南京工业大学微生物实验自来水大肠菌群的检测

(2023)微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)水中微生物实验报告实验概述•实验名称：水中微生物总数和大肠菌群的检测•实验时间：2023年•实验地点：实验室实验目的•检测水中微生物总数和大肠菌群的存在情况•评估水质卫生状况，指导水资源管理和人群健康实验方法1.采集不同来源的水样。

2.将水样制成不同浓度的稀释液。

3.取一定量的水样稀释液注入培养皿中。

4.加入适当培养基，进行菌落计数和形态特征观察。

5.通过酶促法检测大肠杆菌。

实验结果•来源于自来水厂的水样中，微生物总数为100CFU/mL，大肠菌群未检测到。

•来源于河流的水样中，微生物总数为1000CFU/mL，大肠菌群为20CFU/100mL。

•来源于地下水的水样中，微生物总数为10CFU/mL，大肠菌群未检测到。

结论•来源于自来水厂的水样水质较好，不存在大肠菌群的污染。

•来源于河流的水样水质较差，大肠菌群的检出说明存在污染，需进行水质治理。

•来源于地下水的水样水质较好，不存在大肠菌群的污染。

实验意义•检测水中微生物总数和大肠菌群的存在情况，有利于保障人类健康和水资源的可持续利用。

•提供科学依据和技术支持，指导水资源管理和水质卫生监测。

实验注意事项•实验过程需严格遵守无菌操作规范，防止样本污染。

•实验前需对实验设备、培养基等进行消毒处理，确保实验环境洁净。

•实验结束后，需妥善处理实验产生的废液、废料等。

实验展望•未来可进一步开展对水中其他微生物种类的检测，深入了解水生态系统的生物多样性。

•结合近年来人类活动和气候变化的影响，对水质卫生进行长期监测，及时掌握水质变化趋势。

•根据实验结果，制定针对性的水资源管理和水质卫生治理措施。

结语该实验通过检测水中微生物总数和大肠菌群，评估了水质的卫生状况。

实验结果表明，水质卫生状况与水源的来源密切相关。

希望通过类似的实验，加强对水质卫生状况的监测和管理，确保水资源的可持续利用，保障人们的用水安全和健康。

实验五自来水中细菌菌落数和大肠菌群数的测定一、实验目的l．学习水样的采取方法、水样细菌总数测定的方法和平板菌落计数的原则。

2．学习水中大肠菌群数的测定方法。

二、实验原理细菌菌落总数是指水样经过处理，在一定条件培养后，所得1毫升检验样中所含细菌菌落的总数。

本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。

由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。

目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。

大肠菌群是肠道中最普遍存在和数量最多的一群细菌，常将其作为人畜粪便污染的标志。

水被大肠菌群污染，就有可能存在病原菌污染，所以，大肠菌群是重要的水质卫生指标。

水中大肠菌群数是以液体稀释培养计数法测定，即100毫升检样中大肠菌群最可能数（most probable number，MPN）。

三、实验器材l．培养基（1）肉膏蛋白胨琼脂培养基蛋白胨1克，牛肉膏0.5克，氯化钠0.5克，琼脂1.5克，蒸馏水100mL，pH7.2～7.4。

121℃灭菌15min，备用。

（2）乳糖胆盐发酵培养液蛋白胨2克，猪胆盐0.5克，乳糖1克，0.5%中性红水溶液0.5mL，蒸馏水100mL，pH 7.4。

分装到三角瓶和试管中，并放入一倒置杜氏小管。

115℃灭菌15min，备用。

双料发酵管除蒸馏水外，其它成分加倍，三倍料发酵管各组分用量增加至三倍。

2. 仪器或其他用具培养箱，试管，杜氏小管，三角烧瓶，带玻璃塞瓶，培养皿，吸管，等。

四、实验内容l．水样的采取(1) 取样瓶的灭菌准备好清洁的容量为100毫升的磨砂口带塞瓶，瓶的颈部和上部用牛皮纸覆盖，并用线捆好，然后160～170℃干热灭菌2h。

(2) 自来水的采取为了取得典型的水样，取自来水样时，至少应先放水5min，以冲去龙头口所带的微生物。

水中细菌总数的测定和大肠菌群的检测（一)实验目的(1)了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义。

(2)学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法。

(3)学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。

（二)实验原理水是微生物广泛分布的天然环境。

各种天然水中常含有一定数量的微生物。

水中微生物的主要来源有：水中的水生性微生物(如光合藻类)、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。

水中的病原菌主要来源于人和动物的传染性排泄物。

水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。

国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每mL不超过100个。

所谓细菌总数是指1mL或1g检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，由于计算的是平板上形成的菌落(colony-forming unit，cfu)数，故其单位应是cfu/g(mL)。

它反映的是检样中活菌的数量。

所谓大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。

水的大肠菌群数是指100mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。

在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽胞杆菌等多种细菌。

这些细菌都可随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量最多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。

目前，国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。

因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。

水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。

多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。

滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于阻塞滤孔的水样。

自来水中细菌总数的测定【摘要】本实验应用平板菌落技术测定水中细菌总数。

以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌种数仅是一种近似值。

实验用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在保证无菌的环境下，采取自来水的样品，利用培养基制作平板，计数。

国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每毫升不超过100个。

所谓细菌总数，指1毫升或1克检样中所含的细菌菌落的总数。

按菌落计数方法进行计数，得到如下结果：在显微镜下可观察到众多的菌落且种类繁多，取其平均值得到，菌落数为65/mL，自来水中细菌总数为65/mL，符合国家饮用水标准。

【关键词】自来水细菌总数平板菌落计数技术牛肉膏蛋白胨琼脂培养基自来水的微生物学检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。

应用平板计数技术测定水中细菌总数是用微生物测水质的常用方法。

由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。

目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。

通过此方法我们能够计算出水中的细菌总数，从而判断自来水是否符合国家标准，是否受到污染。

1材料与方法1.1 水样的采取先在自来水龙头周围放置酒精灯进行灭菌，再放开水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。

1.2 固体培养基的制作牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏 1.5g 蛋白胨 5.0g NaCl 2.5g水500mL pH 7.4～7.6将培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后到入烧杯。

也可放在称量杯中，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。

实验六水中细菌总数和大肠菌群的检测摘要:本实验以测定公园河流水的细菌总数和大肠菌群的数量，来测定特定地点的水质情况.初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标，判定水体的质量。

对该实验点的水源作出了定性的评价，以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。

关键字：河流水；细菌总数测定；大肠菌群;EMB培养前言各种天然水中常含有一定数量的微生物。

水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正相关,因而是评价水质污染程度的重要指标之一。

细菌总数是指1mL水样中所含细菌菌落的总数[cfu/g（mL)],可用稀释平板计数法检测.水中大肠菌群的数量可用来判断水源是否被粪便污染，并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。

特征:G—无芽孢杆菌，兼性厌氧、在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气。

多管发酵法初发酵:适当稀释样品,乳糖发酵培养，产酸产气;分离培养:伊红美蓝(EMB）平板上划线分离，出现紫色、粉红色特征性菌落；复发酵验证：挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。

材料和方法牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：用于水中细菌总数测定牛肉膏5g，蛋白胨10g， NaCl 5.0 g，琼脂8g，蒸馏水1000ml; pH 7。

0乳糖胆盐蛋白胨培养基：用于初发酵1×：蛋白胨 20g、牛胆盐 5g、乳糖 10g、0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL（调pH值后加）、水1000mL、pH 7。

2－7。

4三倍浓缩液（3×）:除水以外,其余成分取三倍用量分装：1×的培养基分装9ml/管, 3×的培养基分装5ml/管或50ml/瓶，均装上德汉氏小管。

灭菌条件：115℃ ,15min。

EMB培养基：用于大肠菌群菌落鉴定脱水培养基,按说明书操作，水用量为90％.水源：紫竹院河水仪器：高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒精灯、显微镜等。

试剂：牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂粉，伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0.04%溴甲酚紫水溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂具体实验步骤：1)，相关器械的灭菌操作，以及前往紫竹院取少量的样品水。

水中细菌总数的检测及大肠菌群的测定一、实验的目的要求1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。

二、实验原理细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。

细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标。

我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数。

所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染，但不能说明污染的来源。

因此必须结合总大肠菌群数来判断水污染的来源和安全程度。

本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。

由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。

目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。

平板菌落计数法的优点：能测出样品中的活菌数。

此法常用于某些成品和生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。

缺点：手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。

生活饮用水细菌卫生标准我国饮用水卫生标准：≤3个大肠菌群/1L饮水，≤100个细菌总数/1ml饮水三、实验仪器和材料(三)实验器材(1) 菌落总数的测定：1)培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌生理盐水。

2)器材：灭菌三角瓶，灭菌的具塞三角瓶，灭菌平皿，灭菌吸管，灭菌试管等。

(2)大肠菌群的测定；1)培养基：伊红美蓝琼脂培养基：蛋白胨10g，乳糖10g， K2HP042g， 2％伊红水溶液20Ml，0.65％美蓝水溶液lOmL，琼脂17g，水1000mL，pH7.1。

制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶于水中，校正pH后分装．121℃灭菌15min备用。

临用时加入乳糖并熔化琼脂，冷至50-55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。

自来水大肠菌群的检测***1*（南京工业大学生物与制药工程学院南京 211800）【摘要】水是制药和食品行业使用最为广泛的原料，也是赖以生存和发展的物质基础。

水与药品、食品中的其他原料一样，必须符合既定的质量标准，如果水被污染就会影响多批次产品。

另外，对微生物实验室来说，水是各种培养基、缓冲液、检测剂的主要组成部分实验采用自来水作为样品，对样品进行接种，分离，纯化，培养得到具有不同特征的肠杆菌。

通过对肠杆菌的数量和形态特征的分析，确定自来水是否被污染和污染程度。

【关键词】多管发酵，大肠杆菌，最大可能数(MPN)，发酵实验，革兰染色前言：城市生活供水水质与人们生活息息相关，为确保饮水合用水安全，必须对其进行严格的常规监测。

但是水体中直接检测出病原微生物比较困难，因为它们数量极少，而且培养条件苛刻，分离鉴定比较困难。

因此常选用指示微生物作为水体中病原微生物数量的指标。

大肠菌在人体内和粪便中存在很多，受气污染的水体中较容易检测到大肠菌的存在，并且检测方法简单。

因此，常用大肠菌群为指标评价水的卫生质量。

大肠菌群是一群需氧或兼性厌氧的、在37℃培养24-48h能发酵乳糖产酸产气的革兰阴性无芽孢杆菌，包括埃希菌属（Escherichia）、柠檬酸杆菌属（Citrobacter）、肠杆菌属（Enterbactor）、克雷伯菌属（Klebsiella）。

大肠菌群数是指每升水之中含有的大肠菌群的近似值，根据水中大肠杆菌数的数目即可判断水源是否被污染，并推断水源受肠道病原菌污染的可能性。

本实验采用多管发酵法对水质微生物进行分析。

该方法适用于各种水样，包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三部分。

初发酵试验室用无菌操作技术向一系列装有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中接种一定量水样，培养。

能产酸产气者说明水样中含有大肠杆菌群细菌。

再根据产酸产气（阳性）管数求出100ml待测水样中是否存在大肠杆菌群细菌，而且可以检测出待测水样中大肠杆菌群的最大可能数。