实验报告
课程名称：病原生物学与免疫学实验 指导老师：陈玮__ _____成绩：______________ 实验名称：沉淀反应和补体参与的免疫反应 实验类型：___________同组学生姓名：钟一鸣
1.沉淀反应——双向琼脂扩散试验
【实验原理】
双向扩散是将可溶性抗原和抗体分别加到琼脂板相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如果抗体和抗原相对应，则在两者比例适当处形成白色沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体系统，因其扩散速度不同，可在琼脂中出现多条沉淀线。观察沉淀线的位置、形状等可对抗原或抗体作出定性分析。本试验常用于检测抗原抗体的纯度，滴定抗体的效价以及用已知抗体（抗原）检测和分析未知抗体（抗原）。临床上用此法检测患者血清中的甲胎球蛋白AFP ，作为原发性肝癌的重要诊断指标。双向扩散实验所需时间较长（24h ），灵敏度不高。
【实验现象】
沉淀线
Ag 对照
Ag 对照
Ag 待测
Ag 待测
Ag 对照
Ab
Ab
1）.六边形排列孔中，六条沉淀线在抗体孔周围衔接成一个完整的圆形
2）.三角形排列孔中，出现两条沉淀线，且二者相交顶端相连
【实验结果】
待测样本AFP阳性，与阳性对照含有浓度基本相同的AFP
【讨论】
1）.六边形排列孔中出现完整的圆形，说明阳性对照抗原和待测样本抗原浓度基本接近，使得六个孔中各沉淀线离中央孔的距离接近，围成完整的圆形
2）.三角形和六边形排列孔的沉淀线均较接近中央孔，说明待测抗原和阳性对照抗原的浓度略大于抗体浓度。
3）.制琼脂板时，不能太薄，且因要打六边形孔，尽量保证边上的孔不能太浅
4）.沉淀线不明显可能和抗原抗体浓度以及放置时间有关，放置时间过短则沉淀线不明显，过长则会使已经形成的沉淀线解离或散开而出现假阴性
2.免疫电泳试验——对流免疫电泳试验
【实验原理】
带电的胶体颗粒可在电场中移动，移动的方向与胶体颗粒所带的电荷有关，蛋白质抗原在PH8.6的缓冲液中带负电荷，故由阴极向阳极移动，抗体球蛋白的等电点为PH6-7，故在PH8.6的缓冲液中带负电荷少，且分子较大，移动缓慢，同时因电渗作用，反向阴极移动，于是形成抗原与抗体相对移动的情况，在二者相遇的最适比例处产生白色沉淀。此种在双向免疫扩散的基础上加电泳的方法称为对流免疫电泳。由于抗原、抗体在电场中做定向移动，限制了琼脂双向扩散时抗原、抗体朝各方向自由扩散，因而提高了实验的敏感度，同时缩短试验时间，故可作快速诊断。
【实验现象】
Ag
Ab Ab Ag
注：左侧为阳性对照，右侧为待测组
可见AFP阳性血清孔和抗体孔之间的白色沉淀线，同时待测血清孔和抗体孔之间也有沉淀线出现
【实验结果】
待测血清为AFP阳性，其内含有甲胎球蛋白。
【实验讨论】
1）抗体球蛋白的电渗力大于其电泳力，使之向负极移动，抗原电泳力大于电渗力，使之向正极移动，二者相向移动，相遇后形成沉淀线
2）阳性对照及待测组所得的沉淀线均不明显，可能是由于试验前配制的各血清及抗体溶液的浓度不完全合适所致，过浓或过稀均不易出现沉淀线
3）沉淀线不明显也可能是我们组加样时有部分孔溢出，部分孔不够，第二次再补加，使得抗体抗原量有些许差异
4）沉淀线不明显还可能与琼脂的质量有关
3.补体参与的免疫反应——溶血反应
【实验原理】
将红细胞多次注射于动物可使之产生相应的抗体（溶血素），这种抗体与红细胞结合，在有电解质存在时可发生凝集现象，若同时有补体存在，因补体的作用没有特异性，能与任何一组抗原抗体复合物结合，故补体被激活，红细胞被溶解破坏，这种现象称为溶血反应。溶血反应通常用来作为补体结合反应中的指示系统。
【实验现象】
注：上两图由左至右见下表
1 2 3 4 5 6 7 2%红细胞 0.5
0.5
0.5
第2管沉淀物
第3管沉淀物 第2管上清液 第3管上清液 溶血素2U 0.5 0.5 — —
—
0.5
0.5
补体2U 0.5 — 0.5 0.5 — 0.5 — 生理盐水
0.5
1.0
1.0
2.5
2.5
—
—
1）.1号、4号和7号试管溶液为红色，澄清透明 2）. 2、3、6、7号试管溶液为红色，浑浊 【实验结论】
1号、4号和7号试管出现溶血反应，其余均无明显反应 【实验讨论】
1）.2、 5号管中有红细胞以及相应抗原，可出现凝集反应，但实验中不明显，应该是因为红细胞及抗体没有达到适当的浓度，凝集反应不明显
2）.1号管中有红细胞、抗体及补体，三者可形成复合物导致溶血；4号管中有2号管沉淀物中的红细胞及抗体复合物，外加补体，可致溶血；7号管中有3号管上清液的补体和额外加的红细胞和抗体，也可形成复合物溶血
3）.3号管中缺乏抗体，6号管缺乏抗体，均无法形成复合物溶血
4）.7号管溶液特别少是因为放置过程中不小心倒出了一部分，日后的实验中应当对此加以注意
1 2
3
4 5 6
7
5）.倒出2、3号管的上清时，尽量速度快，防止下部沉积的红细胞打散溢出
