临床免疫学检验知识点
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免疫检验知识点总结一、免疫检验的基本原理① 抗体与抗原的相互作用免疫检验的基本原理是利用抗体与抗原的特异性相互作用。
抗体是一种由机体产生的特异性蛋白质,可以识别并结合与之对应的抗原,形成抗原-抗体复合物。
这种特异性相互作用是免疫检验能够有效识别某些疾病的基础。
② 免疫检验的灵敏度和特异性免疫检验的灵敏度是指测试方法能够准确检测到低浓度抗原或抗体的能力,而特异性是指方法能够区分目标抗原或抗体与其他非特异性成分的能力。
通常情况下,免疫检验需要具有较高的灵敏度和特异性,才能准确诊断疾病。
二、常见的免疫检验方法1. ELISA(酶联免疫吸附实验)ELISA是一种广泛应用于医学诊断的免疫检验方法。
它利用酶标记的抗体或抗原与待检测的抗原或抗体结合,通过酶底物的显色反应来检测特定物质的存在和浓度。
ELISA方法可以用于检测各种疾病的标志物,包括感染病原体、肿瘤标志物、药物残留等。
2. 免疫荧光分析免疫荧光分析是利用荧光标记的抗体识别和检测待检测的抗原或抗体。
通过荧光显微镜或荧光光度计来观察或定量分析荧光信号,以确定特定物质的存在和浓度。
免疫荧光分析广泛用于细胞学、免疫学、微生物学等领域的研究和诊断。
3. 免疫固定电泳免疫固定电泳是通过将抗体和待检测的抗原在电泳条件下结合,然后通过免疫印迹方法检测特定蛋白质或其他生物分子的存在和浓度。
免疫固定电泳在临床诊断和科研领域有广泛的应用。
4. 放射免疫测定放射免疫测定是利用放射性同位素标记的抗体或抗原与待检测的抗原或抗体结合,通过放射性测量仪器来检测特定物质的存在和浓度。
放射免疫测定通常具有较高的灵敏度和特异性,可用于检测一些低浓度的生物分子。
5. 流式细胞术流式细胞术是利用激光技术和荧光标记的抗体来检测和分析细胞表面或内部标志物的存在和表达水平。
流式细胞术可以快速高效地分析大量细胞样本,广泛用于免疫学、细胞生物学、肿瘤学等领域的研究和诊断。
三、免疫检验在疾病诊断中的应用1. 传染病的诊断免疫检验方法可以用于感染病原体的检测,例如HIV、乙肝病毒、丙肝病毒等。
临床免疫学检验临床免疫学检验是一种透过检验身体免疫系统的功能状态来诊断和治疗人体免疫疾病的医学检验技术。
它主要应用于检测人体免疫功能的变化,例如免疫缺陷、自身免疫性疾病、过敏反应等。
其检测结果成为了判断疾病是否存在、发展过程和预后的重要依据。
一、临床免疫检查所涉及的项目1、全血细胞计数:包括白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、血小板等。
白细胞计数对疾病监测有重要意义,其异常值可能暗示某些疾病的存在,如感染、免疫疾病、白血病等。
2、单个抗体检测:单个抗体检测用于检测某个特定的抗体,例如细菌感染、病毒感染、肿瘤标志物等。
3、自身抗体检测:自身抗体检测用于检测人体免疫系统对自身组织或成分的免疫反应。
例如自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等。
4、流式细胞术:流式细胞术通过检测细胞表面标志物和细胞内物质,可以识别不同的细胞类型,例如白细胞分化、肿瘤细胞的识别等。
5、免疫固定电泳:免疫固定电泳是一种检测血清蛋白质的方法,其主要应用于鉴定血清蛋白质成分的变化,例如蛋白质异常增加、某些种类蛋白质缺失等,以及某些疾病的辅助诊断。
二、临床免疫检验的意义临床免疫学检验在筛选、诊断、治疗疾病、预测预后等方面有重要的意义。
1、疾病筛查:许多免疫学检查项目可以用于常见和罕见疾病的筛查。
例如,促甲状腺激素检查可以预先诊断甲状腺自身免疫疾病,抗心肌抗体和心肌肌原纤维蛋白抗体可以诊断心肌病,肝疾病特异性抗体可以确定患者是否感染肝炎病毒等。
2、疾病诊断:免疫学检查也可以用于特定疾病的诊断,如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、白血病、骨髓增生异常综合征等。
3、治疗效果观察:对于特定的疾病或治疗方式,需要通过免疫学检查来了解患者的治疗效果,如慢性乙型肝炎治疗后的血清HBV DNA状态、各类肿瘤治疗后肿瘤标志物水平的变化、免疫调制药物治疗后CD4/CD8等细胞水平的变化等。
4、预后预测:免疫学检查还可以为临床预后预测提供指导,如系统性红斑狼疮患者抗双链DNA抗体和抗精氨酸胞浆蛋白抗体储量高则易发生肾脏损害,骨髓增生异常综合征患者骨髓造血功能可通过检查免疫球蛋白储量进行评估。
免疫应答主要分为哪几个阶段?1)识别阶段 2)活化和增值阶段 3)免疫效应中枢免疫器官和外周免疫器官有哪些器官组成?各有什么功能?1)中枢免疫器官:免疫细胞发生、分化、成熟的场所,如骨髓,胸腺2)外周免疫器官:免疫细胞产生应答的场所。
如脾脏,淋巴结,黏膜,扁桃体等。
T细胞、B细胞和NK细胞的主要功能分别是什么?1)T细胞:介导细胞免疫,辅助体液免疫。
2)B细胞:产生体液免疫3)NK细胞:介导天然免疫,发挥细胞毒作用。
根据作用方式及其特点的不同,机体存在两类免疫简述各自的概念和特征?1)先天性免疫或固有性免疫,是个体出生是就具有的天然免疫,可通过遗传获得,是机体在长期进化过程中逐渐建立起来的主要针对入侵病原体的天然防御功能。
其主要特征是反应迅速,针对外来异物的范围较广,不针对某个特定异物抗原,也称非特异性免疫。
2)适应性免疫,是个体出生后,接触到生活环境中的多种异物抗原,并在不断刺激中逐渐建立起来的后天免疫,也称获得性免疫。
其主要特征是针对某个特定的异物抗原而产生免疫应答,开始的应答过程比较缓慢,一旦建立清除该抗原的效率很高,特异性很强,也称特异性免疫。
简述抗原抗体反应的原理。
答:抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性,这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的,它们之间的结合是抗原表位与抗体超变区沟槽分子表面的结合简述抗原抗体反应的类型。
答:抗原抗体反应分为五种类型:①颗粒性抗原与相应抗体结合所产生的凝集反应;②可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应;③抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应;④细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应;⑤免疫标记的抗原抗体反应等。
什么是带现象?答:在抗原抗体反应等价带前后,由于抗体或抗原过量(形成前带或后带),上清液中可测出游离的抗体或抗原,形成的沉淀物少,不出现可见反应,这种现象在做血清学试验时称为带现象。
影响抗原抗体反应的环境条件有哪些?在实验中如何控制这些条件因素?答:环境条件包括:电解质,酸碱度和温度。
临床免疫知识点总结一、免疫系统的基本概念1. 免疫系统的组成免疫系统是由多种细胞和分子组成的复杂系统,包括淋巴细胞、巨噬细胞、树突状细胞、血清免疫球蛋白等。
淋巴细胞包括T细胞、B细胞和NK细胞,它们在免疫应答中起着不同的作用。
巨噬细胞和树突状细胞则是通过吞噬和呈递抗原来激活淋巴细胞。
血清免疫球蛋白包括IgG、IgM、IgA、IgE和IgD,它们可以与抗原结合,并触发免疫反应。
2. 免疫系统的功能免疫系统的主要功能是保护机体免受外界病原微生物的侵害。
它通过识别和清除病原微生物,维持机体内部的稳态。
免疫系统还能够识别和清除异常细胞,包括肿瘤细胞。
此外,免疫系统还参与到体内异物和抗原的清除,保持机体内部的稳态。
3. 免疫系统的免疫应答当机体受到感染或其他外界侵害时,免疫系统会启动免疫应答,包括先天免疫应答和获得性免疫应答。
先天免疫应答通过巨噬细胞和自然杀伤细胞来清除病原微生物,而获得性免疫应答则是通过B细胞和T细胞来识别和清除特定抗原。
免疫应答的过程包括抗原识别、T细胞和B细胞的激活、抗原清除和记忆应答。
二、免疫系统的疾病1. 免疫系统的过敏性疾病过敏性疾病是由于机体异常的免疫应答导致的疾病,包括变态反应、过敏性鼻炎、哮喘、食物过敏等。
这些疾病通常由特定抗原引起,机体对抗原产生异常的免疫应答,导致炎症和组织损伤。
2. 免疫系统的自身免疫性疾病自身免疫性疾病是由于机体免疫系统对自身组织产生异常的免疫应答,导致组织损伤和功能障碍,包括类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、自身免疫性甲状腺疾病等。
这些疾病通常由遗传和环境因素共同导致,临床表现各异。
3. 免疫系统的恶性肿瘤免疫系统的恶性肿瘤包括淋巴瘤和骨髓瘤等,这些肿瘤通常由淋巴细胞或浆细胞恶性增生导致。
临床表现包括淋巴结肿大、骨髓增生异常、免疫功能低下等。
三、临床免疫学的诊断和治疗1. 免疫系统疾病的诊断免疫系统疾病的诊断主要依靠病史、临床表现、实验室检查和免疫学检查。
第一章概论1. 免疫学(Immuno logy)是研究免疫系统的结构与功能,并通过对其在免疫应答过程中所产生的免疫保护与免疫损伤机制的研究,探讨有效的免疫措施,实现以防病、治病为目的的一门现代医学学科。
免疫学技术对推动免疫学的发展及基础与临床免疫学的结合起了重要作用。
学习免疫学的基本概念,了解临床免疫学的理论基础,掌握免疫技术的检测原理是学习和研究临床免疫学与免疫技术的重要保障。
第一节免疫学简介1. 免疫(immuni ty)是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能。
免疫系统与机体的其他系统相互配合,相互制约,共同维持机体在生命过程中的生理平衡。
一、免疫学概念与免疫应答1. 宿主体内的免疫系统能识别并清除从外环境中侵入的病原生物及其产生的毒素、内环境中因基因突变产生的肿瘤细胞、自身衰老残损的组织细胞或自身变性抗原,实现免疫防御、免疫自稳、免疫监视。
免疫防御——指机体排斥外源性异物的能力。
免疫自稳——指机体识别和清除自身衰变残损的组织细胞的能力,以维持正常内环境稳定。
免疫监视——指机体杀伤和清除异常突变细胞的能力,以监视和抑制恶性肿瘤在体内生长。
2. 免疫应答反应(immune respon se):是指机体免疫系统接受抗原刺激发生一系列反应,并以排出或分解该抗原为目的的反应过程。
免疫应答的过程主要分为:识别阶段(recogn ition phase)——抗原识别处理传递信息活化阶段(activa tionphase)——免疫细胞活化增殖产生效应细胞、分子效应阶段(respon se phase)——执行效应功能3. 免疫应答效应大多为生理性,是机体对外来抗原或自身变性抗原的清除效应。
免疫应答反应过强时,可致机体组织或器官发生病理损伤,出现临床疾病。
免疫学检验知识点免疫学检验是一种通过检测体内免疫系统的功能状态来评估健康状况的方法。
免疫系统是人体的一种重要的防御机制,可以识别和清除病原体,保护身体免受感染。
免疫学检验可以帮助医生诊断和治疗各种免疫相关的疾病,例如自身免疫性疾病、过敏反应、免疫缺陷等。
本文将介绍一些常见的免疫学检验知识点。
一、抗体检测抗体是一种由免疫系统产生的蛋白质分子,可以识别和结合特定的抗原。
通过检测抗体的存在和量来评估免疫系统对疾病的应答情况。
常见的抗体检测包括ELISA(酶联免疫吸附试验)、Western blotting(蛋白质印迹)等。
这些检测方法可以用于检测感染性疾病的抗体,例如HIV、肝炎病毒等,并可用于确认诊断和评估治疗的效果。
二、免疫球蛋白检测免疫球蛋白是一种由免疫细胞分泌的抗体,可以帮助中和细菌毒素、清除细菌和病毒等。
免疫球蛋白检测可以评估免疫系统的功能状态。
常见的免疫球蛋白检测包括免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)等。
这些检测可以用于评估免疫系统对感染的应答情况、诊断免疫缺陷病、监测免疫治疗的效果等。
三、细胞免疫学检测细胞免疫学检测是一种评估免疫系统功能的重要方法。
常见的细胞免疫学检测包括淋巴细胞亚群分析、细胞毒性检测、细胞增殖试验等。
这些检测可以评估免疫细胞的数量、功能和应答情况,用于诊断免疫相关疾病、评估治疗效果等。
四、炎症指标检测炎症是免疫系统对感染和损伤的一种典型反应。
炎症指标检测可以评估免疫系统对炎症的应答情况。
常见的炎症指标包括C-反应蛋白(CRP)、白细胞计数、红细胞沉降率(ESR)等。
这些指标可以用于评估感染和炎症性疾病的程度、监测治疗效果等。
五、过敏原检测过敏反应是一种免疫系统过度应答一些外界物质的情况,例如花粉、食物、宠物等。
过敏原检测可以帮助确定引发过敏反应的具体物质,以便采取相应的预防和治疗措施。
常见的过敏原检测包括皮肤划痕试验、血清IgE测定等。
免疫学检验考试重点免疫学检验老师给的重点,自己总结的,当复习资料看看吧。
第一章绪论1、临床免疫学检验是研究免疫学检验的理论、技术、应用,以及临床免疫学性疾病发病机制、免疫诊断与防治的一门医学应用性学科。
2、临床免疫学(clinical immunology)是利用免疫学的基础理论和技术来研究临床疾病的免疫病理机制、诊断和鉴别诊断、治疗效果和预后判断以及疾病预防等多个分支学科的总称。
3、免疫学检验建立的基础第二章抗原抗体反应1、抗原抗体反应(antigen-antibody)是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。
可发生于体内,也可发生于体外。
2、抗原抗体防御的原理是什么?具有哪些特点?原理:基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性,抗原与抗体间的结合是非共价键结合,通过静电场力、范德华引力(作用最小)、氢键结合力(最具特异性)、疏水作用力(作用最大)等分子间的引力结合在一起,在特异性的基础上形成非共价键由亲水胶体转化为疏水胶体。
特点:特异性、比例性、可逆性。
3、影响抗原抗体反应的因素有哪些?①反应物自身因素抗原(理化性状、分子量、表位的种类和数目)、抗体(来源、浓度、特异性与亲和力)。
②环境因素电解质、酸碱度(一般在6-8之间为宜)、温度(一般为15-40,常用抗原抗体反应为37)。
③对照的设置阴性对照、阳性对照、空白对照、标准品对照4、亲合力(avidity):抗体结合部位与抗原表位之间结合的强度,与抗体结合价直接相关即所谓多价优势。
5、亲和力(affinity):是指抗体分子单一抗原结合部位与抗原分子表面一个相应抗原决定簇(表位)之间的结合强度,它是抗原抗体之间固有的结合力。
第三章免疫原和抗体的制备1、抗体制备类型:单克隆抗体、多克隆抗体、基因工程技术。
2、各类抗体的制备原理和应用?单克隆抗体,原理:将抗原免疫的小鼠脾细胞与具有体外长期繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞通过融合剂(聚乙二醇,PEG)融为一体,在HAT选择性培养基的作用下,只让融合成功的杂交瘤细胞生长,经过反复的免疫学检测、筛选和单个细胞培养(克隆化),最终获得既能产生所需单克隆抗体,又能体外长期繁殖的杂交瘤细胞系,将这种杂交瘤细胞扩大培养,接种于小鼠腹腔,从小鼠腹腔积液中获取高效价的单克隆抗体。
临床免疫学检验重点整理(下)混合,在补体参与下,使抗体形成细胞周围那些受到抗体分子致敏的绵羊红细胞溶解,形成肉眼可见的溶血空斑,每一个空斑中央含一个抗体形成细胞,空斑数目即为抗体形成细胞数目。
细胞因子(CK):是由机体活化的免疫细胞及某些基质细胞分泌的小分子蛋白质,通过结合细胞表面的相应受体发挥生物学效应(有旁分泌、自分泌、内分泌)。
细胞粘附分子(CAM):是由细胞产生、介导细胞与细胞间或细胞与基质间相互接触和结合的分子。
酶联免疫斑点实验(ELISPOT):在包被有待测CK抗体的微孔板上,加入可分泌相应细胞因子的待测细胞,在有或无刺激物存在的条件下培养后,待测细胞向其周围分泌细胞因子,并被板上的特异性抗体捕获。
洗去细胞后用酶标抗体为一抗或二抗,分别做直接法和间接法。
所选底物应在酶促反应后形成不溶性产物。
一个斑点代表一个细胞因子分泌细胞,斑点的颜色深浅程度与细胞因子量相关。
目前在细胞因子检测方面应用较多的是IFN-γ的测定。
免疫球蛋白(Ig):是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。
可分为分泌型和膜型两类。
(现在认为,Ig与Ab没有什么区别)临床上常用速率散射免疫比浊法检测Ig。
免疫球蛋白测定的临床意义(一)年龄,年龄不同其血液中的Ig含量有一定变化,新生儿可由母体获得通过胎盘转移来的IgG,故血液中含量较高,接近成人水平。
婴幼儿体液免疫功能尚不成熟,Ig含量低于成人,各年龄段的正常参考区间见教材。
需要注意的是,血液Ig随年龄、性别、血型、种族及测定方法不同而有差别,各实验室需要建立自己的参考值范围。
(二)多克隆高Ig血症肝脏疾病如慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、隐匿性肝硬化等患者的血清中,三种免疫球蛋白均可升高。
慢性细菌性感染如结核、麻风、慢性支气管炎等血中IgG可升高。
宫内感染时脐带血或出生后的新生儿血清中IgM含量可增高。
自身免疫性疾病时三种Ig均可升高,如SLE患者以IgG/A升高较为多见,类风湿性性关节炎患者以IgM升高为主。
临床免疫学检查考点总结一、病毒性肝炎标志物检查HAV HBV HCV HDV HEV基因组线状单链RNA小RNA病毒科DNA病毒单股正链RNA(黄病毒属)单股环状RNA单股正链RNA(杯状病毒属)抗体系统IgM,表近期感染1周达高峰,持续2月逐渐下降,IgG可保持多年HBV颗粒又叫Dane颗粒,详见后不是保护性抗体是HCV感染的标志抗-HDV不是保护性抗体抗HEVIgM在发病初期产生是近期感染的标志备注100℃5min可完全灭活,紫外线、过氧乙酸等敏感HBV抵抗力强,100℃10min可灭活,对酒精敏感100℃5min可灭活一种缺陷病毒需HBV辅助才能复制消毒剂敏感免疫学标志临床意义HBsAg+ 最早出现血清学标志抗-HBs抗体:曾感染乙肝;接种了疫苗一种保护性抗体HBeAg(e抗原)HBV活动性复制和传染性标志抗-HBe 传染性减弱的标志HBcAg(核心抗原)存在于受染肝细胞核中,血液中检测不到,+表有传染性抗-HBcIgM 早期感染IgG 过去感染HBV DNA 最敏感最直接的HBV感染指标二、常用抗原抗体凝集反应项目缩写临床意义抗核抗体谱ANA包括dsDNA抗体、抗组蛋白抗体、抗可提取核抗原(ENA)抗体谱。
ANA——最常见于SLE、混合性结缔组织病抗Sm - SLE特异性指标抗双链DNA 抗体抗dsDNA SLE活动性指标类风湿因子RF类风湿性疾病时,RF的阳性率70%~90%,故本试验的特异性不高抗环瓜氨酸肽抗体CCP 是类风湿性关节炎特异而敏感的早期诊断指标抗链球菌溶血素“O”抗“O”升高常见于感染性心内膜炎、扁桃体炎、风湿热以及链球菌感染后肾小球肾炎,1周后开始升高,4~三、肿瘤标志物检查(一)甲胎蛋白(AFP)测定:升高见于肝癌(>300μg/L)、生殖腺胚胎性肿瘤(如睾丸癌、畸胎瘤),病毒性肝炎、肝硬化(但<300μg/L)(二)癌胚抗原(CEA)测定结肠癌、直肠癌、乳腺癌、胃癌、肺癌、胰腺癌等(三)前列腺特异抗原测定在前列腺癌时可见PSA水平明显升高四、免疫球蛋白1.IgG、IgA、IgM均增高常见于各种慢性感染、慢性肝病、肝硬化、淋巴瘤和某些自身免疫性疾病(如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等)2.单一免疫球蛋白增高主要见于免疫增殖性疾病(如多发性骨髓瘤、原发性球蛋白血症等)。
临床免疫学检验技术口诀以下是为您生成的十个适用于小学生的临床免疫学检验技术口诀:**口诀一**一学抗原和抗体,就像钥匙配锁具。
抗原是那锁模样,抗体如同钥匙奇。
二者相遇会结合,免疫反应就开启。
抗体专门来识别,抗原特性要牢记。
免疫检验基础在,小朋友们别忘记。
**口诀二**一讲免疫细胞多,好似卫兵守城郭。
白细胞们责任重,T 细胞 B 细胞活。
二说巨噬大细胞,吞噬病原不含糊。
NK 细胞威力猛,杀敌如同斩妖魔。
免疫防线要筑牢,细胞作用细琢磨。
**口诀三**一探免疫球蛋白,种类不少作用殊。
IgG 是老大姐,含量高来分布足。
IgM 像急先锋,早期抗感染忙碌。
IgA 守黏膜关,IgE 与过敏熟。
IgD 较神秘,功能还待深入读。
**口诀四**一论免疫应答妙,如同战场起风暴。
初次应答反应慢,再次应答速度高。
体液免疫抗体造,细胞免疫 T 细胞跑。
免疫记忆很重要,下次敌人来打倒。
**口诀五**一述免疫标记法,如同星星闪闪挂。
荧光标记亮晶晶,酶标显色容易查。
放射标记精度高,化学发光也不差。
选择方法看需求,准确检测全靠它。
**口诀六**一讲免疫沉淀术,好似泥沙水中住。
抗原抗体相结合,沉淀下来能看顾。
双向免疫效果好,单向也能有帮助。
操作细心又耐心,结果清晰不含糊。
**口诀七**:一探免疫电泳法,如同赛车跑道划。
抗原抗体齐赛跑,电场里面分高下。
琼脂凝胶作平台,沉淀线出真相达。
分析结果多比较,免疫情况能洞察。
**口诀八**一述免疫比浊法,好像测量杯中沙。
抗体抗原混一起,浊度变化能观察。
仪器测量精度准,定量分析顶呱呱。
操作规范步骤清,数据可靠人人夸。
**口诀九**一论免疫亲和柱,如同磁铁吸宝物。
特异性强选材料,目标分子跑不掉。
清洗杂质再收集,纯化效果真叫好。
学会运用这一招,免疫检验水平高。
**口诀十**一谈免疫芯片妙,好似微型实验室。
众多靶点集成排,一次检测信息全。
灵敏度高速度快,未来发展前景灿。
小朋友们多学习,科学奥秘等你探。
临床免疫学检验 1、免疫:是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能 2、免疫防御(对外);免疫自稳(防自身免疫病);免疫监视(防肿瘤)。 3、中枢免疫器官:骨髓、胸腺; 外周 免疫器官:淋巴结、 脾脏(最大 )、黏膜相关淋巴组 织 4、 B细胞:通过识别膜免疫球蛋白来结合抗原,介导 体液免疫;B细胞受体=BCR=mlg 表面标志: 膜免疫球蛋白( SmIg)、 Fc 受体、补体受体、 EB 病毒受体和小鼠红细胞受体。 成熟B细胞:CD19 CD20 CD21 CD22 (成熟 B细胞的 mlg主要为mlgM和mlgD)同时检 测CD5分子,可分为B1细胞和B2细胞。
B 细胞功能检测方法: 溶血空斑形成试验(体液免疫功能)。 5、 T细胞:介导细胞免疫。共同表面标志是CD3(多链糖蛋白);辅助T细胞的标志是CD4; 杀伤T细胞的标志是 CD8 T细胞受体=TCR
T细胞和NK细胞的共同表面标志是 CD2(绵羊红细胞受体); CD外CD4+ CD8-=辅助性T细胞(Th) CD外CD4- CD8+ =细胞毒性T细胞(Tc或CTL)( T细胞介导的细胞毒试验) CD知CD2升=调节性T细胞(Tr或Treg )
T细胞功能检测: 植物血凝素(PHA刀豆素(CONA刺激T细胞增殖。增殖试验有:形态 法、核素法。
T 细胞亚群的分离: 亲和板结合分离法,磁性微球分离法,荧光激活细胞分离仪分离法 *E花环试验是通过检测SRBC受体而对T细胞进行计数的一种试验; 6、 NK细胞:具有细胞介导的 细胞毒作用。直接杀伤靶细胞(肿瘤细胞和病毒感染的细胞) 表面标志: CD16( ADCC)、 CD56。 测定人NK细胞活性 的靶细胞多用 K562细胞株,而测定小鼠 NK细胞活性则常采用 YAC-1细 胞株。
7、 吞噬细胞包括:单核-吞噬细胞系统 (MPS表面标志CD14包括骨髓内的前单核细胞、 外周血中的单核细胞和组织内的巨噬细胞)和中性粒细胞。 (表达MHQ类分子)
8、 人成熟树突状细胞 (DC)(专职抗原呈递功能): 表面标志为CD1a CD11c和CD83 9、 免疫球蛋白可分为分泌型(slg,主要存在于体液中,具有 抗体功能)及膜型(mlg,作 为抗原受体 表达于B细胞表面,称为膜表面免疫球蛋白)
10、 免疫球蛋白按 含量多少排序:lgG> IgA > IgM > IgD > IgE五类(按重链恒定区抗原性(CH 排序)
免疫球蛋白含量测定:单向环状免疫扩散法、免疫比浊法。 11、 免疫球蛋白的同种型抗原决定簇位于 恒定区( CH、 CL) 12、 抗体由浆细胞产生。抗体分子上 VH和VL (高变区)是抗原结合部位。 13、 IgG:血清中含量最高的免疫球蛋白(lgG1最高),血液和细胞外液中的主要抗体。也 是再次免疫应答 的主要抗体,是 唯一能通过胎盘 的抗体,大多数抗菌抗体、抗病毒抗体是 IgG,某些自身抗体及超敏n型抗体是 IgG,免疫学检测中第二抗体也以 IgG为主。 14、 IgA :分血清型(单体存在)及分泌型;分泌型 IgA (sIgA )为二聚体,性能稳定,主 要存在于胃肠道、支气管分泌液、 初乳、唾液 、泪液中,局部浓度高,是参与 黏膜局部免疫 的主要抗体。
15、 IgM:为五聚体,主要存在于血液中,是 Ig中分子量最大的(又称巨球蛋白)。个体发 育最早合成 和分泌的抗体。抗原刺激后体液免疫应答中 最先产生 的抗体,感染过程中血清 IgM水平升高,说明 近期感染。新生儿脐血中若IgM增高,提示有宫内感染。
16、 IgE :为单体结构,正常人血清中 含量最低。IgE为亲细胞抗体,介导 I型超敏反应。 特异性过敏反应和寄生虫早期感染患者血清中可升高。
17、 补体:具有酶样活性的球蛋白(肝细胞、巨噬细胞产生);激活途径主要有三种:经典 途径(以结合抗原后的IgG或IgM类抗体为主要 激活剂(双链 DNA , C1〜C9全部参与)、 替代途径(病原微生物 细胞壁成分(脂多糖)直接激活补体 C3,然后完成C5〜C9的激活过 程)、MBL途径(由急性炎症期产生的甘露糖结合凝集素 (MBI)与病原体结合后启动激活)。
18、 补体系统中C3含量最多,C2含量最少。 19、 灭活:加热56C 30分钟,补体丧失活性 20、 补体清除免疫复合物的方式:吞噬调理;免疫粘附;免疫复合物抑制。 21、 完全抗原 =反应原性 +免疫原性。 半抗原=反应原性( 无免疫原性 ) 22、 抗原抗体结合力 (分子间引力):静电吸引、范德华力、氢键、 疏水作用力(最强) 23、 抗原抗体反应 的四大特点:特异性 、可逆性、 比例性、阶段性 ;受反应条件(如温度、 pH电解质、抗原抗体比例等)的影响。
24、 抗体过量——前带;抗原过量——后带(钩状效应) 25、 抗原抗体反应 可分为两个阶段: 第一阶段 为抗原与抗体发生特异性结合的阶段, 此阶段 反应快, 仅需几秒至几分钟, 但不出现可见反应;第二阶段 为可见反应阶段, 此阶段 反应慢, 往往需要数分钟至数小时。
26、 颗粒性抗原出现凝集反应。 可溶性抗原出现沉淀反应。 单价抗原与相应抗体结合不出现 沉淀现象。
27、 木瓜酶水解IgG为2Fab+Fc;胃蛋白酶水解IgG为F(ab)2+nFc。 28、 最常用于免疫 动物 的佐剂是 弗氏佐剂 ,弗氏佐剂分为弗氏完全佐剂 (弗氏不完全佐剂加 卡介苗)和弗氏不完全佐剂两种。
29、 R (兔子)型抗血清是用家兔及其他动物免疫产生的抗体,抗原抗体反应比例合适 范围 较宽 ,适于作 诊断试剂 。 H (马)型抗血清是用马等大动物免疫获得的抗体,抗原抗体反应比例合适范围较 窄,一般 用作 免疫治疗 。
30、 抗血清常见保存条件: 2-8 C保存;冷冻保存(最常用);真空干燥保存( 5-10年)。 31、 杂交瘤细胞 放入液氮(-196 C)前,需要 逐步降温。复苏细胞时,从液氮罐内取出冻存 管,立即浸入37 C水浴。
32、 凝集反应分为两个阶段:①抗原抗体的特异性结合;②出现可见的颗粒凝聚。 33、 直接凝集反应 :细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原,在适当的 电解质( 0.85%氯化钠) 参与下可直接与相应抗体结合出现凝集。抗原 =凝集原,抗体 =凝集素。 34、 玻片凝集试验:主要用于抗原的定性分析, ABO血型的测定。 试管凝集试验 :肥达氏试验、外斐试验、输血交叉配血试验; 35、 正向间接血凝反应(PHA :红细胞包被 抗原,用以检测抗体。(凝集) 反向间接 血凝反应(RPHA :红细胞包被 抗体,用以检测抗原。(凝集) 36、 间接血凝抑制试验: 可用于检测抗体、 自身抗体、 变态反应性抗体, 也可测定抗原。 ( 不 凝集)
37、 金黄色葡萄球菌 A蛋白(SPA --协同凝集反应(反向间接凝集) 38、 血凝试验(载体为绵羊、家兔、鸡的红细胞及 0型人红细胞)可在微量滴定板或试管中 进行,将标本倍比稀释,一般为 1:64 ,同时设不含标本的稀释液为对照孔。凡红细胞沉积 于孔底, 集中呈一圆点 的为不凝集 。如红细胞 凝集,则分布于孔底 周围。
39、 胶乳凝集 试验(间接凝集),所用载体为 聚苯乙烯 胶乳; 明胶凝集 试验(间接)将病毒 抗原或重组抗原吸附于 粉红色明胶颗粒 : HIV-1 抗体和抗精子抗体检测
40、 抗球蛋白试验,又称 Coombs试验,是检测抗红细胞 不完全抗体的一种很有用的方法。 包括直接Coombs试验(检测红细胞上的不完全抗体) 和间接Coombs试验(游离在 血清中的 不完全抗体)
41、 沉淀反应分两个阶段: 第一阶段 为抗原抗体发生特异性结合,几秒到几十秒即可完成, 出现可溶性小的复合物, 肉眼不可见 。第二阶段 为形成 可见 的免疫复合物, 约需几十分钟到 数小时才能完成,如沉淀线、沉淀环。
絮状沉淀试验: 抗原抗体溶液在电解质的存在下结合, 形成絮状沉淀物, 这种絮状沉淀受抗 原和抗体比例的直接影响,因此 常用 来作为测定 抗原抗体反应最适比例 的方法。
42、 免疫比浊:最适pH为6.5〜8.5,磷酸盐缓冲液。(R型抗体,增浊剂如聚乙二醇(PEG、 吐温 -20 )。适合于 大批量标本 的检测。
当反应液中 抗体过量 时, IC 的形成随着抗原递增而增加,至抗原、抗体最适比例处达最高 峰,这就是经典的 海德堡曲线理论 。 当抗原过量 时,形成的IC (免疫复合物)分子小,而且会发生再解离,使 浊度反而下降, 光散射亦减少 ,这就是高剂量 钩状效应 。
43、 单向扩散试验 是在琼脂内混入抗体, 测抗原 。 Mancini曲线适用大分子抗原和长时间扩散(> 48小时)的结果,沉淀环直径的平方与抗 原浓度呈线性关系。 Fahey 曲线 适用于小分子抗原和较短时间扩散的结果处理,用半对数值画线,浓度对数与 扩散环直径呈线性关系。
双向扩散试验 是对抗原或抗体进行定性分析。 沉淀线如果 靠近抗原孔 ,则表示 抗体含量较大 沉淀线如果 靠近抗体孔 ,则表示 抗原含量较大 。 不出现沉淀线 则表明 无对应的抗体或抗原 或者抗原 过量 。
*分子量小者扩散快,反之则较慢。 由于慢者扩散圈小,局部浓度则较大,形成的沉淀线弯向分子量大的一方。 如果两者分子量大致相等,则形成直线。 * 两条沉淀线互相吻合相连 ,表明抗体与两个抗原中的相同表位结合而沉淀,两个 抗原相同 沉淀线呈部分相切,说明两个抗原之间有部分相同。 两条沉淀线交叉而过,说明两个抗原完全不同。
*出现沉淀线最高的抗体稀释度为该抗体的效价。 *出现一条沉淀线说明待测抗原或抗体纯。 出现多条沉淀线说明不纯。 44、对流免疫电泳 ( 双向免疫扩散 与电泳 相结合的 定向加速 的免疫扩散技术):抗体流向负 极,抗原流向正极;最适比例出现沉淀线。
火箭免疫电泳 是将单向免疫扩散与电泳相结合的一项定量检测技术, 实质上是加速的单向扩 散试验。 (抗体混合于琼脂 中,样品孔中的抗原置于负极端,电泳时抗体 不移动 ,抗原向正 极泳动 ,随着抗原量的逐渐减少, 抗原泳动的基底区越来越窄, 抗原抗体分子复合物形成的 沉淀线逐渐变窄, 形成一个形状如火箭的不溶性复合物沉淀峰。 )顶部呈不清晰的云雾状或 圆形,则表示未达终点 。
免疫电泳技术:区带电泳 +免疫双向扩散。 用于纯化抗原和抗体成分的分析 免疫固定电泳:电泳+沉淀反应技术,可用于各种蛋白质的鉴定 (M蛋白的鉴定与分型, 也 用予尿液中本-周蛋白的检测及K、入分型,脑脊液中寡克隆蛋白的检测及分型。 )。
45、 RIA (放免)核素(125 I)标记抗原,竞争抑制(标记抗原和非标记抗原竞争 限量抗体), 反比关系;IRMA(免疫放射)核素标记抗体,非竞争结合(过量标记抗体,反应速率比RIA 快,灵敏度明显高于 RIA) ,正比关系。