烟草的组织培养技术
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烟草植物组织培养实验实验目的一学习和掌握植物组织培养技术,理解植物细胞的全能性。
实验原理二年代初期发展起来的一项生物技术。
由于其拥有占地世纪30植物组织培养是从20少、繁殖系数大等特点,现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。
本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容,使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解,为以后的实际操作提供依据。
在植物组织培养中,主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生,使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞,通过脱分化形成愈伤组织,并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织,大致要经历三个时期:起动期、分裂期和形成期。
①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。
用于接种的外植体的细胞,通常都是成熟细胞,处在静止状态。
起动期是通过一些刺激因素(如机械损伤、改变光照强度、增加氧等)和激素的诱导作用,使外植体细胞的合成代谢活动加强,迅速进行蛋白质和核酸的合成。
机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂,如伤口上会出现愈伤组织。
在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词,但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织,大都不是损伤的结果。
外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好,因此生长素类物、萘乙4-D4-二氯苯氧乙酸2,,质在植物组织培养中得到广泛应用,常用的有生长素(2)细胞分裂素IBA、吲哚丙酸IPA和吲哚丁酸NAA酸、萘乙酰胺NAD和吲哚乙酸IAA))等。
分裂期是,KT-30CPPU糠氨基嘌呤(KT)氯吡苯脲(6-(苄氨基嘌呤6-BA、6-指外植体细胞经过诱导以后脱分化,不断分裂、增生子细胞的过程。
处于分裂期的愈伤组织的特点是:细胞分裂快,结构疏松,颜色浅而透明。
外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。
例如,烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易,禾本科植物的脱分化比较难;花的脱分化比较容易,茎、叶的脱分化比较难;幼嫩组织的脱分化比较容易,成熟的老组织脱分化比较难。
烟草植物组织培养实验一实验目的学习和掌握植物组织培养技术,理解植物细胞的全能性。
二实验原理植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。
由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点,现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。
本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容,使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解,为以后的实际操作提供依据。
在植物组织培养中,主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生,使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞,通过脱分化形成愈伤组织,并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织,大致要经历三个时期:起动期、分裂期和形成期。
①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。
用于接种的外植体的细胞,通常都是成熟细胞,处在静止状态。
起动期是通过一些刺激因素(如机械损伤、改变光照强度、增加氧等)和激素的诱导作用,使外植体细胞的合成代谢活动加强,迅速进行蛋白质和核酸的合成。
机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂,如伤口上会出现愈伤组织。
在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词,但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织,大都不是损伤的结果。
外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好,因此生长素类物质在植物组织培养中得到广泛应用,常用的有生长素(2,4-二氯苯氧乙酸2,4-D、萘乙酸NAA、萘乙酰胺NA D和吲哚乙酸IAA、吲哚丙酸IP A和吲哚丁酸IBA)细胞分裂素(6-苄氨基嘌呤6-BA、6-糠氨基嘌呤(K T)氯吡苯脲(KT-30,CPPU))等。
分裂期是指外植体细胞经过诱导以后脱分化,不断分裂、增生子细胞的过程。
烟草植物组织培养实验一实验目的学习和掌握植物组织培养技术。
深刻理解植物细胞的全能性。
二实验原理植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。
由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点,现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。
本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容,使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解,为以后的实际操作提供依据。
在植物组织培养中,主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生,使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞,通过脱分化形成愈伤组织,并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织,大致要经历三个时期:起动期、分裂期和形成期。
①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。
用于接种的外植体的细胞,通常都是成熟细胞,处在静止状态。
起动期是通过一些刺激因素(如机械损伤、改变光照强度、增加氧等)和激素的诱导作用,使外植体细胞的合成代谢活动加强,迅速进行蛋白质和核酸的合成。
机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂,如伤口上会出现愈伤组织。
在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词,但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织,大都不是损伤的结果。
外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好,因此生长素类物质在植物组织培养中得到广泛应用,常用的有生长素(2,4-二氯苯氧乙酸2,4-D、萘乙酸NAA、萘乙酰胺NAD和吲哚乙酸IAA、吲哚丙酸IPA和吲哚丁酸IBA)细胞分裂素(6-苄氨基嘌呤6-BA、6-糠氨基嘌呤(KT)氯吡苯脲(KT-30,CPPU))等。
分裂期是指外植体细胞经过诱导以后脱分化,不断分裂、增生子细胞的过程。
处于分裂期的愈伤组织的特点是:细胞分裂快,结构疏松,颜色浅而透明。
外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。
例如,烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易,禾本科植物的脱分化比较难;花的脱分化比较容易,茎、叶的脱分化比较难;幼嫩组织的脱分化比较容易,成熟的老组织脱分化比较难。
烟草植物组织培养实验一实验目的学习和掌握植物组织培养技术。
深刻理解植物细胞的全能性。
二实验原理植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。
由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点,现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。
本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容,使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解,为以后的实际操作提供依据。
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从一块外植体形成典型的愈伤组织,大致要经历三个时期:起动期、分裂期和形成期。
①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。
用于接种的外植体的细胞,通常都是成熟细胞,处在静止状态。
起动期是通过一些刺激因素(如机械损伤、改变光照强度、增加氧等)和激素的诱导作用,使外植体细胞的合成代谢活动加强,迅速进行蛋白质和核酸的合成。
机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂,如伤口上会出现愈伤组织。
在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词,但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织,大都不是损伤的结果。
外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好,因此生长素类物质在植物组织培养中得到广泛应用,常用的有生长素(2,4-二氯苯氧乙酸2,4-D、萘乙酸NAA、萘乙酰胺NAD和吲哚乙酸IAA、吲哚丙酸IPA和吲哚丁酸IBA)细胞分裂素(6-苄氨基嘌呤6-BA、6-糠氨基嘌呤(KT)氯吡苯脲(KT-30,CPPU))等。
分裂期是指外植体细胞经过诱导以后脱分化,不断分裂、增生子细胞的过程。
处于分裂期的愈伤组织的特点是:细胞分裂快,结构疏松,颜色浅而透明。
外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。
例如,烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易,禾本科植物的脱分化比较难;花的脱分化比较容易,茎、叶的脱分化比较难;幼嫩组织的脱分化比较容易,成熟的老组织脱分化比较难。
烟草组织培养实验方案摘要本实验通过配制四种培养基来实现烟草种子萌发,种子苗叶片诱导、分化及植株再生,从而获得课题所需要的基因受体植株。
关键词烟草组织培养前言组织培养不仅是一种植物快速繁殖的手段,同时也是植物改良、种质保存和次生物质生产的理想途径。
烟草是典型的基因工程模式植物,易于进行组织培养,容易得到再生的转化植株。
一实验植物:华烟6号二实验材料:华烟6号种子三实验方法与步骤1.培养基的配制本次实验使用(1)种子萌发培养基:MS培养基+GA30.7mg/L;(2)愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L;(3)幼芽增殖培养基:MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L;(4)生根培养基:MS+NAA 0.2 mg/L。
上述培养基均附加3%蔗糖,0.8%琼脂,pH5.8,培养温度25±2℃,光照强度2 000 lx。
2. 培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌(湿热灭菌法)3. 无菌苗的获得把烟草种子用市售丝袜(或纱布)包好,先分别用75%乙醇或无菌水浸泡30 s,用无菌水洗净表面抑制种子萌发的药物,待洗涤的水清澈透明,然后将烟草种子用70%酒精浸泡1 min, 10%NaClO消毒10 min,经无菌水漂洗后,在超净工作台处(紫外灭菌20~30min)接种于以配置好的(1)培养基,放入(27±1)℃的光照培养架中培养。
光照周期为10 h(8:00~18:00)光照,12 h暗培养。
种子苗具4~5叶时继代扩繁备用。
4. 烟草叶片愈伤诱导及不定芽分化在超净工作台上取上述烟草无菌苗幼嫩叶片1~2片于无菌培养皿中,将叶片切成1.0~1.5平方厘米的小方块,接入(2)中培养。
约2~3d后,叶片外植体卷曲、增厚、膨胀,15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织,愈伤组织诱导率为100%。
30d后,从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出许多浅黄绿色芽点。
烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立一、概述烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立,是植物组织培养领域中的一项重要研究。
烟草作为一种重要的经济作物,其组织培养技术的研究对于提高其生产效率、优化品质具有重要意义。
愈伤组织的诱导是植物组织培养的第一步,也是后续细胞悬浮培养、基因工程操作等的基础。
烟草愈伤组织的诱导,通常通过无菌操作,利用激素等生长因子刺激烟草叶片等外植体细胞脱分化形成。
这一过程不仅受到激素种类和浓度的影响,还受到光照、温度、湿度等培养条件的影响。
优化诱导条件,降低褐化等不利因素的影响,是烟草愈伤组织诱导研究的关键。
细胞悬浮培养体系的建立,则是进一步将愈伤组织转化为可用于大规模生产和基因操作的细胞悬浮液。
通过选择适当的培养基、调节生长条件、优化细胞悬浮密度等手段,可以实现烟草细胞的稳定增殖和高效表达。
本文旨在探索烟草愈伤组织的诱导条件以及细胞悬浮培养体系的建立方法,通过系统的实验设计和优化,为烟草组织培养技术的发展和应用提供理论基础和实践指导。
这一研究也将为其他植物的组织培养提供有益的参考和借鉴。
1. 烟草愈伤组织诱导与细胞悬浮培养体系的重要性烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立,在植物组织培养、基因工程以及植物快繁等多个领域都具有重要的科学意义和实践价值。
愈伤组织的诱导是植物组织培养中的关键环节。
通过特定的培养基和培养条件,可以诱导烟草叶片等外植体脱分化形成愈伤组织。
这一过程不仅验证了植物细胞的全能性,而且为后续的细胞悬浮培养提供了适宜的起始材料。
细胞悬浮培养体系的建立为植物细胞的大规模培养和遗传转化提供了平台。
通过优化悬浮培养条件,可以获得大量生长状态良好的细胞,进而用于后续的基因转化、次生代谢产物生产等研究。
悬浮培养体系还可以用于筛选具有优良性状或抗性的细胞株系,为烟草育种提供新的途径。
烟草愈伤组织诱导及细胞悬浮培养体系在植物快繁方面也具有潜在的应用价值。
通过诱导愈伤组织再分化形成不定芽或胚状体,可以在短时间内获得大量的植株,从而实现烟草的快速繁殖。
烟草幼苗的组织培养实验报告一,实验名称:烟草幼苗的组织培养二,实验原理:植物组织培养是指在无菌条件下,分离并在培养基中培养立体植物组织(器官和细胞)的技术。
植物组织培养的理论基础是植物细胞具有全能型。
植物组织当中原本已经分化的细胞,在脱离原有机体环境成为离体状态,在适宜的营养和外界条件下,就会表现出全能性,从已经分化的细胞发生脱分化,成为重新具有分裂能力的细胞(本实验中用到的是愈伤组织,是由植物的一个离体的细胞,一块组织或一个器官的细胞脱分化形成的),并重新生长发育成完整的植株。
生长素,细胞分裂素浓度之间的平衡可以决定烟草组织幼苗的叶片或茎髓将产生根,茎或仅仅是愈伤组织。
三,实验材料和用具:1、材料:烟草幼茎2、用具:超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、电子天平、移液器、手术器械、20ml量筒、PH试纸、烧杯、玻璃棒、三角烧瓶、封口膜、高压橡皮筋。
3、试剂:MS培养基、NAA、6-BA四,实验步骤:1、培养基的配置成分实际称取量大量元素(10×)40 ml蒸馏水300 ml微量元素(100×) 4 ml有机成分(100×) 4 ml铁盐(100×) 4 ml蔗糖12 g定容至400 ml激素(1 mg/ml)每130 ml MS加:生根6-BA=13 μl NAA=65 μl生芽6-BA=65 μl NAA=13 μl对照组(不加激素)pH值 5.8分瓶30 ml/瓶琼脂0.24 g2、培养基、剪子、镊子、枪头需在高压灭菌锅120摄氏度灭菌20分钟。
3、接种前打开无菌间和超净台紫外灯照射30分钟4、肥皂洗手和手腕,关闭无菌间棚顶紫外灯,打开超净台风机,并关掉超净工作台上的紫外灯。
再用百分之七十的酒精喷手。
5、点燃酒精灯6、将橡皮筋解开(不掀开封口膜),放到无菌风道侧面。
将镊子见到放到酒精灯外焰灼烧,冷却后剪取外肢体。
迅速用另一手持三角瓶,去下封口膜,瓶口略倾斜,在酒精灯外焰上灼烧数秒。
烟草的组织培养技术
一、目的与要求
1.验证“植物细胞全能性”理论。
2.学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法。
二、实验原理
植物组织培养是指在无菌条件下,分离、并在培养基中培养离体植物组织(器官或细胞)的技术。
植物组织培养的理论依据是植物细胞的全能性,即植物体的每个活细胞都有相同的遗传组成,在适当条件下具有繁殖出完整植株的能力。
植物组织当中原本已经分化的细胞,组织、器官一旦脱离原有的机体环境,成为离体状态,在适宜的营养和外界条件下,就会表现出细胞的全能性,从已经分化的细胞通过脱分化,成为重新具有分裂能力的胚性细胞,并能再分化重新生长发育成完整的植株。
愈伤组织:是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞,通过脱分化不断分裂、增生子细胞,这些细胞分裂快,结构疏松,颜色浅而透明,逐渐形成了无序结构的细胞团。
脱分化:已经分化的细胞,发生生理、生化的改变,退回到胚性细胞的过程。
再分化:经过脱分化的细胞或组织再次获得分化成不同功能的细胞、组织、器官或完整植物体。
三、材料和用具
1.材料:无菌烟草叶盘(已经诱导成芽),拟南芥。
2.用具:超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、电子天平、移液器、手术解
剖刀、大、小镊子、30ml烧杯、500ml烧杯、药勺、玻璃棒、培养
瓶、平皿、试纸(PH5.4-7),报纸等。
3.试剂:MS培养基、0.5mol/LNaOH、1mol/L HCl。
四、操作步骤
(一)诱导培养基配制(见表1)
1.加MS储液(储液配置见附表)
大量元素和微量元素的母液都是高浓度的,为防止混合后发生沉淀,建议加完大量元素后先加水(约总体积3/4),再加各微量元素和有机成分。
铁盐也是微量元素,因为易发生沉淀,所以与其它微量元素分开配。
储液中的铁盐存于棕色瓶中。
配好的储液应当4℃保存。
表1是4瓶培养基(1组)的配置方案。
表1 诱导培养基配制表
成分实际称取量
蒸馏水120 ml
MS母液15 mL
蔗糖 4.5 g
用蒸馏水粗略定容至100ml
pH值 5.8
琼脂 1.2 g
2.加蔗糖(3%)(m/v)。
蔗糖是碳源,同时起到维持渗透压的作用。
3.调pH=5.8。
pH过低,高温处里时间过长,都可能会使培养基不凝。
4.加琼脂(0.7-0.8%)(m/v)琼脂粉是固化剂、支持物。
(二)灭菌
1.培养基、解剖刀、镊子、平皿需在高压灭菌锅120℃,灭菌15min。
2.接种前打开无菌间和超净台紫外灯照射30min。
3.用肥皂洗手和手腕。
进入无菌间,先用70%酒精或新洁尔灭喷手。
关掉
无菌间棚顶紫外灯,打开超净台风机,关掉超净工作台上的紫外灯。
(三)接种
1.坐在超净工作台前,用70%酒精棉球擦拭双手、培养瓶和超净台面。
2.待手上的酒精干了,点燃酒精灯。
3.将培养瓶的盖子旋松,但不要打开,放到无菌风道侧面备用。
将镊子、解剖刀在酒精灯外焰上灼烧,待其冷却后,放到培养皿上备用。
4.用镊子和解剖刀取出一块叶盘,放到平皿上,切取烟草叶芽1-2块,插
入培养基。
5.用酒精灯火焰上灼烧瓶口,瓶盖数秒(阻断微生物进入),拧上瓶盖,不
必太紧。
注意:无菌操作时不要讲话,以免污染。
用酒精对双手消毒时,务必待酒精彻底挥发后再靠近
酒精灯火焰,以免火焰伤手。
进出无菌间关好缓冲间的推拉门。
培养4周,25℃,光照16小时,暗8小时,湿度70%-80%。
五实验结果
1.第二周生长情况
拟南芥1:1号拟南芥种子开始膨胀,略微膨大,但是并未发芽,无明显变化。
拟南芥2:2号拟南芥中有一至二个种子开始发芽,芽的形状不规则,并且显得略微发黄。
芽只是茎的部分露出培养基的上方,芽与根都在培养基中,推测原因是种子相对于培养基的位置影响,发芽的一面面朝培养基,故芽孢向培养基中生长。
烟草1:生长状态较好,发育较快,已经占据了整个培养瓶的空间,茎秆粗壮,叶片绿色略带黄色,根系较发达,伸张至整个培养瓶的培养基。
烟草2:生长状态较好,同1号烟草。
区别在于根系更发达,有部分根伸张到培养基的表面,暴露在空气中。
2.第三周生长情况
拟南芥1:同第二周时的状态,无明显变化。
拟南芥2:最初生长出的芽死了几个,只有一个芽显浅黄色,其它已发的颜色渐渐变深,显现出与培养基相近的褐色。
表明色素对拟南芥种子的发芽有影响,可以渗透到萌发的芽中。
烟草1:生长情况与第二周时相同。
有限的培养瓶生长空间与培养基中有限的营
养物质,限制了烟草苗的进一步生长。
但染料的颜色略微变浅。
烟草2:生长情况与第二周相似,只是叶片的大小有长大。
最明显的变化是培养基的颜色,最初的深红色此时已成了浅红,颜色变化较大。
3.第四周生长情况
拟南芥1:依旧无萌芽,只是种子更加膨大。
拟南芥2:芽的大小与前两周相同,无明显变化。
推测原因是温度较低,抑制了芽的萌发于继续生长。
烟草1:室内培养两周后,叶片开始显得发黄,茎秆开始变细,为缺乏光照和营养物质的表现,需要移种到外部环境中。
烟草2:叶片变小、发黄,整体状态不及前一周。
染料的颜色继续变浅,根毛的颜色加深。
六思考题
1.什么是细胞全能性?
答:细胞的全能性是指细胞经分裂和分化后仍具有形成完整有机体的潜能或特性。
具有以下两大特点:
①高度分化的植物体细胞具有全能性,植物细胞在离体的情况下,在一定营养的物质,激素和其他适宜的外界条件下,才能表现其全能性。
②高度分化的动物体细胞也具有全能性。
动物细胞(如成纤维细胞)在离体的情况下,在一定营养物质、因子(包括特定转录因子或小分子化合物)的诱导下,可被重编程为诱导多能干细胞(iPSC),并发育成新的个体。
根据动物细胞全能性大小,可分为全能性细胞(如动物早期胚胎细胞),多能性(如原肠胚细胞),专能性(如造血干细胞);根据植物细胞表达全能性大小排列是:受精卵、生殖细胞、体细胞;全能性的物质基础是细胞内含有本物种全套遗传物质。
一个生活的植物细胞,只要有完整的膜系统和细胞核,它就会有一整套发育成一个完整植株的遗传基础,在一个适当的条件下可以通过分裂、分化再生成一个完整植株,这就是所谓的植物细胞全能性。
这是植物组织培养的理论基础。
出师表
两汉:诸葛亮
先帝创业未半而中道崩殂,今天下三分,益州疲弊,此诚危急存亡之秋也。
然侍卫之臣不懈于内,忠志之士忘身于外者,盖追先帝之殊遇,欲报之于陛下也。
诚宜开张圣听,以光先帝遗德,恢弘志士之气,不宜妄自菲薄,引喻失义,以塞忠谏之路也。
宫中府中,俱为一体;陟罚臧否,不宜异同。
若有作奸犯科及为忠善者,宜付有司论其刑赏,以昭陛下平明之理;不宜偏私,使内外异法也。
侍中、侍郎郭攸之、费祎、董允等,此皆良实,志虑忠纯,是以先帝简拔以遗陛下:愚以为宫中之事,事无大小,悉以咨之,然后施行,必能裨补阙漏,有所广益。
将军向宠,性行淑均,晓畅军事,试用于昔日,先帝称之曰“能”,是以众议举宠为督:愚以为营中之事,悉以咨之,必能使行阵和睦,优劣得所。
亲贤臣,远小人,此先汉所以兴隆也;亲小人,远贤臣,此后汉所以倾颓也。
先帝在时,每与臣论此事,未尝不叹息痛恨于桓、灵也。
侍中、尚书、长史、参军,此悉贞良死节之臣,愿陛下亲之、信之,则汉室之隆,可计日而待也。
臣本布衣,躬耕于南阳,苟全性命于乱世,不求闻达于诸侯。
先帝不以臣卑鄙,猥自枉屈,三顾臣于草庐之中,咨臣以当世之事,由是感激,遂许先帝以驱驰。
后值倾覆,受任于败军之际,奉命于危难之间,尔来二十有一年矣。
先帝知臣谨慎,故临崩寄臣以大事也。
受命以来,夙夜忧叹,恐托付不效,以伤先帝之明;故五月渡泸,深入不毛。
今南方已定,兵甲已足,当奖率三军,北定中原,庶竭驽钝,攘除奸凶,兴复汉室,还于旧都。
此臣所以报先帝而忠陛下之职分也。
至于斟酌损益,进尽忠言,则攸之、祎、允之任也。
愿陛下托臣以讨贼兴复之效,不效,则治臣之罪,以告先帝之灵。
若无兴德之言,则责攸之、祎、允等之慢,以彰其咎;陛下亦宜自谋,以咨诹善道,察纳雅言,深追先帝遗诏。
臣不胜受恩感激。
今当远离,临表涕零,不知所言。