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高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定氟比洛芬酯注射液中大豆油含量张勉;李超【摘要】目的建立测定氟比洛芬酯注射液中大豆油含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测器法.方法以硅胶柱为色谱柱,以正己烷-异丙醇-冰醋酸(99.4∶0.5∶0.1)为流动相,流速为1.0 mL/min;蒸发光散射检测器,漂移管温度为70℃,雾化气压力为35.0 psi,进量为10μL.结果大豆油质量浓度在1.707 ～ 17.072 μg/mL(r =0.998)范围内与峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率为100.34％,RSD为1.52％(n=9).结论该法用于测定氟比洛芬酯注射液中大豆油的含量,快速简便,专属性好,结果准确.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2014(023)007【总页数】2页(P26-27)【关键词】高效液相色谱-蒸发光检测器;氟比洛芬酯注射液;大豆油【作者】张勉;李超【作者单位】重庆市食品药品检验所,重庆 401121;重庆市食品药品检验所,重庆401121【正文语种】中文【中图分类】R927.2;R971+.1氟比洛芬酯注射液是以脂微球为药物载体的非甾体类镇痛剂。
药物进入体内靶向分布到创伤及肿瘤部位后，氟比洛芬酯从脂微球中释放出来，在羧基酯酶作用下迅速水解生成氟比洛芬，通过氟比洛芬抑制前列腺素的合成而发挥镇痛作用。
大豆油是制备乳剂的重要原辅料，其含量直接影响乳剂的成型质量，在氟比洛芬酯注射液中大豆油作为氟比洛芬酯的载体，有利于氟比洛芬酯达到靶向部位，更好地吸收。
但由于大豆油为长链甘油三酸酯，紫外特征不强，常规的紫外检测器无法完成对其的测定。
国内仅有一个厂家生产该品种，现行质量标准[1]中未对大豆油进行含量控制。
笔者采用高效液相色谱法分离，利用蒸发光散射检测器测定氟比洛芬酯注射液中大豆油的含量，有效地解决了大豆油在该注射剂中的检测问题，方法准确，操作简便。
1 仪器与试药Waters e2695型高效液相色谱仪。
应用蒸发光散射检测器的含量计算1.检测器响应和定量分析响应是随着散射范围的变化而变化，我们假设样品的范围很大，测得的峰面积与样品的质量有如下关系：A=am b（1）a、b是相关系数，它们与液滴大小、溶质浓度、溶质自然特征和蒸发温度等有关。
等式1反应出A和m是非线性关系；等式1取对数得到等式2，等式2中㏒A和㏒m是线性关系：㏒A=b㏒m＋㏒a（2）2.标准曲线的计算：例如：称取对照品3.10mg至10ml容量瓶中，定容，其含量为310ug/ml。
进样量5ul，得X1：310ug/ml×5/1000＝1.55×10-6，其得到的面积为Y1=79.50。
进样量10ul，得X2：310ug/ml×10/1000＝3.10×10-6，其得到的面积为Y2=203.61。
将上述对照品的各稀释浓度及其对应的面积，分别取对数列表如下：___∑（mi －m）（Ai－A）∑miAi－m∑Ai回归系数：b=----------------------------------=-----------------------------（1） __ ∑（m i －m ）2∑m i 2－m ∑m i 1.496149－0.340845×4.209170.061474 b=---------------------------------------------=-----------------=1.3567570.2776605－0.340845×0.681690.0453095__截距：a=A －bm （2）a=2.104585－1.356757×0.340845=1.64241设：Y=㏒Y1=194.35A,X=b ㏒m,C=㏒a,得：Y=X+C已知称取供试品0.5330g 至25ml 容量瓶中，加溶剂至刻度，其含量为213.2ug/ml 。
进样量10ul ，得X1：21.32×10/1000＝21320×10-6，其得到的面积为Y1=194.35。
蒸发光检测器（ELSD）知识汇总一、定义：蒸发光检测器即ELSD检测器，是一种通用检测器，在辅助气体一般是氮气或者是经过净化的压缩空气的作用下，将流动相雾化，形成的液雾（雾珠）通过加热而蒸发，此时溶解在流动相中不易挥发的样品即形成颗粒物，这些颗粒物由辅助气体推动进入光束通道，造成光束散射。
通过测定散射光的强度即可预测样品颗粒的数量，从而测定样品浓度。
二、历史：虽然蒸法光散射检测器(Evaportive light Scattering,ELSD)已经开发生产15年，但是对于许多色谱工作者来说，它仍是一个新产品。
第一台ELSD是由澳大利亚的Union Carbide研究实验室的科学家研制开发的，并在八十年代初转化为商品，八十年代以激光为光源的第二代ELSD面世。
此后，通过不断设计提高了ELSD的操作性能。
现在ELSD越来越多的作为通用型检测器]用于高效液相色谱，超临界色谱（SFC）和逆流色谱中。
三、用途：蒸发光检测器是一种通用型的检测器，可检测挥发性低于流动相的任何样品，而不需要样品含有发色基团。
蒸发光散射检测器灵敏度比示差折光检测器高，对温度变化不敏感，基线稳定，适合与梯度洗脱液相色谱联用。
已被广泛应用于碳水化合物、类脂、脂肪酸和氨基酸药物以及聚合物等的检测。
ELSD用来测定那些不能用紫外检侧器检侧的组分，对HM的检测器是很重要的补充。
但ELSD对有紫外吸收的组分检测灵敏度相对较低．此外，它只适合流动相能完全挥发的色谱条件，若流动相含有难以挥发的缓冲剂时，就不能用ELSD进行检测。
四、优势：1.可检测挥发性低于流动相的任何样品；检测不含发色团的化合物，如：碳水化合物、脂类、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性剂、药物，并在没有标准品和化合物结构参数未知的情况下检测未知化合物。
2.流动相低温雾化和蒸发，对热不稳定和挥发性化合物亦有较高灵敏度；3.广泛的梯度和溶剂兼容性，无溶剂峰干扰；4.辅助载气提高了检测灵敏度，保持检测池内的清洁，避免污染；5.高精度雾化和蒸发温度控制，保证高精度检测；6.可与任何HPLC系统连接。
高效液相色谱—蒸发光散射检测器法测定中药茺蔚子中盐酸水苏碱的含量目的建立中药茺蔚子中盐酸水苏碱的高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定方法。
方法Asahipak NH2P 50 4E色谱柱（4.6 mm × 250 mm），流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液（84∶16），体积流量1 mL/min，柱温30℃。
结果盐酸水苏碱在0.487～4.383 μg范围内线性关系良好，r = 0.9999，平均回收率为97.96%，RSD为0.92%。
结论该法灵敏度高，专属性强，可作为中药茺蔚子中盐酸水苏碱的定量测定方法。
[Abstract] Objective To establish HPLC-ELSD determination method of the hydrochloric acid stachydrine in Motherwort Fruit. Methods The separation by HPLC-ELSD was performed on Asahipak NH2P 50 4E column （4.6 mm × 250 mm）with acetonitrile-0.2% phosphoric acid solution （84∶16）as mobile phase，1 mL/min of flow rate and 30℃of column temperature. Results Hydrochloric acid stachydrine at 0.487-4.383 μg had good linear relationship，r = 0.9999，the average recovery was 97.96%，RSD was 0.92%. Conclusion The method is sensitive，specific，it can be used as quantitative determination method of the hydrochloric acid stachydrine in Motherwort Fruit.[Key words] Motherwort Fruit；Hydrochloric acid stachydrine；HPLC-ELSD中藥茺蔚子又名益母草子，为唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的干燥成熟果实。
外标两点法对数方程是在应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）进行药物分析时的含量计算方法。
我们用蒸发光散射检测器时，由于散射光的信号为非线性的，根据ELSD的工作原理，进样质量（ug）和ELSD检测响应值（峰面积A）一般不呈现良好的线性。
因为信号相应值与物质质量的对数呈线性关系，如果对进样质量和峰面积分别取常用对数后，两者呈现良好的线性关系，但是它是一条不经过原点的直线，所以在含量测定时必须使用外标两点法，通常称作外标两点法对数方程。
进两个不同量的对照品（ul）, 将进样质量（ug）和对应的峰面积（A）取对数后，由两点确定方程，方法是将两组数值代入对数方程：lgA=KlgC+b，即可求出式中的K和b。
公式为：lgA=KlgC+b，
A：峰面积
K：为公式中参量
C：进样质量（ug）
b：为公式中参量
计算时将样品峰面积（A）代入方程lgA=KlgC+b，计算出IgC后，再取反对数就可以计算出C了。
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各物质色谱峰面积的自然对数与浓度的自然对数呈良好的线性关系,精密度RSD为0.%～2.75%,最低检测限为0.02～0.04μg,回收率测定值为93.2%～104.5%、快速地定量、定性分析各类混合脂肪酸甘油酯和游离脂肪酸,。
关键词:高效液相色谱;; 物,、二甘酯与三甘酯。
单甘酯、二甘酯是天然油脂代谢的中间产物,是一类重要的食品乳化剂[1]。
其中二甘酯除乳化性外,还具有许多独特的物理化学性质和生理作用,已广泛应用于食品、医药、化妆品等工业[2]。
研究表明,1,3-二甘酯被食用后,不像油脂那样在体内积累,因而在食物中添加二甘酯取代普通食用油脂,不仅不影响食欲,而且可以抑制体重的增加[3]。
另外,1,3-二甘酯对胆汁酸的分泌有抑制作用,可用于腹泻的预防和治疗[4]。
目前,单甘酯和二甘酯的生产方法主要是化学法和酶法,因此对由不同原料合成的甘油酯进行单甘酯、二甘酯与三甘酯的定量、定性至关重要。
UM-3000蒸发光散射检测器使用说明书Unimicro Technologies Inc.4713 First Street, 225, Pleasanton, CA 94566, USATel.: (925)846-8638 Fax: (925)846-3687Web: 上海张江高科技园区松涛路489号C01座上海通微分析技术有限公司电话：(021)50801569 传真：(021)38953636网址：为保证仪器安全使用，请在使用前仔细阅读本说明书。
目录1. 简介 (1)1.1 UM-3000 ELSD检测器介绍 (1)1.2 操作原理 (2)2. 检测器的安装 (3)2．1 必需组件 (3)2．2 拆箱 (4)2．3 检测器的安装位置 (4)2．4 电源要求 (4)2．5 气路连接 (4)2．5．1 气体供应输入连接 (5)2．5．2 气阀的连接 (5)2．5．3 气体出口的连接 (5)2．6 数据线连接 (5)3．日常操作 (5)3．1 安全 (5)3．2 操作注意事项 (6)3．3 开机运行 (6)3．4 关机操作 (7)4. 日常维护和清洁 (7)4．1 日常维护 (7)4．1．1 雾化器维护 (7)4．1．2 激光光源的更换 (8)．2 日常清洁 (8)4．2．1 流通渠道清洁 (8)4．2．2 雾化器清洁 (8)4．2．3 蒸发室清洁 (9)4．2．4 检测室清洁 (9)5. 诊断和故障排除 (9)5．1 检测器故障 (9)5．2 基线噪声大 (10)5．3 系统故障 (12)6. 附录 (13)6．1 仪器规格 (13)6．2 相关配件 (13)6．2 挥发性流动相改性剂 (13)1. 简介1.1 UM-3000 ELSD检测器介绍UM-3000型蒸发光散射检测器（Evaporative Light Scattering Detector）设计用于高效液相色谱系统，分析任何挥发性低于流动相的化合物。
高效液相色谱法蒸发光散射检测器测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A 及B 的含量李会军 李 萍(中国药科大学生药学教研室 南京 210038)摘要 目的:建立酸枣仁中酸枣仁皂苷A 及B 的含量测定方法,为该药材提供质量控制标准。
方法:应用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPL C-EL SD),Allspere ODS-2(250mm 4 6mm ,5 m)色谱柱,甲醇-水-冰醋酸(70 30 1)为流动相,测定了酸枣仁中酸枣仁皂苷A 及B 的含量。
结果:分析了11批商品药材。
酸枣仁皂苷A 及B 的平均回收率分别为92 4%(RSD =3 8%)和91 8%(RSD =3 9%)。
结论:方法快速简便,重现性良好,可用于酸枣仁药材的质量控制。
关键词 酸枣仁 高效液相色谱法 蒸发光散射检测器酸枣仁为鼠李科植物酸枣Ziz ip hus j uj uba var sp inosa (Bunge)H u ex H. F.Chou 的干燥成熟种子,具有养心安神的功效,是较为常用的镇静催眠中药。
酸枣仁皂苷A 及B 为其镇静催眠的有效成分之一[1],含量测定方法报道的有一阶导数光谱法[2]及薄层扫描法[3],本文首次采用高效液相色谱法利用蒸发光散射检测器(ELSD)对酸枣仁皂苷A 及B 进行了含量测定研究。
实验结果表明该法灵敏度、稳定性和重现性均能满足要求,是一种检测皂苷类成分的有效方法。
1 仪器与试剂日本岛津LC -10AD 液相色谱仪;法国SEDEX55型蒸发光散射检测器;H S 色谱数据工作站(杭州英谱科技开发有限公司);各地酸枣仁药材样品(见表1)均经作者鉴定;酸枣仁皂苷A 及B 对照品由中国药品生物制品检定所提供,纯度 98 5%;试验用水为上海获特满公司产纯净水;甲醇为淮阴化学试剂厂产色谱纯;其它试剂均为南京化学试剂厂产分析纯。
2 色谱及检测条件色谱柱:Allspere ODS-2(250mm 4 6mm ,5 m );预柱:Pellicular C 18(7 5mm 4 6mm);流动相:甲醇-水-冰醋酸(70 30 1);流速:1mL min-1。
外标两点法对数方程是在应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELS D）进行药物分析时的含量计算方法。
大家都知道在用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）的定量用外标两点法对数方程，并且药典也要求如此！比如银杏叶、知母、黄芪、人参、署预、（中药含有皂苷的），化药也有一些。
但对数方程的列法却各不相同，有很多人是3楼的列法：峰面积和进样量同时去对数。
但就药典的文字理解：“对数方程”是指在方程里有一个对数，而同时取对数列出来的方程叫双对数方程。
根据最小二乘法应该是进样量(ug)与峰面积的对数的线性方程。
我们用蒸发光散射检测器时，由于散射光的信号为非线性的，根据ELSd的工作原理，进样质量和ELSD检测响应值（峰面积）一般不呈现良好的线性。
因为信号相应值与物质质量的对数呈线性关系，如果对进样质量和峰面积分别取常用对数后，两者呈现良好的线性关系，但是它是一条不经过原点的直线，所以在含量测定时必须使用外标两点法，通常称作外标两点法对数方程，在中国药典20 00版2002增补本以及2005版、2010版中，凡采用HPLC-ELSD方法进行含量测定时，均有“采用外标两点法对数方程计算含量”一句。
进两个不同浓度的对照品, 将进样量和对应的峰面积取对数后，由两点确定方程，方法是将两组数值代入直线方程：y=Kx+b，即可求出式中的K和b。
再将求出的K和b代入公式：InA=KInC+b ，即可求出对数方程。
公式为：InA=KInC+bA：峰面积K：为公式y=Kx+b中的KC：进样量b：为公式y=Kx+b中的b计算时将样品峰面积（A）代入方程InA=KInC+b，计算出InC后，再取反对数就可以计算出C了．再电子表格计算较为方便．在Excel中进行直线回归，可得出该方程，最后求出带入计算，就OK了！解析外标两点对数方程计算黄芪药材含量方法：照高效液相色谱法，ODS柱，以乙腈-水（32：68）为流动相，流速1ml/min，经蒸发光检测器检测，用外标两点对数方程计算黄芪药材中黄芪甲苷的含量。
高效液相色谱-蒸发光散射检测法高效液相色谱-蒸发光散射检测法同时测定四君子丸中的5种有效成分四君子丸为四君子汤的现代剂型，由党参、白术、茯苓、炙甘草组成，被《中华人民共和国药典》(2005版)收载［1］。
现代药理学研究证明，四君子汤可增强机体的抵抗力，调节机体各方面的功能，对垂体、心血管功能、消化道运动功能和免疫功能有明显的改善作用［2］。
四君子丸含有党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ等主要活性成分［3－7］。
对于党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的定量分析方法，已有的文献报道均是对其中的一种或两种成分进行测定［8－14］，尚未见对上述5种活性成分同时测定的报道。
按照药典［1］的规定，对四君子丸的鉴定仅依靠薄层色谱法进行，结果比较粗放。
本文对四君子丸中的上述5种活性成分同时进行了含量测定，可为四君子丸的全面质量控制提供实验依据。
1实验部分1.1仪器与试药LC7000高效液相色谱仪(海能仪器)，包括LC7011输液泵，LC7070蒸发光散射检测器;HanonClatity色谱工作站。
HIQ SIL C18V 色谱柱(250mm× 4.6mm，5μm)。
甲醇(色谱纯)，二次蒸馏水(自制)，冰醋酸(分析纯);党参炔苷、苍术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、茯苓酸和甘草酸铵对照品;党参、白术、茯苓、甘草均购于济南漱玉平民药店;用于方法优化的四君子丸样品为自制，每丸平均质量为3.0g，符合中国药典对丸剂的各项规定要求。
测定的四君子丸实际样品分别为5个药品生产厂家的产品。
1.2对照品溶液的制备分别精密称取党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ对照品适量，分别配制质量浓度为6. 03，3.78，12.24，3.62，7.80g/L的储备液。
将上述5种储备液各取500μL混合、摇匀，即得含党参炔苷1.21g/L、茯苓酸0.76g/L、甘草酸2.45g/L、苍术内酯Ⅲ0.72g/L和白术内酯Ⅰ1.56g/L的混合对照品储备液。
HPLC-ELSD法测定玉屏风颗粒中甘露醇的含量目的：建立用液相色谱法联用蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）测定玉屏风颗粒中辅料甘露醇的含量。
方法：采用Prevail Carbohydrate ES 柱（Φ4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈—水（75∶25），流速1.0 mL·min-1，蒸发光检测器。
结果：线性范围1.509 76～11.323 2 μg，r＝0.999 9；平均回收率为99.3％，RSD＝1.44％（n＝6）。
结论：该法快速、准确、可靠；可作为玉屏风颗粒辅料甘露醇的检查。
标签：液相色谱法联用蒸发光散射检测器；玉屏风颗粒；辅料；甘露醇；含量玉屏风颗粒收载于《中国药典》2010年版一部［1］，由黄芪、防风及炒白术3味药组成，具有益气，固表，止汗之功效。
主要用于表虚不固，自汗恶风，面色晄白，或体虚易感风邪者。
玉屏风颗粒为国家中药保护品种，全国独家生产，生产厂家为广东环球制药股份有限公司。
甘露醇是玉屏风颗粒中的稀释剂，较传统稀释剂有易溶解等优点，但具有对人体肠道的清理和轻微的脱水作用。
为考察其辅料的投料情况，此次试验建立了HPLC-ELSD法测定玉屏风颗粒中辅料甘露醇的含量，为辅料的添加及控制提供了科学依据。
1仪器和试药Agilent1200高效液相色谱仪，带四元泵；瓦里安300蒸发光散射检测器；自动进样器；在线真空脱气机；智能化柱温箱及HP化学工作站；乙腈为HPLC 级，水为超纯水。
甘露醇对照品（中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号：111522-200607）。
26批玉屏风颗粒样品均由广东环球制药股份有限公司提供。
2色谱条件色谱柱：Prevail Carbohydrate ES 柱（Φ4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈—水（75∶25）；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；蒸发光检测器，雾化器温度：90 ℃；漂移管温度：60 ℃；气体流速：2.0 L·min-1。
中华中医药学刊蒸发光散射检测器(E LS D )应用概况张悦晗,甄汉深,成 莉(广西中医学院,广西南宁530001) 摘 要:目的:介绍蒸发光散射检测器(E LS D )的仪器构造,特点,工作原理,应用等。
总结其在中药成分分析中的优势和应用情况。
方法:对有关高效液相色谱蒸发光散射检测器法测定中药成分的文章进行综述。
结果:蒸发光散射器在测定没有紫外吸收或仅在紫外末端有吸收的成分上有较大的优势和较广泛的应用。
结论:蒸发光散射检测器在中药成分分析中有广泛的应用前景。
关键词:蒸发光散射检测器;高效液相色谱法;工作原理;应用中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2007)04-0831-03The App li ca ti o n o f I n tr o duced Evapo ra tive L i gh t -Sca tte ring D e tec t o r (ELSD )ZHANG Yue 2han,Z HE N Han 2shen,CHE NG L i(Guangxi Traditi onal Chinese M edical University,nanning 530001,Guangxi,China ) Ab s trac t:O bjective:I ntr oduced evaporative light -scattering detect or (E LS D )instru ment structure,characteristic,p rinci p le of work,app licati on and s o on .Analyze in Chinese native medicine ingredient analysis superi ority and app lica 2ti on situati on .M ethods:E LS D deter m inati on Chinese native medicine ingredient article t o the related highly effective liq 2uid chr omat ography t o carry on the su mmary .R esu lts:E LS D or only has the abs or p ti on in the deter m inati on not ultravi olet abs or p ti on in the ultravi olet ter m inal on the ingredient t o have the big superi ority and the wides p read app licati on .Conclusion:E LS D have the wides p read app licati on p r os pect in the Chinese native medicine ingredient analysis. Ke y wo rd s:E LS D;HP LC;p rinci p le of work;app licati on 收稿日期:2006-11-13作者简介:张悦晗(1980-),女,江西南昌人,2004级硕士研究生,主要从事药物质量与成分分析的研究。
应用蒸发光散射检测器的含量计算
1.检测器响应和定量分析
响应是随着散射范围的变化而变化，我们假设样品的范围很大，测得的峰面积与样品的质量有如下关系：
A=am b（1）
a、b是相关系数，它们与液滴大小、溶质浓度、溶质自然特征和蒸发温度等有关。
等式1反应出A和m是非线性关系；等式1取对数得到等式2，等式2中㏒A和㏒m是线性关系：
㏒A=b㏒m＋㏒a （2）
2.标准曲线的计算：
例如：称取对照品3.10mg至10ml容量瓶中，定容，其含量为310ug/ml。
进样量5ul，得X1：310 ug/ml×5/1000＝1.55×10-6，其得到的面积为Y1=79.50。
进样量10ul，得X2：310ug/ml×10/1000＝3.10×10-6，其得到的面积为Y2=203.61。
将上述对照品的各稀释浓度及其对应的面积，分别取对数列表如下：
_ _ _
∑（m i－m）（A i－A）∑m i A i－m∑A i
回归系数：b=---------------------------------- = ----------------------------- （1）
_ _
∑（m i－m）2∑m i2－m∑m i
1.496149－0.340845×4.20917 0.061474
b= --------------------------------------------- = ----------------- = 1.356757
0.2776605－0.340845×0.68169 0.0453095
_ _
截距：a= A－b m （2）
a=2.104585－1.356757×0.340845 = 1.64241
设：Y = ㏒Y1=194.35A , X = b㏒m , C = ㏒a , 得：Y = X + C
已知称取供试品0.5330g至25ml容量瓶中，加溶剂至刻度，其含量为213.2ug/ml。
进样量10ul，得X1：21.32×10/1000＝21320×10-6，其得到的面积为Y1=194.35。
Y1=194.35 , ㏒2.288585 = 1.356757㏒m ＋1.64241
2.288585 －1.64241 0.646175
㏒m = ------------------------------- = ----------------- = 0.476264
1.356757 1.356757
㏒m = 0.476264 取反函数得：m = 2.994084
2.994084
供试品的含量％＝------------------ ×100% = 1.404 %
213.2。
