而对另一种圆偏振光几乎无吸收。
最后,经过样品室的光被检测器检测,并由数据采集系统记录。
3. 圆二色光谱的工作原理:在圆二色光谱实验中,常用的测量方法是比较样品吸收的右旋圆偏振光和左旋圆偏振光之间的差异。
通过这种方式,可以得到关于样品吸收对不同圆偏振光的响应的信息。
4. 基于贝尔定理的分析方法:圆二色光谱实验中常用的分析方法是基于贝尔定理。
贝尔定理指出,样品吸收的圆二色旋光部分与其物质浓度、光程差和旋光率之间存在关系。
通过测量样品的圆二色吸收光谱和旋光率,可以推断样品的物质浓度和结构。
5. 圆二色谱图的解读:圆二色谱图通常表示为吸收率(Absorbance)和波长(Wavelength)之间的关系曲线。
谱图中的正峰和负峰对应于样品在不同波长下对右旋圆偏振光和左旋圆偏振光的吸收差异。
这些峰的形状和位置提供了有关物质结构和手性性质的信息。
6. 圆二色谱图的解释:在圆二色谱图中,正峰和负峰的强度和形状提供了关于样品的结构和手性性质的重要信息。
正峰表示右旋圆偏振光被吸收的程度,而负峰表示左旋圆偏振光被吸收的程度。
峰的强度取决于样品的吸收性质,而峰的形状则受到分子结构的影响。
7. 圆二色光谱的应用:圆二色光谱广泛应用于化学、生物化学、药物研发等领域。
圆二色谱样品浓度圆二色谱是一种分析化学技术,用于测量样品中的物质浓度。
它基于圆二色现象,即样品吸收线偏振光时,会在旋光性分子存在时发生旋光现象。
圆二色谱可以通过测量旋光角度来确定样品中旋光性分子的浓度。
下面将详细介绍圆二色谱的原理、方法和应用。
圆二色谱的原理是基于光在介质中传播时,电磁波的振动方向可能发生旋转的现象。
对于具有对显性旋光性分子,它们的分子结构中存在着旋光性中心,可以使光中的电磁波振动方向发生旋转。
这种旋光性分子对偏振光有选择地吸收不同方向的电磁波,导致通过溶液的偏振光的偏振方向发生改变。
圆二色谱实验中,常用的光源是紫外可见光源,例如汞灯或钨灯。
样品通常是溶液,可以通过旋转片使入射光是偏振光,然后传播过样品后,通过旋转片使出射光也是偏振光。
这样,通过旋转片的旋转,可以测量样品对不同偏振方向的光的吸收情况。
圆二色谱的测量是用圆二色谱仪进行的。
圆二色谱仪通常由光源、光栅、单色器、样品室、探测器等部分组成。
光源发出的光经过光栅和单色器分光,然后通过样品室中的样品,进入探测器中进行测量。
探测器会将接收到的光信号转换为电信号,经过处理后,可以得到样品的吸光度和旋光度的数据。
根据旋光度和吸光度,可以计算出样品中旋光性分子的浓度。
圆二色谱在科学研究和工业生产中有广泛的应用。
在生物化学和生物技术领域,圆二色谱可以用于研究蛋白质、核酸、糖等生物分子的结构和性质。
通过测量蛋白质的圆二色谱,可以了解其二级结构(α-螺旋、β-折叠等)和反应过程中的构象变化。
在药物研发中,圆二色谱可以用来研究药物与蛋白质的相互作用,推测药物的运输、代谢和毒性等信息。
在食品行业,圆二色谱可以用于检测食品中的旋光性分子,如蔗糖、氨基酸等。
这些旋光性分子可以用来判断食品的纯度和质量。
在工业领域,圆二色谱可用于研究工业催化剂中有机分子的结构和活性,以及研究环境中的污染物浓度。
此外,圆二色谱还可以用于研究草药的成分和功效,甚至用于酒类的品质鉴定。
圆二色谱测蛋白质结构原理
一、蛋白质的圆二色性
蛋白质或多肽中的主要光活性基团是肽键、芳香族氨基酸残基和二硫键。
当平面圆偏振光的吸收不同时,会产生吸收差异,导致偏振光矢量的振幅差异,圆偏振光变成椭圆偏振光,即蛋白质的圆二色性。
这种圆二色性反映了蛋白质分子中光活性基团的手性分布和构象特征,是研究蛋白质结构的重要手段之一。
二、圆二色谱仪的工作原理
圆二色谱仪通过测量不同波长下蛋白质分子对左旋圆偏振光和右旋圆偏振光的吸收差异来实现对蛋白质结构的分析。
这种差异的大小和方向与样品中手性分子结构的数量和方向有关。
具体来说,圆二色谱仪通过以下几个步骤进行测量:
1.样品准备:将待测蛋白质样品溶解在适当的溶剂中,制成一定浓度的溶液。
2.光学系统设置:在圆二色谱仪中,左旋圆偏振光和右旋圆偏振光分别通过两个独立的通道,并且各自的光强通过光电倍增管进行检测。
3.扫描波长:在一定的波长范围内,连续扫描不同波长的光,并记录左旋圆偏振光和右旋圆偏振光的强度。
4.数据处理和分析:通过比较不同波长下左旋圆偏振光和右旋圆偏振光的强度差异,计算出样品的圆二色性。
进一步的分析可以揭示蛋白质分子中手性基团的数量、分布和构象特征。
总之,圆二色谱是一种非常有用的工具,可以用来研究蛋白质的结构和构象特征。
通过对圆二色谱数据的分析,我们可以了解蛋白质分子的手性分布、柔性、二级结构等信息,从而更好地理解蛋白质的功能和作用机制。
电子圆二色谱原理
电子圆二色谱是一种常用的实验方法,用于研究材料的光学性质和电子结构。
其原理基于旋光效应和傅里叶变换。
首先,我们需要理解旋光效应。
当光通过某些分子或晶体时,由于手性的存在,光线会发生旋转。
这种现象称为光的旋光效应。
旋光效应可以分为左旋光和右旋光,即光线绕其传播方向的轴旋转。
在电子圆二色谱实验中,我们通常使用偏振光。
偏振光是一种具有特定方向的振动光,例如只在水平方向振动的横向偏振光。
当这种偏振光通过材料样品时,被样品的分子或晶体旋光,导致光的偏振方向发生变化。
实验中使用的偏振光由两个互相正交的圆偏振光组成。
一个是左旋偏振光,其旋转方向为逆时针,另一个是右旋偏振光,其旋转方向为顺时针。
这两个偏振光分别被样品吸收或经过样品后产生相位差。
这个相位差与样品在光的作用下电子的吸收、散射以及旋光效应有关。
在电子圆二色谱实验中,我们所测量的是样品对左旋偏振光和右旋偏振光吸收系数的差异,即左旋吸收系数与右旋吸收系数之差。
这个差值可以通过光的强度变化来测量,并转换为圆二色光信号。
通过傅里叶变换分析圆二色光信号,可以得到与材料电子结构有关的信息。
具体来说,通过傅里叶分析可以得到材料的电子
能级分布、能带结构以及电子态密度等信息。
总结来说,电子圆二色谱的原理是基于旋光效应和傅里叶变换,通过测量样品对左旋偏振光和右旋偏振光的差异来获取材料的光学性质和电子结构的信息。
圆二色谱用途
圆二色谱(Circular Dichroism,CD)是一种空间结构分析技术,可以用于研究有机和无机化合物的立体结构、对称性和手性性质。
具体来说,圆二色谱的用途包括:
1.判断物质的手性:通过测量物质对左旋和右旋圆偏振光的吸收或散射差异,判断物质是否具有手性,以及手性的类型。
2.蛋白质结构分析:以蛋白稀溶液为检测对象,制备适宜的蛋白样品是该实验成功的关键。
此外,圆二色谱通常以蛋白稀溶液为检测对象,因此需将蛋白样品完全溶解在缓冲液或溶剂中,使其形成均一、透明的蛋白溶液。
同时,缓冲溶液的离子强度最好不要超过5mM,过强的离子强度可能会对测试结果产生影响。