大鼠骨髓间充质干细胞的分离方法和培养

大鼠骨髓间充质干细胞的分离方法和培养摘要】目的：探索在体外培养和纯化SD大鼠的骨髓间充质干细胞（BMSCs）的方法。

方法：采用改良全骨髓贴壁方法，分离和纯化3～4周的大鼠BMSCs，镜下连续观察细胞的形态变化。

流式细胞仪鉴定其表面抗原CD11b、CD45和CD90的表达情况。

结果：原代培养的细胞呈圆形和梭形等，24小时后大部分细胞均贴壁。

8～10天可达80%～90%融合，纯化后传代周期为6～8天。

流式细胞术鉴定表明CD11b和CD45阴性，CD90阳性。

结论：改良全骨髓贴壁法可有效分离培养大鼠的骨髓间充质干细胞，是一种比较理想的分离培养方法。

【关键词】骨髓间充质干细胞细胞培养大鼠【中图分类号】R730.5 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）13-0026-02Rat bone marrow mesenchymal stem cells‘s separation methods and tocultivate Zou Jin. Hun an Vocational College of Science and Technology, Hu’nan Province, Changsha 410014, China; Li Ya. Hu’nan University of Chinese Medicine, Hunan Province, Changsha 410004, China; Yin Jin. The Centers for Disease Control and Prevention of Hu’nan, Hu’nan Provin ce, Changsha 410007, China【Abstract】Objective To explore the in vitro culture and purification of SD rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) method. Methods Using improved the whole bone marrow adherent method, separation and purification of rat (for 3 ～ 4 weeks )of BMSCs, microscopically continuous observation of cell morphology change. To identification cells surface antigen CD11b, CD45 and CD90 expression using flow cytometry. Results The original generation of cultured cells is circular and spindle,after 24 hours, most of the cells are attached. 8 ～ 10 days later, the fusion of up to 80% ～ 90%. After purification，extend the period is 6 ～ 8 days. Using flow cytometry assay, CD11b and CD45 were negative, CD90 is positive. Conclusions Improved the whole bone marrow adherent method, which can effectively the isolation and cultureof rat bone marrow mesenchymal stem cells, is an ideal method of cultivation.【Key words】Bone marrow mesenchymal stem cells; Cell culture; The rat骨髓间充质干细胞是中胚层来源的干细胞，是具有多向分化潜能的成体干细胞之一[1]。

大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及鉴定韩玮;苏力担卡扎·仇曼;何铁英;程坤;郝晓文;王松;陈启龙【摘要】目的：探索大鼠骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）的分离、培养及鉴定方法。

方法采用贴壁分离方法，分离纯化3～4周龄 SD 大鼠的骨髓间充质干细胞，观察细胞生长状况，分别用免疫荧光染色、流式细胞仪鉴定及4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）标记细胞核的方法鉴定 BMSCs 纯度及活性。

结果原代 BMSCs 呈圆形、大小均一，透光性可，24 h 后开始贴壁，2 d 后开始长出伪足，7～8 d 细胞融合达90％，纯化后 BMSCs 呈梭形，24 h 细胞贴壁率可达99％，前4代细胞传代周期为7 d，之后传代周期逐渐缩短。

第3代BMSCs 的表面标志物 CD29阳性表达率为98．9％，CD44阳性表达率为73．3％。

DAPI 标记的 BMSCs 胞核可见明亮蓝色荧光，标记率达100％。

结论贴壁分离法分离大鼠 BMSCs，可得到纯度较高、活力强的 BMSCs，第3代BMSCs 生物学性状稳定。

%Objective To explore the methods of separate,culture and identification of rat bone marrow mesenchymal stem cells.Methods By adherent separation method,bone marrow mesenchymal stem cells were isolated and purified from 3-4 weeks old SD rat,then cell growth was observed,respectively by im-munofluorescence staining,flow cytometry and DAPI nuclear staining method for identification of BMSCs purity and activity.Results Primary BMSCs was round,uniform in size and light in transmission.After 24h begin to adherent,2 d began to grow following pseudopodia,90% of the cells were fused on 7-8 d, and purified BMSCs werefusiform.24 h cell adherent rate was 99% and before the 4th generation cell cycle was 7 days.After subculture,cycle graduallyshortened.The results of surface markers of the third gener-ation MSCs showed thatthe positive rate of CD29 was 98.9%,and the positive rate of CD44 was 73.3%. DAPI labeled BMSCs,the nucleus can see bright blue fluorescence,labeling rate of 100%.Conclusion Adherent separation of rat BMSCs have high purity and strong vitality of BMSCs,and the third generation of BMSCs shows stable biological character.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2016(039)009【总页数】4页(P1155-1158)【关键词】骨髓间充质干细胞;细胞培养;大鼠【作者】韩玮;苏力担卡扎·仇曼;何铁英;程坤;郝晓文;王松;陈启龙【作者单位】新疆医科大学第一附属医院胰腺外科，乌鲁木齐 830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科，乌鲁木齐 830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科，乌鲁木齐 830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科，乌鲁木齐 830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科，乌鲁木齐 830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科，乌鲁木齐 830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科，乌鲁木齐 830054【正文语种】中文【中图分类】R33骨髓间充质干细胞(BMSCs)为非造血干细胞，存在于骨髓中，易于获得及分离培养，可诱导为多重细胞，分泌多重生长因子、酶及趋化因子，在组织器官的修复及促进组织器官生长过程中起到关键作用[1]。

骨髓间充质干细胞分离及条件培养基在其培养扩增中的作用摘要：【目的】建立一种简便、快速、实用的大鼠骨髓间充质干细胞(mesenehymal stem cells，MSCs)体外分离、纯化和扩增的方法。

【方法】采用贴壁法分离纯化大鼠骨髓MSCs(rMSCs)，并对其形态学特征进行观察，培养时观察条件培养基对rMSCs生长的影响。

【结果】贴壁法能有效地分离rMSCs，采用条件培养液培养，细胞活力好，增殖能力强，对维持细胞正常形态有着重要作用。

【结论】贴壁分离法能成功地进行rMSCs的体外分离，采用爷件培养液建立的rMSCs培养方法有效可行。

关键词：骨髓问充质干细胞／分离和提纯；细胞培养骨髓间充质干细胞(MSCs)是一种成体干细胞，具有较强的可塑性，能被诱导分化为成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞、成肌细胞等⋯1，同时发现MSCs还具有独特的免疫调节作用[2-4J。

细胞学、组织学及器官学的研究者均把目光投向MSCs，同时MSCs也受到药理研究者的关注。

MSCs除了可作为组织工程较理想的种子细胞外，也可作为药物作用的靶标或药理研究的工具，利用MSCs体内外生物学性质进行中药作用机理的研究已有众多报道I 。

但由于骨髓中的MSCs含量很低，1 个骨髓单核细胞中仅含有1～2个MSCs~11 J，加之MSCs主要存在于骨内膜_】，要获得满足药物研究所需的数量比较困难。

因此，采用合适的MSCs分离、纯化和扩增的方法是许多研究的重要前提。

1 材料与方法1．1 动物Sprague Dawley(SD)大鼠，性别不限，体质量100～120 g，本校实验动物中心提供，合格证号为SCXK (粤)2003．0001。

1，2 主要试剂低糖Dulbeceo改进的Eagle培养基(1ow glucose Dulbecco’s Modified Ea e Medium，LDMEM)由GIBCO 公司提供；胎牛血清(fetalbovine serum，FBS)由杭州四季青生物工程材料有限公司提供；2．5 g／L胰酶(含0．2 g／L EDTA)由吉诺生物医药技术有限公司提供；HEPES为Sigma产品，广州威佳公司分装；青霉素、链霉素由华北制药有限公司提供；兔抗大鼠CD44、CD54、I 型胶原抗体，生物素化抗生蛋白链菌素复合(Streptavidin．Biotin．Complex，SABC)试剂盒，二氨基联苯胺(diaminobenzidine，DAB)显色试剂盒均由武汉博士德公司提供。

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定燕学波;杜运华;吕安林;邢玉洁;胡朝晖;胡新君;岳峰【摘要】目的研究大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及鉴定方法.方法采用颈椎脱臼法处死大鼠,用淋巴细胞分离液通过密度梯度离心法分离出骨髓间充质干细胞.然后通过换液培养去除悬浮不贴壁的细胞.待原代细胞长满培养瓶底85%左右时传代.倒置显微镜下观察骨髓间充质干细胞培养传代过程中细胞形态变化,流式细胞仪鉴定骨髓间充质干细胞表面抗原 CD44、CD45表达情况.结果在倒置显微镜下,刚接种的骨髓间充质干细胞呈圆形或球形,体积小,折光性强.3 d 后大部分细胞贴壁,体积较小,形态多样,为椭圆形、短梭形.2周形成集落,细胞数量明显增多,体积增大,以长梭形为主,呈放射状向四周扩展.传代后细胞生长旺盛,呈长梭形、旋涡状生长,且细胞形态均一,趋向一致.流式细胞仪测定骨髓间充质干细胞表面抗原 CD44阳性表达率为(89.98±1.29)%,CD45阳性表达率为(2.14±0.22)%.结论联合细胞形态学变化及细胞表面标记抗原 CD44和 CD45的鉴定,采用密度梯度离心法联合差速贴壁法能够获得纯化的大鼠骨髓间充质干细胞.% Objective To investigate isolation, culture and identification of rat BMMSCs. Methods Rats were killed by cervical dislocation, BMMSCs were isolated from bone marrow of SD rats by density gradient centrifugation. Other cells mixed in BMMSCs were removed by differential adhesion method, then the purified BMMSCs were obtained. The cells grown to 85 % confluence were digested and passaged at the ratio of 1:2 till fourth passage in vitro. The morphological changes were observed under phase contrast microscope during the culture and passage of BMMSCs.The positive surface marker CD44 and negative marker CD45 of cells were detected for the identification of BMMSCs withflow cytometry. Results Primary BMMSCs were smaller and had varied shapes, most of cells were of oval or short spindle and had strong refraction. The majority adhered after 3 d, and the cells showed morphological diversity ranging from oval, short spindle, to triangular or star-shaped. After 2 w, the adherent cells rapidly proliferated and formed large or small colonies. After passage, the cells were larger than the original cells and showed elongated spindle, arranged the same trend. The results of flow cytometry showed that CD44 expression of BMMSCs was (89.98±1.29)%, CD45 positive expression rate was (2.14±0.22)%. Conclusion The purified BMMSCs were obtained by density gradient centrifugation combined differential adhesion method. The purified BMMSCs could be identified by detecting positive surface antigen CD44 and negative surface antigen CD45.【期刊名称】《实用医药杂志》【年(卷),期】2012(000)010【总页数】3页(P931-933)【关键词】骨髓间充质干细胞;CD44;CD45;分离;鉴定【作者】燕学波;杜运华;吕安林;邢玉洁;胡朝晖;胡新君;岳峰【作者单位】河南信阳，154 医院心肾内科;河南信阳，154 医院心肾内科;陕西西安，解放军第四军医大学西京医院心内科;陕西西安，解放军第四军医大学西京医院心内科;河南信阳，154 医院心肾内科;河南信阳，154 医院心肾内科;河南信阳，154 医院心肾内科【正文语种】中文【中图分类】Q2-33近几年自体骨髓间充质干细胞（BMMSCs）移植技术发展迅速，逐渐成为治疗心肌梗死后心衰的有效办法之一。

大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养表型鉴定与标记大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养表型鉴定与标记目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离培养、表型鉴定和标记的方法,为临床进行细胞移植治疗心、肝、脑等器官急性衰竭提供种子细胞.方法无菌条件下取大鼠股骨、胫骨和腓骨,用冲洗法冲出骨髓,用直接贴壁法分离纯化MSCs,体外扩增,用免疫细胞化学法及流式细胞仪分别对培养的MSCs进行鉴定,并检测第3代MSCs的细胞周期.结果体外培养的原代MSCs 72 h内可见有少量贴壁细胞,7 d左右达到汇合.免疫细胞化学示,MSCs CD29、CD44、CD73、CD105、CD166表达阳性,而CD14、CD34、CD45表达阴性.流式细胞仪示,CD14阳性率为0.19%、CD29为64.36%、CD34为0.17%、CD44为86.73%、CD45为0.18%、CD73为90.21%、CD105为74.25%、CD166为54.60%.细胞周期显示,第3代MSCs约有90%的细胞处于G0/G1期.结论MSCs在体外很容易分离培养和扩增,DAPI标记MSCs敏感性好,标记效率高,可作为标记细胞的一种有效手段,MSCs体外培养成功为细胞移植治疗急危重症器官衰竭提供新的治疗途径.作者：何忠杰马俊勋方驰华杨丽萍作者单位：何忠杰,马俊勋(南方医科大学附属珠江医院普通外科,广东,广州,510280)方驰华(中国人民解放军总医院304急救部,北京,100037)杨丽萍(中国人民解放军总医院304烧伤研究所,北京,100037)刊名：中国急救医学 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CRITICAL CARE MEDICINE 年，卷(期)：2005 25(12) 分类号：Q503 Q813.1+1 关键词：骨髓间充质干细胞分离培养表型细胞周期大鼠流式细胞仪。

大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养方法优化祝旭龙;颜谭;姚维杰;王永恒;程冲;向俊西;吕毅;高庆东;李建辉【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2014(000)011【摘要】目的：建立一个分离、培养、纯化大鼠的骨髓间充质干细胞的方法。

方法使用贴壁法分离大鼠的骨髓间充质干细胞，通过培养初期的频繁换液和传代过程中减少胰蛋白酶的暴露时间，达到骨髓间充质干细胞的纯化。

流式细胞仪检测细胞表面标志物，MTT法检测细胞生长状况，暴露于不同的诱导培养基使细胞成骨、成脂，并向肝胆系分化。

结果分离所得的细胞阳性表达CD29、CD44、CD90，而对于造血细胞标志物CD45呈阴性。

在成骨、成脂培养基的诱导下，细胞ALP、茜素红、油红O染色均呈阳性，并发现传至10代的细胞仍保持分化功能。

将骨髓间充质干细胞贯续暴露于不同的细胞因子和激素，得到了表达肝细胞、胆管上皮细胞特异标志的子代细胞。

结论通过改良后的方法可以高效、简洁地分离出形态均一的大鼠骨髓间充质干细胞，并能够向多胚层的细胞分化。

%Objective To optimize the protocols for isolation and culture of mesenchymal stem cells from rat bone marrow (BMSCs). Methods BMSCs were isolated by adherence to plastic with frequent medium change and reduced trypsinization time. The cell growth curves were drawn and the surface markers of BMSCs were detected by flow cytometry. The cells were induced to differentiate into osteogenic, adipogenic, hepatic and cholic lineages. Results The cells isolated using this method were positive forCD29, CD44, and CD90 and negative for the hematopoietic surfacemarkers CD45. The osteogenic and adipogenic differentiation of the BMSCs was verified by alkaline phosphatase staining, Alizarin red staining and Oil red staining. The cell subcultures up to passage 10 maintained capacities of differentiation into osteogenic and adipogenic lineages. The BMSCs induced with sequential addition of growth factors, cytokines and hormones differentiated into cells expressing hepatocyte-and cholangiocyte-specific markers. Conclusion The optimized method allows efficient isolation of homogenous populations of MSCs from rat bone marrow, which can be induced into multiple cell lineages.【总页数】7页(P1621-1626,1631)【作者】祝旭龙;颜谭;姚维杰;王永恒;程冲;向俊西;吕毅;高庆东;李建辉【作者单位】陕西省人民医院/西安交通大学第三附属医院肿瘤外科，陕西西安710068; 延安大学医学院，陕西延安716000;陕西省人民医院/西安交通大学第三附属医院肿瘤外科，陕西西安 710068; 延安大学医学院，陕西延安716000;陕西省人民医院/西安交通大学第三附属医院肿瘤外科，陕西西安 710068;陕西省人民医院/西安交通大学第三附属医院肿瘤外科，陕西西安 710068;陕西省人民医院/西安交通大学第三附属医院肿瘤外科，陕西西安 710068;西安交通大学第一附属医院肝胆外科，陕西西安 710061;西安交通大学第一附属医院肝胆外科，陕西西安 710061;陕西省人民医院/西安交通大学第三附属医院肿瘤外科，陕西西安710068; 延安大学医学院，陕西延安716000;陕西省人民医院/西安交通大学第三附属医院肿瘤外科，陕西西安 710068【正文语种】中文【相关文献】1.全骨髓贴壁改良培养法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞 [J], 阳玉群;莫雪安;农伟东;杨龙秀;孔德燕;张泰鹏;刘金萍2.密度梯度离心及贴壁分离筛选相结合分离培养大鼠骨髓间充质干细胞 [J], 王英慧;郑瑞;陈莉3.密度梯度离心及贴壁分离筛选相结合分离培养大鼠骨髓间充质干细胞 [J], 王英慧;郑瑞;陈莉;4.大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养贴壁分离和消化控制相结合可否为简便高效的技术方法 [J], 刘品端;王伟;梅晰凡5.全骨髓培养法对大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定 [J], 李大伟;高广周;李欣;孙涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）的分离与鉴定大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）的分离与鉴定材料试剂(一)主要设备和产地1.手术器械上海手术器械厂2.台式水平离心机Eppendorf，5810R德国3.Nanopure超纯水仪日本SANYO公司4.AA一200型电子天平美国Denver Instrumol/Lent公司5.低温高速离心机ThermoForma公司6.90一2型磁力搅拌器上海沪西分析仪器厂7.电动匀速垂直转轮上海沪西分析仪器厂8.微量移液枪德国Eppendorf公司9.烧杯、容量瓶上海实生公司10.全自动酶标光度仪美国Bio-Rad公司11.6cm/10cm细胞培养皿美国Conring12.2mL冻存管、细胞冷冻储存器美国Conring13.低温高速离心机ThermoForma公司产品14.YJ-875超净工作台苏州工业园区三兴净化科技有限公司15.C02培养箱3111型美国Thermo Forma公司16.CK40-F200型倒置显微镜日本Olympus公司17.10ml注射器美国BD公司(二)试剂和材料1.谷氨酰胺(L-Glutamine)美国Hyclone公司2.75%消毒酒精上海生工3.肝素美国sigma公司4.胰蛋白酶美国Amresco公司5.胎牛血清美国Gibco公司6.α-MEM培养液美国Hyclone公司7.5-6周龄SD大鼠上海斯莱克实验动物有限公司8.Percoll细胞分离液美国GE公司9.DMSO(细胞培养级)美国Sigma公司Rat BMSC的分离与培养分离颈椎脱臼法处死大鼠，75%酒精中浸泡5分钟，超级工作台内依次取下大鼠两条胫骨及两条股骨。

用手术器械将长骨上附着的肌肉组织尽量去除干净，整个过程保持无菌。

用剪刀剪去长骨两端，10ml注射器吸取加入肝素的完全培养液（10%FBSα-MEM），从长骨一端开口处注入，将骨髓腔内的细胞出入到50ml离心管内，直至长骨冲洗的发白，认为骨髓腔内的细胞都被吹入离心管内。

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养与初步鉴定秦贺;杨仕明;赵立东;郑贵亮;郭维维;陈光涛;翟所强【期刊名称】《中华耳科学杂志》【年(卷),期】2009(0)4【摘要】目的探讨体外分离、传代培养大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的方法 ,并对培养细胞进行初步鉴定,为利用大鼠骨髓MSCs进行感音神经性聋细胞移植治疗的研究奠定基础.方法用贴壁培养法分离大鼠骨髓细胞,第1组于24小时全量换液,第2组于24小时半量换液,第3组于3天全量换液,传代扩增.相差显微镜进行形态学观察;RT-PCR检测培养细胞表面分子表达:定向诱导培养细胞向成脂细胞、成骨细胞方向分化.结果 24小时首次全量换液组培养7天后观察见少量细胞集落,细胞形态不规则;24小时首次半量换液组培养7天后观察见较多细胞集落,细胞规则,呈梭形、椭圆形:3天首次全量换液组培养7天后观察见较多悬浮细胞,与贴壁细胞混杂在一起.培养细胞表面分子SH2、CD31、CD44呈阳性表达,但不表达CD34.第2组培养细胞传代后加入不同诱导剂定向诱导分化一定阶段,分别经油红O及yon Kossa法染色鉴定证实MSCs可分别向脂肪细胞及成骨方向分化.结论本实验分离培养的大鼠骨髓原代细胞24小时首次半量换液培养利于大鼠骨髓MSCs的分离和纯化,可稳定表达SH2、CD31、CD44.MSCs具有多项分化潜能.【总页数】5页(P357-361)【作者】秦贺;杨仕明;赵立东;郑贵亮;郭维维;陈光涛;翟所强【作者单位】解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,解放军耳鼻咽喉研究所耳神经生物中心,北京,100853;解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,解放军耳鼻咽喉研究所耳神经生物中心,北京,100853;解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,解放军耳鼻咽喉研究所耳神经生物中心,北京,100853;解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,解放军耳鼻咽喉研究所耳神经生物中心,北京,100853;解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,解放军耳鼻咽喉研究所耳神经生物中心,北京,100853;解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,解放军耳鼻咽喉研究所耳神经生物中心,北京,100853;解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,解放军耳鼻咽喉研究所耳神经生物中心,北京,100853【正文语种】中文【中图分类】R394.26【相关文献】1.大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养及初步鉴定 [J], 王俊芳;罗永湘;方煌;陈安民2.密度梯度离心及贴壁分离筛选相结合分离培养大鼠骨髓间充质干细胞 [J], 王英慧;郑瑞;陈莉3.牛骨髓间充质干细胞的分离培养和初步鉴定 [J], 董方圆;董雅娟;胡亮;柏学进;于进亮4.牛骨髓间充质干细胞的分离培养和初步鉴定 [J], 董方圆;董雅娟;胡亮;柏学进;于进亮5.大鼠骨髓间充质干细胞的分离纯化与初步鉴定 [J], 张本斯;王凡;邓力;羊惠君;李瑞祥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠骨髓间充质干细胞的分离纯化与成骨鉴定作者：李显澎樊粤光刘建仁范海蛟江晓兵孙志刚曾建春阳建权【摘要】【目的】研究大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）的分离纯化和在诱导条件下的成骨能力。

【方法】取SPF级SD大鼠6只，采用全骨髓贴壁培养法分离成年大鼠骨髓间充质干细胞，取传至第3代的MSCs进行细胞形态和免疫组化鉴定；应用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的诱导分化培养液诱导传代细胞向成骨细胞分化，检测碱性磷酸酶（ALP）的活性和细胞矿化作用进行成骨细胞鉴定。

【结果】全骨髓贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓MSCs，MSCs在含体积分数为10% 胎牛血清的低糖DMEM（L-DMEM）培养液中生长性状相对稳定，增殖速度快；诱导条件下，细胞ALP活性明显增高，并出现了矿化结节。

【结论】建立了一种体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓MSCs的方法，成骨能力肯定，为中药蛋白质组学研究提供材料基础。

【关键词】骨髓间充质干细胞/病理学；细胞培养，体外的；组织工程骨髓间充质干细胞（MSCs）在体内外诱导因子的作用下，可向成骨细胞、成软骨细胞、肌腱细胞、脂肪细胞、神经细胞和星形胶质细胞转化，具有很大的可塑性［1］，这使其在组织工程、细胞治疗等方面成为研究的热点［2］。

为更好地将MSCs应用于骨质疏松症、骨坏死、骨缺损，本实验通过体外细胞培养的方法将MSCs从骨髓中分离纯化，观察MSCs在体外的扩增、鉴定，并诱导其定向成骨分化。

现报道如下。

1 材料与方法1.1 动物 SD大鼠6只，SPF级，体质量140~160 g，由广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号为：0025033。

1.2 主要试剂与仪器低糖DMEM （L-DMEM，美国Gibco 公司，GNM31600）；兔抗大鼠CD34（BA0532）、CD44（BA0321）、CD54（BA0541）（武汉博士德公司）；高糖DMEM（Hyclone，SH30022.01B）；胎牛血清（Hyclone，SV30087.01）；胰蛋白酶（Hyclone，SV30042.01）；β-甘油磷酸钠（美国Simga公司）；地塞米松（美国Sigma公司）；D-hanks （美国Simga公司）；维生素C（美国Sigma公司）；生物素化抗生蛋白链菌素复合物（streptavidin biotin complex，SABC）（SA1022）试剂盒（武汉博士德公司）；二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）（AR1022）（武汉博士德公司）；其他试剂均为国产分析纯。