南京工业大学微生物实验-自来水大肠菌群的检测

大肠菌群检测(MPN法)大肠菌群检测(MPN法)是一种常用的微生物学技术，可用于检测土壤、水源、食品等中的大肠菌群进行水质和食品安全监测。

本文将介绍大肠菌群及其检测方法-最可能数法(MPN法)。

一、大肠菌群概述大肠菌群是以肠道菌属为主体的一类细菌，包括肠道埃希菌、沙门氏菌、志贺菌、伤寒杆菌等成员，它们可以在人类和动物的肠道中生存并繁殖。

在自然界中，大肠菌群也是广泛存在的微生物家族，如彗星菌、副肠杆菌、耶尔森氏菌等都属于大肠菌群。

1.菌落计数法该方法主要是利用琼脂平板培养皿在水培的条件下，大肠菌群在培养基上经不同时间的生长，形成菌落来进行菌数计数。

缺点是容易受到其他微生物的干扰，只能算出概略的数值，一定误差，没有国家标准。

2. 硝酸德钠试剂法将测样加硝酸德阳试剂进行加热，最终乳黄色的镜检测前进行比色，得出含大肠菌群的细菌群落达标后延迟显色的时间。

该方法已被最可能数(MPN)法所替代。

3. 最可能数法(MPN法)该方法先将测量的样品分别稀释到不同浓度下，再将每一份稀释液添加到以琼脂平板固化培养基为基础的不同培养液中，观察哪一份培养液出现大肠菌群的生长，最后通过MPN表格计算每85ml或100ml的水样中最可能含有的大肠菌群数量，计算公式为：10^x = n / 联合效价（即dilution rate的倒数）其中，x代表最可能数，n代表测量到大肠菌群的样品数。

在实际工作中，MPN法检测显示出了较好的结果，优点是用固定方法，可重复性好，而且可以通过相关将分析获得定量值，便于与相关的标准进行比较。

三、大肠菌群的检测范围1. 水源：大肠菌群检测是办公室里检测饮用水可能携带的最佳方法。

一般情况下，检测过程是检测水中的微生物是否合乎标准。

2.食品：由于食品生产经常存在卫生要求，因此食品也是大肠菌群检测重要的一环。

例如，必须检测火腿或肉类制品中的大肠菌群是否合格以确保食品安全。

3. 其他领域：大肠菌群检测可以用于医学、农业、环境和建筑等领域，如医院污水浑浊度的检测和土壤中大肠菌群的检测。

生产用水微生物菌落与大肠的检测流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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1. 掌握水中大肠杆菌检测的基本原理和方法。

2. 了解水中大肠杆菌污染的严重性及预防措施。

3. 培养实验操作技能，提高对水质监测的认识。

二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种条件致病菌，广泛存在于人和动物的肠道中。

在水质监测中，大肠杆菌常作为粪便污染的指示菌。

本实验采用伊红美蓝培养基进行大肠杆菌的检测，通过观察菌落特征，确定水中大肠杆菌的存在。

三、实验材料1. 实验器材：无菌试管、移液器、培养箱、酒精灯、无菌棉签、试管架、培养皿、显微镜等。

2. 实验试剂：伊红美蓝培养基、无菌水、水样、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠等。

四、实验步骤1. 水样采集：采集待检测水样，用无菌容器盛装，避免污染。

2. 水样稀释：将水样进行适当的稀释，以便在培养基上形成单菌落。

3. 接种：取适量稀释后的水样，用无菌棉签均匀涂布于伊红美蓝培养基表面。

4. 培养：将接种后的培养基放入培养箱中，在37℃条件下培养24小时。

5. 观察：观察培养基上的菌落特征，如菌落大小、形状、颜色等，判断是否存在大肠杆菌。

6. 鉴定：对疑似大肠杆菌的菌落进行进一步的鉴定，如革兰氏染色、生化试验等。

五、实验结果与分析1. 菌落观察：在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌菌落呈深紫色（黑色），边缘整齐，有金属光泽。

2. 鉴定结果：经革兰氏染色和生化试验，证实所观察到的菌落为大肠杆菌。

1. 大肠杆菌是水质监测中的重要指标，其存在表明水质可能受到粪便污染，存在健康风险。

2. 本实验采用伊红美蓝培养基进行大肠杆菌检测，操作简便，结果准确。

3. 在实际水质监测中，还需结合其他指标，如粪大肠菌群、耐热大肠菌群等，全面评估水质状况。

七、实验总结1. 本实验成功检测了水中大肠杆菌，掌握了水中大肠杆菌检测的基本原理和方法。

2. 通过实验，提高了对水质监测的认识，增强了环保意识。

3. 在今后的学习和工作中，将继续关注水质问题，为保护水资源、保障人民群众健康贡献力量。

水处理微生物水体中总大肠菌群的检验水处理微生物学实验实验设计:水体中总大肠菌群的检验班级:给排水121 姓名:胡嘉伟学号:6002212029 一、实验原理1.大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。

主要生活在大肠内。

在肠道中大量繁殖，几占粪便干重的1/3。

大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。

所以在平常外界环境中不能正常存活很长。

在环境卫生不良的情况下，常随粪便散布在周围环境中。

若在水和食品中检出此菌，可认为是被粪便污染的指标，从而可能有肠道病原菌的存在。

因此，大肠菌群数(或大肠菌值)常作为饮水和食物(或药物)的卫生学标准。

(国家规定，每升饮用水中大肠杆菌数不应超过3个)二、主要仪器设备药品:普通乳糖蛋白胨培养液(蛋白胨 10g，牛肉膏 3g，乳糖5g，氯化钠 5g，1.6,溴甲酚紫乙醇液 1.0mL，蒸馏水 1000mL，pH 7.2~7.4。

9g配蒸馏水100ml),三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液, EMB，革兰染液等。

品红亚硫酸钠培养基(蛋白胨 10g，乳糖 10g，K2HPO4 3.5g，琼脂 15,20g，蒸馏水1000mL，无水亚硫酸钠 5g，5,的碱性品红乙醇溶液 20mL，pH 7.2~7.4。

).伊红美蓝培养基(EMB培养基)(蛋白胨10g，乳糖10g，K2HPO4 2.0g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，2,伊红(曙红)水溶液20mL，5,美蓝(亚甲蓝)水溶液13mL，pH 7.2~7.4。

) 仪器:显微镜，天平，培养箱，水浴锅，培养皿，10ml吸管1支,100ml量筒1支，洗耳球，量筒，灭菌锅，酒精灯，接种环，试管，报纸。

水样:湖水三、实验方案1.初发酵实验。

a、包装8个中等大小的培养皿和1支10ml、7支1或2ml的移液管。

并进行干热灭菌。

b、配制25ml三倍浓度乳糖蛋白胨培养液，分装到5支试管中(每支5ml)，配制160ml普通浓度乳糖蛋白胨培养液，分装到16支试管中(每支10ml)，每支试管内加入一个倒放的布氏小管，保证小管内无气泡。

水中大肠杆菌检测实验报告水中大肠杆菌检测实验报告水是人类生活中不可或缺的资源，但是水中的污染物对人体健康造成了严重的威胁。

其中，大肠杆菌是一种常见的水质污染指标，其存在表明水体可能受到粪便污染。

本实验旨在通过检测水样中的大肠杆菌含量，评估水质的安全性。

实验材料和方法：1. 实验材料：- 水样：从自然水源中采集的水样。

- 大肠杆菌检测试剂盒：包括培养基、试剂和培养皿等。

- 实验室设备：包括离心机、恒温培养箱等。

2. 实验方法：- 采集水样：在适当的采样点采集水样，保持样品的原始性。

- 准备培养基：按照检测试剂盒说明书的要求，准备好培养基。

- 培养大肠杆菌：将水样加入培养基中，经过适当的培养条件（如温度、时间等），使大肠杆菌得到生长。

- 检测大肠杆菌：根据检测试剂盒的指引，使用试剂对培养后的水样进行检测。

实验结果：经过实验，我们得到了水样中大肠杆菌的检测结果。

根据检测试剂盒的指示，如果水样中检测到大肠杆菌，说明水质存在潜在的健康风险；如果水样中未检测到大肠杆菌，说明水质相对安全。

讨论：本实验的目的是评估水质的安全性，通过检测大肠杆菌的存在与否来判断水样的卫生状况。

大肠杆菌是一类存在于动物和人类的肠道中的细菌，其存在于水中可能是由于粪便污染。

因此，水中大肠杆菌的检测是评估水质卫生状况的重要指标。

通过本实验，我们可以得出以下结论：1. 水样中未检测到大肠杆菌，说明水质相对安全，可以放心饮用或使用。

2. 水样中检测到大肠杆菌，说明水质存在潜在的健康风险，不宜直接饮用或使用。

然而，需要注意的是，本实验只是初步的水质评估方法之一，仅能提供关于大肠杆菌存在与否的信息，并不能全面评估水质的安全性。

在实际应用中，还需要综合考虑其他水质指标，如化学物质、重金属等的含量，以及水源的来源和处理情况等因素。

此外，本实验中使用的大肠杆菌检测试剂盒是一种常见的快速检测方法，其操作简单、结果迅速，适用于实验室和野外条件下的水质检测。

水中大肠菌群的检测一、实验目的1、了解大肠菌群数量与水质状况的关系。

2、了解饮用水和水源水大肠菌群的原理和意义。

3、掌握大肠菌群对人体健康的影响以及作为水体评价的指标和对象。

4、学习检测水中大肠菌群的方法。

二、实验原理1、大肠菌群大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。

主要生活在大肠内。

在肠道中大量繁殖，几占粪便干重的1/3。

大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。

所以在平常外界环境中不能正常存活很长。

在环境卫生不良的情况下，常随粪便散布在周围环境中。

若在水和食品中检出此菌，可认为是被粪便污染的指标，从而可能有肠道病原菌的存在。

因此，大肠菌群数（或大肠菌值）常作为饮水和食物（或药物）的卫生学标准。

（国家规定，每升饮用水中大肠杆菌数不应超过3个）2、初发酵试验发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置杜氏小套管。

乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。

为便于观察细菌的产酸情况，培养基内加有溴甲酚紫作为PH指示剂，细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色。

溴甲酚紫还有抑制其他细菌如芽孢菌生长的作用。

水样接种于发酵管内，37℃下培养：（1）24h内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠杆菌，疑为阳性结果；（2）在量少的情况下，也可能延迟48h后才产酸产气，此时应视为可疑结果。

以上两种结果均需继续做下面两部分实验，才能确定是否是大肠菌群。

（3）48h后仍不产气的为阴性结果。

3、MPN - 概述最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。

其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。

本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等。

水中大肠菌群的检测法（多管发酵法）一、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。

大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌（Escherichia coli）为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽泡杆菌，在37°C生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。

我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。

多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。

发酵管内装有乳糖蛋口豚液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。

乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。

本实验为精简实验，所以省略了平板分离和复发酵试验后两部分，直接通过第一部分初发酵试验的颜色变化进行判断是否存在大肠菌群。

初发酵试验水样接种于发酵管内，37°C下培养，24小时内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。

48小时后仍不产气的为阴性结果。

二、实验器材1•水样中心湖的湖水2.试剂三倍浓缩乳糖蛋口腺发酵管3.仪器及其它用品移液枪，16支试管（16支德汉氏小套管）三、实验步骤初发酵试验取16支发酵管，其中10支用移液管加入10ml 一倍的乳酸蛋口腺培养液，5支加入5ml三倍乳糖蛋白腺培养液，1支加入9ml自然水。

然后往16支试管各倒置一支汉氏小套管。

完成后包装好，于121°C高压灭菌锅中灭菌30min左右。

将取回来的中心湖水样稀释20倍。

待试管冷却后，在无菌操作条件下，向装有三倍的乳酸蛋白腺培养液的5支试管加入10ml水样，向装有一倍的乳糖蛋白腺培养液的5支试管中加入lml水样，向装有一倍的乳酸蛋白豚培养液的另5支试管中加入lml IO"水样。

将各试管充分混均，置于37°C恒温箱中水样体积10mL lmL变黄数555产气数555培养24ho四、实验结果同时观察其他两组也是用中心湖水样的，其结果全都是显示为黄色。

水质大肠杆菌检测方法水质大肠杆菌是一种常见的水污染指标微生物，其存在表明水体可能受到了粪便或污水的污染。

因此，对于饮用水、游泳水、工业用水等不同用途的水体，检测水质中大肠杆菌的含量具有重要意义。

本文将介绍几种常用的水质大肠杆菌检测方法，以供参考。

一、培养基法。

培养基法是一种常见的大肠杆菌检测方法，其基本原理是将水样在含有大肠杆菌生长所需营养物质的培养基上培养，然后观察培养基上是否有大肠杆菌的生长。

这种方法操作简单，成本较低，但需要一定的培养时间，通常需要24-48小时才能得到结果。

此外，培养基法对于大肠杆菌的特异性较差，可能会同时检测出其他肠道菌群。

二、膜过滤法。

膜过滤法是一种常用的水质微生物检测方法，其原理是将水样通过微孔膜过滤，然后将膜放置在含有营养物质的培养基上进行培养。

通过计数膜上的大肠杆菌落，可以得到水样中大肠杆菌的数量。

这种方法操作简便，结果准确，而且可以检测到低浓度的大肠杆菌。

但是，膜过滤法需要一定的实验室设备和技术支持。

三、分子生物学方法。

随着分子生物学技术的发展，PCR（聚合酶链式反应）和实时荧光定量PCR等分子生物学方法也被应用于水质大肠杆菌检测中。

这些方法具有高度的特异性和灵敏度，可以快速准确地检测出水样中的大肠杆菌。

此外，分子生物学方法还可以对大肠杆菌进行分子鉴定和基因分析，为进一步研究提供了有力的支持。

然而，分子生物学方法需要相对复杂的实验操作和昂贵的设备，对操作人员的技术要求也较高。

综上所述，针对水质大肠杆菌的检测，可以根据实际情况选择合适的方法。

培养基法操作简单，成本低，适合于一般的水质监测；膜过滤法准确性高，可以检测低浓度的大肠杆菌；而分子生物学方法则具有高度的特异性和灵敏度，适合于对水质中微生物的深入研究。

在实际应用中，可以根据需求和条件选择合适的检测方法，以保障水质安全和生态环境的健康。

大肠菌群检测的实验报告大肠菌群检测实验报告一、实验目的本实验旨在通过检测样品中的大肠菌群数量，评估其卫生质量，为食品安全和人类健康提供重要依据。

二、实验原理大肠菌群是指一群革兰氏阴性、无芽孢、兼性厌氧的细菌，主要包括埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠球菌属等。

这些细菌可在25-37℃的环境下生长，且在伊红美蓝培养基上形成典型的大肠菌群菌落。

本实验采用MPN（最大可能数）方法进行大肠菌群的检测。

通过在不同浓度的样品中接种不同体积的培养基，并按照MPN表进行统计分析，以获得样品中大肠菌群的数量。

三、实验步骤1.样品处理：将样品按照10倍递增的方式进行稀释，以适应不同浓度的大肠菌群检测。

2.接种培养：分别取0.1mL、0.01mL、0.001mL的样品稀释液，接种于伊红美蓝培养基中，每个稀释度接种三管。

轻轻摇匀，倒置培养。

3.培养观察：将培养基放入37℃的培养箱中，培养24小时。

观察每个稀释度的培养管中是否有典型的大肠菌群菌落形成。

4.结果统计：根据MPN表，统计每个稀释度下形成菌落的管数，并计算大肠菌群的数量。

5.结果报告：根据实验数据，得出样品中大肠菌群的数量，并评估其卫生质量。

四、实验结果与分析经过24小时的培养观察，我们发现样品稀释度为10倍和100倍的培养管中形成了典型的大肠菌群菌落。

根据MPN表进行统计分析，得出样品中大肠菌群的数量为9.0×10²CFU/mL。

根据国家相关标准，该样品的大肠菌群数量超过了安全阈值（<10³CFU/mL），因此该样品的卫生质量不达标。

五、结论与建议通过本实验的检测和分析，我们得出样品中大肠菌群的数量超出了安全阈值，说明该样品的卫生质量不符合要求。

这可能是由于生产过程中的污染、储存条件不当或运输环节不卫生等原因导致的。

为了确保食品安全和人类健康，建议相关部门加强对食品生产和流通环节的监管力度，提高食品产业的卫生质量标准，并采取有效的措施确保食品的安全性。

实验六水中大肠菌群(Coliform group)细菌的检测一、实验目的1.采用多管发酵法，以最近似数的方式测定水中大肠菌群数。

2. 掌握微生物实验中无菌操作技术方法。

二、实验原理如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原苗污染而引起肠道传染病。

由于肠道病原菌在水中数量较少，故从水中特别是自来水中分离病原菌常常非常困难。

大肠菌群细菌是肠道好氧菌中最普遍和数量最多的一类细菌，所以常常将其作为粪便污染的指示菌。

即根据水中大肠菌群细菌的数目来判断水源是否受粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。

一般规定每1000ml自来水中大肠菌群细菌不得超过3个．大肠菌群细菌是指一类好氧或兼性厌氧，革兰氏阴性，无芽孢的杆菌，包括四种细菌：大肠埃希氏杆菌、枸椽酸盐杆菌、产气杆菌及副大肠杆菌。

它们有相似的生化反应，能发酵葡萄糖，产酸产气，但发酵乳糖的能力不同。

当将它们接种到含乳糖的远滕氏培养基上生长时，四种菌的反应不一样，大肠埃希氏杆菌的菌落呈紫红色带金属光泽；枸椽酸盐杆菌的菌落呈紫红或深红色；产气杆菌的菌落呈淡红色，中心色深；副大肠杆菌的菌落无色透明(因不利用乳糖所致)。

本试验采用多管发酵法，以最近似数的方式来记载，这一数字是根据概率公式来估算，有大于实际数字的倾向，在增加每种稀释度的试管重复数后，可减少偏差。

本法除了用于检测水样(淡水或海水)外，尚可用于泥浆、沉积物、污泥等的检测。

测定时先将这类固体或半固体样品预先称重，再加水稀释，可取50g 样品，置于盛有450ml灭菌磷酸盐缓冲液并装有玻璃珠、石英砂的锥形瓶中，振荡l~2min，便成10-1稀释，以用于检验。

三、实验材料1.培养基；1.1乳糖胆汁液体培养基：蛋白胨：20.0g， 1.6％溴甲酚紫乙醇溶液：l ml，乳糖：5.0g，胆酸钠：5.0g将蛋白胨、乳糖、胆盐加热溶解于1000m1蒸馏水中，调pH值至7.2～7.4，加入1.6％溴甲酚紫乙醇溶液l ml，充分混匀，分装于有倒置杜汉氏小管的试管中，注意小管中不得有气泡，115ºC灭菌20min。

检测学校自来水、饮用水、空气的含菌量一、实验目的利用所学到的微生物知识来检测学校自来水、饮用水、空气含菌量是否符合国家卫生指标，进一步掌握微生物培养、检测的方法。

二、实验原理1.利用菌体平板培养法，通过平板菌落计数计算0.1毫升含菌量，可以推测出平均含菌量。

2.大肠杆菌在伊红美蓝琼脂平板上菌落呈紫黑色，有金属光泽，同时做革兰氏染色镜检，呈红色(一般就为大肠杆菌)。

三．1.实验器材4支无菌试管（有塞）培养皿12个无菌吸液管2个2.试剂：牛肉膏蛋白胨培养基伊红美蓝琼脂培养基EMP四．操作方法1.水样采取分别在f2和二区取水，打开水龙头排水3---5分钟，用无菌细管接水样，马上盖好盖，分别为2管饮用水和2管自来水。

2制作培养基牛肉膏蛋白培养基牛肉膏3g蛋白胨10gNaCL 5g琼脂15---20g水1000mlPh 7.0---7.2伊红美蓝琼脂培养基EMP（伊红美蓝在培养基冷却到50—60度加）3.高温灭菌4灌注5 总菌培养。

冷却后，取样液10-1和10-2各0.01ml涂到牛肉膏蛋白胨培养基，各2个平板6.伊红美蓝培养测定大肠杆菌。

冷却后，取样液10-1和10-2各0.01ml 涂到伊红美蓝琼脂培养，各2个平板。

7牛肉膏培养空气中的菌体。

冷却切后放在校园人较为密集处打开盖三到五分钟，取三个点，每个点2个培养基。

8在37度下培养二十四小时10.菌落计数11.计算。

水每100ml含菌量，空气每立方含菌量。

1.国家自来水卫生标准2.国家饮用水卫生标准3.国家空气卫生标准。