葡萄糖检验
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葡萄糖(GLu)测定方法操作规程【产品名称】通用名称:葡萄糖(GLu)测定试剂盒(葡萄糖氧化酶法)使用说明书【摘要】糖是人体的主要供能物质,也是组织细胞的主要成分。
血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定,当这些调节失去原有的相对平衡时,则出现高血糖或低血糖症状。
1.病理性高血糖:(1)原发性糖尿病(2)内分泌疾病:嗜铬细胞瘤、甲状腺毒瘤、肢端肥大症、巨人症、Cushing综合征、高血糖素细胞瘤;(3)胰腺疾病:急性或慢性胰腺炎、流行性腮腺炎引起的胰腺炎、胰腺囊性纤维化、血色病(血红蛋白沉着症)等;(4)抗胰岛素受体抗体与有关疾病:棘皮症、Wernicke’s脑病。
2.病理性低血糖:(1)胰岛细胞瘤、高血糖素缺乏;(2)对抗胰岛素的激素分泌不足,如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长激素、肾上腺皮质激素和甲状腺素分泌减少;(3)严重肝病患者,肝细胞糖原储存不足及糖原异生功能低下,肝脏不能有效地调节血糖。
【预期用途】该试剂盒采用葡萄糖氧化酶法,用于体外定量测定人血清或血浆中葡糖糖的含量。
【检验原理】葡糖糖被葡萄糖氧化酶氧化后生成过氧化氢,过氧化氢在过氧化物酶的作用下,与4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸钠缩合,生成醌系色素,通过测定此反应的吸光度可求得葡糖糖的含量。
D-2葡萄糖氧化酶D-葡萄糖醛酮+H2O22 H2O2 + 4-APP ++ H3O+POD醌系色素+ 5H2O【主要组成成份】试剂1(R1):磷酸盐缓冲液100 mmol/L抗环血酸氧化酶4700 U/L葡糖糖氧化酶4000 U/L试剂2(R2):磷酸盐缓冲液100 mmol/L过氧化物酶6700U/L4-氨基安替比林0.7 mmol/L对羟基苯甲酸钠 1.3 mmol/L校准品:葡萄糖溶液。
*不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【试剂准备】R1:即用液体试剂R2:即用液体试剂【储存条件与有效期】未开启的试剂盒避光保存于无腐蚀性气味和通风良好的室内,在2℃~8℃有效期为一年。
葡萄糖测定的标准操作规程【目的】体外检测血清中葡萄糖(GLU )的含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP ,室负责人监督落实。
2.本SOP 的改动,可由任一使用本SOP 的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h ,不饮酒24h 后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况。
孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。
此外,有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。
2.静脉采血除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪,低速离心机一、检测原理本试剂所采用的反应式如下:+--+++-−−−→−+--+--−→−+H NADH PG NAD ADPATP PDH G HK 6666磷酸葡萄糖磷酸葡糖糖葡萄糖式中:ATP 为三磷酸腺苷;ADP 为二磷酸腺苷;HK 为己糖激酶;G-6-PDH 为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶;6-PG 为6-磷酸葡萄糖酸上述反应中,NADH 的生成量与样本中葡萄糖的浓度成正比,通过在340nm 处测定吸光度的变化值,即可测得样本中葡萄糖的浓度。
二、试剂1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司HDL-C 试剂盒,为液体双试剂,各组分如下:试剂1(R1)三磷酸腺苷 0.75mmol/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 375U/LNAD 15mmol/L哌嗪-N,N ’-双(2-乙磺酸)缓冲液 50 mmol/L试剂2(R2)己糖激酶 60KU/L哌嗪-N,N ’-双(2-乙磺酸)缓冲液 50 mmol/L2.校准要求2.1校准品:使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清(货号:4490050/4590050)对测定进行校准。
目的:为检验葡萄糖辅料规定一个标准的程序,以便获得准确的实验数据。
范围:适用于葡萄糖的检验。
职责:检验员,检验室主任。
规程:1.性状:本品为无色结晶或白色结晶性或颗粒性粉末,无臭;味甜。
本品在水中易溶,在乙醇中微溶。
1.1 比旋度:精密称取本品约10g,置100ml量瓶中,加水适量与氨试液0.2ml溶解后用水稀释至刻度,摇匀,放置10分钟,在25℃时,按旋光度测定法(SOP-QC-310-00)测定。
比旋度应在+52.5°至+53.0°范围内为符合规定。
2.鉴别2.1 试剂与仪器2.1.1 碱性酒石酸铜试液 2.1.2 试管2.1.3 IR-470型红外光谱仪2.2 项目与步骤2.2.1 称取本品约0.2g,置试管中,加水5ml溶解后,缓缓滴入温热的碱性酒石酸铜试液中,即生成氧化亚铜的红色沉淀。
2.2.2 红外分光光度法:本品按红外光光度法测定法(SOP-QC-302-00)测定,本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致为符合规定。
3.检查3.1 试剂与仪器3.1.1 酚酞指示液 3.1.2 氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)3.1.3 1号浊度标准液 3.1.4 90% 乙醇3.1.5 标准氯化钠溶液 3.1.6 标准硫酸钾溶液3.1.7 碘试液 3.1.8 磺基水扬酸溶液(1→5)3.1.9 硝酸 3.1.10 硫氰酸铵溶液(30→100)3.1.11 标准铁溶液 3.1.12 醋酸盐缓冲液3.1.13 稀硫酸 3.1.14 溴化钾溴试液,盐酸3.1.15 烧杯 3.1.16 滴管3.1.17 回流管,三角烧杯瓶 3.1.18 比色管3.1.19 电炉 3.1.20 直热式电热恒温干燥箱3.1.21 坩埚 3.1.22 小型三用水箱3.2 项目与步骤3.2.1 酸度:称取本品2.0g,置烧杯中,加水20ml溶解后,加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)0.20ml,应显粉红色为符合规定。
葡萄糖1.目的规范葡萄糖测定的操作程序,确保葡萄糖测定结果准确。
2.检验方法氧化酶法(两点终点法) 3.检验原理 葡萄糖+O 2+H 2O 葡萄糖酸+H 2O 2H 2O 2+4-AAP+苯酚红色醌亚胺+4H 2O在波长505nm 处比色,计算出GLU 浓度。
4.临床意义临床检测GLU 浓度主要用于糖尿病诊断、昏迷鉴别诊断及糖代谢研究。
血糖增高主要见于:①生理性高血糖:可见于饭后1-2小时或情绪紧张肾上腺分泌增加时;②病理性高血糖:可见于内分泌功能障碍引起的糖尿病、颅外伤、颅内出血、脑膜炎引起的颅内高压、脱水引起的高血糖、急慢性胰腺炎、肝功能障碍等。
血糖降低主要见于:①生理性低血糖:常见于饥饿和剧烈运动后。
②病理性低血糖:可见于高胰岛素血症、非胰性肿瘤、糖原累积症、自身免疫性疾病、半乳糖血症和肾脏疾病等。
5.标本采集及干扰因素 5.1标本要求空腹不抗凝静脉血2~3ml 。
5.2标本保存室温保存,及时送检。
血清ALT 在20-25℃可稳定24小时,在2-8℃储存可稳定7d ,-20℃冰冻保存可稳定30d 。
5.3注意事项推荐选用血清,避免溶血,红细胞中ALT 比血浆高约7倍,溶血时红细胞内ALT 可进入血浆,导致测定结果偏高。
标本应避免溶血、脂血、黄疸。
6.检测仪器日立7180全自动生化分析仪,使用具体要求和校准程序详见《仪器GOPOD操作规程》。
7.试剂 7.1试剂品牌美康生物 7.2包装规格200mL (R1:2×65mL+R2:1×70mL ) 7.3主要组成成分 试剂成分含量(最终反应体系) 试剂1 磷酸盐缓冲液 0.1mol/L 苯酚0.01×10-3mol/L 试剂2葡萄糖氧化酶 16000u/L 过氧化物酶 1000u/L 4-氨基安替比林0.02×10-3mol/L不同批次的试剂不推荐混合使用 7.4储存条件有效期试剂在2-8℃保存可稳定1年,试剂开瓶后于2-8℃可稳定1个月。