过敏原检测试剂盒说明书

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断花生过敏原（Peanut）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被花生特异蛋白（Peanut）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB 显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的花生过敏原（Peanut）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无上海笃玛生物科技有限公司检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、1.25、2.5、5、10、20ppm试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

Human IgE ELISA Kit产品编号 产品名称包装 PI479Human IgE ELISA Kit96次产品简介：碧云天的Human IgE ELISA Kit (Human IgE Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人总免疫球蛋白E 酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆中的IgE 的ELISA 试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。

多次重复检测结果表明，最小检出量为14.3ng/ml ，本试剂盒采用特异性抗体识别人IgE ，与IgG 、IgA 没有交叉反应性，板内、板间变异系数均小于10%。

免疫球蛋白E (IgE)只能在哺乳动物身上发现。

IgE 存在于血液中，是免疫系统抵御细菌和病毒等外来物质入侵的重要工具。

IgE 是一类具有δ链的亲同种细胞抗体，是参与过敏性鼻炎、过敏性哮喘和湿疹等发病机制调节的主要抗体。

IgE 是组胺和白三烯等肥大细胞释放抗炎剂水平的主要调剂者。

尽管只有少量IgE 在血液中，但它还负责触发严重过敏反应。

IgE 在I 型超敏反应中起作用，I 型超敏反应表现为各种过敏性疾病，如过敏性哮喘、大多数类型的鼻窦炎、过敏性鼻炎、食物过敏，以及某些类型的慢性荨麻疹和特应性皮炎。

此外，有足够证据证明IgE 还参与免疫系统对寄生虫入侵的反应，并增加与癌症发病有关的白血细胞数量。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA 法(Sandwich ELISA)检测样品中人IgE 的浓度，其原理见图1。

人IgE 特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人IgE 会与捕获抗体结合。

当加入辣根过氧化物酶标记人IgE 抗体后，辣根过氧化物酶标记人IgE 抗体与人IgE 结合，形成夹心的免疫复合物。

最后加入显色剂TMB 溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。

过敏原特异性抗体IgE ELISA 检测试剂盒说明书【用途】定性和定量检测过敏原特异性人IgE。

过敏反应是一种特殊的病理性免疫反应，是人体对一种或多种原本无害的物质产生不正常的反应。

其主要原因是患者吸入或食入含有过敏性物体刺激机体，触发细胞大量分泌药理活性物质，引起一系列过敏症状，例如过敏性哮喘，过敏性鼻炎，湿疹、发痒、流泪、皮炎以及肠胃道过敏症等。

同时产生相当量的E型免疫球蛋白（Immunoglobulin E 即Ig E），引起人类过敏反应的过敏原种类繁多，如能从中查到引起机体过敏的物质，就能很好地预防和治疗过敏反应。

本检测盒是一种用酶联免疫法（ELISA）快速、精确测定体内引起过敏反应的特异E型免疫球蛋白的体外诊断工具。

它可定性和定量地测定人体抗特种过敏原的E型免疫球蛋白在血清中的水平，从而帮助医生正确地诊断引起病人过敏反应的过敏原。

本过敏原检测盒适合于广泛的过敏原检测，特别适用于少儿患者，同时也非常适用于湿疹以及其他皮肤病患者和对皮试过敏的患者。

【检测原理】本试剂盒采用酶免ELISA法。

当具有过敏抗原固化于表面的载体与病人血清培养在一起后，血清中特异性IgE（一抗）就会特异地结合到抗原上，此特异结合的抗体可被酶联的二抗所识别，加入显色剂后，二抗所联的酶使显色剂呈蓝色，加终止液后呈黄色。

显色的深度与血清中特异性IgE成正比；能定性/半定量地检测血清中特异性IgE的浓度。

【检测盒组成】过敏原包被微孔酶标板(Coated Wells) 96wells HRP酶联二抗12 ml浓缩洗涤液(15X)(Washing Conc.) 40ml×1 TMB单组分显色液12 ml硫酸终止液(Stop Solution) 12ml 样本稀释液(Sample Diluent) 12 ml【检测动态范围】0.35 ～100 IU/ml (0.84ng ~ 240 ng/ml)。

【重现性】CV 10%～15%【重现性】0.30IU/ml (0.72ng/ml)【注意事项】1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。

Instruction manual (说明书)：AllergyScreen过敏原检测试剂盒1.用途AllergyScreen过敏原定量检测系统采用免疫印迹方法，定量检测人血清中过敏原特异性IgE抗体。

2.概述IgE免疫球蛋白发现始于1964年，它在I型变态反应发生机制中起重要作用。

免疫应答时B淋巴细胞分化成熟为浆细胞，并合成和分泌不同类型的抗体。

该过程由Th和Ts细胞调节，如果调节失控，通常不会造成损害的抗原也能激发免疫应答，刺激抗原特异性B细胞分化成熟为浆细胞，并产生IgE抗体, IgE抗体通过Fc段同嗜碱性粒细胞和肥大细胞表面Fc受体结合。

当同一变应原再次进入机体，直接作用于IgE，并通过它的决定簇与IgE分子Fab段间的结合，形成IgE 受体聚集成片,这些变化最终导致嗜碱性粒细胞和肥大细胞脱颗粒释放组胺等生物活性物质，从而产生如麻疹`荨麻疹、皮炎、关节炎，枯草热（过敏性鼻炎）`哮喘及过敏性休克等典型的I型变态反应症状。

3.检测原理特异性过敏原被吸附于硝酸纤维素膜表面，置于反应槽中。

用移液器加入病人血清，室温下孵育，标本中过敏原特异性的IgE抗体与过敏原发生反应，并连接在硝酸纤维素膜上。

将多余的抗体冲洗脱掉，再加入标记了生物素的抗人IgE 抗体，室温下孵育，冲脱未结合上的抗抗体。

然后加入结合有碱性磷酸酶标记的链霉亲和素，室温下孵育，链霉亲和素和生物素结合。

将未结合上的酶标链霉亲和素冲洗干净。

当再加入BCIP/NBT酶作用底物并孵育后，碱性磷酸酶发生特定的酶显色反应，试剂条上出现沉淀。

颜色深浅与血清中sIgE抗体含量成正比。

待试剂条干燥后，CCD相机照相，读取检测结果。

4.检测系统组成每套检测系统包括：1×12 检测条：标记有20种过敏原的硝酸纤维素膜，置于塑料反应槽中（混合过敏原组，吸入组，食物组）1×洗脱液：（TRIS/NaCl，包含0.1%NaN3）可稀释成1x500ml 的清洗液，pH=7.5 （20ml）1×标记有生物素的抗人IgE抗体（白盖，多抗），含 0.1%NaN3 1×酶标链霉亲和素（红盖），连接有碱性磷酸酶的链霉亲和素1×底物（蓝盖），BCIP/NBT12×加样吸管（300微升）1×使用说明书5.未提供的实验所需的其他工具5.1稀释液蒸馏水或去离子水5.2 其他搅拌器；量筒（500毫升），500毫升洗瓶，具10个不同板型的洗板机（也可无），避光的孵育箱（具体要求见MEDIWISS说明书）；水平混匀器；电吹风（也可无）；专用阅读仪（RAPID READER）和电脑（Windows98，Windows2000 ME或Windows2000 PROF 带USB接口）及打印机。

过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒（化学发光免疫分析法）适用范围：该产品用于体外半定量检测人血清中蒿属花粉、户尘螨、粉尘螨、猫毛皮屑、狗毛皮屑、蟑螂、豚草花粉、葎草花粉、霉菌混合（点青霉/烟曲霉/交链格孢/枝状枝孢）、树花粉混合（杨树花粉/榆树花粉/柳树花粉）、鸡蛋、牛奶、大豆、花生、海虾、海蟹、海鱼的特异性IgE(specific IgE,简称sIgE)抗体浓度和定量检测人血清中的总IgE（Total IgE,简称TIgE）抗体浓度。

1.1 包装规格包装规格为36人份/盒1.2 产品组成表1. 产品检验项目表2 产品主要组成表2.1 外观外观应符合如下要求：2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整，液体无渗漏；2.1.2 中文包装标签应清晰，无破损。

2.2 校准品溯源性按照GB/T 21415-2008标准，特异性IgE试剂盒校准品溯源到WHO人血清IgE国际标准品（WHO International Standard Immunoglobulin E(IgE),human serum）。

2.3 准确度2.3.1 特异性IgE2.3.1.1 偏差Ⅰ表3中过敏原偏差试验按以下方法操作：用WHO人血清IgE国际标准品（WHO International Standard Immunoglobulin E(IgE),human serum）标定的过敏原血清作为参考物质进行检测，其测量结果的相对偏差应在±25%范围内；表3：特异性IgE偏差试验Ⅰ中的过敏原Ⅱ表4中过敏原偏差试验按以下方法操作：用Phadia ImmunoCAP试剂标定分级级别的过敏原血清作为参考物质进行检测，其测量结果应该符合对应参考品的分级级别。

表4. 特异性IgE偏差试验Ⅱ中的过敏原2.3.1.2 符合率Ⅰ阳性符合率每种过敏原用5份过敏原阳性内部参考品检测，相应检测结果≥0.35IU/mL，不得出现阴性。

Ⅱ阴性符合率每个检测项目用5份相应过敏原阴性内部参考品检测，相应检测结果＜0.35IU/mL，不得出现阳性。

过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒（胶体金免疫层析法）
适用范围：该产品用于体外定性检测人血清中针对蒿属花粉/豚草花粉、户尘螨/粉尘螨、猫毛皮屑、狗毛皮屑、大豆、鸡蛋、牛奶、杨树/柳树/榆树花粉变应原的特异性IgE抗体。

1.1 包装规格：25人份／盒。

1.2 主要组成成分：
2.1 外观检查
外观应符合如下要求：
2.1.1试剂盒各组分应齐全、完整，密封包装无漏气、破损；
2.1.2包装、标签无破损，文字清晰。

2.1.3铝箔袋内检测卡外观平整，物料贴附牢固，内容齐全。

2.2 物理检查
试纸条的宽度应不低于4mm；液体移行速度应不低于5mm/min。

2.3 阴性符合率
应为（-/-）20/20。

2.4 阳性符合率
每个过敏原检测项阳性符合率均应为（+/+）5/5。

2.5 最低检测限
每个过敏原检测项对应最低检测限质控品L1和L2的检测结果均应为阳性，L3应为阴性。

2.6 精密度
每个过敏原检测项10个测试之间反应结果一致，显色度均一。

2.7 稳定性
2.7.1热稳定性试验：试剂盒于37±1℃放置6天，检测2.1～2.6各项，结果应符合2.1～2.6各项目要求。

2.7.2效期稳定性试验：试剂盒在2℃～30℃保存，取到效期后的试剂盒，检测2.1～2.6各项，结果应符合2.1～2.6各项目要求。

2.8 批间差
三批每个过敏原检测项各10个精密度质控品测试之间反应结果应一致，显色度均一。

2.9 特异性
测10份特异性质控品血清（S1～S10）,其结果为阴性。

吸入性/食物性过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒（免疫印迹法）适用范围：用于定性检测人血清中的柳树/杨树/榆树、普通豚草、艾蒿、屋尘螨/粉尘螨、屋尘、猫毛、狗上皮、蟑螂、点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉、葎草、鸡蛋白、牛奶、花生、黄豆、鳕鱼/龙虾/扇贝、虾、蟹过敏原特异性IgE 抗体。

1.1 试剂盒规格20人份/盒（7项、10项、17项）1.2 试剂盒型号吸入性/食物性过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒（7项）：鸡蛋白、牛奶、花生、黄豆、鳕鱼/龙虾/扇贝、虾、蟹；吸入性/食物性过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒（10项）：柳树/杨树/榆树、普通豚草、艾蒿、屋尘螨/粉尘螨、屋尘、猫毛、狗上皮、蟑螂、点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉、葎草；吸入性/食物性过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒（17项）：柳树/杨树/榆树、普通豚草、艾蒿、屋尘螨/粉尘螨、屋尘、猫毛、狗上皮、蟑螂、点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉、葎草、鸡蛋白、牛奶、花生、黄豆、鳕鱼/龙虾/扇贝、虾、蟹；1.3 试剂盒组成及规格见表1表1 试剂盒的组成及规格2.1 外观2.1.1 产品包装完整、标签清晰。

液体试剂中，样品稀释液、底物液和酶标二抗为淡黄色，其它试剂为无色，均无混浊，无未溶物。

2.1.2 检测膜条干净、无污渍、无破损。

2.2 膜条尺寸宽度： 2±0.5mm2.3 装量及组件数量检查见1.3，其中装量应不少于标示值。

2.4 阴性符合率用N1-N10总计10份阴性参考品进行检测，各项检测指标检测结果均为阴性。

2.5阳性符合率用P26-P45总计20份企业阳性参考品进行检测，各项检测指标检测结果应符合企业阳性参考品结果。

2.6最低检出限应小于或等于0.35IU/mL。

2.7分析特异性用N11-N15总计5份分析特异性企业参考品进行检测，各项检测指标检测结果均为阴性。

其中，N11为花生特异性IgG抗体阳性，N12为黄豆特异性IgG抗体阳性，N13为虾特异性IgG抗体阳性，N14葎草特异性IgG抗体阳性，N15为屋尘螨/粉尘螨特异性IgG抗体阳性。

过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒
摇床或膜条仪操作流程
1.样本孵育：在反应槽中加入0.5ml-1.0ml血清样本（不能稀释）
2.酶结合液孵育: 在反应槽内加入1.0 ml 结合液
5.判读结果: 将反应条固定在支架上，软件判读，半定量结果
6. 打印报告: 直接打印A4纸大小报告or数据导出到LIS/HIS
欧博克（包括总IgE）操作注意事项
一、手工操作注意事项
1、取膜条的时候，不要触碰过敏原反应区,避免污染抗原包被区域；
2、4项，7项，14项欧博克试剂盒说明书要求血清样本用样本稀释液稀
释后加入，但实际操作中样本不能稀释，且血清的量必须是能够覆
盖过敏原反应区，一般要0.5ml；后面的反应步骤请按照流程图的
指引来完成。

3、10项欧博克试剂盒说明书中是浸泡式孵育和自来水冲洗，为了保证
实验的标准化，请按照流程图来完成，血清的量也是以能够覆盖过
敏原反应区为准，一般要0.5ml。

4、在实验过程中，注意是否有膜条翻转并及时调整过来；
5、结合液反应完后的清洗步骤一定要清洗干净，否则会出现花条或整
个背景偏深，影响结果的判读。

必要时可以将清洗时间延长到
8min。

6、反应结束时应立即取出膜条，在晾干后30min内读数。

一、上机操作注意事项
1、因为我们目前结合液和底物的瓶子还没有刻度，所以在每次试验之
前，一定要确保结合液与底物液量足够该次试验用量，管理占液量
约为3.2-3.5ml，试剂瓶中的最低液量为反应条数N*1+3.5ml。

2、试验前后一定要将管路清洗干净，同时发现背景偏深时要观察吸液
后的废液残留量是否过多，如超过30ul就需要调整吸液系统。

特应性过敏原(中国组合)检测试剂盒标准操作流程1方法欧蒙印迹法2原理用于体外半定量检测人血清或血浆中吸入性和食物性过敏原特异性IgE抗体。

试剂盒中的检测膜条上平行包被了21种不同的吸入性和食物性过敏原。

经缓冲液预处理的检测膜条与患者样本进行第一步温育。

如果样本阳性，IgE类特异性抗体与相应的过敏原结合。

为检测结合的抗体，加入酶标单克隆的抗人IgE抗体（酶结合物）进行第二步温育，然后加入酶底物，发生颜色反应。

3试剂品牌、编号、代号、包装、规格（表1）表1 德国欧蒙医学实验诊断有限公司试剂1601(16)4试剂成分4.1包被过敏原的检测膜条：ts20, w1, w6, ds1, h1, e1, e2, i6, ms1, u80, f1, f2, f13, f14,f27,f88, fs33, fs34, f23,f234,CCD 。

4.2酶结合物: 碱性磷酸酶标记的抗人IgE（小鼠），直接使用。

4.34. 色原/底物液:四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-3-吲哚-磷酸盐（NBT/BCIP），直接使用。

4.4通用缓冲液: 10倍浓缩。

5仪器品牌、型号摇床、扫描仪6检测时间根据样本稀释度与加样量不同检测时间略有不同。

7标本要求待测样本在2-8℃可以稳定14天，已稀释的样本应在同一个工作日内检测。

8试剂准备同一批号试剂盒中各个组分互相匹配，不能与其它批号试剂盒中的组份混用。

所有试剂均应在室温（18-25℃）平衡30分钟后方可使用；液体试剂使用前应充分混匀。

从第一次使用起，试剂盒如保存在2-8℃，并且在没有污染的情况下，可稳定至所标示的有效期。

9操作步骤9.1预处理：当膜条平衡到室温后打开包装，取出所需的膜后应立即密封好原包装并将其保存于2-8℃。

先将10倍浓缩的通用缓冲液充分混匀，如需温育一条检测膜条，可取5ml浓缩缓冲液加入到45ml蒸馏水或去离子水中进行稀释。

稀释后的缓冲液应在同一个工作日用完。

将模条上有编码的一面朝上放入温育槽中，用移液枪吸取1ml的稀释好的通用缓冲液加入到温育槽中，于室温条件下在摇摆摇床上温育5分钟。

AllergyScreen过敏原诊断试剂盒标准操作规程（SOP）1．原理标本中过敏原特异性IgE抗体与吸附在硝酸纤维素膜上的过敏原发生抗原抗体特异性反应，形成抗原抗体复合物，标记了生物素的抗人IgE抗体与抗原抗体复合物反应，结合有碱性磷酸酶的链霉亲和素，生物素结合。

碱性磷酸酶与底物BCIP/NBT发生特定的酶显色反应。

颜色深浅与血清中sIgE抗体含量成正比。

2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人最好空腹采集血样。

注意有无应用影响IgE水平的药物，如激素、免疫调节药等。

2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

2.3 抗凝剂：血浆使用枸橼酸盐作为抗凝剂，不能使用肝素或EDTA抗凝剂。

2.4 标本处理：本系统推荐用人血清为标本，亦可用血浆为标本。

静脉采血待血清自然析出或离心（4000G/转）10分钟，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃下保存一周。

若需保存更长时间，应置于-20℃以下储藏。

3．试剂3.1 试剂本实验使用的是德国MEDIWISS公司提供的AllergyScreen过敏原诊断试剂盒，试剂组分如下：检测条标记有过敏原的硝酸纤维素膜，置于塑料反应槽中洗脱液 20ml， TRIS/NaCl，可稀释成500ml 的清洗液，pH=7.5抗人IgE抗体 4ml，标记有生物素的，含 0.1%NaN3链霉亲和素 4ml，连接有碱性磷酸酶BCIP/NBT 4ml3.2 试剂的稳定性原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。

稀释过的清洗液在2-8℃下至多保存八周。

4．仪器过敏原检测仪（Mediwiss，Moers，Germany）可以检测到0.25%或更高的光密度信号。

当光密度是5%是可达到0.2%光密度的重复性。

试剂（1）技术参数产品名称：吸入性食物性过敏原特异性抗体IgE检测试剂盒（免疫印迹法）规格：20人份/盒产品用途：该产品用于定性检测人血清中过敏原特异性IgE水平，检测项目：共21位点，30项目：、屋尘螨/户尘螨、屋尘、蟑螂、狗毛皮屑、猫毛皮屑、矮豚草、艾蒿、葎草、霉菌组合（点青霉/交链孢霉/烟曲霉/分枝孢霉）、树花粉组合（栎树/榆树/梧桐/柳树/杨树）、鸡蛋白、牛奶、牛肉、羊肉、蟹、虾、鳕鱼、鲑鱼、龙虾/扇贝、花生、黄豆主要技术参数和要求：1.检测方法：免疫印迹法，血清检测。

2.检测位点：21个位点。

3.检测区间：≥0.35IU/ml4.适用仪器：手工或全自动免疫印迹仪5.主要性能指标：最低检出量：用最低检出量质控品进行检测，不高于0.35IU/ml。

阴性质控品符合率：阴性质控品结果判读为阴性结果，阴性质控品符合率为100%。

阳性质控品符合率：阳性质控品结果判读符合阳性质控品性质，阳性质控品符合率为100%。

精密度：以某一浓度的人IgE校准品重复测定（n=10）,反应结果一致，显色度均一。

交叉反应：与5.0IU/ml人IgA、IgG、IgM无交叉反应；由于两种或两种以上过敏原蛋白在结构上的相似，使它们竞争IgE抗体的结合表位，引起交叉反应。

临床灵敏度：＞95.0%临床特异性：＞98.0%6.资质：国家食品药品监督管理局批准的三类体外诊断试剂证书。

试剂（2）技术参数产品名称：总IgE检测试剂盒（胶体金法）规格：规格：20人份/盒产品用途：该产品用于定性检测人血清中总IgE抗体含量。

主要技术参数和要求：1.检测方法：胶体金法，血清检测。

2.检测位点：总IgE3.检测区间：≥87IU/ml5.适用仪器：无需仪器6.主要性能指标：最低检出量：用最低检出量质控品进行检测，不高于87IU/ml。

阴性质控品符合率：阴性质控品结果判读为阴性结果，阴性质控品符合率为100%。

阳性质控品符合率：阳性质控品结果判读符合阳性质控品性质，阳性质控品符合率为100%。

AllergyScreen过敏原诊断试剂盒标准操作规程（SOP）1．原理标本中过敏原特异性IgE抗体与吸附在硝酸纤维素膜上的过敏原发生抗原抗体特异性反应，形成抗原抗体复合物，标记了生物素的抗人IgE抗体与抗原抗体复合物反应，结合有碱性磷酸酶的链霉亲和素，生物素结合。

碱性磷酸酶与底物BCIP/NBT发生特定的酶显色反应。

颜色深浅与血清中sIgE抗体含量成正比。

2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人最好空腹采集血样。

注意有无应用影响IgE水平的药物，如激素、免疫调节药等。

2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

2.3 抗凝剂：血浆使用枸橼酸盐作为抗凝剂，不能使用肝素或EDTA抗凝剂。

2.4 标本处理：本系统推荐用人血清为标本，亦可用血浆为标本。

静脉采血待血清自然析出或离心（4000G/转）10分钟，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃下保存一周。

若需保存更长时间，应置于-20℃以下储藏。

3．试剂3.1 试剂本实验使用的是德国MEDIWISS公司提供的AllergyScreen过敏原诊断试剂盒，试剂组分如下：检测条标记有过敏原的硝酸纤维素膜，置于塑料反应槽中洗脱液 20ml， TRIS/NaCl，可稀释成500ml 的清洗液，pH=7.5抗人IgE抗体 4ml，标记有生物素的，含 0.1%NaN3链霉亲和素 4ml，连接有碱性磷酸酶BCIP/NBT 4ml3.2 试剂的稳定性原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。

稀释过的清洗液在2-8℃下至多保存八周。

4．仪器过敏原检测仪（Mediwiss，Moers，Germany）可以检测到0.25%或更高的光密度信号。

当光密度是5%是可达到0.2%光密度的重复性。

吸入性及食物性过敏原特异性IgE抗体检测（欧蒙印记法）1.目的：规范实验室吸入性及食物性过敏原特异性IgE抗体的检测操作。

2.范围：XXX医院xxx科3.测定原理:采用免疫印迹法原理。

经缓冲液预处理的检测膜条与患者样本进行温育。

如果样本阳性，IgE 类特异性抗体与相应的过敏原结合。

在洗涤之后，加入酶标单克隆的抗人IgE 抗体（酶结合物）进行第二步温育，以形成复合物。

在孵育之后，冲洗掉未结合的酶-抗-IgE，然后加入底物液，发生颜色反应。

终止反应之后，风干判读结果。

4.标本:4.1病人准备：要求患者在安静状态下；晨起的精神、体力、情绪等因素的影响较小，是标本采集的最佳时间；抽取肘部静脉血或毛细血管血。

4.2标本种类：人血清或者EDTA、肝素或柠檬酸抗凝血浆。

4.3标本稳定性：待测样本于2-8°C 条件下通常可保存14 天。

稀释后的样本应在同一个工作日内检测。

4.4标本稀释：4.4.1患者样本不需稀释，直接检测（方案a）。

4.4.2如果样本量过少，可用已稀释的通用缓冲液1:11稀释血清或者血浆样本，然后过夜温育（方案b）。

例如：100ul血清用1.0ml已稀释的通用缓冲液稀释，并用旋涡混匀器充分混匀，不适合用加样枪混匀。

4.4.3 如果使用特定的温育盘（ZD9897-0130）用于减少血清用量打的实验，使用这种温育盘未稀释血清用量可以减少至400ul（方案c）。

4.5标本容器：一般用真空采血管中的血清促凝管（红色头盖）或抗凝管（紫色或绿色头盖）。

4.6标本最小用量：血清最小用量 1ml。

4.7标本运送：标本采集于真空采血管后应尽快送实验室分析，物流系统可加快标本传递速度。

若标本不能及时转运到实验室，应将真空采血管内的标本置冰瓶或冷藏箱内，运送过程中应避免剧烈震荡。

当天无法运送的标本应分离血清后冷藏。

5.试剂:5.1来源：欧蒙公司.5.2 规格： 16*1人份/盒5.3试剂盒组成和代号：主要组分：16 人份的试剂盒5.4储存和稳定性：2-8°C 保存，不要冰冻。

*Date Revised：July2014(2nd Edition)Issue Date：June2014(1st Edition) [For food inspection]FASTKIT ELISA Ver.III Wheat<<Instruction Manual>>*Please read this manual carefully before using the kit.-Development history and characteristics–This product is a food allergen screening test kit which can detect wheat proteins in foods.This product is based on the guidelines shown by CAA Notification No.286from the Deputy Secretary General of the Consumer Affairs Agency dated September10,2010, "Test methods for food products containing allergic substances".This product can measure wheat proteins in the food such as raw materials and processed foods widely.According to CAA Notification No.36from the Deputy Secretary General of the Consumer Affairs Agency dated March26,2014, "Partial Revision of"Test methods for food products containing allergic substances"",This is the improved kit by removing 2-mercaptoethanol from"FASTKIT ELISA Ver.ⅡWheat".In addition,according to a separate attachment6of CAA Notification No.36from the Deputy Secretary General of the Consumer Affairs Agency"Guidelines for Evaluating Improved Methods of the Test Methods for Food Products Containing Allergic Substances",it has been confirmed that its performance is equal to that of "FASTKIT ELISA Ver.ⅡWheat".-Kit contents-A:Antibody immobilized plate(with cover)96wells(8wells⨯ 12strips)⨯ 1B:Standard solution(50ng/mL) 1.8mL⨯ 1C:Dilution buffer100mL⨯ 1D:Biotin-labeled antibody150µL⨯ 1E:Enzyme(peroxidase)-labeled streptavidin150µL⨯ 1F:Chromogenic substrate12mL⨯ 1G:Stop solution(0.5N H2SO4)12mL⨯ 1H:Concentrated washing solution(1/10concentration)100mL⨯ 1I:Extraction reagent①(1/20concentration)50mL⨯ 1J:Extraction reagent②(1/20concentration)50mL⨯ 1K:Extraction reagent③(1/20concentration)50mL⨯ 1L:Instruction manual1-Objective/performance-∙This kit can measure standard wheat proteins in a solution at aconcentration ranging from0.78to50ng/mL.-Measurement principle-(1)An antibody to bind to more than one wheat protein has beenimmobilized in the plate wells.(2)The immobilized antibody captures multiple wheat proteins(w1,w2…)in the measurement solution to form complexes.(3)The Biotin-labeled antibody binds to the complexes to form sandwichcomplexes.The Enzyme-labeled streptavidin then binds to the sandwichcomplexes through the reaction between biotin and streptavidin.The enzymatic substrate is then added to produce a color.-Necessary apparatuses-[Preparation of reagents]∙Measuring cylinders,beakers,micropipettes,and disposable tips[Preparation of measurement solution]∙Grinding machine(food cutter),balance,50-mL plastic centrifugal tubes(with cap),shaking machine,centrifugal machine(A centrifugal machine of3,000⨯g or higher and with an ability of centrifugation at room temperature is recommended),filter paper,and funnel[Measurement operation and data analysis]∙Micropipette,disposable tips,test tubes or micro tubes,blotting paper(paper towel),micro-plate reader(with filters with a wavelength of450nm and600to650nm),and analytical software(that can use the4-parameter analysis) Note1)To prevent the contamination by experimental instruments,use disposable apparatuses or monopolized instruments as much as possible.If you use non-monopolized instruments,wash them using an alkaline detergent to remove proteins beforeuse.-Reagent preparation-[Reagents to be used as supplied]∙Dilution buffer:Let it warm to room temperature(20to25°C)before use.∙Chromogenic substrate:Collect a necessary amount into a light-resistant container and let it warm to room temperature(20 to25︒C)before use.∙Stop solution:Let it warm to room temperature(20to25°C)before use.[Reagents to be prepared before use]∙Sample extracting medium:Prepare a sample extractingmedium by thoroughly shaking a mixture consisting of theExtraction reagents①,②,③and purified water at a ratioof1:1:1:17before use.∙Diluent for reference standard:Prepare a1/20dilution of thesample extracting medium with the Dilution buffer.∙Standard solution:Dilute the standard solution with thediluent for the reference standard with reference to the following dilution examples.＜Examples of dilution of standard solution＞Concentration of referencestandard(ng/mL)502512.5 6.25 3.125 1.56250.781250 Amount of standard solution tobe added(μL)8004004004004004004000 Amount of diluent for referencestandard to be added(μL)0400400400400400400400∙Concentrated washing solution:Prepare a1/10dilution of the concentrated washing solution using purified water.∙Biotin-labeled antibody:Prepare a1/100dilution of the Biotin-labeled antibody using the Dilution buffer that was let warm to room temperature e the dilution within15minutes.∙Enzyme-labeled streptavidin:Prepare a1/100dilution of the Enzyme-labeled streptavidin using the Dilution buffer that was let warm to room temperature e the dilution within15minutes.＜Diluents to be used and objects to be diluted＞Objects to be diluted Standard solutionSupernatant fromextraction or filtrateBiotin-labeledantibodyEnzyme-labeledstreptavidinDiluent for reference standard-Measurement operation -1)Let the Antibody immobilized plate warm to room temperature in theoriginal aluminum pouch.Remove it from the pouch immediately beforeuse (Note 1).2)Add 100μL each of the diluted standard and measurement solutions intothe wells (Note 2).3)Lightly agitate the solution in the wells and allow the plate to stand for one hour at room temperature (20to 25°C)for reaction.4)After the reaction is completed,discard the standard and measurementsolutions.Add 250μL of the diluted washing solution to each well anddiscard it,and repeat this procedure five times (Note 3).5)Add 100μL of the prepared Biotin-labeled antibody solution to each well.6)Lightly agitate the solution in the wells and allow the plate to stand for onehour at room temperature (20to 25°C)for reaction.7)After the reaction is completed,discard the Biotin-labeled antibody solution and wash the plate as described in the above Step 4.8)Add 100μL each of the prepared Enzyme-labeled streptavidin solution toeach well.9)Lightly agitate the solution in the wells and allow the plate to stand for 30minutes at room temperature (20to 25°C)for reaction.10)After the reaction is completed,discard the Enzyme-labeled streptavidin solution and wash the plate as described in the above Step 4.11)Let the Chromogenic substrate warm to room temperature beforehand and add 100μL of the reagent to each well.12)Lightly agitate the reagent in the wells and allow the plate to stand for 20minutes at room temperature (20to 25°C)to make the reagent produce a color.It is recommended that this step should be performed under a light-shielded condition to increase data reproducibility.13)Let the stop solution warm to room temperature beforehand and add 100μL of the solution to each well.Lightly agitate the solution to stop color development (Note 4).14)After agitation,measure the absorbance at the primary wavelength of 450nm and secondary wavelength of 600to 650nm using a plate reader.Note 1)When a part of the plate is used,return the unused strips into the aluminum pouch with a desiccant and keep the pouch in a refrigerator.Note 2)It is recommended that three wells each should be used for the measurement of the standard and measurement solutions.Makesure to prepare a standard curve based on the measurements of the standard solution for every measurement.Note 3)The cleaning operation is critical for accurate pletely remove the solution and air bubbles in the wells by holdingthe plate upside down and strongly tapping it onto a power towel several times,and then add the next reagent immediately.Note 4)Handle the stop solution carefully because it contains 0.5N sulfuric acid.-Data analysis -1)Prepare a standard curve graph from the absorbance values of the standard solution using the 4-parameter analysis (Note 1).2)Read the wheat protein concentration in the measurement solution (ng/mL)from the standard curve.3)Multiply the wheat protein concentration by the dilution factor during the extraction operation (400)to calculate the wheatprotein concentration in the food product.Note 1)The measurement results may vary when the standard curve graph is prepared using an analytical technique other than the the4-parameter analysis.-Performance of this kit-"FASTKIT ELISA Ver.ⅢWheat"was evaluted accoding to "Guidelines for Evaluating Improved Methods of the Test Methods for Food Products Containing Allergic Substances".Result of FASTKIT ELISA Ver.ⅡWheat was taken to the X-axis,and result of FASTKIT ELISA Ver.ⅢWheat was taken to the Y-axis,and the quantitive values of them were plotted.The results are shown below.These results indicated that FASTKIT ELISA Ver.ⅢWheat was satisfied to the criteia of the guideline (slope:0.75-1.25,correlation coefficient:R ＜0.9).[Samples][Results]＜10,000ppm ＜100ppm Snack 1Snack 2Snack 3Snack 4Confectionery 1Confectionery 2Seasoning 1Seasoning 2Retort curry Retort stew Meat sauceSnack 3Snack 4Confectionery 1Confectionery 2Confectionery 3rice gruel Sausage Meatball 1Meatball 2KamabokoThe result of validation for FASTKIT ELISA Ver.ⅡWheat is exhibited on website (NH Foods Ltd.R&D Center homepage).*-False positive/false negative-1)No cross reactivity has been observed with the specific allergenic ingredients except for wheat(egg,milk,buckwheat,peanut,shrimp,and crab).2)For more information of false positive or false negative results,refer to the"List of food products producing false positive orfalse negative results"on the homepage of NH Foods Ltd.R&D Center on the web.*3)The kit may cause a non-specific reaction under the presence of a very high concentration of a protein.In such a case,appropriately dilute the sample and repeat the test.Always use the diluent for the reference standard when a1/20dilution of a sample is further diluted.4)Some of wheat starch,soy sauce,brewing vinegar,and wheat hydrolysate may produce a false negative result because itcontents little wheat protein or contained wheat protein is disintegrated during manufacturing process.-Precautions for use or handling-[General precautions]1)Read this instruction manual carefully and observe the operation procedures.2)Do not use the kit or its component after its expiration date.The expiration date is indicated on the outer package and eachcomponent’s label.3)This kit is intended for measuring the designated raw materials in food products and not for making a diagnosis of foodallergy.The correlation between the measurement results of the kit and development of allergic symptoms has not been established.4)Make a comprehensive decision on the presence/absence of the designated raw materials by examining not only the result ofthe present kit,but also other data including raw materials and manufacturing records.5)For how to use the machines and apparatuses used with the kit,refer to the instruction manuals provided by theirmanufacturers/distributors.6)The present instruction manual complies with the notification from the Deputy Secretary General of the Consumer AffairsAgency“Test methods of food products containing allergic substances”and is intended to serve as guidelines for those in charge of food inspection.Verify the validity of the application of each inspection step to each food product.7)Buyer assumes all risk and liability resulting from the use of this product.NH Foods Ltd.shall not be liable for any damages,including special or consequential damage,or expense arising directly or indirectly from the use of this product.*8)The specifications of this kit are subject to change without prior notice.[Safety precautions]1)Take care to prevent the exposure of the skin,mucosal membrane,or clothes to the reagents of the kit.2)When any of the reagents accidentally enters the eye or mouth,immediately take appropriate first-aid treatment,such asrinsing with tap water,and receive medical attention.-Storage and expiration date-1)Storage:Keep this kit under a refrigerated(2to8 C)and light-shielded condition.Avoid freezing the kit.2)Expiration date:Six months from the date of manufacture:The expiration date is indicated on the outer package and eachcomponent’s label.-References-1)CAA Notification No.286from the Deputy Secretary General of the Consumer Affairs Agency,"Test methods for foodproducts containing allergic substances"2)Marui E.:Food Sanitation Research,Vol.52(5),25-31,20023)Akiyama H.and Toyoda M.:Food Sanitation Research Vol.52(6),65-73,20024)CAA Notification No.36from the Deputy Secretary General of the Consumer Affairs Agency,"Partial Revision of"Testmethods for food products containing allergic substances""[Distributor and contact]See the label on the side of the outer package.[Manufacturer]NH Foods Ltd.*R&D Center3-3Midorigahara,Tsukuba,Ibaraki,300-2646Tel:+81-29-847-7825/Fax:+81-29-848-1256URL:http://www.rdc.nipponham.co.jp(B2)。

总IgE检测试剂盒（酶联免疫法）说明书[产品名称][通用名称] 总IgE检测试剂盒(酶联免疫法)[英文名称] Total IgE ELISA[包装规格]适应症：过敏性疾病、蠕虫病、湿疹性或非湿疹性皮炎、IgE骨髓瘤等。

临床意义：1）过敏反应和特应性疾病的诊断：除了皮肤和激发实验、检测特异性IgE外，变态反应性疾病的诊断还包括检测总IgE水平。

但是，过敏反应并不总伴有总IgE水平的升高（成人>100 IU/ml）。

相反，低水平的IgE（成人<25 IU/ml）也不能排除患有特应性过敏反应。

通过长期脱敏治疗和远离过敏原，总IgE滴度通常会下降。

通过测定总IgE水平可以区分过敏性哮喘和内源性哮喘，过敏性鼻炎和血管舒缩性鼻炎以及婴儿特应性皮炎和脂溢性皮炎。

在特应性皮炎患者中可见极高浓度的IgE（数千IU/ml）。

其他过敏性（和高IgE水平）的疾病包括急性复发性或慢性荨麻疹、复发性Quincke 水肿（血管神经性水肿）、胃肠道不耐受和不明原因的疹病。

检测总IgE也可用于鉴别诊断肺部嗜酸性粒细胞浸润、变态反应性曲霉病、外源性变态反应性肺泡炎（农夫肺和养鸽者肺）和Churg-Strauβ 综合征。

2）其他疾病中的IgE：高IgE水平的非变态反应性疾病包括多种形式的蠕虫病，如弓蛔虫病、蛔虫病、血吸虫病、钩虫病、利什曼原虫病、毛线虫病。

然而，在绦虫病和蛲虫病中未见有IgE水平升高。

对于大多数病例，经有效治疗后，IgE水平可降至正常值范围内。

在下列疾病中可检测出高浓度的IgE：湿疹性或非湿疹性皮炎；IgE骨髓瘤；急性系统性红斑狼疮（SLE）；移植物抗宿主反应；T细胞缺陷（Wiskott-Aldrich 综合征）；2度或3度烧伤；耳鼻喉肿瘤；肝病（尤其与酒精滥用有关）；AIDS晚期阶段（CD4+ T细胞明显下降）。

在下列疾病中可有IgE缺陷：X-染色体相关低丙种球蛋白血症；严重的联合免疫缺陷（SCID）；毛细管扩张性运动失调；肺纤维化疾病；极少数的健康人。

过敏原八项抗体检测试剂盒
【检验原理】
本试剂盒采用亲和素-生物素化过敏原抗原预包被板ELISA 原理，检测人血清/血浆中存在的针对特异性过敏原IgE 抗体，配以酶标记抗人IgE单克隆抗体作为标记物。

加入底物TMB显色后终止反应，在450nm波长测各孔O.D值，O.D值的大小与待检抗体含量成正比。

生物素系统（biotin-avidin system）的稳固级联放大作用，使试剂的特异性、灵敏度、稳定性极大地提高，并使反应时间明显缩短，整个过程在2小时左右可以完成，具有简单、快速的特点。

【贮存条件及有效期】
2-8℃密封保存，避免冻结。

有效期10个月。

【预期用途】
本试剂盒用于定性检测人血清中针对特异过敏原（屋尘、螨、兽羽毛、冬春季花粉、夏秋季花粉、蟑螂、霉菌、蒿属植物）的IgE型抗体及血清中总IgE水平，对常见过敏性疾病的病因诊断有重要的参考价值。

过敏原检测试剂盒说明书本试剂盒采用管式酶免（ELISA）分析法，对人血清或血浆中的过敏原特异性IgE 抗体进行定性/半定量检测。

[概述]美国CORTEZ IgE抗体存在于具有过敏体质个体的血清中，这些个体在接触到特异性过敏原时主要出现速发型过敏反应的症状。

对血清中总IgE抗体水平的检测，可为判定机体对过敏的易感性提供有价值的信息。

而对血清中特异性过敏原检测可对患者进行脱敏治疗提供有力的依据。

皮试是常用的一种简单，低成本的体内过敏原检测方法，但皮试存在准确性低，结果不易判断以及危险性较大等缺点。

体外检测中的放射过敏吸附试验(RAST)，荧光酶标法(FEIA)和酶标法(ELISA)已被用于定量检测来源于不同过敏原的IgE抗体。

过敏的临床症状主要包括过敏反应、花粉热、气喘、过敏性湿疹、皮炎、呼吸不畅和鼻炎。

通过检测大部分常见的过敏原或总IgE抗体来诊断过敏反应，就能更好地预防和治疗。

本试剂盒是一种体外定性/半定量的酶免法，可同时独立地检测各种常见的过敏反应，并估计人血清或血浆中IgE 的总水平。

这种独特的装置由一只反应管组成，反应管中含有一系列塑料段，在这些塑料段的表面包被有单一过敏原或过敏原混合物或单克隆抗体，这样，患者血清中的IgE抗体就可以与它们分别反应形成免疫复合物而沉淀下来。

由于过敏原的选择不同，本试剂盒检测的具体内容有多种形式。

每个反应管均带有阳性、阴性对照，有助于结果的分析。

[原理]当具有过敏抗原固化于表面的载体与病人血清培养在一起后，血清中特异性IgE（一抗）就会特异地结合到抗原上，此特异结合的抗体可被酶联的二抗所识别，加入显色剂后，二抗所联的酶使显色剂由黄色变成紫色。

显色的深度与血清中特异性IgE成正比；能半定量地检测血清中特异性IgE的浓度。

[贮存] 收到试剂盒后，应将试剂盒贮存在2－8℃。

[标本收集] 患者无需特殊的准备，也无需禁食。

使用血清或血浆。

标本不需稀释，反应管内吸入标本量约600l。