丙二醛、超氧化物歧化酶和
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氧化应激生物标志物
氧化应激是指细胞内外环境的一系列因素导致细胞内氧化物质
生成过多,进而损伤细胞结构和功能的过程。
氧化应激在许多疾病的发生和发展中都起到了重要作用。
因此,研究氧化应激生物标志物可以为诊断和治疗疾病提供重要的指导。
目前,常见的氧化应激生物标志物包括丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶等。
丙二醛是一种代表性的氧化应激物质,其水平可反映机体氧化应激程度。
超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶是机体内主要的抗氧化酶,其活性和水平可反映机体抗氧化能力。
此外,一些新型的氧化应激生物标志物也逐渐受到研究关注,如氧化还原状态调节蛋白、热休克蛋白等。
这些生物标志物的研究将有助于深入了解氧化应激的机制,以及寻找新的治疗策略。
总的来说,氧化应激生物标志物是研究氧化应激及其相关疾病的重要指标,对于诊断和治疗疾病具有重要意义。
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检测植物提取物的抗氧化活性,哪种方法更快捷?在植物提取物检测项目中,抗氧化活性是重要的评价指标之一。
抗氧化活性评价主要是通过试验了解提取物的抗衰老、抗疲劳、抗炎等生物活性的检测项目。
以槐米为例,由于含有丰富的黄酮、皂苔和苗醇等生物活性物质,槐米被公认为是目前最具有抗氧化活性潜力的农业废弃物之一。
槐米中提取的芦丁,具有良好的抗氧化活性,此外在降血清胆固醵、降血压、降血脂、降血糖和提高免疫力等多方面具有良好的功效。
所以,以槐米为资源开发以芦丁、榔皮素等为代表的抗氧化活性物质可以广泛地应用到食品、保健品和药品工业领域,形成高附加值产品用。
因此,抗氧化活性也就成为评价植物提取物产品开发和质量控制的关键指标之一。
主流抗氧化活性评价方法介绍目前,植物提取物中抗氧化活性评价方法主要根据受试对象可以分为体内法和体外法二大类。
体内方法以丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱昔肽等为指标,测定其含量来评价体内抗氧化活性的高低。
体外抗氧化评价体系则以自由基清除法、氧化还原法为主。
体内方法的优势是更接近人体结果,但一般费时费力,且只能反映某一指标活性的高低。
体外方法则很好地弥补了体内法的缺点。
其中,11-二苯基-2-三硝基苯胧(DPPH)法是应用最广泛的抗氧化测定方法。
必须注意的是,常规的比色皿模式的DPPH测定法将DPPH溶液与样品直接混合,因此检测得到的是样品总的抗氧化活性。
然而,植物提取物原料通常是多元抗氧化活性物质混合物。
当这些物质混合在一起被DPPH法测定的时候,相互之间可能存在抗氧化拮抗或协同的效应,导致检测评估结果偏低或者偏高。
此外,在很多评价任务中,仅仅测定混合物样品的总抗氧化性常规的抗氧化活性评价方法基于DPPH分子与自由基混合后体系的颜色变化,利用紫外-可见分光光度计监测其吸光度值变化可以实现对样品中总抗氧化活性的定量分析。
但必须注意的是,这种抗氧化评价方法有一个固有的缺点:检测选择性差。
更确切地说,当样品中含有两种或者两种以上的抗氧化活性物质的时候,分析结果无法区分每一种物质的抗氧化活性高低。
猪抗氧化指标是评估猪体内抗氧化能力的一种指标,可以反映猪对自由基和氧化应激的应对能力。
以下是常用的猪抗氧化指标:
1.SOD(超氧化物歧化酶):SOD是一种重要的抗氧化酶,能够催化超氧阴离子的歧化反
应,减少自由基的生成。
2.CAT(过氧化氢酶):CAT是另一种重要的抗氧化酶,能够催化过氧化氢的分解,降解
有害的过氧化氢。
3.GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶):GSH-Px是一种谷胱甘肽相关的酶,能够通过还原过
氧化物来保护细胞免受氧化应激伤害。
4.MDA(丙二醛):MDA是脂质过氧化产物的代表,可以作为氧化损伤程度的指标。
较
高的MDA水平可能表示较高的氧化应激水平。
5.T-AOC(总抗氧化能力):T-AOC是衡量体内总体抗氧化能力的指标,包括酶类和非酶
类抗氧化物质。
这些指标可以通过实验室检测方法来测量,用于评估猪体内的抗氧化能力和氧化应激状况。
需要注意的是,具体的参考范围和意义可能会因不同研究或实验目的而有所差异。
机体抗过氧化能力指标
机体抗氧化能力指标是评估生物体对抗氧化应激的能力的指标。
抗氧化能力是指生物体对抗氧化应激的能力,包括清除自由基、修
复氧化损伤、维持氧化还原平衡等方面。
以下是一些常见的机体抗
氧化能力指标:
1. 抗氧化酶活性,包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)等酶的活性。
这些酶能够清
除自由基,减少氧化损伤。
2. 抗氧化物质含量,包括维生素C、维生素E、谷胱甘肽、类
胡萝卜素等抗氧化物质的含量。
这些物质能够中和自由基,减少氧
化损伤。
3. 氧化应激标志物,包括丙二醛(MDA)、羟基自由基(·OH)等氧化应激标志物的含量。
这些标志物的含量可以反映机体的氧化
损伤程度。
4. 抗氧化基因表达,包括抗氧化相关基因(如SOD、CAT、GPx
等基因)的表达水平。
这些基因的表达可以影响抗氧化能力。
5. 细胞膜的稳定性,包括细胞膜的流动性、渗透性等指标,稳定的细胞膜可以减少氧化损伤。
综上所述,机体抗氧化能力指标涉及到酶活性、抗氧化物质含量、氧化应激标志物、抗氧化基因表达以及细胞膜的稳定性等多个方面,通过综合评估这些指标可以全面了解机体对抗氧化应激的能力。
运动疲劳恢复期不同时相大鼠丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性及相运动疲劳是指由于运动负荷过大而导致的肌肉损伤、体力和精力消耗等症状。
针对运动疲劳产生的不同阶段,进行不同方式的康复,可以有效地促进身体的恢复和防止进一步的损伤。
于是,本文将就运动疲劳恢复期不同时相对大鼠丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性及相600字进行讲解。
1. 运动疲劳初期运动疲劳初期是指运动过程中或运动后几小时内出现的疲劳反应。
在这个时期,大鼠的丙二醛含量会出现升高,这是由于肌肉活动增加了脂肪氧化反应,使生成了大量的丙酮酸,而丙酮酸是由前者通过混合酸酸化和解酸成分制得的,同时也可通过脂肪酸的β-氧化表示,这些代谢产物在缺氧时形成甘油醛。
甘油醛通过水解脱盐成为丙二醛,而丙二醛是肌肉分解后的一种代谢产物,因此在运动疲劳初期其含量会明显升高。
此外,超氧化物歧化酶活性在运动疲劳初期会显著下降,使自由基得不到有效的处理,导致自由基的毒性作用加剧,影响大鼠的抗氧化能力。
2. 运动疲劳中期在运动疲劳中期,大鼠的丙二醛含量逐渐回落,这是由于针对初期的肌肉损伤和创伤反应引起的脂肪氧化已逐渐得到调节。
同时,超氧化物歧化酶的活性开始升高,大鼠的抗氧化能力也逐渐增强。
这一阶段重点是加强体内营养的摄取,尽快修复肌肉损伤和恢复人体机能,避免运动疲劳加剧。
3. 运动疲劳后期在运动疲劳后期,大鼠的丙二醛含量逐渐下降至正常水平,超氧化物歧化酶的活性也逐渐趋于平稳。
但是,此时大鼠已经进入了高负荷状态,并且身体处于一种消耗状态,需要大量的营养物质和能量来填补消耗和恢复的需求。
因此,在这个时期需要通过适当的饮食和锻炼,以及足够的睡眠来恢复身体,以避免身体处于疲劳状态并受到进一步的损伤。
总之,在运动疲劳的不同阶段,大鼠的丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性都会出现不同程度的变化。
对于这些变化,我们应该根据不同阶段的需要进行不同方式的康复,以最大限度地促进身体的恢复,并避免运动疲劳进一步加剧。
1前言1.1黄芪概述黄芪(Milkvetch Root),又称北芪、黄蓍,豆科黄芪属,多年生草本,国家三级保护植物,是我国的主要药材之一。
黄芪株高约为1米,主根深长,肉质,略呈圆锥形,稍带木质,表皮棕褐色,内部浅棕黄色;茎直立,四棱形,上部多分枝;奇数羽状复叶互生,具短柄,全缘,叶面深绿色,叶背被白色长柔毛呈淡绿色。
野生黄芪多长在路旁、山顶、林缘等的地方,也可人工种植干燥向阳的地块,但忌连作,一般在清明前后播种,七月开花,九月结果。
黄芪多为圆柱形直根,表面呈淡棕褐色,有不规则的纵皱纹或纵沟,皮质部黄白较疏松,木质部菊花纹理状,味微甜并稍带有豆腥味。
入药时以根条粗长、空洞小、破皮少,菊花心鲜明者为佳。
一般在春秋两季采挖3年以上的根,因为此时的有效成分最高,然后经初步处理后生用或蜜炙用,或者制成饮片,调剂在中药处方中。
现代也常把黄芪的各种有效成分如皂苷,黄酮,多糖等通过工业手段提取出来,以便于口服和静脉滴注。
在传统中医学上来看,生品黄芪长于益卫固表,脱毒生肌,利尿退肿[1];蜜制黄芪甘温而偏润,长于益气补中,多用于脾肺气虚,食少便溏,气短乏力,也可用于气虚便秘[1]。
另外,现代医学证明黄芪还具有增强机体免疫、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用,是一种具有很大应用潜力的优良药材。
黄芪属于山西道地药材之一,有着巨大的药用价值,但受限于其特殊的生长环境和近年来其生长环境遭到人为的破坏,野生黄芪资远远不能满足实际需要。
而黄芪的栽培近年来面临着种质退化、产量、质量下降等一系列问题,严重制约了黄芪种植业的发展。
因此,加强黄芪的研究和保护,成为我国黄芪产业面临的重要问题。
1.2植物的抗逆性植物生存在自然环境,就难免会受到寒冷、高温、干旱、杂草,病虫害等不良环境的威胁。
这些不良环境会破坏植物的膜系统,造成细胞脱水和膜系统上的酶活性紊乱[13],影响植物与之相关的一系列新陈代谢活动,从而使植物受到伤害甚至死亡。
丙二醛、超氧化物歧化酶和活性氧对2型糖尿病患者胰岛β细胞功能的影响【摘要】目的:探讨2型糖尿病患者胰岛β细胞功能与氧化应激的关系。
方法2013年1月至2014年10月2型糖尿病患者100例为DM组、糖耐量受损的患者55例为IGT组和健康就诊者30例为对照组,测定3组血浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和活性氧(ROS)水平,采用稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素分泌指数(HOMA-β)以及胰岛素敏感指数(ISI)评价胰岛β细胞功能。
结果: GDM组患者MDA、ROS 、OMA-IR、HOMA-IR水平明显高于IGT组和对照组,IGT组和对照组HDL-C、SOD、HOMA-β、IS I水平明显低于GDM组,差异均有明显的统计学意义(p<0.05),HOMA-IR与MDA和ROS呈现明显的正相关(p<0.01),与SOD呈现明显的负相关(p<0.01);HOMA-β与MDA和ROS呈现明显的负相关(p<0.01),与SOD呈现明显的正相关(p<0.01),IS I与MDA和ROS呈现明显的负相关(p<0.01),与SOD呈现明显的正相关(p<0.01);Logistic回归分析显示:FINS,MDA,SOD,ROS是影响胰岛β细胞功能的主要因素。
结论:2型糖尿病患者胰岛β细胞功能受损可能与氧化应激有关。
【关键词】:2型糖尿病患者;氧化性应激;胰岛β细胞Influence of MDA 、SOD and ROS on islet beta-cell function of type 2 diabetic patients【abstract】Objective: To explore the relationship between islet beta-cell function and oxidative stress.Methods:The plasma malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD)and reactive oxygen species (ROS) level of 100 patients with type 2 diabetes mellitus (DM group ),55 patients with impaired glucose tolerance(IGT group)and 30 normal persons (control group) were compared from January 2013 to October 2014。
超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)在脑缺血中的作用丙二醛(MDA)含量是反映机体抗氧化潜在能力的重要参数,可以反应机体脂质过氧化速率和强度,也能间接反映组织过氧化损伤程度。
近些年来,有文献报道,缺氧性心肌损伤大鼠心肌中和克山病患者体内氧自由基(0FR)含量增加。
众所周知,缺氧可使心肌组织生成大量氧自由基(0FR), OFR作用于细胞膜上的不饱和脂肪酸使膜脂质产生过氧化反应.进而导致心肌细胞的损伤,并形成脂质过氧化物, 丙二醛(MDA)是体内重要的OFR的代谢产物,能较好地反应组织过氧化程度。
大量自由基产生及其导致的质膜、细胞器膜脂质过氧化反应是脑缺血再灌注损伤的重要致病机制。
有效的自由基清除对脑缺血再灌注损伤起重要的保护作用。
目前已证实甘露醇、巴比妥类、类固醇类激素具有清除自由基的作用。
实验发现脑缺血再灌注组脑皮质MDA较对照组明显增高,而SOD活力明显降低(P<0.01)。
33℃亚低温能降低脑缺血再灌注损伤鼠脑皮质MDA产生,保护SOD活力(P<0.05),且30℃亚低温作用更为显著,其差异具有高度显著性(P 〈0.01〉。
这一结果提示:亚低温能抑制脑缺血再灌注损伤氧自由基的产生,保护SOD的活力超氧化物歧化酶(SOD)是机体内清除O2-的特异性酶。
有三种SOD亚型存在于机体内,SOD1(CuZnSOD),SOD2(MnSOD),SOD3(EC-SOD).SOD1是哺乳动物胞质中主要的酶,SOD2存在于线粒体。
SOD3存在于细胞外。
这三种SOD亚型均可歧化O2-生成H2O2,继而被过氧化物酶(peroxisomal),过氧化氢酶(catalase),或谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase)清除。
近年发展的转基因和基因敲除技术,对在不表达或过表达过氧化物酶动物的进一步研究,证明了自由基和氧化应激在缺血性神经细胞损伤中的作用。
在大鼠全脑缺血及局灶性脑缺血模型中,Chan等[14]发现在SOD1过表达后海马CA1区的神经元死亡比对照组减少50%,SOD1还可以保护氧化应激所导致的血脑屏障损伤和皮质栓塞的形成[15]。
丙二醛MDA、总抗氧化能力、超氧化物歧化酶(SOD)的测定丙二醛MDA测定测试所需仪器设备:可见光分光光度计,可调到95℃左右的恒温水浴箱(或者铝锅内放几个去掉盖子的易拉罐,将罐壁及底部穿数十个孔,以便水的进入,用来代替水浴箱)。
离心机。
100T试剂盒组成与配制:试剂一:液体20mL*1瓶,室温保存.(天冷时会凝固,每次测试前适当水浴加温以加速溶解,直至透明方可应用)。
试剂二:液体12mL*1瓶,用时每瓶加340mL双蒸水混匀,4℃冷藏。
试剂三:粉剂*1支,4℃冷藏。
1.按规范操作方法来配制MDA3号试剂:将1支100T的MDA3号粉剂倒入烧杯内加90℃~100℃的热蒸馏水64mL,充分溶解(溶解过程中可适当加热)。
冷却后加冰醋酸60mL混匀。
2.再将上述配好的MDA3号试剂用50%冰醋酸按2:1进行稀释,用多少配多少。
例如您需要用微量法测MDA需要试剂三为15mL,则可以取上述按规范操作法配好的试剂三10mL加冰醋酸5mL,混匀即可。
配好的试剂避光4℃冰箱冷藏(冰醋酸自备)注:因蒸馏水热胀冷缩,加热过程要蒸发,本应加60mL现多加4mL,冷却后在60mL。
50%冰醋酸的配制是50mL双蒸水加50mL冰醋酸混合而成的。
冰醋酸又名乙酸,一般的医药公司、化剂公司均有售,要购AR级分析纯级的乙酸较好,乙酸含量为99%以上。
用时将粉剂加入到90℃~100℃的热双蒸水60mL中,(在溶解过程中可适当加热),充分溶解后用双蒸水补足至60mL再加冰醋酸60mL,混匀,配好的试剂避光冷藏。
冰醋酸自备。
标准品:10nmoL/mL四乙氧基丙烷5mL*1瓶,4℃冷藏。
测试盒冷藏至少可保存一年。
操作步骤:混匀(摇动几下试管架)旋涡混匀器混匀,试管口用保鲜薄膜扎紧,用针头刺一小孔,95℃水浴(或用锅开盖煮沸40分钟),取出后流水冷却,然后3500~4000转/分,离心10分钟,取上清***,532nm处,1cm光径,蒸馏水调零,测各管吸光度值。
常用作物生理指标测定方法作物生理指标是衡量作物生长发育和生理功能的重要参数,对于研究作物生理特性、生长速度、抗逆性能以及优化农业管理具有重要价值。
下面是一些常用的作物生理指标测定方法:1.叶绿素含量测定:叶绿素是作物光合作用的重要生化指标,常用的方法包括醋酸镁法、乙醇法和非破坏性叶绿素测定仪等。
2.叶片相对含水量测定:叶片相对含水量是反映植物水分状况的指标,常用的方法包括重量法、酒精浸泡法等。
3.叶片相对电导率测定:叶片相对电导率是反映作物膜系统完整性的指标,常用的方法包括浸泡法和浸渍法。
4. 叶片蛋白质含量测定:叶片蛋白质含量是反映植物生长和抗逆性的指标,常用的方法包括Lowry法、Bradford法和Biuret法等。
5.叶片活性氧含量测定:活性氧对植物生长和逆境抗性具有重要影响,常用的方法包括过氧化氢测定法、超氧化物歧化酶测定法和丙二醛含量测定法等。
6.叶片抗氧化酶活性测定:抗氧化酶是植物抵御氧化应激的重要酶系,常用的方法包括超氧化物歧化酶活性测定法、过氧化氢酶活性测定法和过氧化物酶活性测定法等。
7.土壤水分含量测定:土壤水分含量是影响作物生长和产量的重要因素,常用的方法包括烘干法、容量法和驻挠仪测定法等。
8.根系活力测定:根系活力是作物吸收水分和养分的重要指标,常用的方法包括三苯四氮唑蓝法和碘化钠法等。
9.气孔导度测定:气孔导度是作物水分调节和碳代谢的重要参数,常用的方法包括气体交换仪测定法和树脂浸泡法等。
10.叶盘蒸腾速率测定:叶盘蒸腾速率是反映作物水分蒸腾能力的指标,常用的方法包括测定叶盘失重法和石蜡浸渍法等。
以上是一些常用的作物生理指标测定方法,这些方法提供了了解作物生长发育和生理功能的重要信息,为作物生理机制的深入研究和农业管理的优化提供了依据。
同时,为提高作物抗逆性能和增加农业产量提供了重要的支持。
高级植物生理实验报告植物抗性生理农学院农药学东保柱20132020542013年12月27日实验1 超氧化物歧化酶(SOD )活性和丙二醛含量的测定(操作步骤)1 试剂配制1.1 磷酸缓冲液 (PBS) 配制注:配成PBS2000ml ,其中1000ml 用于A 液配制,另1000ml 用于酶液制备。
1.2 其它溶液配制2 酶液制备称取植物材料1g ,加少许0.05mol/L 、pH7.8的磷酸缓冲液在冰浴中研磨,最终定容制得10 ml 匀浆。
转移至10ml 离心试管中,在3000 rpm 下粗离心1分钟,粗提液再转移至2个5ml 离心管中,在冷冻离心机13000g 、4℃下离心20分钟,上清液即为酶液,用于SOD 活性和丙二醛含量的测定。
3 丙二醛含量测定吸取酶液2ml →加入F液2ml →沸水浴加热15分钟(呈粉红色)→快速冷却→4000rpm 下离心5分钟。
若以种子为材料,则加热后溶液混浊,需增加离心力。
以F液为参比液,分别在532nm 和600nm 处测定光密度值。
丙二醛含量(nmol ·g -1)=式中:V/v --- 提取液总量(10ml)/测定液用量(2ml)R --- 反应液总量(4ml)W --- 植物材料鲜重或干重(g)0.155 --- 丙二醛的摩尔浓度消光系数(当[MDA]=1nmol/ml 时,OD 532-OD 600=0.155)[即( OD532—OD600) / 0.155的单位为1nmolMDA / ml ]室温下处理的叶片在523nm出的光密度值室温下处理的叶片在600nm出的光密度值室温下丙二醛含量(nmol·g-1)=-0.0022+0.039/0.155×4×10/2×1=4.75 nmol·g-1 冷处理下的叶片在523nm出的光密度值室温下处理的叶片在600nm出的光密度值冷处理下丙二醛含量(nmol·g-1)=0.077-0.026/0.155×4×10/2×1=6.58 nmol·g-14 超氧化物歧化酶活性测定4.1 操作及说明* 仪器调零液中的“酶液”0.1ml,可以取对照植株的,也可以取胁迫植株的。
氧化应激指标检测
1.抗氧化酶活性检测:抗氧化酶包括超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘
肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)等。
这些酶能够清除体内的自由基,维持氧化还原平衡。
通过测量这些酶的活性,可以了解机体的抗氧化能力。
2.自由基产生检测:自由基是氧化应激的主要产物,可以通过测量体
内的自由基含量来评估氧化应激的程度。
一种常用的检测方法是测量血液
中的丙二醛(MDA)含量,MDA是脂质过氧化的产物,其含量的增加表明机
体受到了氧化应激的损伤。
3.氧化还原状态检测:氧化应激状态下,机体内的氧化还原平衡被打破,导致氧化还原指标的变化。
其中最常用的检测指标是谷胱甘肽(GSH)
含量和还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)比值。
GSH是机体内
最重要的抗氧化物质,其还原态的水平能够反映机体抗氧化能力的强弱。
4.细胞损伤指标检测:氧化应激状态会导致细胞损伤,因此通过检测
细胞膜的稳定性或细胞损伤指标的变化来评估氧化应激的程度。
例如,可
以测量血清中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)等
细胞损伤指标的活性。
5.非酶抗氧化指标检测:除了抗氧化酶外,机体还有一些非酶抗氧化
物质,如维生素C、维生素E和谷胱甘肽等,这些物质可以通过测量血液
中的含量来评估机体的抗氧化能力。
总之,氧化应激指标检测可以为临床诊断提供重要的参考,帮助评估
机体氧化应激水平和抗氧化能力。
通过这些指标的检测,可以及早发现并
干预氧化应激导致的健康问题,促进健康的维持。
酶—蛋白联合测定法1包括:(1)可溶性蛋白(soluble protein),(2)超氧化物歧化酶(superoxide dismutase),SOD(3)过氧化物酶(peroxidase),POD(4)丙二醛(malondialdehyde),MDA(5)过氧化氢酶(catalase),CAT2 联合测定的原因:(1)节省人力,节省提取研磨过程(2)节省待测样品3 联合测定的可行性:(1)汪俏梅,郭得平(2004)对POD、SOD、CA T进行联合测定。
取1g西兰花样品,按1:5(W/V)加入0.05mol/L,pH7.8的磷酸缓冲液,冰浴研磨,匀浆于4℃,13000g离心20min,上清液为酶提取液,分别测定POD、SOD、CA T活性。
(2)叶陈亮,柯玉琴,陈伟(1996),对可溶性蛋白、MDA、SOD、LOX进行联合测定。
称1g花蕾,用含1%聚乙烯吡咯烷酮的50mmol/L,pH7.0磷酸缓冲液4ml与冰浴中研磨匀浆,15000r/m冷冻离心10min,上清液备用。
①取上清液50μl,按Folin-酚法测定可溶性蛋白质含量;②取上清液1.25ml,加水1.25ml和0.5%硫代巴比妥酸三氯醋酸溶液2.5ml混匀,煮沸10min后离心比色测定,按陈贵推荐公式计算MDA含量;③取上清液10μl,按朱广廉法测定SOD活性,以SOD抑制NBT光化学还原50%所需酶量为一个酶活性单位;④取上清液0.5ml,按Surrey法比色测定LOX活性,以每分钟增加1个OD值为一个酶活单位。
4 联合测定的缺点(1)时间比较紧张,要求合理安排顺序,相互之间溶液干扰;(2)最好是同时做,人员比较多;(3)仪器,尤其是分光光度计要求要足够,不要相互之间抢;(4)需要标准曲线的最好一起做,它要求所有待测样尽量在同一条件下测定。
其它酶也是么?解决,减少实验次数,集中在1-2次内完成。
做大量的预备实验,熟练技能。
达到实验组每个成员倒背如流。
动物营养学报2020,32(1):432⁃439ChineseJournalofAnimalNutrition㊀doi:10.3969/j.issn.1006⁃267x.2020.01.050饲粮中添加超氧化物歧化酶模拟物对肉鸡生长性能㊁血清免疫指标及肠道抗氧化指标和消化酶活性的影响马渭青㊀王思博㊀杨㊀季㊀崔红霞㊀赵旦华㊀许㊀丽∗(东北农业大学动物科技学院,哈尔滨150030)摘㊀要:本试验旨在研究饲粮中添加超氧化物歧化酶模拟物(SODm)对肉鸡生长性能㊁血清免疫指标及肠道抗氧化指标和消化酶活性的影响㊂选取1日龄健康的爱拔益加(AA)肉鸡公雏288只,随机分为4组,每组6个重复,每个重复12只㊂对照组(Ⅰ组)饲喂基础饲粮,试验组(Ⅱ㊁Ⅲ㊁Ⅳ组)在基础饲粮上分别添加1.0㊁2.0㊁3.0g/kg的SODm㊂试验期为42d㊂结果表明:1)饲粮中添加SODm对肉鸡生长性能无显著影响(P>0.05)㊂2)21日龄时,Ⅲ组的血清免疫球蛋白G(IgG)含量显著高于对照组(P<0.05),Ⅳ组的血清免疫球蛋白M(IgM)含量显著高于其他各组(P<0.05),各组之间血清免疫球蛋白A(IgA)含量无显著差异(P>0.05)㊂42日龄时,各组之间血清IgA㊁IgG㊁IgM含量均无显著差异(P>0.05)㊂3)21日龄时,Ⅲ组的肠道超氧化物歧化酶(SOD)㊁谷胱甘肽过氧化物酶(GSH⁃Px)活性显著高于对照组(P<0.05),丙二醛(MDA)含量显著低于对照组(P<0.05)㊂42日龄时,Ⅳ组的肠道总抗氧化能力(T⁃AOC)显著高于其他各组(P<0.05),Ⅲ㊁Ⅳ组的肠道MDA含量显著低于对照组(P<0.05)㊂4)21日龄时,Ⅱ㊁Ⅲ组的肠道胰蛋白酶㊁胃蛋白酶㊁脂肪酶活性显著高于对照组(P<0.05);42日龄时,Ⅲ组的肠道胃蛋白酶活性显著高于其他各组(P<0.05)㊂由此可见,饲粮中添加SODm可以提高肉仔鸡血清免疫指标及肠道抗氧化性能和消化酶活性㊂关键词:超氧化物歧化酶模拟物;肉鸡;免疫;抗氧化;消化酶中图分类号:S831㊀㊀㊀㊀文献标识码:A㊀㊀㊀㊀文章编号:1006⁃267X(2020)01⁃0432⁃08收稿日期:2019-07-02基金项目:国家自然科学基金项目(31872377)作者简介:马渭青(1994 ),男,山东高密人,硕士研究生,从事单胃动物营养研究㊂E⁃mail:1131878862@qq.com∗通信作者:许㊀丽,教授,博士生导师,E⁃mail:xuli_19621991@163.com㊀㊀超氧化物歧化酶模拟物(superoxidedismutasemimics,SODm)是一种通过化学或生物合成的具有超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活性的化合物,常见的配体有卟啉环㊁希夫氏碱(Schiff sbase)㊁大环含氮化合物及天然活性物质等,其中以天然活性物质作为配体毒性最小[1-2]㊂SOD是机体抗氧化系统中重要的抗氧化酶之一,能够清除机体内的超氧阴离子,维持机体的氧化还原平衡,减少机体的炎症反应[3]㊂根据所含辅基可分为锰超氧化物歧化酶(Mn⁃SOD)㊁铁超氧化物歧化酶(Fe⁃SOD)㊁铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn⁃SOD)3种类型,Mn⁃SOD主要存在于线粒体中,当过度消耗时,会引起细胞衰老,导致机体出现炎症反应[4-5]㊂在医学上SOD具有抗辐射㊁抗氧化㊁抗癌㊁消炎等作用,被广泛应用[6-7]㊂而SODm作为模拟物也具有类似的作用㊂Salvemini等[8]研究发现,SODm可以通过抑制中性粒细胞的衰老缓解脂多糖引起的大鼠肠道炎症㊂目前,1期马渭青等:饲粮中添加超氧化物歧化酶模拟物对肉鸡生长性能㊁血清免疫指标及 SODm作为抗氧化剂在动物生产中的研究较少㊂有鉴于此,本试验研究了SODm对肉仔鸡生长性能㊁血清免疫指标及肠道抗氧化指标和消化酶活性的影响,以期为SODm在家禽生产中的应用提供依据㊂1㊀材料与方法1.1㊀试验动物与试验设计㊀㊀试验选取1日龄健康的爱拔益加(AA)肉鸡公雏288只,随机分为4组,每组6个重复,每个重复12只㊂对照组(Ⅰ组)饲喂基础饲粮,试验组(Ⅱ㊁Ⅲ㊁Ⅳ组)在基础饲粮上分别添加1.0㊁2.0㊁3.0g/kg的SODm㊂SODm模拟Mn⁃SOD人工合成,呈白色粉末状,购自大庆华美科技有限公司㊂试验期为42d㊂1.2㊀基础饲粮与饲养管理㊀㊀基础饲粮参照NRC(1994)[9]和‘中国饲料成分及营养价值表“(2018年第29版)配制,基础饲粮组成及营养水平见表1㊂肉鸡在铁丝网笼中饲养,在整个试验过程自由采食与饮水㊂第1周室温保持在32ħ,每周逐渐降温2ħ,直至达到24ħ,然后保持这个温度到试验结束㊂在试验期间,第1 7天接受24h的照明,之后23h照明1h黑暗直到第42天㊂所有肉鸡在第6天和第12天接种新城疫灭活疫苗,第19天接种传染性法氏囊病灭活疫苗㊂表1㊀基础饲粮组成及营养水平(风干基础)Table1㊀Compositionandnutrientlevelsofbasaldiets(air⁃drybasis)%项目Items1 21日龄1to21daysofage22 42日龄22to42daysofage原料Ingredients玉米Corn61.0063.00豆粕Soybeanmeal26.0023.00豆油Soybeanoil1.003.00玉米蛋白粉Cornproteinmeal5.002.50棉籽粕Cottonseedmeal2.002.50羽毛粉Feathermeal2.00磷酸氢钙CaHPO41.301.10石粉Limestone1.501.50食盐NaCl0.300.30续表1项目Items1 21日龄1to21daysofage22 42日龄22to42daysofageL-赖氨酸L⁃Lys0.200.03蛋氨酸Met0.200.07预混料Premix1)1.501.00合计Total100.00100.00营养水平Nutrientlevels2)代谢能ME/(MJ/kg)12.2112.75粗蛋白质CP21.5520.63赖氨酸Lys1.140.91蛋氨酸Met0.550.39蛋氨酸+半胱氨酸Met+Cys0.910.76苏氨酸Thr0.760.70色氨酸Try0.220.21钙Ca1.051.00有效磷AP0.400.34总磷TP0.600.58㊀㊀1)预混料为每千克饲粮提供Thepremixprovidedthefollowingperkgofdiets:1 21日龄1to21daysofage,氯化胆碱cholinechloride(50%)1.5g,VA12000IU,VD3000IU,VE24IU,VK32.6mg,硫胺素thiamine2.3mg,泛酸pantothenicacid12mg,烟酸niacin35mg,生物素bio⁃tin0.18mg,叶酸folicacid0.6mg,吡哆酚pyrazine3.8mg,植酸酶phytase200IU,VB120.011mg,Fe100mg,Mn120mg,Zn100mg,Cu8mg,I0.7mg,Se0.3mg;22 42日龄22to42daysofage,氯化胆碱cholinechloride(50%)0.5g,VA12000IU,VD3000IU,VE24IU,VK32.6mg,硫胺素thiamine2.3mg,泛酸pantothenicacid12mg,烟酸niacin35mg,生物素biotin0.18mg,叶酸folicacid0.6mg,吡哆酚pyrazine3.8mg,植酸酶phytase200IU,VB120.011mg,Fe100mg,Mn120mg,Zn100mg,Cu8mg,I0.7mg,Se0.3mg㊂㊀㊀2)粗蛋白质㊁钙和总磷为实测值,其余为计算值㊂CP,CaandTPweremeasuredvalues,whiletheotherswerecal⁃culatedvalues.1.3㊀测定指标与方法1.3.1㊀生长性能㊀㊀每天06:00记录投料量并每周回称1次剩料,用于计算平均日采食量(ADFI)㊂记录第1天㊁第21天和第42天肉鸡体重,用于计算平均日增重(ADG),根据ADFI和ADG计算料重比(F/G)㊂334㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报32卷1.3.2㊀血清免疫指标㊀㊀试验第21天和第42天,每个重复选取2只体况相似的肉鸡,颈静脉采血,收集于采血管,然后4000r/min离心10min取上清,用于测定血清免疫球蛋白A(IgA)㊁免疫球蛋白G(IgG)㊁免疫球蛋白M(IgM)含量㊂血清免疫指标均使用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定㊂1.3.3㊀肠道抗氧化指标㊀㊀试验第21天和第42天,每个重复选取2只体况相似的肉鸡,屠宰后取十二指肠中段(从肌胃底部至胰环末端),将十二指肠纵向打开,用生理盐水溶液清洗,然后用玻璃盖玻片刮下黏膜组织㊂按质量体积比(肠黏膜组织ʒ生理盐水=1ʒ9)制备肠道黏膜组织匀浆,4000r/min4ħ离心10min取上清,用于测定肠道SOD㊁谷胱甘肽过氧化物酶(GSH⁃Px)活性,总抗氧化能力(T⁃AOC),丙二醛(MDA)含量㊂肠道抗氧化指标均使用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定㊂1.3.4㊀肠道消化酶活性㊀㊀试验第21天和第42天,肉鸡屠宰后取十二指肠,收集食糜于2mL冻存管,置于液氮中保存㊂按质量体积比(食糜ʒ生理盐水=1ʒ1)制备匀浆,4000r/min㊁4ħ离心10min取上清,测定肠道脂肪酶㊁胰蛋白酶㊁胃蛋白酶㊁肠道消化酶活性㊂肠道消化酶活性均使用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定㊂1.4㊀数据处理与统计分析㊀㊀使用Excel2016对原始数据进行处理,使用SPSS22.0的单因素方差分析(one⁃wayANOVA)对数据进行方差检验和多重比较,结果表示为 平均值ʃ标准差 ,P<0.05表示差异显著㊂2㊀结㊀果2.1㊀饲粮中添加SODm对肉鸡生长性能的影响㊀㊀由表2可知,饲粮中添加SODm对各个时期肉鸡的ADFI㊁ADG㊁F/G均无显著影响(P>0.05)㊂表2㊀饲粮中添加SODm对肉鸡生长性能的影响Table2㊀EffectsofdietarySODmongrowthperformanceofbroilers项目Items组别GroupsⅠⅡⅢⅣ1 21日龄1to21daysofage平均日采食量ADFI/(g/d)39.62ʃ2.6839.36ʃ0.4938.95ʃ1.0339.67ʃ0.36平均日增重ADG/(g/d)27.08ʃ1.4727.90ʃ0.8227.41ʃ1.5727.09ʃ1.93料重比F/G1.46ʃ0.051.41ʃ0.051.42ʃ0.081.47ʃ0.1122 42日龄22to42daysofage平均日采食量ADFI/(g/d)153.31ʃ11.07153.84ʃ9.29151.90ʃ7.39153.38ʃ9.49平均日增重ADG/(g/d)90.84ʃ3.2792.00ʃ1.6787.43ʃ4.5887.40ʃ4.29料重比F/G1.69ʃ0.111.67ʃ0.091.74ʃ0.111.75ʃ0.041 42日龄1to42daysofage初重Initialweight/g44.17ʃ3.0646.17ʃ0.4145.50ʃ1.7646.50ʃ0.84末重Finalweight/g2520.67ʃ94.782564.17ʃ61.402457.00ʃ117.902450.67ʃ62.30平均日采食量ADFI/(g/d)96.47ʃ6.5696.60ʃ4.7995.43ʃ4.1096.52ʃ4.89平均日增重ADG/(g/d)58.96ʃ2.2159.95ʃ0.8057.42ʃ2.7857.24ʃ1.48料重比F/G1.64ʃ0.091.61ʃ0.081.66ʃ0.101.69ʃ0.06㊀㊀同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)㊂下表同㊂㊀㊀Inthesamerow,valueswithdifferentsmalllettersuperscriptsmeansignificantdifference(P<0.05),whilewiththesameornolettersuperscriptsmeannosignificantdifference(P>0.05).Thesameasbelow.2.2㊀饲粮中添加SODm对肉鸡血清免疫指标的影响㊀㊀由表3可知,21日龄时,与对照组相比,Ⅲ组的血清IgG含量显著降低(P<0.05),其他各组无显著差异(P>0.05);与对照组相比,Ⅳ组的血清IgM含量显著提高(P<0.05),其他各组无显著差4341期马渭青等:饲粮中添加超氧化物歧化酶模拟物对肉鸡生长性能㊁血清免疫指标及异(P>0.05);各组之间血清IgA含量无显著差异(P>0.05)㊂42日龄时,各组之间血清IgA㊁IgG㊁IgM含量均无显著差异(P>0.05)㊂表3㊀饲粮中添加SODm对肉鸡血清免疫指标的影响Table3㊀EffectsofdietarySODmonserumimmuneindexesofbroilersg/L项目Items组别GroupsⅠⅡⅢⅣ21日龄21daysofage免疫球蛋白AIgA2.31ʃ0.052.28ʃ0.092.31ʃ0.042.37ʃ0.03免疫球蛋白GIgG4.31ʃ0.11a4.21ʃ0.04ab4.13ʃ0.07b4.24ʃ0.02a免疫球蛋白MIgM1.64ʃ0.04b1.62ʃ0.06b1.64ʃ0.02b1.72ʃ0.01a42日龄42daysofage免疫球蛋白AIgA2.16ʃ0.092.13ʃ0.022.16ʃ0.072.11ʃ0.02免疫球蛋白GIgG4.09ʃ0.044.11ʃ0.054.14ʃ0.084.09ʃ0.05免疫球蛋白MIgM1.59ʃ0.031.58ʃ0.011.61ʃ0.031.59ʃ0.022.3㊀饲粮中添加SODm对肉鸡肠道抗氧化指标的影响㊀㊀由表4可知,21日龄时,Ⅲ组的肠道SOD活性显著高于对照组(P<0.05),Ⅱ组的肠道SOD活性显著低于对照组(P<0.05);Ⅲ组的肠道GSH⁃Px活性显著高于其他3组(P<0.05);Ⅲ㊁Ⅳ组的肠道MDA含量显著低于其他2组(P<0.05);各组之间肠道T⁃AOC无显著差异(P>0.05)㊂42日龄时,Ⅳ组的肠道T⁃AOC显著高于其他3组(P<0.05);Ⅲ㊁Ⅳ组的肠道MDA含量显著低于对照组(P<0.05),且Ⅲ组的肠道MDA含量显著低于Ⅳ组(P<0.05);各组之间肠道SOD㊁GSH⁃Px活性无显著差异(P>0.05)㊂表4㊀饲粮中添加SODm对肉鸡肠道抗氧化指标的影响Table4㊀EffectsofdietarySODmonintestinalantioxidantindexesofbroilers项目Items组别GroupsⅠⅡⅢⅣ21日龄21daysofage超氧化物歧化酶SOD/(U/mgprot)125.88ʃ20.12b99.62ʃ16.98c148.07ʃ8.87a113.43ʃ13.88bc谷胱甘肽过氧化物酶GSH⁃Px/(U/gprot)1685.39ʃ132.00b1638.89ʃ150.01b1877.51ʃ59.21a1640.55ʃ89.47b总抗氧化能力T⁃AOC/(U/gprot)7.45ʃ0.587.89ʃ0.487.52ʃ0.827.29ʃ0.63丙二醛MDA/(nmol/mgprot)1.15ʃ0.13a1.01ʃ0.20a0.79ʃ0.13b0.73ʃ0.11b42日龄42daysofage超氧化物歧化酶SOD/(U/mgprot)215.28ʃ59.51270.10ʃ35.69235.76ʃ58.32228.77ʃ33.80谷胱甘肽过氧化物酶GSH⁃Px/(U/gprot)1491.65ʃ159.071606.56ʃ220.111624.65ʃ313.901678.89ʃ280.99总抗氧化能力T⁃AOC/(U/gprot)4.30ʃ0.63b4.20ʃ0.20b4.09ʃ0.33b5.18ʃ0.67a丙二醛MDA/(nmol/mgprot)3.08ʃ0.64a2.99ʃ0.71a1.13ʃ0.28c2.02ʃ0.16b2.4㊀饲粮中添加SODm对肉鸡肠道消化酶活性的影响㊀㊀由表5可知,21日龄时,对照组的肠道胰蛋白酶㊁胃蛋白酶㊁脂肪酶活性显著低于Ⅱ㊁Ⅲ组(P<0.05);各组之间肠道淀粉酶活性无显著差异(P>0.05)㊂42日龄时,Ⅲ组的肠道胃蛋白酶活性显著高于其他3组(P<0.05);各组之间肠道胰蛋白酶㊁脂肪酶㊁淀粉酶活性无显著差异(P>0.05)㊂534㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报32卷表5㊀饲粮中添加SODm对肉鸡肠道消化酶活性的影响Table5㊀EffectsofdietarySODmonintestinaldigestiveenzymeactivitiesofbroilersU/mgprot项目Items组别GroupsⅠⅡⅢⅣ21日龄21daysofage胰蛋白酶Trypsin8.55ʃ0.56c11.13ʃ2.15b13.97ʃ1.64a9.65ʃ0.44bc胃蛋白酶Pepsin6.48ʃ1.47b11.06ʃ4.11a12.09ʃ3.51a9.44ʃ1.67ab脂肪酶Lipase0.31ʃ0.02b0.37ʃ0.05a0.39ʃ0.06a0.35ʃ0.05ab淀粉酶Amylase45.92ʃ17.1576.32ʃ25.2285.90ʃ20.8275.19ʃ38.3042日龄42daysofage胰蛋白酶Trypsin23.30ʃ9.7924.85ʃ5.8327.64ʃ3.9922.40ʃ7.38胃蛋白酶Pepsin21.14ʃ2.57b21.32ʃ2.56b26.34ʃ2.07a22.67ʃ2.37b脂肪酶Lipase0.43ʃ0.110.41ʃ0.080.41ʃ0.040.39ʃ0.07淀粉酶Amylase207.75ʃ42.75218.95ʃ70.52217.69ʃ65.69214.27ʃ22.503㊀讨㊀论3.1㊀饲粮中添加SODm对肉鸡生长性能的影响㊀㊀抗氧化剂可以作为饲料添加剂应用于动物生产,能够提高动物的生长性能㊂刘梅等[10]研究表明,饲粮中添加40 120mg/kg的茶多酚可以提高肉鸡ADFI和ADG,降低F/G,从而促进肉鸡生长㊂王显慧等[11]研究表明,饲粮中添加150或300mg/kg的维生素C可以提高肉鸡的生长性能和抗氧化性能,改善机体免疫机能㊂陈善真等[12]研究新型维生素E类似物对黄羽肉鸡生长性能的影响时发现,饲粮中添加2.5 10.0IU/kg的新型维生素E对黄羽肉鸡的ADFI㊁ADG和F/G均无显著影响㊂本试验结果显示,在饲粮中添加1.0 3.0g/kg的SODm对肉鸡各个时期的生长性能均无显著影响,可能是植物提取物抗氧化剂除了能够抗氧化外,还具有类似植物雌激素的生理作用,促进动物生长[10],而SODm这类人工合成的化合物主要以抗氧化功能为主㊂3.2㊀饲粮中添加SODm对肉鸡血清免疫指标的影响㊀㊀IgA㊁IgG㊁IgM是家禽体内主要的免疫球蛋白,主要存在于体液免疫中,IgA能够有效清除黏膜上的抗原,在保护肠道㊁呼吸道黏膜中发挥重要作用;IgG主要由免疫器官的浆细胞分泌,能够清除病原微生物,在血清中含量较高;IgM是机体免疫中最早释放的免疫物质,能够溶解细菌㊁中和病毒等[13-15]㊂抗氧化剂能够通过提高免疫器官指数促进抗体的释放,血液中中性粒细胞的吞噬作用与IgG的含量呈正相关[16]㊂初晓等[17]研究表明,茶多酚能够提高D-半乳糖致衰小鼠免疫器官指数和细胞吞噬功能,是潜在的免疫调节剂㊂表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是茶多酚中的主要成分,能够提高断奶仔猪淋巴细胞转换率,促进细胞因子的分泌,对于氧化应激状态下的仔猪,可提高其血清IgA㊁IgG及IgM含量,降低肿瘤坏死因子-α(TNF⁃α)含量,降低免疫器官的损伤程度[18]㊂蒋守群等[19]研究表明,添加80IU/kg的维生素E能够提高22 42日龄肉鸡的法氏囊指数,降低血清TNF⁃α含量,改善免疫机能㊂在本试验中,饲粮中添加3.0g/kg的SODm能够显著提高21日龄肉鸡血清IgM含量,而对42日龄的血清免疫指标无显著影响,表明SODm对肉鸡前期具有一定的免疫调节作用,但是对肉鸡后期的免疫调节效果不明显㊂3.3㊀饲粮中添加SODm对肉鸡肠道抗氧化指标的影响㊀㊀SOD㊁GSH⁃Px是机体的主要抗氧化酶,其活性代表了机体的抗氧化性能㊂MDA是脂质过氧化产物,其含量反映了脂质过氧化程度㊂外源性抗氧化物主要通过2种途径发挥作用:其一是自身作为抗氧化物被氧化,减少自由基对细胞的损伤;其二是激活体内的抗氧化系统,提高体内抗氧化酶的活性[20-21]㊂研究表明,在饲粮中添加50 150mg/kg的维生素E能够提高三黄鸡血清中抗氧化酶活性,降低MDA含量[22]㊂SODm作为SOD的模拟物,具有与其相似的生理活性,能够清除超氧阴离子自由基,减少细胞的脂质氧化㊂本6341期马渭青等:饲粮中添加超氧化物歧化酶模拟物对肉鸡生长性能㊁血清免疫指标及试验研究表明,饲粮中添加SODm能够提高肠道抗氧化性能,降低肠道MDA含量,减少脂质氧化水平㊂对于肉鸡前期,SODm主要通过提高抗氧化酶活性来减少脂质的氧化,而在肉鸡后期,SODm可能通过提高其他抗氧化物质来提高T⁃AOC,保护肠道健康㊂3.4㊀饲粮中添加SODm对肉鸡肠道消化酶活性的影响㊀㊀消化酶的活性决定了机体对营养物质的吸收利用程度[23]㊂研究发现,天然维生素E能够提高肉鸡肠道消化酶活性及抗氧化能力[24]㊂何敏等[25]研究表明,饲粮中添加50 1000mg/kg的维生素E能够提高斑点叉尾消化道内蛋白酶㊁脂肪酶活性,改善肠道内环境,添加量为100mg/kg时效果最佳㊂本试验研究表明,饲粮中添加2.0g/kg的SODm可以提高肉鸡十二指肠胰蛋白酶㊁胃蛋白酶和脂肪酶活性,SODm前期提高肉鸡肠道消化酶活性的效果优于后期,这也许是由于前期肠道没有发育完全,SODm能够及时清除肠道内产生的超氧阴离子,保护肠道细胞,改善肠道形态,促进消化酶的分泌㊂4㊀结㊀论㊀㊀①在1 21日龄,饲粮中添加SODm可以提高肉鸡的血清IgM含量及肠道SOD㊁GSH⁃Px活性,降低肠道MDA含量,提高肠道胰蛋白酶㊁胃蛋白酶㊁脂肪酶活性㊂㊀㊀②在22 42日龄,饲粮中添加SODm可以提高肉鸡肠道T⁃AOC,降低肠道MDA含量,提高肠道胃蛋白酶活性㊂参考文献:[1]㊀陈林林,王振兴,韩可,等.超氧化物歧化酶模拟物的合成研究进展[J].合成化学,2018,26(10):787-794.[2]㊀李晨,杨征,厍梦尧,等.超氧化物歧化酶化学模拟的新进展[J].高等学校化学学报,2011,32(9):2046-2061.[3]㊀NALKIRANI,TURANS,ARIKANS,etal.Determi⁃nationofgeneexpressionandserumlevelsofMnSODandGPX1incolorectalcancer[J].AnticancerRe⁃search,2015,35(1):255-259.[4]㊀董亮,何永志,王远亮,等.超氧化物歧化酶(SOD)的应用研究进展[J].中国农业科技导报,2013,15(5):53-58.[5]㊀DIKALOVAAE,ITANIHA,NAZAREWICZRR,etal.Sirt3impairmentandSOD2hyperacetylationinvascularoxidativestressandhypertension[J].Circula⁃tionResearch,2017,121(5):564-574.[6]㊀VUJASKOVICZ,BATINIC⁃HABERLEI,RABBANIZN,etal.Asmallmolecularweightcatalyticmetallo⁃porphyrinantioxidantwithsuperoxidedismutase(SOD)mimeticpropertiesprotectslungsfromradia⁃tion⁃inducedinjury[J].FreeRadicalBiologyandMedicine,2002,33(6):857-863.[7]㊀DHANASEKARANA,KOTAMRAJUS,KA⁃RUNAKARANC,etal.Mitochondriasuperoxidedis⁃mutasemimeticinhibitsperoxide⁃inducedoxidativedamageandapoptosis:roleofmitochondrialsuperox⁃ide[J].FreeRadicalBiologyandMedicine,2005,39(5):567-583.[8]㊀SALVEMINID,RILEYDP,LENNONPJ,etal.Pro⁃tectiveeffectsofasuperoxidedismutasemimeticandperoxynitritedecompositioncatalystsinendotoxin⁃in⁃ducedintestinaldamage[J].BritishJournalofPhar⁃macology,1999,127(3):685-692.[9]㊀NRC.Nutrientrequirementsofpoultry[S].9thed.Washington,D.C.:TheNationalAcademiesPress,1994.[10]㊀刘梅,史挺,王玉海,等.茶多酚对肉仔鸡生产性能及抗氧化能力的影响[J].中国饲料,2018(19):65-69.[11]㊀王显慧,刘福柱,牛竹叶,等.VC对肉鸡生产性能㊁胴体品质㊁免疫机能和抗氧化特性的影响[J].西北农林科技大学学报(自然科学版),2010,38(2):1-7.[12]㊀陈善真,李其昌,郑森文,等.新型维生素E类似物对黄羽肉鸡生产性能㊁胴体指标及抗氧化指标的影响[J].饲料研究,2016(21):24-28,42.[13]㊀吴迎朝.黑沙蒿水提物对断奶仔猪生长性能㊁免疫和抗氧化功能的影响[D].硕士学位论文.呼和浩特:内蒙古农业大学,2018.[14]㊀赵明明.黑灵芝多糖对小鼠肠道黏膜免疫及黏膜损伤的影响[D].硕士学位论文.南昌:南昌大学,2018.[15]㊀唐斌.不同低氧训练方式对大鼠血清免疫球蛋白A㊁G㊁M和皮质酮的影响[D].硕士学位论文.北京:北京体育大学,2007.[16]㊀SUGISAWAH,ITOUT,SAKAIT.Promotingeffectofcolostrumonthephagocyticactivityofbovinepoly⁃morphonuclearleukocytesinvitro[J].Neonatology,2001,79(2):140-144.734㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报32卷[17]㊀初晓,姚如泳,韩志武.茶多酚对D-半乳糖致衰老小鼠免疫功能的调节作用[J].中国医院药学杂志,2006,26(5):637-638.[18]㊀李永义.茶多酚对氧化应激仔猪的保护作用及机制研究[D].博士学位论文.成都:四川农业大学,2011.[19]㊀蒋守群,周桂莲,林映才,等.饲粮维生素E水平对22 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∗Correspondingauthor,professor,E⁃mail:xuli_19621991@163.com(责任编辑㊀武海龙)EffectsofDietarySuperoxideDismutaseMimicsonGrowthPerformance,SerumImmuneIndexesandIntestinalAntioxidantIndexesandDigestiveEnzymeActivitiesofBroilersMAWeiqing㊀WANGSibo㊀YANGJi㊀CUIHongxia㊀ZHAODanhua㊀XULi∗(CollegeofAnimalScienceandTechnology,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030,China)Abstract:Thisstudywastoinvestigatetheeffectsofdietarysuperoxidedismutasemimics(SODm)ongrowthperformance,serumimmuneindexesandintestinalantioxidantindexesanddigestiveenzymeactivitiesofbroil⁃ers.Atotalof288one⁃day⁃oldmaleArborAcres(AA)broilerswererandomlydividedinto4groupswith6replicatesineachgroupand12replicatesineachgroup.Broilersinthecontrolgroup(groupⅠ)werefedabasaldiet,andtheothersinexperimentalgroups(groupsⅡ,ⅢandⅣ)werefedthebasaldietsupplementedwith1.0,2.0and3.0g/kgSODm,respectively.Theexperimentlastedfor42days.Theresultsshowedasfol⁃lows:1)dietarySODmhadnosignificanteffectonthegrowthperformanceofbroilers(P>0.05).2)On21daysofage,theserumimmunoglobulinG(IgG)contentofgroupⅢwassignificantlyhigherthanthatofthecontrolgroup(P<0.05),theserumimmunoglobulinM(IgM)contentofgroupⅣwassignificantlyhigherthanthatofothergroups(P<0.05),andtherewasnosignificantdifferenceinserumimmunoglobulinA(IgA)contentamongallgroups(P>0.05).On42daysofage,therewerenosignificantdifferencesincon⁃tentsofIgA,IgGandIgMinserumamongallgroups(P>0.05).3)On21daysofage,theactivitiesofsu⁃peroxidedismutase(SOD)andglutathioneperoxidase(GSH⁃Px)inintestineofgroupⅢweresignificantlyhigherthanthoseofthecontrolgroup(P<0.05),andthemalondialdehyde(MDA)contentwassignificantlylowerthanthatofthecontrolgroup(P<0.05).On42daysofage,theintestinaltotalantioxidantcapacity(T⁃AOC)ofgroupⅣwassignificantlyhigherthanthatofothergroups(P<0.05);andtheintestinalMDAcon⁃tentofgroupsⅢandⅣwassignificantlylowerthanthatofthecontrolgroup(P<0.05).4)On21daysofage,theactivitiesoftrypsin,pepsinandlipaseinintestineofgroupsⅡandⅢweresignificantlyhigherthanthoseofthecontrolgroup(P<0.05);on42daysofage,theintestinalpepsinactivityofgroupⅢwassignifi⁃cantlyhigherthanthatofothergroups(P<0.05).ItcanbeseenthatdietarySODmcanimprovetheserumim⁃muneindexesandintestinalantioxidantcapacityanddigestiveenzymeactivitiesofbroilers.[ChineseJournalofAnimalNutrition,2020,32(1):432⁃439]Keywords:superoxidedismutasemimics;broilers;immune;antioxidant;digestiveenzyme934。
银屑病患者抗氧化酶、脂质过氧化物及肿瘤坏死因子测定的意
义
彭立义;张道杰;叶明亮;韩安林;尹秋霞
【期刊名称】《实用医药杂志》
【年(卷),期】1997(0)5
【摘要】检测了银屑病患者血清过氧化脂质、丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和肿瘤坏死因子水平。
与健康组相比,银屑病患者过氧化脂质、丙二醛及肿瘤坏死因子水平增高(P<0.01),而超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性降低(P<0.01),且增高或降低的程度与病期有关。
说明过氧化脂质、丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶及肿瘤坏死因子反应异常,在银屑病发病中发挥一定作用。
从而提示:综合分析以上五项检测水平,可作为判断病情变化,评价疗效及估计预后的重要参考指标。
【总页数】2页(P33-34)
【关键词】银屑病;过氧化脂质;丙二醛;超氧化物歧化酶;谷胱甘肽过氧化物酶;肿瘤坏死因子
【作者】彭立义;张道杰;叶明亮;韩安林;尹秋霞
【作者单位】济南军区总医院
【正文语种】中文
【中图分类】R758.63
【相关文献】
1.老年冠心病患者血清脂质和脂质过氧化物测定的临床意义 [J], 王成章;陈兴
2.银屑病患者血清脂质过氧化物与超氧化物歧化酶含量测定 [J], 于建斌
3.急性白血病患者脂质过氧化水平及抗脂质过氧化酶活力的测定 [J], 于吉峰
4.鼻咽癌患者血清中超氧化物歧化酶和脂质过氧化物及肿瘤坏死因子-α水平测定和意义 [J], 姚俊;罗国庆;张月飞;崔德威;杨利荣
5.老年心脑血管病及糖尿病患者血浆脂质过氧化物与抗氧化酶测定 [J], 黄仲驹;吴长珠;刘友尧;翁元真
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丙二醛、超氧化物歧化酶和活性氧对2型糖尿病患者胰岛β细胞功能的影响【摘要】目的:探讨2型糖尿病患者胰岛β细胞功能与氧化应激的关系。
方法2013年1月至2014年10月2型糖尿病患者100例为DM组、糖耐量受损的患者55例为IGT组和健康就诊者30例为对照组,测定3组血浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和活性氧(ROS)水平,采用稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素分泌指数(HOMA-β)以及胰岛素敏感指数(ISI)评价胰岛β细胞功能。
结果: GDM组患者MDA、ROS 、OMA-IR、HOMA-IR水平明显高于IGT组和对照组,IGT组和对照组HDL-C、SOD、HOMA-β、IS I水平明显低于GDM组,差异均有明显的统计学意义(p<0.05),HOMA-IR与MDA和ROS呈现明显的正相关(p<0.01),与SOD呈现明显的负相关(p<0.01);HOMA-β与MDA和ROS呈现明显的负相关(p<0.01),与SOD呈现明显的正相关(p<0.01),IS I与MDA和ROS呈现明显的负相关(p<0.01),与SOD呈现明显的正相关(p<0.01);Logistic 回归分析显示:FINS,MDA,SOD,ROS是影响胰岛β细胞功能的主要因素。
结论:2型糖尿病患者胰岛β细胞功能受损可能与氧化应激有关。
【关键词】:2型糖尿病患者;氧化性应激;胰岛β细胞Influence of MDA 、SOD and ROS on islet beta-cell function of type 2 diabetic patients【abstract】Objective: To explore the relationship between islet beta-cell function and oxidative stress.Methods:The plasma malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD)and reactive oxygen species (ROS) level of 100 patients with type 2 diabetes mellitus (DM group ),55 patients with impaired glucose tolerance(IGT group)and 30 normal persons (control group) were compared from January 2013 to October 2014。
Using the homeostasis model assessment insulin resistance index (HOMA-IR), insulin secretion index (HOMA- β) and insulin sensitivity index (ISI) evaluation of beta cell of islet function.Result:Patients in group GDM MDA, ROS, OMA-IR, HOMA-IR levels were higher in the IGT group and the control group, IGT group and control group HDL-C, SOD, HOMA- β, ISI levels were significantly lower than that in GDM group, significant differences were significant (P < 0.05), there is an obvious positive correlation between HOMA-IR and MDA and ROS (P < 0.01), showed a significant negative correlation with SOD (P < 0.01); significant negative correlation of HOMA- β and MDAand ROS (P < 0.01), showed a significant positive correlation with SOD(P < 0.01), showed a significant negative correlation between ISI and MDA and ROS (P < 0.01), presents the obvious a positive correlation with SOD (P < 0.01); Logistic regression analysis showed: FINS, MDA, SOD, ROS are the main factors that influence the function of islet beta-cell function.Conclusion: The Effect of Oxidative Stress on Pancreatic Beta Cell Secretory Function with type 2 diabetic patients .【key words】:Type 2 Diabetes Mellitus;Oxidative Stress;islet beta-cell function 2型糖尿病 (type 2 diabetes mellitus) 是由多种致病因素导致β细胞功能下降或胰岛素抵抗等引发以血糖升高为主的代谢紊乱综合征[1]。
2型糖尿病糖尿病发生以后,β细胞功能依然会呈现出进行性下降的趋势,在糖尿病的早期β细胞功能是可逆的,而到了糖尿病后期,因β细胞凋亡完全丧失功能,血糖难以控制并且不可逆转[2]。
因此通过了解影响糖尿病患者β细胞功能的因素,在糖尿病的早期对这些因素进行控制,防止β细胞功能的继续恶化及凋亡,从而有利于糖尿病的预防,对于开展糖尿病的三级预防工作具有重要的临床意义。
为此本研究对100例2型糖尿病患者β细胞功能与氧化应激指标进行了相关性研究,现报道如下。
1 临床资料与方法1.1 研究对象:2013年1月至2014年10月在我院内分泌科进行住院治疗的2型糖尿病患者100例为DM组,糖尿病的诊断标准按1999年WHO的诊断标准,并且通过胰岛素释放试验分型确诊为2型糖尿病。
其中男性67例,女性37例,年龄32~71岁平均年龄(59.51±11.78)岁,糖耐量受损的患者55例为IGT组,其中男性29例,女性24例,年龄28~66岁平均年龄(54.51±10.89)岁,来我院进行体检的健康就诊者30例为对照组,其中男性18例,女性12例,年龄29~68岁平均年龄(55.53±10.86)岁,三组患者年龄,性别比较均无明显的统计学差异(p>0.05),具有临床可比性。
1.2 方法:(1)由体检中心医务人员对所有研究对象的身高、体重、腰围、臀围、血压等指标进行测量,并计算体重指数(BMI)、腰臀比(WHR)。
(2)所有受试者试验前禁食12 h,禁饮8 h,清晨空腹采静脉血测定空腹血糖(FPG),空腹胰岛素(FINS),总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等指标,所有操作均按试剂盒说明书严格执行。
另取静脉血所有标本均用无菌试管收集,分离血浆置-70℃保存等待统一检验,用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法检查丙二醛( MDA);超氧化物歧化酶 (SOD);活性氧(ROS), 试剂盒由上海研生生化试剂有限公司提供,具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。
(3)用稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素分泌指数(HOMA-β)以及胰岛素敏感指数(ISI)评价胰岛β细胞功能。
计算公式如下HOMA-IR=FPG mmol/L×FINS mIU/L/22.5 ;HOMA-β=20×(FINS mIU/L /FPG mmol/L-3.5)(%);ISI=1/( FPG mmol/L×FINS mIU/L )1.3 统计学处理:所有数据经过校对后输入计算机,采用spss17.0建立数据库,计量资料多组比较采用方差分析,两组指标比较采用t 检验,二变量的相关性检验采Spearman 相关性分析,多因素分析采用非条件性Logistic 回归法,以P <0.05为差异有统计学差异。
2 结果2.1 两组孕妇一般资料及血脂情况比较:经过观察发现GDM 组患者TC 、TG 、LDL-C 、FPG 、FINS 、MDA 、ROS 、OMA-IR 、HOMA-IR 水平明显高于IGT 组和对照组,差异均有明显的统计学意义(p <0.05),IGT 组和对照组HDL-C 、SOD 、HOMA-β、IS I 水平明显低于GDM 组,差异均有明显的统计学意义(p <0.05)详见表1.表1 两组患者相关指标比较(x ±s )a 与对照组比较 p <0.05;b 与IGT 比较p <0.052.2 氧化应激指标与胰岛β细胞功能相关性分析:经过观察发现HOMA-IR 与MDA 和ROS 呈现明显的正相关(p <0.01),与SOD 呈现明显的负相关(p <0.01);HOMA-β与MDA 和ROS 呈现明显的负相关(p <0.01),与SOD 呈现明显的正相关(p <0.01),IS I 与MDA 和ROS 呈现明显的负相关(p <0.01),与SOD 呈现明显的正相关(p <0.01)见表2.表2氧化应激指标与血脂相关性分析组别年龄(岁)BM I ∕kg -2WHR TC(mmol/L) TG(mmol/L) HDL-C(mmol/L )LDL-C(mmol/L )GDM 组 59.51±11.78 23.32±1.83 0.88±0.06 5.23±0.56ab 3.03±1.32 ab 1.28±0.73 ab 3.61±1.27 ab IGT 组 54.51±10.89 22.89±1.57 0.87±0.03 4.61±0.75 2.35±1.02 a 1.35±0.62 a 2.85±1.16 a 对照组55.53±10.8623.43±1.860.84±0.074.57±0.57 1.53±0.42 1.55±0.62 2.12±0.98 FPG (mmol ∕L ) FINS (uu/ml) MDA (nmol ∕ml ) SOD (U ∕L ) ROS (U ∕L ) HOMA-IR HOMA-β IS I ×10-29.23±1.34 ab 12.76±3.42 ab 4.78±1.64 ab 91.22±13.74 ab 21.45±9.85 ab 5.12±2.36ab 48.97±12.75 ab 1.61±0.24 ab 5.15±0.46 a 9.34±2.34 a 4.33±1.32 a 89.78±11.42 a 18.65±9.67a 3.61±2.03 a 135.53±32.64 a 2.13±0.86 a 4.88±0.827.53±1.783.66±1.23105.64±12.8611.32±6.862.34±1.93145.06±62.753.32±1.07指标MDA (nmol ∕ml ) SOD (U ∕L ) ROS (U ∕L )HOMA-IRr0.533 -0.523 0.613p<0.01 <0.01 <0.012.3胰岛β细胞功能异常的相关因素分析:以胰岛J3细胞功能是否受损(HOMA-I 、RHOMA-β、IS I 任何一项发生异常定义为胰岛β细胞功能受损)为因变量,将TC ,TG ,HDL-C ,LDL-C ,FINS ,MDA ,SOD ,ROS 等有统计学意义的因素为自变量 ,引入非条件 Logistic 回归模型,进行多因素分析。