鸡新城疫高免血清的制备

高免血清及卵黄抗体的制备技术

免疫血清

1.动物的选择 可作为免疫用的动物多为哺乳类和禽类，主要有家兔、绵羊、马、猪、驴、豚鼠和鸡等，其中实验常用家兔、绵羊、鸡和豚鼠。选择动物时要注意以下几个方面：

a.抗原与动物种系 动物性抗原的免疫原性，随动物种系远近而有差别。近缘动物的蛋白质免疫原性弱，反之则强。因此选择动物时应选用亲缘关系较远的动物。

b.免疫血清的用量 所需要的免疫血清，如是经常大量地使用，选择免疫动物时则应选择大动物；如所需的免疫血清量不大，则以选择小动物为宜。

c.动物的个体状态 用于免疫的动物必须是适龄、健壮、无感染的动物。免疫过程中应特别注意营养和卫生管理。注射抗原1个月后，动物仍无良好的抗体反应，或在规定注射日程后抗体效价不高，可再注射l～2次，若仍不佳者立即弃去．

2.抗原制备与接种 制造抗血清，根据产品不同,所用抗原、制法亦有所不同。病毒性抗血清，一般是用本动物的含毒组织作抗原，首先把强毒接种本动物，使其发病，采取其含毒性组织作为抗原，注射于免疫动物。细菌性血清，是用抗原性好的强毒或弱毒菌种，接种于规定培养基内，于37℃培养，细菌发育良好者，以纯粹检验后用作抗原。

抗原接种：动物在免疫过程中分为基础免疫及高度免疫。基础免疫一般是注射疫苗，然后连续多次注射强毒进行高度免疫，每次注射剂量，要随着注射次数的增加而增加。接种抗原的次数和剂量，应根据制造抗血清的品种和动物健康情况加以调整。为了获得效价高的抗血清，动物饲养条件必须保持良好。

3.血清抗体的检测 免疫程序接近结束时，测定血清的抗体效价，如果效价已达规定的要求，即可视作免疫成功，开始采血。若经试血，血清效价不合格，则可继续增加注射抗原次数或剂量，如再试血仍不合格，应将动物淘汰。

测定免疫血清效价是及时掌握采血时机的重要步骤。常用的有环状沉淀反应(包括抗原稀释法和抗体稀释法)和双向琼脂扩散试验。 用琼脂扩散试验测定血清效价时，如果在抗原孔与抗体孔之间出现沉淀线者，即为阳性。最高稀释倍数血清孔出现沉淀线，即为该血清的抗体效价。琼脂扩散试验的效价通常比环状沉淀反应稍低。

高免血清及卵黄抗体的制备技术

免疫血清

1.动物的选择 可作为免疫用的动物多为哺乳类和禽类，主要有家兔、绵羊、马、猪、驴、豚鼠和鸡等，其中实验常用家兔、绵羊、鸡和豚鼠。选择动物时要注意以下几个方面：

a.抗原与动物种系 动物性抗原的免疫原性，随动物种系远近而有差别。近缘动物的蛋白质免疫原性弱，反之则强。因此选择动物时应选用亲缘关系较远的动物。

b.免疫血清的用量 所需要的免疫血清，如是经常大量地使用，选择免疫动物时则应选择大动物；如所需的免疫血清量不大，则以选择小动物为宜。

c.动物的个体状态 用于免疫的动物必须是适龄、健壮、无感染的动物。免疫过程中应特别注意营养和卫生管理。注射抗原1个月后，动物仍无良好的抗体反应，或在规定注射日程后抗体效价不高，可再注射l～2次，若仍不佳者立即弃去．

2.抗原制备与接种 制造抗血清，根据产品不同,所用抗原、制法亦有所不同。病毒性抗血清，一般是用本动物的含毒组织作抗原，首先把强毒接种本动物，使其发病，采取其含毒性组织作为抗原，注射于免疫动物。细菌性血清，是用抗原性好的强毒或弱毒菌种，接种于规定培养基内，于37℃培养，细菌发育良好者，以纯粹检验后用作抗原。

抗原接种：动物在免疫过程中分为基础免疫及高度免疫。基础免疫一般是注射疫苗，然后连续多次注射强毒进行高度免疫，每次注射剂量，要随着注射次数的增加而增加。接种抗原的次数和剂量，应根据制造抗血清的品种和动物健康情况加以调整。为了获得效价高的抗血清，动物饲养条件必须保持良好。

3.血清抗体的检测 免疫程序接近结束时，测定血清的抗体效价，如果效价已达规定的要求，即可视作免疫成功，开始采血。若经试血，血清效价不合格，则可继续增加注射抗原次数或剂量，如再试血仍不合格，应将动物淘汰。

测定免疫血清效价是及时掌握采血时机的重要步骤。常用的有环状沉淀反应(包括抗原稀释法和抗体稀释法)和双向琼脂扩散试验。

高免血清的制备及效价测定 目的意义 1、了解高免血清的制备过程；

2、学习家兔采血的方法和血清分离方法； 3、学习琼脂双向扩散法检测血清效价。

实验原理

抗原进入机体后，被机体的抗原递呈细胞所识别并加以处理，递呈给B淋巴细胞，B淋巴细胞增殖、分化形成浆细胞，浆细胞分泌产

生特异性抗体。（示意图）该特异性抗体与相应抗原在电解质存在的情况下，在琼脂凝胶中相对扩散，相遇时结合形成肉眼可见的抗原抗

体复合物，由于复合物分子较大，不能继续扩散，所以在琼脂凝胶中

沉淀下来，形成肉眼可见的沉淀线。此法可鉴定所制备的高免血清的特异性，并检测出其效价。（示意图）。

实验材料 实验动物：健康成年家兔，体重1.5-2.0Kg；

药品：沙门氏菌油乳剂灭活苗（自制）；消毒酒精及碘酒；琼脂粉；

硫柳汞、NaCL等； 器械：剪刀、镊子、止血钳、三角瓶、平皿、打孔器等。 操作步骤 1、家兔的免疫

在家兔的两后足跖部皮下（或皮内）注射含有完全佐剂的抗原0.1ml，抗原含量5mg/ml初次免疫；待两侧腹股沟淋巴结肿胀后注射含有完全佐剂的抗原0.1ml， 7-10天后，脊柱两侧多点（颈、

胸、腰椎各2点、共6点）皮下注射含不完全佐剂的抗原，每点0.5ml；7-10天后脊柱两侧重复注射1次；7-10天后试血，不合

格者重复脊柱两侧注射。 2、琼脂扩散平板的制备

称取一定量的琼脂按1%左右的比例加入生理盐水，加热煮沸

充分溶解，稍冷后加入终浓度1/万的硫柳汞混匀，将上述溶液倒入平皿中，厚度约为2-3mm，待凝固后用打孔器在其上打中间一孔，

周围六孔的梅花形孔，孔径为2mm，孔间距3-4mm，挑出孔内琼脂，注意不要挑破琼脂边缘，然后在酒精灯火焰上缓缓加热，使孔底

少量琼脂溶化封住孔底。

3、试血 取耳缘静脉血待凝固后分离血清，用生理盐水将血清作2倍系列

稀释后加入梅花形孔周围孔，中间孔滴加抗原，以加满为宜，加毕后，盖上皿盖，将平皿置湿盒中，37℃扩散24-48小时，观察结果。 4、免疫家兔的采血 方法有颈动脉放血和心脏采血。颈动脉放血时，将兔仰卧，固定

1。鸡新城疫

由新城疫病毒引起，以呼吸困难，下痢，神经症状，腺胃乳头出血为特征。应该早期消除病原，重在做好预防。

（处方1）

鸡新城疫高免血清 1毫升

用法：一次肌肉注射。

说明：也可用抗鸡新城疫卵黄抗体1－2毫升，一次肌肉或皮下注射。

（处方2）

金银花 连翘 板蓝根 蒲公英 青黛 干草 各120克

（处方3）预防

鸡新城疫弱毒疫苗2系或四系（N79） 1头份

鸡新城疫油佐疫苗 0。5～1毫升

用法：鸡7日龄，21日龄时用2系或四系（N79）疫苗饮水，滴鼻，点眼或喷雾；42日龄，120日龄用油佐剂疫苗肌肉注射。

说明：120日龄时也可以用新城疫－产蛋下降综合征二联苗0。5～1毫升肌肉注射，或者鸡新城疫－产蛋下降综合症－鸡传染性支气管炎三联苗0。5～1O毫升肌肉注射。

注意：首免日龄最好依据所测母源抗体的高低而定。

2。鸡传染性法氏囊炎

由传染性法氏囊炎病毒引起的2～6周龄雏鸡的一种急性，高度接触性传染病。以法氏囊肿胀，出血，坏死，胸肌，腿肌出血，腺胃，鸡胃交界处条状出血为特征。治疗应该消除病原，做好预防。

（处方1）

传染性法氏囊病高免血清 1毫升

用法：一次皮下注射或肌肉注射

说明：也可以用抗鸡法氏囊病高免卵黄抗体1－2毫升或抗鸡法氏囊病和鸡新城疫双价卵黄抗体1－2毫升一次肌肉或皮下注射

（处方3）

鸡传染性法氏囊病弱毒疫苗 1－4头份

鸡传染性法氏囊灭活有机剂苗 0。5毫升

用法：10～14日龄，28～30日龄各用弱毒苗饮水或滴鼻，饮水量2－4头份；120日龄和280日龄各用灭活苗肌肉注射。也可以在7－10日龄时皮下注射灭活苗0。3－0。5毫升。

3。鸡传染性喉气管炎

由传染性喉气管炎病毒引起的呼吸道传染病。以呼吸困难，湿咳，喉部和气管黏膜肿胀，出血，糜烂为特征。治宜对症处理，预防继发感染。

（处方1）

链霉素 5万－10万IU