小鼠肺腺癌模型的建立及肿瘤病理分析

小鼠肺癌原位模型的建立作者：胥孜杭刘菲邹纯朴朱诗国陈晓来源：《中国医药导报》2015年第01期[摘要] 目的肺癌的发病率和病死率居高不下，而目前用于实验研究的肺癌动物模型存在较大的局限性，故本研究认为建立一个稳定、类似于人体肿瘤微环境的肺癌原位模型是深入研究肺癌的基础。

方法直接将稳定表达虫萤光素酶的鼠Lewis肺腺癌细胞与基质胶的混悬液注射于C57 BL/6小鼠左肺，无需打开胸腔只需将小鼠左胸部皮肤剪开约1 cm小口，定期利用小动物活体成像系统中的生物发光技术监测小鼠肿瘤形成及转移情况，并将小鼠处死后立即进行肺部组织活体取材，采用石蜡包埋、切片、HE染色做出病理学诊断。

结果采用肺内注射的原位造模法成瘤率高，Lewis肺腺癌细胞数量只需0.5×105个即可成瘤，成功率达90%以上，且利用活体成像系统中的生物发光技术能监测到模型小鼠肿瘤可转移至对侧胸廓、对侧肺组织、双侧腋下及腹股沟淋巴结等。

结论注射虫萤光素酶稳定表达的鼠Lewis肺腺癌细胞与基质胶混悬液构建的肺癌原位模型所需细胞数量少，成瘤率高，无手术死亡风险，转移性好，监测方便，操作简单且可重复性高，为深入研究肺癌提供了良好模型。

[关键词] 肺癌;原位模型;活体监测[中图分类号] R734.2 ; ; ; ; ;[文献标识码] A ; ; ; ; ;[文章编号] 1673-7210（2015）01（a）-0015-04Establishment of orthotopic lung cancer model in miceXU Zihang ; LIU Fei ; ZOU Chunpu ; ZHU Shiguo ; CHEN XiaoSchool of Basic Medical Science， Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai ; 201203， China[Abstract] Objective Morbidity and mortality remain high in lung cancer， but the animal lung cancer models used for the experimental research are limited， so to establish an orthotopic lung cancer model， which is stable and similar to the human tumor microenvironment， is a foundation for the further study of lung cancer research. Methods Luciferase-expressed LLC cells and matrigel matrix were directly injected into the left lung of C57BL/6 mice after cutting open a incision of the skin， which about 1 cm， and there was no need to open the chest. Small animal in vivo bioluminescence imaging system was used to monitor tumor growth and metastasis. At different time points， mice were sacrificed and the lung tissues were isolated and imbedded with paraffin. Pathological diagnosis was made by sliced and HE stained. Results LLC cells （0.5×105） were enough to form an orthotopic pulmonary tumor， and the success rate was above 90%. The metastases to contralateral thoracic， contralateral lung， bilateral axillary and inguinal lymph nodeswere monitored by bioluminescence technique. Conclusion The orthotopic tumor models of lung cancer can successfully built by injection of luciferase-expressed LLC cells and matrigel matrix mixture. Furthermore， a few LLC cells are needed， and the tumor formation rate is high， besides there is no operation death risk. It has good metastases and high repeatability， in addition it's easy to operate and easy to be monitored， which provides a good method for the establishment of mouse models for further study of lung cancer.[Key words] Lung cancer; Orthotopic model; Live monitoring目前肺癌的发病率无论在国内还是国外都已位居各类肿瘤发病率的前列，在国内还呈现逐年上升的趋势，其中约80%的肺癌都属于非小细胞肺癌[1-3]，这引起了无论是西医还是中医、临床还是实验室的广泛重视。

小鼠早期肺腺癌模型的病理学研究肖时满;李勇爱;强金伟;邓林;张友元【摘要】目的研究小鼠早期肺腺癌的病理学表现,重点观察肿瘤生长类型和肿瘤-支气管关系.方法 KM小鼠10只每周皮下注射诱癌剂亚硝基胍(MNNG,浓度2.0 mg/mL)0.2 mg,连续4周.喂养至第100天时处死,解剖肺叶并肉眼计数肿瘤,甲醛固定后,随机选择100个肿瘤石蜡包埋、3μm切片、HE染色、光镜下观察和测量肿瘤的组织病理学类型、大小、形态、边缘、生长方式以及与支气管的关系.结果肉眼共见187个肿瘤,随机选取的100个病理证实均为肺腺癌.肿瘤大小0.19～1.33mm,平均0.48 mm.镜下见三种生长方式:匍匐性、膨胀性和混合性,数量分别为6个、28个和68个;平均大小分别为0.34、0.54 mm和0.47 mm.100个肿瘤中96个与支气管形成直接关系,其中13％和96％的肿瘤分别与通气支气管和换气支气管有关.肿瘤中心部、周边部和外周部支气管的显示率分别为19％、49％和96％;平均直径分别为67、91 μm和110 μm.肿瘤生长遇支气管阻挡或沿支气管间扩展可形成分叶(33％)或毛刺(35％).结论小鼠早期肺腺癌生长方式及肿瘤-小支气管关系的病理学研究有助于我们加深对人早期肺腺癌相应CT表现的认识.【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2016(024)001【总页数】6页(P1-6)【关键词】肺癌;支气管;小鼠;病理学;动物模型;CT影像学【作者】肖时满;李勇爱;强金伟;邓林;张友元【作者单位】复旦大学附属金山医院影像科,上海201508;复旦大学附属金山医院影像科,上海201508;复旦大学附属金山医院影像科,上海201508;复旦大学附属金山医院影像科,上海201508;复旦大学附属金山医院病理科,上海201508【正文语种】中文【中图分类】Q95-33肺癌的发病率及死亡率居各类癌症之首[1]。

肺腺癌为最常见的病理组织学亚型，占所有肺癌近一半，尤其是女性[2, 3]。

小鼠肺癌正位模型的建立周恺骅;高基民【摘要】肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,肺癌正位模型的建立是肺癌研究的基础.本研究构建了稳定表达荧光素酶的鼠Lewis肺腺癌细胞株,以非开放性的方式进行肺内注射,监测小鼠的精神状态、行动力、体重,用活体成像系统观察肿瘤大小,并将瘤荷小鼠处死后进行肺部组织活体取材,进行病理检测.研究发现,随着小鼠肺肿瘤的不断变大,小鼠精神状态变差、行动力变弱、体重降低,病变肺叶肺泡结构被大量异型性细胞取代.构建肺癌正位模型操作简单且可重复性高,为深入研究肺癌提供了良好模型.【期刊名称】《浙江农业科学》【年(卷),期】2018(059)012【总页数】6页(P2323-2328)【关键词】肺癌;正位模型;活体监测【作者】周恺骅;高基民【作者单位】温州医科大学检验医学院生命科学学院, 浙江温州 325035;温州医科大学检验医学院生命科学学院, 浙江温州 325035【正文语种】中文【中图分类】S858;R734.2据世界卫生组织癌症研究中心(IARC)报告，肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。

美国癌症协会(American Cancer Society)统计，2017年全美新增的609 640例癌症死亡病例中，肺癌分别以26%和25%占据男、女癌症死亡病例的首位[1-2]。

为了深入地研究肺癌，动物模型是所有研究的基础。

现有的肺癌模型主要分为2种，一种是通过诱导上皮转化来实现，利用化学致癌物或基因工程改变致癌基因或抑癌基因的表达[3]，另一种是利用肺癌细胞株或患者肿瘤细胞进行异位或正位递送。

前者易于肺癌遗传学上的研究及靶向药物的研发，但是成瘤时间较长、建模系统相对复杂及成本较高等问题限制了其应用。

目前应用较多的是利用癌细胞株进行皮下异位移植，但也有学者比较了小鼠正位肺癌模型和皮下模型，认为正位模型虽然操作复杂，但其转移率和肿瘤生物学特征更符合临床实际情况[4]。

已有研究利用Lewis细胞株建立小鼠正位肺癌模型[5-7]，这些研究较多地选择了开放性的方式，对小鼠胸部皮肤切开后进行肺部正位注射来构建肺癌模型。

小鼠Lewis肺癌胸腔移植模型的建立【摘要】目的：通过胸腔移植的方法建立晚期肺癌的动物模型。

方法：经C57BL/6小鼠的腋后线第6肋间胸腔(胸腔模型组)或小鼠腋部皮下(皮下模型组)分别移植鼠源性Lewis肺癌细胞0.2ml （5×106ml-1），观察小鼠的生存时间、小鼠体重、饲料消耗量、游泳试验、常压耐缺氧试验，大体观察胸腔、纵隔、胸水等肺癌细胞浸润和转移情况。

结果：胸腔模型组小鼠中位数生存时间13.5（8～18）d，皮下模型组小鼠中位数生存时间45（25～71）d，胸腔模型组的生存期范围离散程度较皮下模型组小（Ｐ<0.05）。

病程中胸腔模型组小鼠体重下降、摄食减少等恶病质体征较皮下模型组明显（Ｐ<0.01），胸腔模型组小鼠活动减少、睡眠时间缩短、蜷曲、毛发脱落等现象较皮下模型组多见，胸腔模型组小鼠游泳实验及耐缺氧实验时间较皮下模型组明显缩短（Ｐ<0.01），胸腔模型组小鼠早期可出现胸水和肿瘤转移，而皮下模型组小鼠早期未见胸水和肿瘤转移。

结论：胸腔移植模型可作为晚期肺癌动物模型。

【关键词】 Lewis肺癌胸腔移植模型皮下移植模型晚期肺癌小鼠肺癌动物模型与临床结果一直存在差距，尤以晚期模型更为明显。

我们在进行动物实验研究中发现，目前使用的肿瘤皮下移植模型中，动物生存时间差异很大，不利于生存期观察。

肿瘤发展到晚期也可以出现转移，但是发生率很不一致。

另外，模型的肿瘤负荷和产生的症状、并发症、生存状态也很不一致。

为了克服皮下移植模型缺陷，有学者采用将人类癌组织或肿瘤细胞悬液直接植入支气管的方法，可以很好模拟支气管肺癌的临床特征，但是其技术要求较高，成功率较低［12］。

另外，也有人采用外科手术移植方法，同样也是成功率低于10%［3］。

这些模型都需要无胸腺裸鼠或SCID小鼠，饲养条件高，实验费用昂贵。

鉴于肺癌模型的建立现状，至今未见有经胸腔直接移植建立晚期肺癌模型的报道，因此，作者采用清洁级小鼠C57BL/6胸腔种植鼠源性Lewis肺癌细胞的方法，进一步比较该模型和皮下移植模型肿瘤生长状况，观察治疗前后小鼠生存时间、生存状态及其相互关系，研究该模型稳定性和实用性。