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重组褐藻胶裂解酶酶解工艺的优化及产物分析王新侠;乔超超;倪辉;肖安风;蔡慧农;朱艳冰【摘要】为探索假交替单胞菌（ Pseudomonas syringae）重组褐藻胶裂解酶降解褐藻胶的动态过程变化，采用DNS法和苯酚－硫酸法分别测定体系还原糖和总糖，根据二者比例，得出酶解产物随时间变化的平均聚合度，从而研究各因素对褐藻胶降解过程的影响，确定褐藻胶酶解工艺条件。
结果表明，重组褐藻胶裂解酶降解褐藻胶的适宜工艺条件为：水解温度25℃， pH 7�5，初始底物质量浓度7 g ／L，加酶量0�48 U，静置条件下酶解反应210 min。
在此工艺条件下，产生的还原糖的质量浓度达0�878 g／L，平均聚合度为3。
酶解终产物的质谱鉴定结果显示为单糖、二糖和四糖。
%The aim of the study is to determine the dynamic process and technical conditions of alginate degradation by the recombinant alginate lyase from Pseudomonas syringae. The contents of the reducing sugar and the total polysaccharide were determined by 3 , 5-dinitrosalicylic acid assay and phenol-sulfuric acid method, respectively. According to the ratio of reducing sugar and total sugar, the variation regularity of av⁃erage polymeric degree of the enzymatic hydrolysates were obtained. The influence factors in the enzymatic process were studied, and the optimal conditions for alginate degradation by the recombinant alginate lyase were determined. The results showed that optimalco nditions for enzymatic hydrolysis were: temperature 25 ℃, pH 7�5, initial substrate concentration 7 g/L, enzyme 0�48 U, and reaction time 210 min. Under these condition, the concentration of reducing sugar reached 0�878 g/L and the average polymetric degree fell to 3 .The enzymatic hydrolysates were identified by mass spectrometer and the final products mainly included monosaccharide, disaccharide and tetrasaccharide.【期刊名称】《集美大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(021)005【总页数】7页(P338-344)【关键词】褐藻胶;酶解;工艺优化;褐藻胶寡糖;聚合度【作者】王新侠;乔超超;倪辉;肖安风;蔡慧农;朱艳冰【作者单位】集美大学食品与生物工程学院，福建厦门361021;集美大学食品与生物工程学院，福建厦门361021;集美大学食品与生物工程学院，福建厦门361021; 福建省食品微生物与酶工程重点实验室，福建厦门361021; 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室，福建厦门361021; 厦门市食品生物工程技术研究中心，福建厦门361021;集美大学食品与生物工程学院，福建厦门361021; 福建省食品微生物与酶工程重点实验室，福建厦门361021; 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室，福建厦门361021; 厦门市食品生物工程技术研究中心，福建厦门361021;集美大学食品与生物工程学院，福建厦门361021; 福建省食品微生物与酶工程重点实验室，福建厦门361021; 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室，福建厦门361021; 厦门市食品生物工程技术研究中心，福建厦门361021;集美大学食品与生物工程学院，福建厦门361021; 福建省食品微生物与酶工程重点实验室，福建厦门361021; 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室，福建厦门361021; 厦门市食品生物工程技术研究中心，福建厦门361021【正文语种】中文【中图分类】S188我国海藻资源丰富。
褐藻胶裂解酶alyB基因的重组表达及其性质研究摘要褐藻胶裂解酶是通过β-消去机制降解褐藻胶，它不但作为工具酶用于褐藻寡糖的制备，而且本身具有一定的药用价值。
然而，由于褐藻胶裂解酶分离纯化困难以及酶活性低等原因，迄今为止没有一种产业化的褐藻胶裂解酶。
因此，寻找高活力的新褐藻胶裂解酶具有重要的理论意义和明确的应用前景。
本文利用pET24a（+）建立了alyB的高效表达载体，在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了重组表达。
重组AlyB用DEAE Sepharose Fast Flow柱离子交换层析纯化为电泳纯，其分子量通过SDS-PAGE电泳分析为35.6 kDa，与其理论分子量一致。
重组AlyB反应最适pH值为7.5，最适反应温度为40℃。
AlyB在60℃100mM PB (pH7.5)中保存1h后，会失去约90%的活性。
Ba2+、Mg2+、K+、(NH4)2SO4和EDTA显著地增强AlyB的活性。
关键词：褐藻胶裂解酶；重组表达；性质The expression and Characterization of Gene alyBencoding Alginate LyaseAbstractAlginate lyase degrades alginate through beta-elimination mechanism. It is not only a tool for the preparation of alginate oligosaccharides, but also has some medicinal value. However, because of difficulties in purification of alginate lyase and its low activity, none of the industrialized alginate lyase is found so far . Therefore, search for new highly dynamic alginate lyase has important theoretical value and specific prospect. Using pET24a（+）as an efficient expression vector of alyB, the recombinant gene is expressed in E. coli BL21 (DE3).The recombinant AlyB is purified to electrophoretic homogeneity by DEAE Sepharose Fast Flow chromatography, and the molecular weight of AlyB is estimated to be 35.6 kDa by SDS-PAGE, consistent with its theoretical molecular weight. AlyB exhibites optimum pH at 7.5 and optimum temperature at 40℃. After preserved for 1h at 60℃in 100mM PB (pH 7.5), AlyB loses about 90% of its activity. Ba2+, Mg2+, K+, (NH4)2SO4 and EDTA significantly enhance the activity of AlyB.Key words ：Alginate lyase Expression Characterization目录第一章引言 (4)1、褐藻胶 (4)1.1 褐藻胶的基本结构 (4)1.2 褐藻胶的来源 (5)1.3 褐藻胶寡糖及褐藻多糖生物活性研究 (5)1.4 褐藻多糖在细菌生物膜中的生物功能 (6)2、褐藻胶裂解酶 (7)2.1 褐藻胶裂解酶的来源 (7)2.2 褐藻胶裂解酶的底物特异性 (8)2.3 褐藻胶裂解酶的分类 (8)2.4 褐藻胶裂解酶的作用机制 (9)2.5 褐藻胶裂解酶的活性测定方法 (9)2.6 褐藻胶裂解酶的生物学功能 (10)2.7 褐藻胶裂解酶的应用 (11)3、小结 (12)第二章褐藻胶裂解酶AlyB的制备及分离纯化 (13)1、实验材料 (13)1.1菌株与培养基 (13)1.2 试剂 (13)1.3 仪器 (13)2、实验方法 (14)2.1 AlyB的制备 (14)2.2 AlyB的纯化 (14)2.2.1 硫酸铵沉淀 (14)2.2.2 DEAE Sepharose Fast Flow柱离子交换层析 (14)2.3 酶活的紫外吸收法测定 (14)3、结果 (15)3.1 AlyB分离纯化 (15)3.1.1 硫酸铵沉淀 (15)3.1.2 DEAE Sepharose Fast Flow柱离子交换层析 (15)3.2 褐藻胶裂解酶AlyB的性质分析 (15)3.2.1 温度对酶活性的影响 (15)3.2.2 pH对酶活性的影响 (16)3.2.3 EDTA、金属离子对酶活性的影响 (16)4、讨论 (17)参考文献 (19)第三章致谢 (22)第一章引言近年来，伴随着海洋热，越来越多的人开始关注海洋，尤其关注海洋药物的开发及研究。
褐藻酸裂解酶的结构、性质及应用Hee Sook Kim，Choul-Gyun Lee and Eun Yeol Lee摘要褐藻胶是一种线性多糖，由β-D-甘露糖醛酸（M）与其差向异构体α-L-古洛糖醛酸（G）通过1，4糖苷键连接形成不同的结构。
褐藻酸裂解酶因其高粘度及凝胶作用可作为一种食品添加剂来改善食品的质地。
该酶可以通过β-消除机制裂解糖苷键来降解褐藻胶，产生一个具有非还原末端的结构。
褐藻寡糖已被发现具有促进人内皮细胞生长以及巨噬细胞细胞因子释放的作用。
褐藻胶可以通过褐藻酸裂解酶的内切及外切作用，降解为含有不饱和键的单糖。
因此，在不久的将来，褐藻酸裂解酶有潜力作为生物催化剂，以褐藻胶作为可再生资源生产生化试剂及生物燃料。
本文介绍了不同的褐藻酸裂解酶的结构、功能并对褐藻酸裂解酶的应用前景进行了讨论。
关键词褐藻胶；褐藻酸裂解酶；褐藻寡糖；不饱和单糖1 介绍褐藻胶是一种线性多糖，其中其中β-D-甘露糖醛酸（M）与其差向异构体α-L-古洛糖醛酸(G)通过1.4糖苷键按照不同顺序连接而成，其中α-L-古洛糖醛酸是β-D-甘露糖醛酸的C5异构体。
这两种糖醛酸可以形成聚甘露糖醛酸和聚古洛糖醛酸以及甘露糖醛酸与古洛糖醛酸的随机聚合物。
褐藻胶在自然界存量丰富，其作为藻类植物的组成成分，占到了藻类植物干重的44%。
一些细菌也可以合成褐藻胶。
目前，褐藻胶主要用作食品添加剂来改变食物的质感，也被用作固定细胞及组织的介质。
商品级的褐藻胶可通过从海洋大型藻类中提取的方式生产。
褐藻酸裂解酶通过β-切割糖苷键来降解褐藻胶，生产多种以不饱和糖醛酸作为非还原末端的寡糖以及不饱和糖醛酸单体。
多种褐藻酸裂解酶已从海藻、海洋无脊椎动物、海洋及部分土壤微生物中分离得到。
褐藻酸裂解酶可以依据底物特异性分为PM特异性、PG特异性、PMG特异性。
对于相应的底物特异性，褐藻酸裂解酶具有内切酶与外切酶两种活性。
褐藻寡糖已经显现出许多引人注目的生物活性，它可以促进人内皮细胞的生长以及巨噬细胞细胞因子的释放。
褐藻胶裂解酶基因在大肠杆菌中的表达及其酶学性质汪立平，刘玉佩，孙晓红，赵勇(上海海洋大学食品学院，上海201306)摘要：作者从蜡样芽孢杆菌F1—5—10中提取D N A，通过PC R克隆得到褐藻胶裂解酶基因后，将其构建到pE T一30a(+)上并在大肠杆菌B I。
2l菌株中进行高效诱导表达。
继而对纯化得到的褐藻胶裂解酶蛋白进行活性检测和酶学特性研究。
实验结果表明：PC R扩增出1035bp大小的褐藻胶裂解酶基因al gl(G e nB a nk登录号：G U585575)，SD孓PA G E电泳结果显示出相对分子质量约为45ooO的特异性蛋白质条带。
表达条件优化实验结果表明O。
4m m ol／L浓度的I P T G32℃诱导4h重组蛋白的表达量最高，约占菌体总蛋白质质量的36％。
测定褐藻胶裂解酶酶活性，酶活力为11．7U／m g。
酶学性质研究表明：A LG L的酶活最适温度为35℃，热稳定性较差，最适pH值为6．6，C a”、M92对酶活有激活作用，A I。
G I。
催化褐藻胶的K。
值为1．89m g／m L，V。
为15．0l U／m L。
关键词：褐藻胶裂解酶；蜡样芽孢杆菌；原核表达中图分类号：Q78文献标志码：A文章编号：1673一1689(2012)02—189一06E xpr es s i on of A l gi nat e l yas e G ene i n E．cD Z f andC har act er i zat i on of t he E nzym eW．A N G Li一户i，29，L J【，Y k一夕Pi，SU N X i口。
一^o，zg，Z H A O Y b咒g(C onegP of Fo od S c i e nce and Tec hn0109y，Shangh a j()c e an U ni ve r s i t y，S hanghaj201306，C hi na)A bs t m ct：T he臼ZgZ gene(G enB ank ac ces si on num ber：G U585575)e ncodi ng al gi nat e l yase(A LG L)f r om B口fi ZZ比s f e，．P“s Fl一5—10w as cl oned i nt o t he ve ct o r pE T一30a and expr ess ed i nE s c^Pr i f^i口f D Zi B L21i n t hi s s t udy．T he opt i m um e xpr e s si on condi t i ons of al gl i n．E．fD￡i w ass t udy and l i st ed as f ol l ow s：t he conc ent r at i on of I PT G O．4m m ol／L，expr es s i on t i m e4h，ande xpr e s si on t em per at ur e32℃．U nder t he opt i m um condi t i。
酶解制备褐藻胶寡糖及其产物的抗氧化活性分析周绪霞;徐鋆;丁玉庭【摘要】以褐藻酸钠为底物,通过褐藻胶裂解酶酶解方法得到3种不同分子质量范围的褐藻胶寡糖组分(ADO-A、ADO-B和ADO-C),对其抗氧化性活性进行了研究.结果表明:3种寡糖组分都有一定的抗氧化活性,且活性随着寡糖浓度的增加而加强,其中ADO-C的抗氧化活性最高.在DPPH·体系中,ADO-C的IC50值为0.53mg/mL;在·OH体系中,ADO-C对羟基自由基的清除活性大干同浓度的抗坏血酸(P ＜0.05)；还原力方面,在较低的浓度下,ADO-C表现出的还原力显著大于其余的2种(P＜0.05).实验表明,酶解得到的褐藻胶寡糖具有较强的抗氧化性,ADO-C(MW＜8000)的抗氧化性最显著,即分子质量较小的寡糖有更强的抗氧化活性.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2014(040)002【总页数】5页(P116-120)【关键词】褐藻胶寡糖;酶解;抗氧化性【作者】周绪霞;徐鋆;丁玉庭【作者单位】浙江工业大学生物与环境工程学院,浙江杭州,310014;浙江工业大学生物与环境工程学院,浙江杭州,310014;浙江工业大学生物与环境工程学院,浙江杭州,310014【正文语种】中文褐藻胶(Alginate)是一种由β-1，4-D-甘露糖醛酸(M)和α-1，4-L-古罗糖醛酸(G)2 种单体通过1，4-糖苷键链接而成的线性多糖聚合物，主要来自于海带、马尾藻、巨藻等褐藻类植物，具有抗肿瘤、增强免疫、促生长等多种生理活性，但由于其自身是一种高聚合度的物质，分子质量较大，不易溶解，且黏度较大，实际应用有一定的局限性［1］。
褐藻胶分子结构中含有大量的羟基，酶解可以改变糖分子伸展结构，使糖羟基暴露，改善其性能。
褐藻胶寡糖是褐藻胶的降解产物，是由2～10个单糖分子通过糖苷键连接而成的聚合物，由于其相对分子质量低，具有溶解性能好、机体吸收利用率高、稳定性好等特性［2］。
褐藻胶降解过程及链剪切模型的研究佳薇1,陈静静1,1,"12（1.江南大学食品学院，江苏无锡214122；2.江南大学食品安全国际联合实验室，江苏无锡214122）摘要：利用多角度激光光散射检测器(GPC-MALLS)研究了褐藻胶裂解酶(alginate lyase&和纤维素酶(Cellulase)一步法和分步法降解方式下褐藻胶产物相对分子质量参数的变化，分析并确定了链剪切模型及低相对分子质量褐藻胶降解条件。
结果表明Cellulase无法单独作用于褐藻胶。
alginate lyase表现为多次剪切模型和中央剪切模型,alginate lyase分步降解法(iA)提高了酶利用率。
alginate lyase降解条件：一步法反应控制在2h内，分步法控制在5h内，酶添加量为2.56-10.24U/mg o分步法中进一步探究了alginate lyase和Cellulase的协同作用，加酶间隔时间为0min(iACS) ,30min(iACM),60min(iACE)。
结果表明:alginate lyase主要作用于M C!1x105的相对分子质量组分‘Cellulase主要作用于1x104~1x105的相对分子质量组分。
iACE法中产物PDI保持稳定且无限趋近于2,呈现出随机剪切模型。
iACS和iACM法中使产物相对分子质量组分增加，PDI值上升至5.14和7.02。
关键词：褐藻胶裂解酶；纤维素酶;链剪切模型；褐藻胶；多角度激光散射检测器中图分类号:Q539文章编号:1673-1689(2021)01-0043-08DOI:10.3969/j.issn.1673-1689.2021.01.006Degradation Process and Chain Scission Models of AlginateDuring Enzymatic HydrolysisCHEN Jiawei1,CHEN Jingjing1,ZHANG Tao1,JIANG Bo*1#2(1.School of Food Science and Technology,Jiangnan University,Wuxi214122,China; 2.International Joint Laboratory on Food Safety,Jiangnan University,Wuxi214122,China)Abstract:The changes of molecular weight parameters of alginates hydrolyzed by alginate lyase (ALyase)and cellulase using one-step and step-by-step methods were studied by GPC-MALLS.The chain shear models and the degradation conditions were determined.The results showed cellulasehad no function on alginate if used alone.Multiple shear model and central shear model were observed when alginate lyase used.Furthermore,the utilization rate was improved with thestep-by-step method of alginate lyase.The duration of one-step and step-by-step degradation using2.56〜10.24U/mg alginate lyase were with in2h and5h,respectively.The synergistic effect of alginate lyase with cellulase was further explored by step-by-step method at0min(iACS),30min (iACM),60min(iACE).Alginate lyase preferred to take effect on the alginates of molecular weight(M w)!1x105,while cellulase preferred to1x104〜1x105g/mol.The PDI values were stable and收稿日期：2020-03-08基金项目：国家自然科学基金项目(31871745)；国家&十三五’重点研发计划项目(2017YFC1600902)；国家食品科学技术一级学科计划项目(JUFSTR20180203)Op通信作者：江波(1962—),男，博士，教授，博士研究生导师，主要从事食品生物技术研究(Email：*******************.cn很2021年第40卷第1期CHEN Ji-wei,et al；Degradation Process and Chain Scission Models ofAlginate During Enzymatic Hydrolysisapproached to2infinitely in the iACE method,showing a random shear model.In the iACS and iACM methods,the hydrolyzed products varied in components with increased molecular weight,andtheir PDI values rose to5.14and7.02respectively.Keywords:alginate lyase,cellulase,chain scission mode,algin,GPC-MALLS大量研究已证明褐藻胶作为水溶性膳食纤维，具有抗菌、降血糖等生理特性[1-3]o但天然褐藻胶是一种生物大分子，相对分子质量集中在4x105~ 8x10s,即使在低浓度下形成的溶液黏度也很高，流动性与适口性差，使其无法应用到食品体系中发挥重要生理特性$与天然褐藻胶相比，低相对分子质量的褐藻胶不仅具有一定的成膜性，可减缓碳水化合物的吸收速度，同具有的菌：可作为水溶性膳食纤维等特点叫，多糖相对分子质量分度也是其生理特性的重要参数$因，低相对分子质量及相对分子质量分布范围窄的褐藻胶的研可为开性食品「提理$在数的研集中在褐藻胶，褐藻胶的降用物理化方法如伽马射线法、法、法、氧化法,但降低，应生糖链聚集!5旳。
海洋弧菌(Vibrio sp.QD-5)褐藻胶裂解酶基因的r克隆和生物信息学分析晁雅熙;王淑艳;吴谡琦;陈颢【摘要】以海洋弧菌(Vibrio sp.QD-5)的基因组为模板,使用设计的褐藻胶裂解酶引物进行PCR扩增.将目的基因克隆至pet-22b(+)载体后进行测序.测序结果显示,基因aly-I I的大小为2170 bp,预测编码含有723个氨基酸的蛋白质.对该蛋白质进一步进行了生物信息学分析.利用ProtParam和ProtScale对蛋白质的理化性质进行分析,结果表明,蛋白质Aly-II的理论分子质量为85.6 kDa,理论等电点为5.1,并且是一种亲水性蛋白.利用软件MEG 6.0对蛋白质Aly-II进行系统发育分析,结果显示,蛋白质Aly-II很可能是PL-17家族的褐藻胶裂解酶.利用同源建模法构建蛋白质Aly-II的三维结构,Aly-II含有2个结构域,分别为(α/α)6 toroid结构域和β-sheet结构域.%Using designed specific primers,the target aly-I I gene was amplified by PCR from the genomic DNA of Vibrio sp.QD-5,cloned into pet-22b(+)vector and then sequenced.The result showed that the cloned gene was 2170 bp,encoding 723 amino acid residues.The bioinformatics analysis of Aly-II protein was further conducted using ProtParam and ProtScale to analyze the physical and chemical properties of the protein.The theoretical molecular weight and pI of Aly-II were 85.6 kDa and 5.1,respectively.The protein had hydrophilic property.The phylogenetic trees were constructed by MEG 6.0 and phylogenetic a-nalysis showed that,Aly-II was most likely an alginate lyase of PL-17 family.The three-dimensional struc-ture of Aly-II was constructed using homology modelingmethod.The structure of Aly-II displayed that it contained two domains,i.e.,(α/α)6 toriod domain andβ-sheet domain.【期刊名称】《海洋科学进展》【年(卷),期】2018(036)002【总页数】11页(P290-300)【关键词】Vibrio sp.;褐藻胶裂解酶;基因克隆;生物信息学分析【作者】晁雅熙;王淑艳;吴谡琦;陈颢【作者单位】国家海洋局第一海洋研究所,山东青岛 266061;国家海洋局第一海洋研究所,山东青岛 266061;国家海洋局第一海洋研究所,山东青岛 266061;国家海洋局第一海洋研究所,山东青岛 266061【正文语种】中文【中图分类】Q939.97褐藻胶是一类主要存在于褐藻细胞壁中的水溶性酸性多糖,由β-D-甘露糖醛酸和α-L-古洛糖醛酸组成,2个单体之间通过α-1,4-糖苷键可组成3种不同的褐藻胶分子,分别为多聚甘露糖醛酸(poly M)、多聚古洛糖醛酸(poly G)和杂聚物(poly GM)[1]。
黄杆菌褐藻胶裂解酶的高效表达及其在褐藻寡糖制备中的应用江君1，刘军1，杨绍青1，马帅1，闫巧娟2，江正强1,*（1.中国农业大学食品科学与营养工程学院，中国轻工业食品生物工程重点实验室，北京100083；2.中国农业大学工学院，北京100083）摘 要：研究黄杆菌褐藻胶裂解酶基因（rFlAlyA）在枯草芽孢杆菌中的高效表达，高密度发酵48 h最高酶活力为2 550 U/mL，蛋白质量浓度达4.5 mg/mL。
经(NH4)2SO4沉淀和SP强阳离子交换柱纯化后得到电泳级纯酶，分子质量约为30 kDa。
褐藻胶裂解酶rFlAlyA最适pH值为7.5，在pH 4.0～11.0范围内可保持80%以上酶活力；最适温度为50 ℃，在50 ℃及以下可保持80%以上酶活力。
底物特异性分析表明，rFlAlyA特异性降解聚甘露糖醛酸片段，最短链底物为甘露糖醛酸三糖。
rFlAlyA在最适条件下酶解褐藻酸钠4 h后还原糖质量浓度达33 mg/mL，底物转化率为70.1%，电喷雾电离-质谱分析酶解产物的聚合度（degree of polymerization，DP）为1～8，离子色谱分析显示DP=3时相对含量最高，为34.0%。
结果表明，经枯草芽孢杆菌高效表达的rFlAlyA可用于制备褐藻寡糖。
关键词：褐藻胶裂解酶；黄杆菌；枯草芽孢杆菌；高密度发酵；褐藻寡糖High Level Expression of Alginate Lyase from Flavobacterium sp. and Its Application in Preparation of Alginate Oligosaccharides JIANG Jun1, LIU Jun1, YANG Shaoqing1, MA Shuai1, YAN Qiaojuan2, JIANG Zhengqiang1,*(1. Key Laboratory of Food Bioengineering (China National Light Industry), College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China; 2. College of Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China) Abstract: High-efficiency expression of the alginate lyase gene (rFlAlyA) from Flavobacterium sp. in Bacillus subtilis was studied. After high cell-density fermentation for 48 h, the enzymatic activity reached the highest level of 2 550 U/mL with a protein content of 4.5 mg/mL. The rFlAlyA, with a molecular mass of about 30 kDa, was purified to electrophoretic homogeneity after fractionation with (NH4)2SO4 and ion exchange chromatography on SP strong cation exchange column. Maximal enzymatic activity was observed at pH 7.5 and 50 ℃. The enzyme showed good stability at pH 4.0−11.0 and was thermostable up to 50 ℃, retaining over 80% of its activity. The substrate specificity indicated that rFlAlyA was a polymannuronate lyase with trisaccharide being the shortest-chain substrate. For alginate oligosaccharides production, sodium alginate was reacted with rFlAlyA under the optimal conditions for 4 h, giving a final concentration of reducing sugar of 33 mg/mL in the reaction mixture and a conversion rate was 70.1%. Electrospray ionization tandem mass spectrometry showed that the degree of polymerization (DP) of the hydrolysates was 1 to 8 and trisaccharide was the most abundant, which accounted for 34.0% of the total components when the DP was 3. The findings of this study indicated that the recombinant alginate lyase could be applied for the production of alginate oligosaccharides.Keywords: alginate lyase; Flavobacterium sp.; Bacillus subtilis; high cell-density fermentation; alginate oligosaccharidesDOI:10.7506/spkx1002-6630-20191213-149中图分类号：Q814 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2021）04-0145-08引文格式：江君, 刘军, 杨绍青, 等. 黄杆菌褐藻胶裂解酶的高效表达及其在褐藻寡糖制备中的应用[J]. 食品科学, 2021, 42(4): 145-152. DOI:10.7506/spkx1002-6630-20191213-149. JIANG Jun, LIU Jun, YANG Shaoqing, et al. High level expression of alginate lyase from Flavobacterium sp. and its application in preparation of alginate oligosaccharides[J]. Food Science, 2021, 42(4): 145-152. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-20191213-149. 收稿日期：2019-12-13基金项目：“十三五”国家重点研发计划重点专项（2017YFD0400204）第一作者简介：江君（1995—）（ORCID: 0000-0001-9267-0500），男，博士，研究方向为食品生物技术。
