常规组织切片技术

组织切片操作流程切片法主要步骤1、取材与固（1）取材：从动物体取下所需的器官材料。

取材的动物要健康，材料愈新鲜愈好，应在致死后立即取材，防止组织细胞自溶变性；取材的器械要锋利；所取材料力求小而薄（以不超过0.5cm为宜），不能挤压和损伤。

（2）固定：将所取的材料立即投入固定液中，目的是使组织蛋白迅速凝固，使细胞内的结构和成分不再发生变化，保持组织细胞与活体相似的形态结构，固定后的组织块变硬，便于进一步处理。

常用的固定剂有甲醛、乙醇、苦味酸或混合固定液。

实验室常用Bouin固定液，固定时间为12～24小时，其固定的组织块不需进行水洗，可直接进行脱水。

2、脱水与透明（1）脱水：固定后的组织块内含有的大量水分要彻底脱去，以便石蜡的浸入。

常用的脱水剂为乙醇，脱水过程必须循序渐进，从低浓度开始，逐步升高，使组织块中的水分逐渐被乙醇所取代。

具体操作为：Bouin固定液固定的组织块可直接进入70％的乙醇进行脱水，时间12小时左右。

（若材料暂不制片，可保存于70％乙醇中。

）然后将组织块依次移入85％乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各8-12小时，→95％乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各2小时，→100％乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各1小时。

因无水乙醇对组织有脆化作用，故在无水乙醇中时间不能超过2小时。

（2）透明：由于乙醇与石蜡不能相溶，故浸蜡前要对脱水后的组织块进行透明。

常用透明剂有二甲苯、氯仿、苯、香柏油或冬青油等，透明剂能同与乙醇和石蜡相溶，并能增强组织块的折光系数，故透明后的组织块呈半透明状。

使用二甲苯作透明剂的透明过程为：将脱水后的组织块放入无水乙醇与二甲苯混合液（1:1）中30分钟，再移入二甲苯中15-20分钟。

3、浸蜡与包埋（1）浸蜡：将透明后的组织块置于刚过熔点的熔化石蜡中浸渍，使石蜡逐渐渗入并完全置换出透明剂。

过程为：先将透明的组织块移入二甲苯与石蜡混合液（1:1）中，在60℃温箱中放置30分钟，再移入熔化的石蜡（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）中，在温箱中每级各1小时。

组织病理切片制作流程(完整版)组织病理切片是一种常规病理学检查方法，用来对病理组织进行形态学观察和病理诊断。

制作一张优质的组织病理切片需要严格按照一定的流程进行。

组织标本采集组织标本的采集是组织病理学检查的第一步。

组织标本的质量直接影响到切片的质量。

因此，采集前需要确保标本来源正确，并与患者信息相符。

对于手术标本，需要注意保护血管、神经、肌肉等结构，避免对组织结构造成不必要的损害。

对于活检标本，需要选择有代表性的组织，避免损伤重要结构和血管。

组织处理组织标本采集后，需要进行组织处理。

对于手术标本，可以直接收取。

对于活检标本，需要迅速固定，避免组织发生变性和坏死。

常用的固定剂包括10%中性缓冲福尔马林、乙醇、甲醛等，选择固定剂需要根据样本的性质和检测需要来确定。

样本包裹固定后的组织标本需要进行包裹以便于切片操作。

包裹材料通常选择的是聚苯乙烯、增韧剂聚苯乙烯等塑料材料，包裹材料必须能够完全包裹组织标本，并保证固定。

切片制备组织标本包裹后，需要进行切片制备。

切片机是用于切割病理标本的设备，其切割面的厚度一般在4-6μm之间。

在切片制备中，需要根据标本要求来选择显微镜下的切面。

切片后，标本必须尽快贴在玻片上进行染色。

组织染色组织染色是组织病理学检测的重要环节。

目前常用的染色包括常规的苏木素-伊红染色和免疫组化染色等。

苏木素-伊红染色是一种常规染色方法，可以显示出组织的基本结构和染色体。

免疫组化染色可以显示出特定的蛋白质和胚间充质细胞等。

组织标签和包装染色后的组织切片需要进行标签和包装。

标签需要包含姓名、性别、年龄和检测日期等基本信息。

组织切片还需要包装防止刮损和振动。

结果解释组织病理切片制备完成后，需要进行结果解释。

结果解释需要根据不同的病理学检测目的进行，一般是通过显微镜进行观察和诊断。

有时候，还需要通过综合分析临床病史和症状等信息来确定诊断结论。

总结组织病理切片制备流程需要严格按照一定的步骤来进行，包括组织标本采集、组织处理、样本包裹、切片制备、组织染色、组织标签和包装以及结果解释。

常规病理切片的制备（讲稿）亲爱的各位领导，各位老师，大家好。

能站在这个讲台上，对我来说本身就已经是一份莫大的荣誉，但我知道，这个讲台肯定不是属于我的。

我在这里也只能是班门弄斧了。

还真诚的希望各位不要见笑。

如果有什么不对的地方，希望各位领导和老师能够提醒我，帮助我。

因为我是分到了病理科，现在阶段的主要工作是病理技术。

那么我今天就简要的介绍一下在我们科室常规病理切片的制备过程。

这里我们以常规手术标本为例：一．收取标本。

在手术室收取标本，并仔细核对标本的各项信息。

如有误，应立即联系相应科室及医师。

如仍然有误，则可拒收该标本。

二．固定。

第二步和第一步并没有明显的时间上的先后顺序。

其实，准确的说固定必须在收取标本之前就已经进行。

因为活体的器官或组织在离体的那个时候就应该固定。

因为器官或组织离体后，在自然状态下会立刻开始腐败和自溶。

而组织或器官经固定液固定之后能防止细菌的腐蚀和组织的自溶。

细菌无处不存在，它们随时都可污染腐蚀未经处理的组织。

固定液可以固定任何蛋白质，凡有生命的东西，都由蛋白质组成，蛋白质被固定，生命就停止，细菌也就失去了活力。

另者，在日常生活中，人们常可碰到这样的问题，一块肉不经处理放了几天后就会变质，这是为什么呢？除了细菌参与外，其本身也是很重要的。

因为组织离体后，供应这此组织的血液随之消失，细胞缺氧，细胞内溶酶体膜的结构受到破坏，破坏后释放出溶酶体酶，组织在溶酶体酶的作用下开始自溶。

日常生活中常碰到的肉变质，就是细菌污染加组织自溶的结果。

这也就是为什么离体器官或组织必须在手术室刚切下来的时候就固定的原因。

在我们科室最常用的固定液是4%中性甲醛溶液（10%中性福尔马林溶液）。

三．水洗及常规取材。

１．水洗是指针对已经固定充分的组织及器官用流水冲洗。

洗去待检标本表面的杂质及其它可能影响诊断的物质。

２．取材，主要是对送检标本进行肉眼检查并记录同时从标本中切取有病变或怀疑有病变的部位。

而对于微小标本，如通过胃镜或纤支镜等取出的标本我们一般对标本进行全取检查。

组织学技术与染色方法组织学技术是研究组织构造和生物学特性的基础。

在生物学、医学和病理学领域，人们广泛应用组织学技术来研究细胞和组织的结构和功能。

染色方法是组织学技术中的一种重要方法，它可以改变组织的颜色和形态结构，从而使人们更加清晰地观察和研究组织。

本文将介绍组织学技术和染色方法的相关内容。

一、常规组织学技术常规组织学技术是指在组织学和病理学研究中常用的组织学技术，主要包括固定、包埋、切片和染色等步骤。

其中，固定是针对活体组织的一种处理方法，用于保持组织的形态结构和化学结构，同时杀死细胞，以避免组织或细胞的萎缩变形。

主要方法有酸性酒精、福尔马林等。

包埋是将固定后的组织放入合适的包埋剂中，使组织变硬，便于制备切片。

切片是将包埋后的组织切成同样大小的薄片，然后染色或进行其他特殊处理，便于观察和诊断。

二、染色方法染色是组织学技术中的一项重要方法。

染色可以使组织或细胞的不同结构和化学成分显示出不同的颜色，从而方便人们观察和研究组织。

1. 常用染色方法（1）H&E染色H&E染色是组织学研究中最常用的染色方法之一。

该方法主要利用酸性染料和碱性染料的性质不同，在染色后能够将细胞核染成深蓝色，胞浆和细胞质染成淡粉红色，从而方便人们观察和区分不同的细胞类型和组织结构。

（2）伊红染色伊红染色是一种常用的组织学样本染色方法，主要用于染色血液和骨髓切片。

该方法主要利用伊红染料的亲和性，将细胞核染成红色或紫色，细胞质和其他组织及细胞结构则染成红色，能够明显突出血液细胞和骨髓组织结构。

（3）PAS染色PAS染色是糖和糖蛋白类物质的特异性染色方法，主要用于组织中糖和糖蛋白的检测和定量。

该方法主要利用PAS染料与糖类物质形成复合物的性质，将糖染成淡红色或玫瑰红色。

2. 新兴染色技术（1）免疫组化染色免疫组化染色技术是一种利用抗体与特定抗原相互作用的特异性染色方法。

该技术可以检测和鉴定组织或细胞中特定的蛋白质、抗原等，从而在诊断和治疗等方面具有非常重要的应用价值。

免疫组化之组织处理、切片和染色实验技术步骤展开全文1.组织处理恰当的组织处理是做好免疫组化染色的先决条件，也是决定染色成败的内部因素，在组织细胞材料准备的过程中，不仅要求保持组织细胞形态完整，更要保持组织细胞的抗原性不受损或弥漫，防止组织自溶。

如果出现自溶坏死的组织，抗原已经丢失，即使用很灵敏的检测抗体和高超的技术，也很难检出所需的抗原，反而往往由于组织的坏死或制片时的刀痕挤压，在上述区域易出现假阳性结果。

1) 组织及时取材和固定组织标本及时的取材和固定是做好免疫组化染色的关键第一步，是有效防止组织自溶坏死，抗原丢失的开始，离体组织应尽快的进行取材，最好2h内，取材时所用的刀应锐利，要一刀下去切开组织，不可反复切拉组织，造成组织的挤压，组织块大小要适中，一般在2.5cm×2.5cm× 0.2cm，切记取材时组织块宁可面积大，千万不能厚的原则，(也就是说组织块的面积可以大到3cm×5cm，但组织块的厚度千万不能超过0.2cm，否则将不利于组织的均匀固定)。

固定液快速渗透到组织内部使组织蛋白能在一定时间内迅速凝固。

从而完好的保存抗原和组织细胞形态。

对于固定液的选择，原则上讲，应根据抗原的耐受性来选择相应的固定液，但除非是专项科研项目，在病理常规工作很难做到这一点，因为病理的诊断和鉴别诊断都是在常规HE病理诊断的基础上决定是否进行免疫组化的染色，而HE染色的常规组织处理是采用10%的中性缓冲福尔马林或4%缓冲多聚甲醛4倍于组织体积进行组织固定，利用其渗透性强，对组织的作用均匀进行固定，但组织固定时间最好在l2h 内，一般固定时间不应超过24小时。

随着固定时间的延长对组织抗原的检出强度将逐渐降低。

2) 组织脱水、透明、浸蜡组织经固定后进行脱水、透明、浸蜡和包埋。

掌握的原则是脱水透明要充分但不能过，浸蜡时间要够，温度不能高，否则造成组织的硬脆使组织切片困难，即使能切片，由于组织的硬脆，也使切片不能完好平整，染色过程中极易脱片，对免疫组化染色抗原的定位及背景都不利，所以无水酒精脱水和二甲苯透明的时间不宜过长，正常大小的组织无水酒精脱水lh×3次，二甲苯透明lh×2次即可，浸蜡及包埋石蜡温度不要超过65℃。

病理科常规切片（HE切片)质量PDCA管理循环案例示范病理切片质量的好坏关系到病理诊断质量和水平的高低,正确的病理诊断往往取决于准确的显微镜下观察，因此病理切片质量的好坏将直接影响诊断结果的准确性，甚至会带来错误的结果.一张好的病理切片与标本的固定、取材、脱水、包埋、切片、染色等环节有密切的关系。

过去,我科一直严抓病理切片质量,每月都随机抽查30例常规切片进行质量评价，总体来说切片质量较高，基本达到诊断的要求.但是每月的切片质量检查或多或少总发现存在一些缺陷，如切片刀痕、裂隙、气泡、胶液外溢等。

目的：通过检查常规切片质量,发现存在影响切片质量的问题,查找原因,提高切片质量。

数据收集：参照《临床技术操作规范病理学分册》中的常规石蜡包埋—HE染色切片质量的基本标准（见表1),对今年1—7月常规病理切片进行质量分级评定（每月随机抽查30例常规切片，见表2），总的优级率87.1％,优良率97。

6%，总体达标.表1 常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准优质标准满分(分）质量缺陷减分组织切面完整，内镜咬检、穿刺标本切面数10 组织稍不完整：减1～3分；不完整：减4~10分;未达到规定面数：减5分切片薄（3～5μm）,厚薄均匀10 切片厚（细胞重叠)，影响诊断:减6～10分；厚薄不均匀：减3～5分切片无刀痕、裂隙、颤痕10 有刀痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊断：减2分；有刀痕、裂隙、颤痕，影响诊断：减5分切片平坦，无皱褶、折叠10 有皱褶或折叠，尚不影响诊断:各减2分;有皱褶折或折叠,影响诊断：各减5分切片无污染10 有污染：减10分无气泡（切片与载玻片间/盖片与切片、载玻片间），盖片周围无胶液外溢10 有气泡：减3分；胶液外溢：减3分透明度好10 透明度差：减1~3分；组织结构模糊：减5~7分细胞核与细胞浆染色对比清晰10 细胞核着色灰淡或过蓝：减5分红（细胞浆）与蓝（细胞核）对比不清晰：减5分切片无松散，裱贴位置适当10 切片松散：减5分；切片裱贴位置不当:减5分切片整洁,标签端正粘牢，编号清晰10 切片不整洁:减3分；标签粘贴不牢:减3分;编号不清晰：减4分合计100注:切片质量分级标准:①甲级片：≥90分（优)；②乙级片:75～89分（良）;③丙级片:60~74分（基本合格);④丁级片：≤59分（不合格）表2 2012年1—7月常规切片质量抽查情况注：每月随机抽查30例常规切片。