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验证编号XX中基因毒性杂质XX测定方法学验证报告验证报告审批变更记载目录1.概述 (5)2.参考文献 (5)3.验证的结果与结论 (5)4.验证所需要的仪器、试剂及样品信息 (5)5.方法学验证内容 (6)5.1专属性 (6)5.2定量限与检测限 (7)5.3线性与范围 (7)5.4系统适用性 (7)5.5进样精密度 (8)5.6重复性 (8)5.7中间精密度 (9)5.7准确度 (9)5.8溶液稳定性 (9)5.9耐用性 (10)5.10****测定结果 (11)1. 概述此报告总结了基因毒性杂质****测定分析方法验证的试验过程与结论。
2.参考文献《中国药典》2015版通则9101《药物质量标准分析方法验证指导原则》 恒瑞研究院DP-041 基因遗传毒性杂质研究的一般要求3. 验证的结果与结论表1 基因毒性杂质测定方法学验证总结4. 验证所需要的仪器、试剂及样品信息表2 验证使用的主要仪器5.方法学验证内容5.1 专属性1）空白溶剂干扰：在**方法色谱条件下，对空白溶剂（****）进样分析，结果表明空白在****出峰位置没有干扰峰，相关图谱见图****。
2）分离试验：在**方法色谱条件下，对各工艺中间体**、**…与已知杂质**、**、**…进行进样分析，结果表明各杂质均可以与****完全分离，混合进样色谱图见图**。
或：在**方法色谱条件下，对各残留溶剂进行进样分析，结果表明各残留溶剂对****测定均无干扰，混合进样色谱图见图**。
3）样品中其他杂质干扰：在**方法色谱条件下，对本品粗品（批号****）进样分析，结果表明在GTIs出峰位置无其他干扰峰。
色谱图见图**。
4）强制降解：将样品按照下表进行强制降解试验，试验结果见表5表中数据表明，各降解条件下产生的降解杂质均可以与****完全分离，不影响****测定。
5.2定量限与检测限在编号为****的分析方法下，取****对照品（批号：****）约**mg，置50ml量瓶中，加稀释液（****，下同）溶解并稀释定容至刻度，作为储备液A，将储备液A逐级稀释并进样分析。
基因毒性杂质及其警示结构古语有云：“是药三分毒”。
这句话不管在传统中药还是现代化学药都是基本成立的。
对于化学药来说，在活性药物成分（API）的生产过程中，一些起始物料、中间体、试剂和反应副产物不可避免地作为杂质存在于最终产品中，因此一种药物的安全性不仅决定于它本身的毒性情况，也决定于它所含有的杂质的毒性情况。
根据国际人用药品注册技术要求协调会（ICH）指南，原料药杂质可分为有机杂质（有关物质）、无机杂质及残留溶剂三个主要类别。
而大部分基因毒性（或称为遗传毒性）杂质（Genotoxic Impurities, GTIs）就属于一类特殊的有关物质。
近些年发生过多起由于基因毒性杂质残留而导致的药品召回事件，为确保用药安全，各国及地区的相关组织如欧洲药品管理局（EMA）、美国食品药品管理局（FDA）、国际人用药品注册技术要求协调会（ICH）等相继发布杂质控制的相关规程及指导原则。
2017年6月，原国家食品药品监督管理总局（CFDA）加入ICH，这意味着我国在药品安全方面正式向国际接轨；2019年1月，国家药典委员会官网发布了“关于《中国药典》2020年版四部通则增修订内容（第四批）的公示”，其中就包含有“遗传毒性杂质控制指导原则审核稿（新增）”。
因此对国内药企来说，不管是面对国内市场还是走出国门，对基因毒性杂质的控制都是绕不过的坎。
什么是基因毒性杂质？根据《中国药典》的相关文件定义，基因毒性杂质是指能引起基因毒性的杂质，包括致突变性杂质和其它类型的无致突变性杂质。
其主要来源于原料药的生产过程，如起始原料、反应物、催化剂、试剂、溶剂、中间体、副产物、降解产物等。
致突变性杂质（Mutagenic Impurities）指在较低水平时也有可能直接引起DNA 损伤，导致DNA 突变，从而可能引发癌症的遗传毒性杂质；而非致突变机制的遗传毒性杂质在杂质水平的剂量下，一般可忽略其致癌风险。
而潜在基因毒性杂质（Potential Genotoxic Impurities，PGIs）是指其结构中含有与基因毒性杂质反应活性相似的化学结构，即警示结构（Structural alerts, SAs），通常也作为基因毒性杂质来评估。
遗传毒性杂质遗传毒性：泛指各种因素（物理、化学因素）与细胞或生物体的遗传物质发生作用而产生的毒性。
1、致突变性：与DNA相互作用产生直接潜在的影响，使基因突变（bacteria reverse mutation（Ames）试验）2、致癌性：具有致癌可能或倾向（需要长期研究！）3、警示结构特征：一些特殊的结构单元具有与遗传物质发生化学反应的能力，会诱导基因突变或者导致染色体重排或断裂，具有潜在的致癌风险。
遗传毒性物质：在很低的浓度下即可诱导基因突变以及染色体的断裂和重排，因此具有潜在的致癌性。
EMA通告（1）、具体事项：1、哪些品种中会出现甲磺酸酯（或甲磺酸烷基酯）。
特别是甲磺酸盐等形式的API或其合成中用到甲磺酸的API，甲磺酸烷基酯-甲磺酸甲酯、乙酯、其它低级醇酯，应认定为潜在杂质。
2、羟乙基磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐的API。
应说明类似物质磺酸烷基酯或芳基酯污染的危险。
3、限度要求：无其它毒性数据时，这些高风险杂质应依据TTC设定限度。
1.5μg÷以g为单位的最大日剂量得ppm限度。
4、法律依据：EP专论要求凡以甲磺酸盐和羟乙基磺酸盐形式存在的API，均应在其生产过程中采取以下安全措施：必须对生产工艺进行评估以确定家磺酸烷基酯（羟乙基磺酸烷基酯）形成的可能，特别是反应溶媒含低级醇的时候，很可能会出现这些杂质。
必需时需对生产工艺进行验证以说明在成品中未检出这类杂质。
（2）、落实措施：1、API生产是否涉及在甲磺酸（羟乙基磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸等低分子量磺酸）或相应酰氯存在下，使用甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇等低级脂肪醇（如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇等）。
2、对相应酯形成的可能性是否降到最低。
3、是否有有效的清除精制步骤。
设备清洗-是否设计的低级脂肪醇的使用（方法，TTC限度）？起始物料（低分子量磺酸盐或酰氯）中是否控制了其低级脂肪醇酯（方法，TTC限度）？当被磺酸酯或相关物质污染的磺酸用于API合成时能否保证其中潜在的遗传毒性杂质不超过TTC？应考虑各种烷基或芳基磺酸酯杂质累积的风险。
