复方贞芪颗粒的质量标准研究
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本制剂原方为临床使用验方，传统给药方式为汤剂，为了便于携带及增加病人的顺应性，我们根据药物性质和临床应用特点，将其研制成颗粒剂并采用ＨＰＬＣ测定其有效成分含量，进行质量监控。
方中君药女贞子，具有护肝降酶、促进肝细胞再生、抗炎、强心、利尿、抗肿瘤等作用，其主要指标性成分为齐墩果酸，目前作为治疗肝病和降血糖等药物的有效成分０－３１。
为了方便、快速地监控该制剂的质量，本研究采用ＴＬＣ法对方中白芍、刺五加、黄芪进行了定性鉴别，并建立了君药女贞子中的齐墩果酸的含量测定方法。
１仪器与试药Ｗａｔｅｒｓ５１５泵，Ｗａｔｅｒｓ２４８７紫外一可见检测器，Ｒｈｅｏｄｖｎｅ进样器，中国科学院大连化学物理所ＷＤＬ一９５色谱工作站，ＡＳ２０５００Ａ型超声机（ＡＵＴＯＳＣＩＥＮＣＥ公司，功率２５０Ｗ，频率５０ｋＨＺ）。
ＡＥＬ－４０ＳＭ型电光分析天平（ＳＨＩＭＡＤＺＵ公司）。
实验药材均购于安徽省毫州市药材公司，经南京中医药大学王春根教授鉴定，符合２００５年版《中国药典》规定。
齐墩果酸对照品购自中围药品生物制品检定所（批号：１１０７０９—２００３０４）。
甲醇为色谱纯（江苏汉邦科技有限公司产品），水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。
２薄层色谱鉴别【４ｌ２．１黄芪嘲取３个批次复方贞芪颗粒各一份，每份１０ｇ，加乙醇１００ｍＬ，加热回流４ｈ，滤过，滤液蒸干，残渣加水２５ｍＬ使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取３次，每次２５ｍＬ，合并正丁醇液，用氨试液洗涤２次，每次５０ｍＬ，弃去氨试液，正丁醇液再用水洗涤３次，每次５０ｍＬ，正丁醇液蒸干，再加水２ｍＬ使溶解，加于Ｃ憎同相萃取柱，先用２５％乙腈５ｍＬ洗脱，弃去洗脱液，再用３５％乙腈５ｍＬ洗脱，收集３５％乙腈洗脱部分，蒸干，残渣加甲醇ｌｍＬ使溶解，作为供试品溶液。
取缺黄芪阴性制剂，按上述制剂的处理方法，得阴性制剂溶液。
另取黄芪对照药材３ｇ，加稀乙醇３０ｍＬ，加热回流４ｈ，滤过，滤液蒸干，残渣加正丁醇２０ｍＬ，超声处理３０ｍｉｎ，滤过，滤液用５％ＮａＯＨ溶液洗３次，每次２５ｍＬ，再用正丁醇饱和的水洗至中性，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇ｌｍＬ使溶解，作为对照药材溶液。
再取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每ｌｍＬ含１ｍｇ的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（《中国药典》嗍２００５版一部附录ⅥＢ）试验，吸取上述三种溶液各８～１０灿Ｌ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷一甲醇一水（１３：７：２）下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以１０％硫酸乙醇溶液，在１０５ｏＣ加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同的褐色斑点；而阴性制剂在相同的位置无此斑点的存在。
薄层鉴别色谱图见图１。
图１黄芪的薄层鉴别色谱图１．缺黄芪阴性制剂；２黄芪甲苷对照品；３．黄芪对照药材；４．复方贞芪颗粒（僻０３１０）；５．复方贞芪颗粒（０８０３１１）；６复方贞芪颗粒（０８０３１２）２．２自芍取３个批次复方贞芪颗粒各一份，每份５ｇ，加乙醇５０ｍＬ，加热回流１ｈ，滤过，滤液蒸干，加水５０ｍＬ使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取３次，每次２５ｍＬ，合并正丁醇液，用氨试液２次洗涤，每次５０ｍＬ，弃去氨试液，正丁醇液再用水洗涤３次，每中药新药与临床药理２０１０年７月第２１卷第４期·４２３·次５０ｍＬ，正丁醇液蒸干，残渣加水２ｍＬ使溶解，通过ｃ。
固相萃取柱，先用ｌｏ％乙腈２ｍＬ洗脱，弃去洗脱液，再用２５％乙腈５ｍＬ洗脱，收集２５％乙腈洗脱部分，蒸干，残渣加乙醇１ｍＬ使溶解，作为供试品溶液。
另取白芍对照药材０．５ｇ，加乙醇１０ｍＬ振摇５ＩＩｌｉｎ，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇ｌｍＬ使溶解，作为对照药材溶液。
取缺白芍阴性制剂，按上述制剂处理方法得阴性对照液。
再取芍药苷对照品适量，加乙醇制成每１ｍＬ含ｌｍｇ的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（附录ⅥＢ）试验，分别吸取上述６份溶液１０乩，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷一甲醇一水（１３：７：２）下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以５％香草醛硫酸溶液，１０５ｏＣ加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点；而阴性制剂在相同位置无此斑点存在。
薄层鉴别色谱图见图２。
图２白芍的薄层鉴别色谱图１．缺白芍阴性制剂；２．芍药苷对照品；３．白芍对照药材；４．复方贞芪颗粒（０８０３１０）；５．复方贞芪颗（０８０３１１）；６．复方贞芪颗粒（０８０３１２）２．３刺瓦加取３个批次复方贞芪颗粒各一份，每份２５ｇ，按２００５版药典【ｑ刺五加鉴别项下内容处理，得３份供试品溶液。
另取刺五加对照药材５ｇ，同法制成对照药材溶液。
取缺刺五加阴性制剂２５ｇ，同法制成阴性药材试液，再取异嗪皮啶对照品适量，加甲醇制成每１ｍＬ含１ｍｇ的溶液，作为对照品溶液。
按照薄层色谱法（附录ⅥＢ）试验，吸取上述６份溶液各１０乩，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷一甲醇（１９：１）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（３６５ａｍ）下检视。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点；而阴性在相同位置无此斑点。
薄层鉴别色谱见图３。
图３刺五加的薄层鉴别色谱图１．缺刺五加阴性制剂；２异嗪皮啶对照品；３．刺五加对照药材；４．复方贞芪颗粒（０８０３１０）；５．复方贞蓖颗粒（０８０３１１）；６．复方贞芪颗粒．（０８０３１２）３齐墩果酸的含量测定３．１对照品来源及纯度检霞齐墩果酸对照品以标准液浓度（１．３１６ｍｇ／ｍＬ）进行标准品纯度检查，图谱在２倍保留时间（ｔＲ）内积分，结果表明齐墩果酸标准品纯度为９８％以上。
采用高低浓度自身对照法进行对照品纯度检查，结果齐墩果酸标准品纯度为９８．６４％。
３．２色谱条件色谱柱：ＬｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒＣ，。
色谱柱。
流动相：以甲醇一水溶液系统为流动相进行色谱分析，流动相为甲醇一水（９０：１０）（Ｖ／Ｖ），流速：０．５ｍＵｍｉｎ。
测定波长：２２０ａｍ。
柱温：３０℃。
在上述色谱条件下，样品中齐墩果酸与其它峰呈良好分离，空白制剂在此处无干扰，结果见图４。
为确保定量分析的准确性，在系统实验中齐墩果酸理论塔板数不得低于２５００。
重复二支ＬｉｅｈｒｏｓｐｈｅｒＣ。
色谱柱，均能达到上述指标，符合要求。
３．３供试品溶液的制备取本品装量差异下颗粒，研匀，取约１．０ｇ，精密称定，置１００ｍＬ具塞三角瓶中，精密加入９０％甲醇２５ｍＬ，称定重量，超声处理３０ｍｉｎ（２５０ｗ，５０ｋＨｚ），取出放冷，补足减失的重量，过０．４５Ｉｘｍ微孔滤膜，作为供试品溶液。
３．４阴性制刺溶液的制备按全方比例称取缺女贞子的药材，按制剂工艺制备制成粉末，取约ｌｇ，精密称定，其余步骤同供试品溶液的制备方法。
３．５混标溶液的制备将配置好的齐墩果酸标准品（１．３１６ｍｇ／ｍＬ）溶液和熊果酸标准品溶液（１．０１２ｍ∥ｍＬ）各取１ｍＬ置于５ｍＬ容量瓶中，以相同流动相进样，结果显示（图４），齐墩果酸和熊果酸这两个峰接复方贞芪颗粒的质量标准研究作者：须明玉， 朱华旭， 郭立玮， XU Mingyu， ZHU Huaxu， GUO Liwei作者单位：南京中医药大学药学院,南京,210029刊名：中药新药与临床药理英文刊名：TRADITIONAL CHINESE DRUG RESEARCH AND CLINICAL PHARMACOLOGY年，卷(期)：2010,21(4)1.沙静妹;毛洪奎齐墩果酸 1982(06)2.相延英;杨光常用中药中齐墩果酸和熊果酸的含量测定[期刊论文]-中国医院药学杂志 2004(05)3.江铁军SPE-lip-HPIE法测定婉子药材中齐墩果酸.熊果酸的含量[期刊论文]-广东药学院学报 2007(05)4.廖琼峰;李继反相高效液相色谱法测定陆英中齐墩果酸和熊果酸的含量[期刊论文]-药物分析杂志 2005(07)5.刘丹;孟艳秋;赵娟齐墩果酸与熊果酸结构修饰物的药理活性和构效关系研究进展[期刊论文]-化学通报(印刷版) 2007(01)6.国家药典委员会中华人民共和国药典2005版(一部) 20057.林晓莲;张尚斌复方黄连液制备工艺与质量标准研究[期刊论文]-中医药导报 2009(06)8.吕武清;龙新华中成药中的药材薄层色谱鉴别 19979.王忠壮;苏中武;胡晋红太白楤木对实验性搪尿病大鼠血糖及血脂的影响 1996(10)10.王云发;何史;郝光霞女贞素降糖作用的实验研究 1986本文链接：/Periodical_zyxyylcyl201004028.aspx。
