工作菌液储存期限验证

标准菌种管理规程目的：规范药品微生物学检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。

职责： QC 主管负责菌种的申购、接受、保存、分发，微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。

范围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。

内容：1术语标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。

传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。

工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。

菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0 代。

2.标准：2.1 检定菌的申购QC主管每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，交由质量管理部部长审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）药检所购买传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。

2.2 检定菌的接收菌种到达实验室后，由QC主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌接收记录》（附表 1）上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，贴好标签并储存于 2-8?C直到需要使用时。

储存期最长不超过 5 年。

2.3 检定菌的保存2.3.1 工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。

将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱中保存。

此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。

保存时间根据菌种种类而不同，细菌： 1 个月；酵母菌： 2 个月；霉菌及芽胞： 3 个月。

灭菌后的培养基及美国药典标准参考内毒素工作溶液有效期的确认1.0 Purpose 目的The purpose of this protocol is to validate the shelf life of media in sealed (bottle with silicagel plug and screw cap flask) and unsealed container ( Petri dishes) and USP ReferenceStandard Endotoxin (RSE) working solution. (concentration –10EU/ml)该方案是确认装在密封容器（包括胶塞瓶及旋盖瓶）及非密封容器（培养皿）中的培养基以及美国药典标准参考内毒素工作溶液(浓度为10EU/ml)的有效期。

2.0 Background & Scope背景和范围3.0 Applicable Documents 参考文件4.0 Materials 物料4.1 Test articles测试物品A．Microbiological media after autoclaving 灭菌后的培养基Three separate batches of flasks and petri dishes(screw cap and silica gel plug: per batchwill be filled with 400mls of media; petri dishes: per plate will be filled with 8-10ml of agarmedia.每种培养基准备三个批次瓶装的及倒好平板的（胶塞瓶及旋盖瓶每瓶装400ml 培养基；平板每个装8-10ml 琼脂培养基）B. RSE working solution (concentration –10EU/ml). RSE工作溶液 (浓度为10EU/ml)RSE working solution (concentration –10EU/ml) of 1000ml volumetric flasks for threeseparate batches.准备三个批次碘量瓶装的浓度为10EU/ml的美国药典标准参考内毒素工作溶液，每瓶装1000ml。

高水平消毒物品储存时限的研究傅响玲;张玉侠;章晓燕;毛鸣琦;张洁;庄燕华【摘要】目的探讨高水平消毒物品储存有效期限,为临床安全应用消毒物品以及消毒供应中心何时进行物品的再处理提供依据。

方法将临床各科室送至消毒供应中心高水平消毒处理后的呼吸机管道、呼吸机管道附件、复苏囊、面罩等物品共240件（普通科室与ICU各120件,用保鲜自封袋包装后,送至科室,统一储存于治疗室的整理箱内,于消毒后保存1周,2周,3周,1个月,2个月,3个月时分别采样进行细菌培养。

结果不同储存时限消毒物品细菌培养均合格,普通科室组和ICU组的消毒物品在消毒后1周、2周、3周、1个月、2个月和3个月的细菌学培养均为合格。

结论经过高水平消毒后的物品储存3个月是安全可使用的,更长的储存时限还需进一步的验证。

【期刊名称】《护理学杂志》【年(卷),期】2016(031)004【总页数】2页(P55-56)【关键词】消毒供应中心;高水平消毒;储存地点;储存时限;普通科室;ICU【作者】傅响玲;张玉侠;章晓燕;毛鸣琦;张洁;庄燕华【作者单位】[1]复旦大学附属儿科医院消毒供应中心,上海201102;[2]复旦大学附属儿科医院护理部,上海201102【正文语种】中文【中图分类】R472.1呼吸机管道、复苏囊及面罩是危重患者抢救救治中常用的诊疗用具。

有研究表明，呼吸机管路是细菌寄居的重要部位，呼吸机管路污染是导致呼吸机相关性肺炎(VAP)的重要危险因素[1]。

消毒技术规范规定，呼吸机管道、面罩等中度危险性物品应采用高水平消毒或中水平消毒[2]，但未对其储存有效期限做出规定。

各个医院的储存时限也都不相同。

我院一直以来沿袭1周消毒1次的规定并无循证依据。

本研究旨在通过对消毒供应中心高水平消毒后的物品储存不同时间后进行采样细菌培养，以探索此类物品的储存时限，为高水平消毒后的物品储存时限提供依据。

1.1 一般资料选择2015年1～7月临床各科室送至消毒供应中心处理的呼吸机管道、呼吸机管道附件、复苏囊、面罩等物品共240件。

无菌有效期验证资料
无菌有效期验证资料是指对无菌产品进行有效期验证的相关资料。

这些资料包括但不限于以下内容：
1. 无菌产品的生产日期和有效期：记录无菌产品的生产日期和有效期，以确保产品在有效期内保持无菌状态。

2. 无菌产品的灭菌方法和灭菌剂的验证：记录无菌产品的灭菌方法和灭菌剂的验证结果，以确保灭菌过程能够有效地杀灭微生物。

3. 无菌产品的包装材料和包装过程的验证：记录无菌产品的包装材料和包装过程的验证结果，以确保包装能够有效地防止微生物的污染。

4. 无菌产品的微生物检测结果：记录对无菌产品进行微生物检测的结果，包括菌落总数、霉菌和酵母菌的检测结果，以确保产品在无菌状态下。

5. 无菌产品的贮存条件和贮存期验证：记录无菌产品的贮存条件和贮存期的验证结果，以确保产品在贮存期内保持无菌状态。

这些资料是对无菌产品进行有效期验证的重要依据，能够确保产品在有效期内保持无菌状态，从而保证产品的质量和安全性。

灭菌后的培养基及美国药典标准参考内毒素工作溶液有效期的确认1.0 Purpose 目的The purpose of this protocol is to validate the shelf life of media in sealed (bottle with silicagel plug and screw cap flask) and unsealed container ( Petri dishes) and USP ReferenceStandard Endotoxin (RSE) working solution. (concentration –10EU/ml)该方案是确认装在密封容器（包括胶塞瓶及旋盖瓶）及非密封容器（培养皿）中的培养基以及美国药典标准参考内毒素工作溶液(浓度为10EU/ml)的有效期。

2.0 Background & Scope背景和范围3.0 Applicable Documents 参考文件4.0 Materials 物料4.1 Test articles测试物品A．Microbiological media after autoclaving 灭菌后的培养基Three separate batches of flasks and petri dishes(screw cap and silica gel plug: per batchwill be filled with 400mls of media; petri dishes: per plate will be filled with 8-10ml of agarmedia.每种培养基准备三个批次瓶装的及倒好平板的（胶塞瓶及旋盖瓶每瓶装400ml 培养基；平板每个装8-10ml 琼脂培养基）B. RSE working solution (concentration –10EU/ml). RSE工作溶液 (浓度为10EU/ml)RSE working solution (concentration –10EU/ml) of 1000ml volumetric flasks for threeseparate batches.准备三个批次碘量瓶装的浓度为10EU/ml的美国药典标准参考内毒素工作溶液，每瓶装1000ml。

菌种管理制度1、目的建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。

2、适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销毁等。

3、定义➢标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。

➢传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。

➢工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。

➢菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。

4、职责4.1部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。

4.2微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。

5、规程5.1菌种的申购部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划（包括临时检验需要），填写申购流程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌株）或传代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。

5.2菌种的接收菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《标准菌株库存记录》上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4～8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。

5.3菌种的保存5.3.1工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。

将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至4～8℃冰箱中保存。

此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。

保存时间根据菌种种类而不同，细菌：每个月转种一次；酵母菌及芽胞：3~6个月转种一次；丝状真菌每年转种一次。

附表1 黑曲霉孢子悬液贮存期确认用培养基、稀释液序号名称生产商1玫瑰红钠琼脂培养基北京三药科技开发公司2含0.05%（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液聚山梨酯80：北京益利精细化学品有限公司氯化钠：国药集团化学试剂有限公司注：玫瑰红钠琼脂培养基已通过适用性检查。

助消化、抗病毒、抑菌防腐、抗氧化之作用。

临床用于治疗咽喉肿痛、咳嗽痰黏、失音、烦渴、鱼蟹中毒和湿疹较理想。

西青果又名“藏青果”，为中药诃子的幼果。

其化学成分与青果有许多不同，其醇提取物有清除羟自由基及抗DNA氧化作用。

临床多用于治疗阴虚白喉和急、慢性咽炎。

由于青果与西青果的不同，建议医师在遣方用药时，根据患者病情注意区分使用并准确书写；同时注意西青果的常用剂量很小，药典规定剂量为1.5～3g，约为青果的1/3。

中药调剂人员亦应按《饮片调剂规程》的饮片药味应付规定，正确调配。

以使临床用药更加合理有效。

参考文献1 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)2010版[S].北京:中国医药科技出版社,2010:183,1212 北京市药品监督管理局.北京市中药饮片炮制规范2008年版[S].北京:化学工业出版社,2010:243,2313 何志勇,夏文水.中药青果化学成分及药理研究进展[J].中成药,2006,28(7):1024～10264 张鑫.西青果化学成分的研究[J].解放军广州医高专学报,1998,21(2):100～1015 彭勃,苗明三,王颖芳,等.橄榄解酒饮对大、小鼠急性酒精性肝损伤模型自由基代谢的影响[J].江苏中医药,2004,25(1):55～566 彭勃,苗明三,王颖芳,等.橄榄解酒饮对大鼠急性酒精性肝损伤肝组织病理形态的影响[J].中国中医药学报,2004,19(8):468～4707 袁剑刚,刘昕,汤展球.橄榄的抑菌效应及其药效成分的初步研究[J].食品科学,2001,22(3):82～848 王恒,宋良科,汤昊,等.不同种质青果清热利咽化学组分的研究[J].中国中药杂志,2010,35(6):699～6729郑民实.E L I S A技术检测中草药抗HBeAg的实验研究[J].中国医院药学杂志,1991,11(2):5310 张亮亮,林益明.橄榄果实提取物中没食子酸含量及自由基清除能力的研究[J].林产化学与工业,2009,29(B10):192～19411 阿不都热依木,阿不都艾尼,哈木拉提,等.五种维吾尔药的清除羟自由基及抗损伤作用研究[J].中草药,2001,32(3):236～23812北京市卫生局,北京市中医管理局.北京市中药饮片调剂规程2011版[S].2011:50～51（20131019收稿）北京北大维信生物科技有限公司（100094）马威 王晓峰 孟春玲Δ 张丽梅 闫夏黑曲霉孢子悬液贮存期的确认摘要：目的 我厂QC微生物实验室制备的黑曲霉孢子悬液用于基于《中华人民共和国药典》（2010年版）附录“微生物限度检查法”进行的微生物计数方法学验证及计数培养基适用性检查。

菌种保存、传代、使用、销毁管理规程-操作规程菌种管理制度1、目的建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。

2、适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销毁等。

3、定义标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。

传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。

工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。

菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。

4、职责4.1部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。

4.2微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。

5、规程5.1菌种的申购部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划（包括临时检验需要），填写申购流程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌株）或传代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。

5.2菌种的接收菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《标准菌株库存记录》上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4〜8 C 冰箱中，在一周内必须完成转种。

5.3菌种的保存5.3.1工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。

将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至4〜8C冰箱中保存。

此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。

保存时间根据菌种种类而不同，细菌：每个月转种一次；酵母菌及芽胞：3~6个月转种一次；丝状真菌每年转种一次。

文件编号：消毒剂消毒效力及储存有效期验证方案1.概述31.1消毒剂种类31.2消毒剂成分和作用机理32.验证目的33.验证范围34.验证小组成员及分工45.相关文件46.风险分析47.验证内容47.1验证前准备57.2验证用消毒剂的配制67.3消毒剂消毒效力确认67.4消毒剂储存有效期的确认77.5消毒剂消毒效果确认88.相关记录89.验证进度及计划810.验证偏差和变更810.1验证偏差810.2验证变更91. 概述1.1 消毒剂种类本公司在洁净区使用的消毒剂有0.1％新洁尔灭溶液、含氯消毒液<有效氯含量为0.5g/L>、75％乙醇溶液和3%双氧水四种。

其中75％乙醇溶液和3%双氧水用于A/B级洁净区消毒,0.1％新洁尔灭溶液用于C级和D级洁净区消毒,含氯消毒液用于地漏消毒。

1.2消毒剂成分和作用机理1.2.1 0.1％新洁尔灭溶液是一种阳离子表面活性剂,其作用机理是：破坏细胞膜,改变其通透性而起杀菌作用。

含氯消毒液<有效氯含量为0.5g/L>的主要消毒成分是次氯酸钠,属于高效的含氯消毒剂。

含氯消毒剂的杀菌作用包括次氯酸的作用、新生氧作用和氯化作用。

次氯酸的氧化作用是含氯消毒剂的最主要的杀菌机理。

含氯消毒剂在水中形成次氯酸,作用于菌体蛋白质。

次氯酸不仅可与细胞壁发生作用,且因分子小,故侵入细胞内与蛋白质发生氧化作用或破坏其磷酸脱氢酶,使糖代谢失调而致细胞死亡。

次氯酸钠的浓度越高,杀菌作用越强。

75％乙醇溶液的主要消毒成分为乙醇,属中效消毒剂,其作用机理是〔1使蛋白质变性：乙醇作用于细菌细胞首先起到脱水作用,乙醇分子进入到蛋白质分子的肽链环节,使蛋白质发生变性沉淀；〔2破坏细菌细胞壁：乙醇具有很强的渗透作用,60％～85％的乙醇比较容易渗透到菌体内,使得细菌细胞破坏溶解。

〔3对微生物酶系统破坏：乙醇通过抑制细菌酶系统,特别是脱氢酶和氧化酶等,阻碍了正常代谢,抑制细菌生长繁殖。

菌种验收、传代与保藏作业指导书1.目的为确保菌种管理的正确操作性，制定本作业指导书。

2.适用范围适用于实验室各菌种。

3.职责检验员负责菌种的验收、传代与保藏。

4.内容4.1定义标准菌株是指由国内或国际菌种保藏机构保藏的，遗传学特性得到确认和保证并可追溯的菌株。

传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。

工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。

菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每培养一次即称为一代。

所有传代用菌种和工作用菌种的传代次数应严格控制，原则上不得超过5代（从菌种保藏机构获得的标准菌株为第0代），以防止过度传代增加菌种变异和污染的风险。

4.2标准菌的来源标准菌株需有明确来源，应可溯源至国内或国际认可的菌种保藏中心的标准菌株。

4.3标准菌的验收新购买的标准菌株应检查是否随菌种附有菌种证书。

接收时还应检查菌种数量和名称及每一支包装的完整性。

在相应的菌种验收记录上记上所有的关于菌种的信息，如名称、数量和验收日期等。

新购入的标准菌株储存于－20℃冰箱。

4.4菌种的复苏与传代根据不同的菌种保存方法和保存形式，选择适宜的方法无菌开启菌种。

应减少开启过程对菌种活力的影响，且不要引入外部污染。

经冷冻干燥安瓿保存的菌种：先用适宜的消毒剂擦拭安瓿后，用砂轮在安瓿上部1/3处划痕，将安额管顶部烧热，将无菌水滴于加热处使顶部出现裂纹，用无菌器具轻叩裂纹处上部，开启安瓿管的顶端，用适宜的缓冲液或液体培养基溶解菌块，并转移至新鲜的培养基上培养。

甘油小瓷珠保存法保存的菌种：取出冻存管并用力摇晃，使管内瓷珠分散。

无菌条件下拧开冻存管，用无菌的接种环（接种针）或镊子取出1个小瓷珠，拧紧瓶盖。

尽可能快地将冻存管放回原来的保存环境，温度过多改变将减弱细菌的生产能力。

取出的小瓷珠可以直接放在平板培养基上作划线接种，或者直接置于适合的液体培养基中培养。

1.目的PURPOSE (5)2.范围SCOPE (5)3.引言INTRODUCTION (5)4.参考资料REFENRENCE (6)5.验证方法TEST METHOD (6)5.1.所用仪器和物料 (6)5.2.测试工作菌种 (6)5.3.实验程序 (6)6.接受标准 (8)6.1.消毒效力接受标准： (8)6.2.中和效力控制及其接受标准： (8)1.目的PURPOSE验证惠氏苏州工厂目前使用的几种消毒剂Process LpHse: 酸性、Process VespheneⅡ se:碱性、Ethanol 酒精溶液、快活溶液，在不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、塑料门帘、墙面等不同材质上的消毒效力，同时验证消毒剂的使用有效期。

2.范围SCOPE本验证需要验证的消毒剂有：Process LpHse: (酸性)、Process VespheneⅡ se:(碱性)、Ethanol 酒精溶液、快活溶液FORWARD disinfectant四种。

3.引言INTRODUCTION本验证的原理是，在某种材质表面接种0.1ml (104-105CFU)的菌种，室温下自然风干后，将消毒剂直接喷在材质表面，等消毒剂作用一段时间后，检验没有被杀灭的细菌数；根据细菌被杀灭的数量，来判断消毒剂的杀菌效果。

实际消毒操作时，消毒剂喷到要消毒物体表面后，再通过人为的涂擦等操作使消毒剂与物体表面充分接触，同时，此操作也会机械去除掉一部分微生物。

在该验证中，消毒剂是喷到材质表面，这种方法要比实际消毒时的效果差，因此验证的结果更能体现实际的消毒效果。

4.参考资料REFENRENCEDisinfectant Effectiveness Study（812-Analytical Report-0807-1.0）SOPTS-35(V5)5.验证方法TEST METHOD5.1.所用仪器和物料➢所用培养皿、移液管、容器均在121度下灭菌30分钟后使用➢无菌一次性培养皿，移液管。

无菌检查方法的验证无菌检查方法的验证无菌检查方法是为了检查药典要求无菌的制剂及其他制品是否无菌而建立的试验方法，是作为无菌产品批放行的重要依据及药监部门对无菌产品质量监管的一个重要工程。

因此如何确保无菌检查方法的准确可靠至关重要，而检查方法的验证是保证检查结果的公正、科学和准确的根底，因此各个主要国家的GMP或药典都对无菌检查方法的验证提出了严格的要求，2022版中国药典对分析方法验证和检查的要求也有大幅度的提高，同时也是GMP检查中检查的重点和容易发现问题的区域。

验证要求与方法无菌检查方法验证一般分为前验证和再验证两种。

前验证，也称预验证，指在无菌分析方法正式使用前，按照预定验证方案进行的验证。

如果没有充分的理由，任何检查方法必须进行前验证。

再验证，指某一检查方法经过验证并在使用一段时间后进行的，旨在证实已验证状态没有发生飘移而进行的重新验证及对检查方法进行修订、改变时进行的验证。

通常一个无菌产品的检查流程为：首先基于产品的剂型、溶解度等性质，按照药典的要求确定是否需要进行前处理;然后根据产品的特性是否有抑菌性，确定是否需要增加去除产品抑菌性的方法;最后验证整个检查方法中用到的一切及试验过程中的每一个环节包括样品的预处理方式、检查过程、培养条件等均不影响样品中微生物的生长。

这里，验证的重点环节包括：前处理方法直接影响后续步骤的效果和重现性，应是验证的重点。

供试品中抑菌活性的去除是当前验证工作的重点，尤其强调应充分验证供试品本身对微生物生长的影响。

具体的验证方法如下：菌种的选择无菌检查方法验证中通常选择以下6种试验中常用的控制菌的标准菌株，它们分别代表不同类型的菌种：枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63 501]代表药品中常见的污染菌——芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌 [CMCC(B)26 003]代表革兰阳性菌、生孢梭菌 [CMCC(B)64 941]代表厌氧菌、大肠埃希菌 [CMCC(B)44 102]代表革兰阴性菌、白色念珠菌 [CMCC(F)98 001]代表酵母菌、黑曲霉菌 [CMCC(F)98 003]代表霉菌。

XX省药品监督管理局2023年疫苗生产企业专项检查方案一、检查目的通过开展专项检查，使药品生产企业的法律意识、质量意识、责任意识得到普遍增强，提高药品生产企业实施药品GMP规范的自觉性，全面落实质量管理责任，严厉查处违法违规行为，保证药品生产质量，进一步强化药品监管部门职责，提高依法监管水平。

二、检查范围全省疫苗生产企业。

三、时间安排发文之日起至2023年9月30日前完成。

四、重点检查内容（一）物料管理方面。

1细胞/菌毒种是否按《中国药典》和药品GMP要求建立符合生产要求的细胞/菌毒种库，是否在规定条件下储存、专人负责，生产和检定历史来源清晰，传代与已批准的要求一致,是否进行稳定性考察及时了解储存期质量变化情况，相应操作是否满足生物安全级别要求。

2.供应商应当经过评估与审计，供应商发生相关质量事件时，应通过有效方式告知采购方。

长期未使用的关键物料供应商再次使用前考察是否充分。

3.关注生产用主要原材料、辅料的质量标准、取样量及过程。

关注生产用原辅料的入厂验收、储存条件、出入库记录、留样等。

4.产品配制用稳定剂（例如，糖类、氨基酸、碳酸氢钠、明胶等）、佐剂及稀释剂（如氢氧化铝、氯化钠等）应符合相关质量标准和内控标准（如微生物限度、细菌内毒素等）。

5.配制培养基、培养液、生产过程中使用的原材料（例如,氨基酸、维生素、牛血清、抗生素、蛋白质、无机盐、碳水化合物等）和各种溶液应符合相应质量标准；培养液及生产用溶液储存条件与时间应经过验证。

6.生物制品工艺过程中使用的动物源性原辅料应证明无外源性或内源性病毒污染，分析方法应经过验证，其质量标准和检定方法应符合现行版药典或相关的法规。

7.包材内（特别是胶塞）带入异物按照现有方法，能否在制剂生产过程中发现和剔除。

内包材变更后相容性问题，是否存在包材基质物质向产品中迁移，或与产品发生吸附析出，造成不溶性微粒上升、产品效价下降等问题。

8.储存环境对原液质量的影响（包括温度、密封性、保压性能等）。

洁净服清洁消毒效果、贮存期验证方案1.概述本公司为体外诊断试剂生产企业，清洗消毒后洁净服存放时间不超过14天，期间连续穿着不得超过7天。

本方案为洁净服清洁消毒效果、贮存期验证方案。

2.目的证明清洗、消毒方法有效可行，确认洁净服清洗消毒后符合生产工艺要求，防止洁净服对洁净区生产环境及产品产生污染。

3.范围本验证方案适用洁净服清洁消毒效果、贮存期的验证。

4.职责4.1验证委员会姓名部门职务验证职务验证委员会职责组长1.负责验证方案的审核和批准。

2.负责验证报告的审核和批准。

组员1.负责验证方案的审核。

2.负责验证报告的审核。

组员1.负责验证方案的审核。

2.负责验证报告的审核。

4.2验证小组姓名部门职务验证职务验证小组成员职责组长 1.负责参与验证方案的审核。

2.负责验证的协调工作，以保证本验证方案的顺利实施。

3.负责验证数据及结果的收集和审核。

4.负责参与验证报告的审核。

5.负责做出验证结论。

6.负责洁净服清洁消毒效果、贮存期监测及验证时间的确认。

组员组员组员组员组员组员4.3验证涉及部门部门职责质量管理部1.牵头组织起草验证方案，会同验证涉及部门进行审核。

2.检查是否已完成验证方案的起草、审核和批准工作。

3.负责进行计量器具和检测设备的校准和确认。

4.提前通知QC及时配合验证过程中的检验等工作。

5.核实验证具体实施时间，进行验证数据的收集和记录，确保验证进度。

6.负责验证记录、验证报告的填写、审核和归档。

7.最终验证报告的编写、审核和批准。

8.跟踪及调查验证过程中发生的偏差和变更。

9.负责验证中需要的环境监测项目的监测。

10.针对不一致项，协商解决方法。

生产部1.配合起草验证方案和验证报告，参与验证方案的审核。

2.安排人员参与验证小组，由验证小组执行和完成验证。

3.协调验证活动，确保验证进度。

4.负责容器具的清洁。

5.偏差过程的调查、分析，提出解决办法。

6.与质量管理部一起完成最终验证报告的编写、审核。

一填空题（每空分，共45分）1.药品微生物试验工作的人员在上岗前接受胜任工作所必需的设备操本技术等，经考核合格后方可上岗。

3.微生物实验室的管理者其专业技能和经验水平应与他们的职责范围4.微生物实验室使用的培养基可按处方配制，也可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基，在制备培养基时，应选择质量符合要求的脱水培5.6.7.已验证的条件下贮藏。

8.0℃以下存放，因为冷冻可能破坏凝胶特性。

培养基保存应防止水分流失，9.质量下降或微生物污染。

10.11. 微生物检验的实验室应有符合无菌检查法和微生物限度检查要求域。

12. 微生物实验室应按相关国家标准制定完整的洁净室（区）和隔离13. 实验室在使用前和使用后应进行消毒，并定期监测消毒效果，要有足够洗手和手消毒设施, 所用消毒剂和清洁剂的微生物污染状况应进经无菌处理的消毒剂和清洁剂。

14.责进行维护和保管，保证其运行状态正常和受控，同时应有相应的备用设15.实验室应在决定是否检测或拒绝接受样品之前与相关人员沟通。

样品的包装和标签有可能被严重污染，因此搬运和储存样品时应小心以避免污染的告中应有说明。

行。

二、判断题（每题1分，共8分）1.平皿法操作时应先注入培养基，再加入1ml供试液。

（× ）2.以稀释液代替供试液进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。

如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调查（√ ）3.从菌种保藏中心获得的干燥菌种为0代，试验用菌株的传代次数不得超过5代（√）4.控制菌检查用培养基促生长能力检查、抑制能力检查接种不大于100cfu试验菌于被检培养基和对照培养基中。

（×）5.纯化水的微生物限度质量标准为每lml供试品中需氧菌总数不得过lOOcfu。

（√）6.用于环境监控的培养基须特别防护，最好要双层包装和终端灭菌，如果不能采用终端灭菌的培养基，那么在使用前应进行100%的预培养，以防止外来的污染物带到环境中及避免出现假阳性结果。

1.目的PURPOSE (5)2.围SCOPE (5)3.引言INTRODUCTION (5)4.参考资料REFENRENCE (5)5.验证方法TEST METHOD (6)5.1.所用仪器和物料 (6)5.2.测试工作菌种 (6)5.3.实验程序 (6)6.接受标准 (8)6.1.消毒效力接受标准： (8)6.2.中和效力控制及其接受标准： (8)1.目的PURPOSE验证惠氏工厂目前使用的几种消毒剂Process LpHse: 酸性、Process VespheneⅡ se:碱性、Ethanol 酒精溶液、快活溶液，在不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、塑料门帘、墙面等不同材质上的消毒效力，同时验证消毒剂的使用有效期。

2.围SCOPE本验证需要验证的消毒剂有：Process LpHse: (酸性)、Process VespheneⅡ se:(碱性)、Ethanol 酒精溶液、快活溶液FORWARD disinfectant四种。

3.引言INTRODUCTION本验证的原理是，在某种材质表面接种0.1ml (104-105CFU)的菌种，室温下自然风干后，将消毒剂直接喷在材质表面，等消毒剂作用一段时间后，检验没有被杀灭的细菌数；根据细菌被杀灭的数量，来判断消毒剂的杀菌效果。

实际消毒操作时，消毒剂喷到要消毒物体表面后，再通过人为的涂擦等操作使消毒剂与物体表面充分接触，同时，此操作也会机械去除掉一部分微生物。

在该验证中，消毒剂是喷到材质表面，这种方法要比实际消毒时的效果差，因此验证的结果更能体现实际的消毒效果。

4.参考资料REFENRENCEDisinfectant Effectiveness Study（812-Analytical Report-0807-1.0）SOPTS-35(V5)5.验证方法TEST METHOD5.1.所用仪器和物料➢所用培养皿、移液管、容器均在121度下灭菌30分钟后使用➢无菌一次性培养皿，移液管。

菌种菌液管理制度一、目的为了确保菌种菌液的质量和安全性，保障实验室的环境和人员的健康安全，制定本制度。

二、适用范围本制度适用于实验室内所有菌种菌液的管理和操作，所有实验室工作人员必须遵守。

三、管理责任1. 实验室主任负责菌种菌液的管理工作，包括制定管理制度、组织培训、监督检查等。

2. 实验室管理员负责菌种菌液的日常管理工作，包括存储、调配、配制等。

3. 实验室工作人员必须严格遵守本制度，正确操作，确保菌种菌液的质量和安全。

四、菌种菌液的贮存1. 菌种菌液应存放在专用的冰箱或冷藏室内，温度保持在4℃以下。

2. 菌种菌液应放置在密封的容器中，避免细菌污染和其他污染物的侵入。

3. 已使用的菌种菌液应在规定的时间内清理和处理，不得长时间存放。

4. 菌种菌液的存放位置应有明显的标识，包括菌种名称、存放日期、有效期限等信息。

五、菌种菌液的调配与配制1. 调配菌种菌液应使用无菌环境和无菌操作，避免外界细菌的侵入。

2. 菌种菌液的配制应按照标准操作程序和配方要求进行，严格控制配料的质量和比例。

3. 完成菌种菌液的配制后，应做好记录并及时设备清洁，并将配制后的菌种菌液放置在适当的条件下存放。

六、菌种菌液的使用1. 使用菌种菌液时，应先取出所需量，避免将未使用的菌种菌液反复回放。

2. 使用菌种菌液应在无菌条件下进行，避免细菌污染。

3. 使用菌种菌液后，必须做好记录，包括使用日期、数量、用途等信息，方便跟踪管理。

七、菌种菌液的销毁1. 超过有效期限的菌种菌液应及时销毁处理，不得再次使用。

2. 已使用过的菌种菌液应按规定进行处理，避免对环境造成污染和对人员健康造成危害。

八、菌种菌液的监测与检查1. 实验室管理员应定期对存放的菌种菌液进行检查，确保其质量和安全性。

2. 对于长期存放的菌种菌液，应定期进行复核测试，确保菌种的纯度和活性。

九、事故处理若在菌种菌液管理过程中发生泄漏、污染或其他安全事故，应立即停止操作，通知上级主管和安全管理部门，并按规定进行事故处理。

培养基适用性检查▪计数实验的培养基适用性该部分内容均为新增规定了该内容的应用范围采用标准菌种计数，回收率以及形态比较的判定方法标准菌种为：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉；规定了稀释后的工作菌液的保存条件和保存期限引入了对照培养基的概念判定的依据：回收率大于70％，且形态一致▪控制菌检查的培养基适用性该部分内容均为新增规定了该部分内容的应用范围以及检查的项目采用标准菌种比较的判定方法根据培养基的用途不同，分为增菌培养基的促生长能力、固体培养基的促生长能力、培养基的抑制能力、固体培养基的指示能力、液体培养基的指示能力等5种检查方法在检查中引入了涂布接种的概念1.概述培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节。

计数测定用培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素，控制菌检查用培养基也可能由于其促生长能力、指示能力、抑制能力的差异，从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，影响结果判断的客观性。

培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价拍段检验用培养基是否符合检验要求。

微生物限度检查用培养基主要分为细菌、霉菌及酵母菌计数测定用培养基和控制菌检查用培养基两部分。

2010《版中国药典》微生物限度检查法中收载了“适用性检查”对培养基质量进行控制。

2、培养基适用性检查实验的一般要求2.1培养基适用性检查适用范围2010版《中国药典》规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

培养基使用性检查试验可用于确定实验室所用培养基(包括购置的不同批号的成品培养基、不同批号的脱水培养基干粉、按处方自行配制培养基不同批次的原材料等)、制备程序（包括水质控制、配制方法、灭菌程序等）、保存条件（温度、湿度、时间及盛装培养基的容器条件等）等是否满足微生物限度检查用要求。

即上述影响培养基质量的各关键控制点应通过培养基使用性检查试验确定，如果任一控制点发生变化应重新进行培养基适用性检查。