实验设计：卵清蛋白
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流感病毒裂解疫苗卵清蛋白含量检测方法验证方案新页数:13
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刺激性、过敏性和溶血性试验的方案设计与实施
被动致敏 ：上述各组抗血清应根据反应特点决定稀释倍数，一般 用生理盐水稀释成1：2、1：4、1：8、1：16或1：32等。在动物 背部预先脱毛3×4cm2的皮内注射各对应组的抗血清0.1mL，进行 被动致敏。
被动皮肤过敏实验
实验方法：
➢ 激发：被动致敏24或48小时后，各组静脉注射与致敏剂 量相同的激发抗原加等量的0.5-1%伊文思兰染料共1mL， 进行激发。
皮肤刺激性实验
表 1.皮肤刺激反应评分标准
皮肤刺激性实验
结果评价：
单次给药：计算每一观察时间点各组受试物及赋形剂皮肤反应 积分的平均分值，按表2进行刺激强度评价；
多次给药：首先计算每一观察时间点各组积分值，然后计算观 察期限内每天每只动物积分均值，按表2进行刺激强度评价；
皮肤刺激性实验
实验动物：成年白色豚鼠，雌雄各半，每组动物数至少6只。 实验方法： ➢ 实验分组：应设阴性、阳性对照组和受试物不同剂量组。阴性对
照组应给予赋形剂或溶媒，阳性对照组给予8-甲氧基补骨脂素，受 试物低剂量组给予临床用药浓度，高剂量组给予不引起皮肤刺激 反应的浓度 ➢ UV光源：波长为320-400nm的UVA，用前需用辐射计量仪在实验动 物背部照射区设6个点测定光强度（mw/cm2)，以平均值计。照射剂
溶血性实验
实验方法：
➢ 受试物的制备： 用于血管内给药的注射剂以使用说明书规定的临床使用浓度作
为供试品溶液； 临床用于非血管内途径给药的注射剂，以各药品使用说明书规
定的临床使用浓度，用0.9%氯化钠溶液1∶3稀释后作为供试品 溶液。
溶血性实验
实验方法：
➢ 操作步骤： 取洁净试管7只，进行编号，1-5号管为供试品管，6号管为
致敏期间：每日观察每只动物的症状。初次，末次致敏和激发 当日测定每组每只动物的体重。
被动皮肤过敏实验
实验方法：
➢ 激发：被动致敏24或48小时后，各组静脉注射与致敏剂 量相同的激发抗原加等量的0.5-1%伊文思兰染料共1mL， 进行激发。
皮肤刺激性实验
表 1.皮肤刺激反应评分标准
皮肤刺激性实验
结果评价：
单次给药：计算每一观察时间点各组受试物及赋形剂皮肤反应 积分的平均分值，按表2进行刺激强度评价；
多次给药：首先计算每一观察时间点各组积分值，然后计算观 察期限内每天每只动物积分均值，按表2进行刺激强度评价；
皮肤刺激性实验
实验动物：成年白色豚鼠，雌雄各半，每组动物数至少6只。 实验方法： ➢ 实验分组：应设阴性、阳性对照组和受试物不同剂量组。阴性对
照组应给予赋形剂或溶媒，阳性对照组给予8-甲氧基补骨脂素，受 试物低剂量组给予临床用药浓度，高剂量组给予不引起皮肤刺激 反应的浓度 ➢ UV光源：波长为320-400nm的UVA，用前需用辐射计量仪在实验动 物背部照射区设6个点测定光强度（mw/cm2)，以平均值计。照射剂
溶血性实验
实验方法：
➢ 受试物的制备： 用于血管内给药的注射剂以使用说明书规定的临床使用浓度作
为供试品溶液； 临床用于非血管内途径给药的注射剂，以各药品使用说明书规
定的临床使用浓度，用0.9%氯化钠溶液1∶3稀释后作为供试品 溶液。
溶血性实验
实验方法：
➢ 操作步骤： 取洁净试管7只，进行编号，1-5号管为供试品管，6号管为
致敏期间：每日观察每只动物的症状。初次，末次致敏和激发 当日测定每组每只动物的体重。
蛋白质发泡法制备多孔氧化锆陶瓷
表中可看出，随着氧化锆含量的增加，烧结样品的体 积密度逐渐增加，总体气孔率降低．开孔气孔率降低， 闭气孔率提高。同时样品的抗弯强度增加，这是由材 料的微观结构决定的。由于氧化锆含量的增加，孔壁 的厚度增加，孔壁的强度增加，孔壁之间的连通程度 降低，材料的宏观力学性能得到提高。采用发泡法可 以制备高气孔率的多孔陶瓷制品。最高可以达到９５％。
收稿日期：２００７．０２．１５
基金项目：国家高技术研究发展计划（８６３计划）项目（２００６从０３２５４０）资助
作者简介：刘海燕，女，１９８２年生，硕士研究生，天津大学材料学院，天津３０００７２
万方数据
增刊ｌ
刘海燕等；蛋白质发泡法制备多孔氧化锆陶瓷
·５９ｌ－
１６００℃，烧结速率为ｌ℃，ｍｉｎ，保温适当的时间，随 炉冷却。
Ｆｉｇ．２ ＳＥＭ ｉｍａｇｅｓ ｏｆｃｅｌｈ哺ＩＩ疗０ｍ ４０％∞Ｉｉｄ Ｉｏ蚯．ｍｇ ｓ蚴ｐＩｅｇ
ｓｉｎｔｅｎｄ ａｔ（ａ）１５００℃，（ｂ）１５５０℃，柚ｄ“）１６００℃
综合上述因素，结合实验优化，确定烧结制度如 下：以ｌ Ｋ·ｍｉｎ．１升温到８００℃，并在１５０℃（３０ｍｉｎ）， ２００℃（６０ ｍｉｎ），２３０℃（３０ ｍｉｎ）和３６０℃（３０ ｍｉｎ）保 温。然后以３Ｋ．ｍｉｎ－１升温到１５５０℃，保温２ ｈ，随炉 冷却。 ３．２微观结构
Ｌｉｕ Ｈａｉ”ｎ，Ｌｉｕ Ｊｉａｃｈｅｎ，Ｚｈａｎｇ Ｐｅｎｇ”，Ｓ０ｎｇ）（ｊａｎｍｉ，Ｍｅｎ Ｒｏｎｇｌｅｉ （ｋｌｙ Ｌ丑ｂｏ蛆枷＿ｙ ｏｆＡｄＶ柚ｃｃｄ ｃｅｒａｍｉｃｓ ａⅡｄ ＭａｃｈｉⅡｉⅡｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆＭｉｎｉｓ竹ｙ ｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｔｉ孤巧ｉｎ ｕｎｉｖⅢｉ吼Ｔｉ蛆ｊ．ｍ ３０００７２，ｃｈｉｎａ）
２实验
收稿日期：２００７．０２．１５
基金项目：国家高技术研究发展计划（８６３计划）项目（２００６从０３２５４０）资助
作者简介：刘海燕，女，１９８２年生，硕士研究生，天津大学材料学院，天津３０００７２
万方数据
增刊ｌ
刘海燕等；蛋白质发泡法制备多孔氧化锆陶瓷
·５９ｌ－
１６００℃，烧结速率为ｌ℃，ｍｉｎ，保温适当的时间，随 炉冷却。
Ｆｉｇ．２ ＳＥＭ ｉｍａｇｅｓ ｏｆｃｅｌｈ哺ＩＩ疗０ｍ ４０％∞Ｉｉｄ Ｉｏ蚯．ｍｇ ｓ蚴ｐＩｅｇ
ｓｉｎｔｅｎｄ ａｔ（ａ）１５００℃，（ｂ）１５５０℃，柚ｄ“）１６００℃
综合上述因素，结合实验优化，确定烧结制度如 下：以ｌ Ｋ·ｍｉｎ．１升温到８００℃，并在１５０℃（３０ｍｉｎ）， ２００℃（６０ ｍｉｎ），２３０℃（３０ ｍｉｎ）和３６０℃（３０ ｍｉｎ）保 温。然后以３Ｋ．ｍｉｎ－１升温到１５５０℃，保温２ ｈ，随炉 冷却。 ３．２微观结构
Ｌｉｕ Ｈａｉ”ｎ，Ｌｉｕ Ｊｉａｃｈｅｎ，Ｚｈａｎｇ Ｐｅｎｇ”，Ｓ０ｎｇ）（ｊａｎｍｉ，Ｍｅｎ Ｒｏｎｇｌｅｉ （ｋｌｙ Ｌ丑ｂｏ蛆枷＿ｙ ｏｆＡｄＶ柚ｃｃｄ ｃｅｒａｍｉｃｓ ａⅡｄ ＭａｃｈｉⅡｉⅡｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆＭｉｎｉｓ竹ｙ ｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｔｉ孤巧ｉｎ ｕｎｉｖⅢｉ吼Ｔｉ蛆ｊ．ｍ ３０００７２，ｃｈｉｎａ）
２实验
实验设计：卵清蛋白
实验注意事项
1 2 3
蛋白质浓度过大，盐析时发生共沉，分离效果不好。 • 蛋白质浓度太稀，耗盐量过大，蛋白质回收率较低。一 般蛋白质浓度在2.5%～3.0%较适中。
蛋白质提取过程中须注意温度的控制，一般在20℃ 以下进行
调节等电点一定要准确，在本实验中，球蛋白和卵 清蛋白的等电点相差较小，若不准确，会导致蛋白 质不纯。
9 提取液
1.0 3.0
0 4.0 0
0.5 3.5 0.125
1.0 3.0 0.25
1.5 2.5 0.375
2.0 2.0 0.50
2.5 1.5 0.625
3.0 1.0 0.75
4.0 0 1.0
实验步骤
（二）蛋白提取液中蛋白质含量测定 1、提取液分别稀释1倍、10倍、20倍后，取待测蛋白质 溶液1ml，加入蒸馏水3ml，摇匀，按上述方法在280nm 波长处测定光吸收值，并从标准曲线上查出经稀释的待测 蛋白质的浓度。 排除干扰：将待测蛋白质溶液适当稀释，在波长260nm 和280nm处分别测出A值，然后利用280nm及260nm下的 吸收差求出蛋白质浓度。 2.计算：蛋白质浓度（mg/ml）=1.45A280-0.74A260 （式中A280和A260分别是该溶液在280nm和260nm波长下 测得的光吸收值）
.
弃上清液
实验步骤
二.卵清蛋白活性测定：
（一）紫外吸收法测定卵清蛋白的含量 1、标准曲线法 （1）标准曲线的绘制 按下表分别向每支试管加入各种试剂，摇匀。在280nm波长处分别测定各 管溶液的A280值。以A280值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
试管号 试剂 标准蛋白溶液 /mL 蒸馏水/mL 蛋白质浓度 /mg/mL A280 1 2 3 4 5 6 7 8
高一生物《蛋白质的鉴定》教案-
高一生物《蛋白质的鉴定》教案?篇一：还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定教案(word版)人教版实验一生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定教案一、实验原理（1）鉴定实验设计的理念：某些化学试剂+ 生物组织中有关有机化合物（2）具体原理：①可溶性还原糖+ 斐林试剂→砖红色沉淀。
②脂肪小颗粒+ 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒。
③蛋白质+ 双缩脲试剂→紫色反应。
二、目标要求初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
三、重点、难点 1.重点①初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
②通过实验的操作和设计培养学生的动手能力，掌握探索实验设计技巧，从而培养创新思维能力。
2.难点根据此实验方法、原理，设计实验来鉴定常见食物的成分。
四、实验材料1.可溶性还原糖的鉴定实验:选择含糖量较高、颜色为白色或近白色的植物组织，以苹果、梨为最好。
2.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好(实验前浸泡3h～4h)。
3.蛋白质的鉴定实验:可用浸泡1d～2d的黄豆种子(或用豆浆、或用鸡蛋蛋白)。
产生特定的颜色反应。
五、仪器、试剂1.仪器:剪刀,解剖刀,双面刀片,试管,试管架,试管夹,大小烧杯,小量筒,滴管,玻璃漏斗,酒精灯,三脚架,石棉网,火柴,研钵,石英砂,纱布,载玻片,盖玻片,毛笔,吸水纸,显微镜。
2.试剂:①斐林试剂(0.1g/L的NaOH溶液+ 0.05g/mL的CuSO4溶液)；②苏丹Ⅲ染液；③双缩脲试剂；④体积分数为50%的酒精溶液；⑤蒸馏水。
六、方法步骤(演示教学课件) 1.制备试剂。
2.可溶性还原糖的鉴定、方法、步骤。
3.脂肪的鉴定、方法、步骤。
4.蛋白质的鉴定、方法、步骤。
七、教学过程新课引入：我们在化学中学习过物质的鉴定，其原理是被鉴定的物质与所用的化学试剂要么发生颜色反应，要么产生沉淀，我们生物学上也采用此原理，在生物学中物质鉴定的理念是：某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。
生物化学实验--蛋白质性质试验
（三）黄色反应 原理：蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸（如
酪氨酸、色氨酸等），于浓硝酸可反应并生成黄色物 质，此物质在碱性环境下变为桔黄色的硝基苯衍生物 硝醌酸等。
操作：取一支试管，加入1ml蛋白液及浓硝酸5滴。加 热，冷却后注意颜色变化。然后再加入10%NaOH溶液 1ml，颜色有什么变化？
（四）茚三酮反应 原理：蛋白质与茚三酮共热，产生兰紫色的还原茚三
操作：
1、尿素实验
取少量尿素晶体放在干燥的试管中，微火加热使其
熔化成液体，此时有氨气放出，可用湿润的试纸检验，
至液体重新结晶出现白色固体时，停止加热，冷却。然
后加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1% 混匀，观察有无紫色出现。
CuSO4溶液，
2、蛋白液实验
取蛋白液1ml，加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加2-4 滴1% CuSO4溶液，混匀，观察有无紫色出现。
荧光法gml不同种类蛋白最大吸收波长nm标准方法准确操作麻烦费时灵敏度低适用于标准的测定紫外分光光度280205灵敏快速不消耗样品核酸类物质有影响100010000540重复性线性关系好灵敏度低测定范围窄样品需要量大folin酚试剂750灵敏费时较长干扰物质多25050500595灵敏度高稳定误差较大颜色会转移bca50500562灵敏度高稳定干扰因素少费时较长蛋白质不同方法比较一实验原理一实验原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸在碱性条件下可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色生成钼蓝和钨蓝化合物
察结果。 （四）生物碱试剂沉淀蛋白质 取一支试管，加入蛋白液2ml及醋 酸4-5滴，再加饱和苦味酸数滴，
观察现象。
http://222.195.234.199/openclass 登录名：自己的学号 密码：自己的学号 大家先把电子版的实验报告作好，然后在
生化综合实验报告--测定蛋白质含量的三种方法及其比较
器材:
①容量瓶②试管及试管架
③恒温水浴槽④吸量管
⑤分光光度计⑥电热套
⑦锥形瓶⑧比色皿
(3)紫外吸收法
试剂:
样品蛋白溶液:准确称样品蛋白质,配制成一定浓度的溶液。
器材:
①紫外分光光度计②容量瓶
③试管、试管架④吸量管
⑤锥形瓶⑥比色皿
4．实验方法步骤及注意事项
双缩脲法
标准曲线的绘制:
取12支试管分成两组，按下表平行操作，绘制标准曲线。
实验远没有我想象的那样简单，要想做好一个实验，容不得半点马虎。综合实验正是这培养了我们的耐心、恒心和信心，让我们的思维和创造力得到了大幅度的提高，让我们的科学素养有了很大的飞越。真真正正变学生的被动学习为主动学习，激发了我们的学习热情，不管实验成功或是失败，我们都能从中获得很多从其它地方得不到的知识，让我们获益匪浅！
若样品中含有大量吸收紫外线的物质，会出现较大的干扰。
5.实验数据处理方法
双缩脲法
试
剂
0
1
2
3
4
5
样品1
样品2
O．D540
0
0.021
0.052
0.160
0.316
0.345
0.08
0.029
标准蛋白质浓度(mg/ml）
0
1
2
3
4
5
X
Y
考马斯亮蓝染色法
试
剂
0
1
2
3
4
5
样品1
样品2
蛋白质浓度（ug/ml）
样品测定:
①制备样品的蛋白质提取液。
②取出两份1.0 ml样品液。操作同标准曲线，测定样品的OD值，平行两份
计算:
①容量瓶②试管及试管架
③恒温水浴槽④吸量管
⑤分光光度计⑥电热套
⑦锥形瓶⑧比色皿
(3)紫外吸收法
试剂:
样品蛋白溶液:准确称样品蛋白质,配制成一定浓度的溶液。
器材:
①紫外分光光度计②容量瓶
③试管、试管架④吸量管
⑤锥形瓶⑥比色皿
4．实验方法步骤及注意事项
双缩脲法
标准曲线的绘制:
取12支试管分成两组，按下表平行操作，绘制标准曲线。
实验远没有我想象的那样简单，要想做好一个实验，容不得半点马虎。综合实验正是这培养了我们的耐心、恒心和信心，让我们的思维和创造力得到了大幅度的提高，让我们的科学素养有了很大的飞越。真真正正变学生的被动学习为主动学习，激发了我们的学习热情，不管实验成功或是失败，我们都能从中获得很多从其它地方得不到的知识，让我们获益匪浅！
若样品中含有大量吸收紫外线的物质，会出现较大的干扰。
5.实验数据处理方法
双缩脲法
试
剂
0
1
2
3
4
5
样品1
样品2
O．D540
0
0.021
0.052
0.160
0.316
0.345
0.08
0.029
标准蛋白质浓度(mg/ml）
0
1
2
3
4
5
X
Y
考马斯亮蓝染色法
试
剂
0
1
2
3
4
5
样品1
样品2
蛋白质浓度（ug/ml）
样品测定:
①制备样品的蛋白质提取液。
②取出两份1.0 ml样品液。操作同标准曲线，测定样品的OD值，平行两份
计算:
鸡蛋清蛋白酶水解物的制备及功能性质分析
堡主竺竺堡兰望望塑堡鱼鳖查竺塑堕型鱼墨基望些丝堕些堑塞查！！查些盔兰参考文献［１】Ｗｅｌｌｓｔｅａｄ，Ｄ．ｔ１９９５．Ｇｒｏｗｔｈｌｉｍｉｔｅｄｔｏｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｃｏｕｎｔｒｉｅｓ．ＭｉｓｓｅｔＷｏｒｌｄＰｏｕｌｔｒｙ．１１（７）：２１·２３【２】刘宝全等，鸡蛋深３ｎＴ技术，农牧产品开发，１９９９（６）：３４．３５【３】ＫａｚｕｋｏＳｈｉｍａｄａａｎｄＳｅｔｓｕｒｏＭａｔｓｕｓｈｉｔａ．１９８０．ＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＴｈｅｒｍｏｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓａｎｄＡｍｉｎｏＡｃｉｄＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ．Ｊ．Ａｇｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．２８“１：４１３－４ｔ７【４】郑桂芝，蛋白质水解与水解物之利用，食品工业，１９９７２９（５）：１０～１７【５】赵新怀等，酶促水解大豆蛋白的研究，食品与发酵工业，１９９４（５）：７一ｎ【６］６Ｄｅｅｓｌｉｅ，ｗＤ．，Ｃｈｅｒｙａｎ，Ｍ．１９９８Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｓｏｙｐｒｏｔｅｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｆｒｏｍａｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｕｌｔｒａｆｉｔｒａｔｉｏｎｒｅａｔｏｒ．ＪＡｇｒｉｃＦｏｏｄＣｈｅｍ．３６：２６－－３１［７】Ｃｈｏｂｅｒｔ，ＪＭ．ｅｔａｌ，１９８８．ＳｏｌｕｂｉｌｉｔｙａｎｄｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｃａｓｅｉｎｓａｎｄｗｈｅｙｐｒｏｔｅｉｎｓｍｏｄｉｆｉｅｄｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙｂｙｔｒｙｐｓｉｎＪ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．３６：８８３·８９２［８】８Ｋｅｓｔｅｒ，Ｊ．Ｊ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ．ｔ１９８４．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｗｈｅｙｐｒｏｔｅｉｎｓｔｏｉｍｐｒｏｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ．Ｊ．ＤａｉｒｙＳｃｉ．６７：２７５７－－２７７４【９】９汤亚杰，吴思方，酪蛋白磷酸肽的研究进展，食品科学，１９９８１９（５）：３—６【１０】Ｓｈｉｍｉｚｕ，Ｍ．，Ｌｅｅ，Ｓ．Ｗ１９８６．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ２３ｒｅｓｉｄｕｅｓｐｕｒｉｆｉｅｄｆｒｏｍｔｈｅＩⅪｐｔｉｃｈｙｄｍｌｙｓａｔｅｏｆａ，ｌ—ｃａｓｅｉｎ：ｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙｄｕｒｉｎｇｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｅｐｔｉｄｅ．Ｊ．ＦｏｏｄＳｃｉ．５１（５）：１２４８—１２５２【１１］刘杰，蒲萍萍，全蛋儿童食品新技术，食品研究与开发，１９９６１７（３）：３０－－３１【１２】黄毅，鸡蛋奶饲料的研制，食品工业，１９９６（２）：３７【１３】Ｌａｈｌ，ＷＪ．，Ｂｒａｕｎ，Ｓ．Ｄ．１９９４．Ｅｎｚｙｍａｔｉｃｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｆｏｒｆｏｏｄｕ∞．４６（１０、：６８—７１【１４］Ｍａｈｍｏｕｄ，Ｍ．Ｉ．１９９４．ＰｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｉｎｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌｐｒｏｄｕｃｔＳ，ＦｏｏｄＴｅｃｉ＇ｍ０１．４８（１０）：８９．９５ｆ１５】Ｃｈｏｂｅｎ，Ｊ．Ｍ．ｅｔａｌ，１９８８．ＳｏｌｕｂｉｌｉｔｙａｎｄｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｃａｓｅｉｎｓａｎｄｗｈｅｙｐｒｏｔｅｉｎｓｍｏｄｉｆｉｅｄｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙｂｙｔｒｙｐｓｉｎＪＡｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．３６：８８３—８９２【１６】Ｃｈｏｂｅｒｔ，ｊ．Ｍ．１９８８ＳｏｌｕｂｉｌｉｔｙａｎｄｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｃａｓｅｉｎｓｍｏｄｉｆｉｅｄｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙｂｙＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｕｓａｕｒｅｕｓＶ８ｐｒｏｔｅｉｎ．．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．３６：２２０．２２４［１７】Ｃｈｏｂｅｒｔ，Ｊ．Ｍ．１９８９．Ｓｌｕｂｉｌｉｔｙａｎｄｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｂｅｔａ·ｃａｓｅｉｎｍｏｄｉｆｉｅｄｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙｂｙｔｒｙｐｓｉｎ．Ｊ．ＦｏｏｄＢｉｃｃｈｅｍ．１３：３３５—３５２【１８】Ｋｕｅｈｌｅｒ，ＺＡ．ａｎｄＳｆｉｎｅ，ＣＭ．１９７４ＥｆｆｅｃｔｏｆｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｎｓｏｍｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｗｈｅｙｐｒｏｔｅｉｎｊＦｏｏｄＳｃｉ．５０：１４０３－－１４０５【１９】Ｍｏｎｔｉ，Ｊ．Ｃ．ＡｎｄＪｏｓｔ．Ｒ，１９７８．ＥｍｚｙｍａｔｉｃＳｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｈｅａｔ－ｄｅｎａｔｕｒｅｄｃｈｅｅｓｅｗｈｅｙｐｒｏｔｅｉｎ．Ｊ．ＤａｉｒｙＳｃｉ．６１：１２３３－１２３７【２０】ＢＪ中ＲＧＥＧＥＬ＾ＮＤＳＤＡＬ１９８０Ｈｅａｔ—ｉｎｄｕｃｅｄＧｅｌｌｉｎｇｉｎｓｏｌｕｔｉｏｎｓｏｆＯｖａｌｂｕｍｉｎ．Ｊ．ｏｆＦｏｏｄＳｃｉ．４５：５７ｖ－ｚ５７３－４５－【２１】Ｋｕａｎ—ＪｕＬｉｕ；Ｓｈｅｎｇ－ＣｈｉｎＹａｎｇ１９９２ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｈｅａｔｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｌｉｍｉｔｅｄｅｎｚｙｍｅｈｙｄｒｏｌｙｓｅｄＣｈｉｃｋｅｎｅｇｇｗｈｉｔｅ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ３０（４）：５８２—５９２【２２】Ｈｉｄａｌｇｏ，Ｊ．ａｎｄＧｒａｐｅｒ，Ｅ．１９９７Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙａｎｄｈｅａｔｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｗｈｅｙｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ．Ｊ．ＤａｒｉｒｙＳｃｉ：６０：１５１５—１５１８［２３】Ｊｏｏｔ，Ｒ．ａｎｄＮｏｎｔｉ，Ｊ．Ｃ．１９７７．Ｐａｒｔｉａｌｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆｗｈｅｙｐｒｏｔｅｉｎｂｙｔｒｙｐｓｉｎ．Ｊ．ＤａｉｒｙＳｃｉ．６０：１３８７－１３９３【２４】Ｄｕｒｇｅｏｎ，Ｓ．Ｌ．ｅｔａ１．１９９２．Ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｗｈｅｙｐｅｐｔｉｄｅｆｒａｃｔｉｏｎａｓａｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆａｎｄｉｏｎｉｃｓｔｒｅｎｇｔｈ．Ｊ．ＦｏｏｄＳｃｉ．５７（３）：６０１－６０４［２５】ＭｉｔｃｈｅｌｌＪ．ＲａｎｄＳ．Ｅ．Ｈｉｌｌ１９９５．Ｔｈｅｕｓｅａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｒｅａｃｔｉｏｎｓｔｏｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙｏｆｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓｉｎｈｅａｔ－ｐｒｏｃｅｓｓｅｄｆｏｏｄｓ．ＴｒｅｎｄｓｉｎＦｏｏｄｓｃｉ．＆＂ｒｅｃｈ．６（５）：２１９－２２４【２６】ＭａｒｙＫ．Ｓｃｈｍｉｄｌ１９９３．Ｆｏｏｄｐｒｏｄｕｃｔｓｆｏｒｍｅｄｉｃａｌｐｕｒｐｏｓｅｓ．ＴｒｅｎｄｓｉｎＦｏｏｄｓｃｉ．＆Ｔｅｃｈ４（６）：１６４－１６８ｆ２７】Ｔｕｒｇｅｏｎ，Ｓ．Ｌ，ｅｔａｌ，１９９２，ＩｎｔｅｒｒａｃｉａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｔｒｙｐｔｉｃｐｅｐｔｉｄｅｓｏｆＬａｃｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎ．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ１０：６６９·６７５【２８】Ｂｅｈｎｋｅ，Ｕ．ｅｔａ１．１９８６．Ｅｎｚｙｍａｔｉｃｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｅｇｇｗｈｉｔｅｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｓｏｍｅｏｆｉｔｓｉｔｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．Ｎａｈｒｕｎｇ３０（３／４）：３１９－一３２６【２９］Ｍａｈｎｏｕｄ，Ｍ．Ｊ．ｅｔａ１．１９９２．Ｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆｃａｓｅｉｎ：ｅｆｆｅｃｔｏｆｄｅｇｒｅｅｏｆｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｎａａｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙａｎｄｐｈｙｓｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．ＪＦｏｏｄＳｃｉ．５７（５）：１２２３，１２２９［３０１Ｇｒｉｍｂｌｅ，Ｇ．Ｋ．１９９４．Ｔｈｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎｃｌｉｎｉｃａｌｎｕｔｒｉｔｉｏｎ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｕｔｒ，１４：４１９－４４７【３１】Ｇｒｉｍｂｌｅ，Ｒ．Ｆ．１９９４．Ｃｙｓｔｒｉｎｅａｎｄｇｌｙｃｉｎｅｓｕｐｐｌｅ—ｍｅｎｔａｔｉｏｎｍｏｄｕｌａｔｅｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｃｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｔｕｎｌｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａｌｐｈａｉｎｒａｔｓｆｅｄａｌｏｗｐｒｏｔｅｉｎｄｉｅｔ．ＪＮｕｔｒ．１２２：２０６６－２０７３【３２］Ｌｅｍｏｎ，Ｐ．ｗＲ．１９８７．Ｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｅｘｅｒｃｉｓｅ：Ｕｐｄｅｔｅ１９８７．ＭｅｄＳｃｉ．ＳｐｏｒｔｓＥｘｅｒｃ．１９：１７９．１９０【３３］Ｌｅｍｏｎ，ＥｗＲ·ｅｔａｌ１９８４．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｉｎｔｅｎｓｉｔｙｏｎｐｒｏｔｅｉｎｕｔｉｌｉｚｉｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｐｒｏｌｏｎｇｅｄｅｘｅｒｃｉｓｅ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．ＳｐｏｒｔｓＥｘｅｒｃ１６：１５１【３４】Ｅｖｅｎｓ，ｗＪ．１９８３Ｐｒｏｔｅｉｎｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｅｎｄｕｒａｔｉｏｎａｎｄｅｎｄｕｒａｔｉｏｎｅｘｅｒｃｉｓｅ．ＰｈｙｓｉｃｉａｎＳｐｏｒｔｓＭｅｄ．１１：６３—７１ｆ３５】Ｆｒｋｊａｅｒ，Ｓ．１９９４．Ｕｓｅｏｆｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｆｏｒｐｒｏｔｅｉｎｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ．ＦｏｏｄＴｅｃｈｎ０１．４８（１０）：８６’８８【３６】ＭａｒｙＫ．Ｓｃｈｍｉｄｌ１９９３．Ｆｏｏｄｐｒｏｄｕｃｔｓｆｏｒｍｅｄｉｃａｌｐｕｒｐｏｓｅｓ．ＴｒｅｎｄｓｉｎＦｏｏｄｓｃｉ．＆Ｔｅｃｈ．４（６）：１６４－１６８６３７］Ｓｔｅｈｌｅ，Ｐ．ｅｔａ１．１９８２．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｏｆｔｙｒｏｓｉｎｅａｎｄｇｌｕｔａｍｉｎｅｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｐｅｐｔｉｄａｓ．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４：２８０－２８６【３８］Ｇｒｉｍｂｌｅ，ｇ·ｋ·ｅｔａｌ·１９８７Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｐｅｐｔｉｄｅｃｈａｉｎ－ｌｅｎｇｔｈｏｎａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｏｆｅｇｇ－ｐｒｏｔｅｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｉｎｔｈｅｎｏｒｍａｌｈｕｍａｎｊｅｊｕｎｕｍＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ９２：１２６．１４２【３９】Ｓｈａｒｐ，ｗＲ．，Ｅｖａｎｓ，Ｄ．Ａ．ａｎｄＡｎｎｉｒａｔｏ，ＰｍＶ．１９８４．ＦｏｏｄＴｅｃｈｎ０１．３８位）：１１２－－１１９—４６—硕士学位论文鸡蛋清蛋白酶水解物的制各及其功能性质的研究东北农业大学【４０】ＣｏｎｏｒＲｅｉｌｌｙ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｆｏｏｄｓ－－ａｃｈａｌｌｅｎｇｅｆｏｒｃｏｎｓｕｍｅｎ１９９４．ＴｒｅｎｓｉｎＦｏｏｄＳｃｉ．＆Ｔｅｃｈｎ０１．５（４）：１２１——１２３ｆ４１】Ｋｒｉｔｃｈｅｖｓｋｙ，Ｄ．ｅｔａｌｌ９８７．ＤｉｅｔａｒｙｐｒｏｔｅｉｎａｎｄａｔｈｒｏｓｅｌｅｒｏｓｉｓＪＡＯＣＳ．６４（８）：１１６７一“７ｌ【４２】Ｂｅｙｎｅｎ，Ａ．Ｃ．，Ｗｅｓｔ，Ｃ．Ｅ．１９８７．ＣｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎＳｗｉｎｅｆｅｄｄｉｅｔｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｅｉｔｈｅｒｃａｓｅｉｎｏｒｓｏｙｂｅａｎｐｒｏｔｅｉｎＪＡＯＣＳ．６４（８）：１１７８—１１８２【４３】ＭｅｅＬＵ．Ｅ．１９８７．Ｓｐｅｃｉｅｓ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓｏｆＳｕｒｕｍＣｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｔｏｄｉｅｔａｒｙｐｒｏｔｅｉｎｓ．ＪＡＯＣＳ．６４（８）：１１７２—１１７７【４４】陈历俊，东北农业大学博士论文，１９９８【４５】于国平，马力编，食品生物化学实验指导，东北农业大学实验教材，１９９６［４６１马成林等编著，动物性食品理化检验学，中国人民解放军兽医大学出版社，１９８２【４７］ＪＩＮＱＵＡＮＸＵ，ＭＡＫＯＴＯＳＨＩＭＯＹＡＭＡＤＡ，ａｎｄＫＥＮＪＩＷＡＴＡＮＡＢＥ．１９９７．ＧｅｌａｔｉｏｎｏｆｅｇｇｗｈｉｔｅｐｒｏｔｅｉｎｓａｓａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｃｏｍｂｉｎｅｄＨｅａｔｉｎｇａｎｄＦｒｅｅｚｉｎｇ．Ｊ．ｏｆＦｏｏｄＳｃｉ．６２（１）：９６３－－－－９６６．【４８】ＫＥＮＪＩＷ６Ｔ６ＮＡ，ｅｔａｌ１９８５．Ｈｅａｔ－ｉｎｄｕｃｅｄＡｇｇｒｅｇａｔｉｏｎａｎｄＰｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎｏｆＥｇｇＷｈｉｔｅＰｒｏｔｅｉｎｓｉｎＡｃｉｄＭｅｄｉａ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ．５０：５０７—５１０【４９】ＡＯＡＣ．ＯｆｆｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓｏｆｔｈｅＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆＯｆｆｉｃｉａｌＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｓＳｉｄｎｅｙＷｉｌｌｉａｍｓ（ｅｄ）．１４ｔｈｅｄ，ＵＳＡ１９８４：８７７ｆ５０ｊ汤巫杰，吴思方，酪蛋向磷酸肽的研究进展，１９９８，１９ｆ５）：３－６【５１】李书国等，中空纤维超滤器生产人豆分离蛋白的工艺研究，中国粮油学报，１９９４１４（４）：２１—２４【５２】王学松编著，膜分离技术及应用，科学出版杜，１９９４【５３】刘茉娥，陈欢林，新型分离技术基础，杭州：浙江大学出版社，１９９３【５４】徐仲儒编著，农业试验最优回归设计，黑龙江科技出版社，１９９８【５５】郭铁城等，旋转设计试验专用程序包，东北农学院学报，１９８６，４：４１３［５６】ＤｉｎａｋａｒＰａｎｙａｍａｎｄＡｒｕｍＫｉｌａｒａ，ｌ９９６．Ｅｎｈａｎｃｉｎｇｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｒｙｏｆｆｏｏｄｐｒｏｔｅｉｎｓｂｙｅｎｚｙｍａｔｉｃｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．ＴｒｅｎｄｓｉｎＦｏｏｄＳｃｉ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ４（７）：１４２－１４８【５７】ＮａｏｆｕｍｉＫＩＴＡＢＡＴＡＫＥ．１９８５Ｈｅａｔ—ＴｒｅａｔｅｄＯｖａｌｂｕｍｉｎａｎｄＥｇｇＷｈｉｔｅ．Ａｇｒｉｃ．Ｂｉ０１．Ｃｈｅｍ４９（８）：２４５７—２４５８【５８】Ｆｒｅｅｎｅｙ，Ｒ．Ｅ１９８０．ＣｈｅｍｉｃａｌＤｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓ．ＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ．１：４７［５９】许永红，蛋白质酶法水解物苦昧的控制，食品工业科技，１９９７（３）：ｌ一４－４７－。
最新实验设计：卵清蛋白
❖ 沉淀法是分离纯化生物大分子物质常用的一种经典方法，可 分盐析法、等电点沉淀法和有机溶剂沉淀法等。
❖ 蛋白质分子表面含有带电荷基团，这些基团与水分子有较大 的亲和力，故蛋白质在水溶液中能形成水化膜，增加了蛋白 质水溶液的稳定性。如果在蛋白质溶液中加入大量中性盐， 导致蛋白质分子表面电荷被中和，水化膜被破坏，最终引起 蛋白质分子间相互聚集并从溶液中析出，这就是盐析作用。
管溶液的A280值。以A280值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
试管号 试剂
1
2
3
4
5
6
7
8
9 提取液
标准蛋白溶液
/mL
0
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 4.0 1.0
蒸馏水/mL
蛋白质浓度 /mg/mL
4.0
3.5
3.0
2.5 2.0 1.5 1.0 0
3.0
0 0.125 0.25 0.375 0.50 0.625 0.75 1.0
实验设计：卵清蛋白
Contents
实验目的 实验原理 实验方法 实验材料及用品 实验步骤 实验注意事项
实验目的
1.掌握提取鸡蛋清中卵清蛋白的基本原理和方法。 2.掌握紫外分光光度计的使用方法及注意事项。 3.掌握用紫外吸收法测定蛋白质活性，了解其他测 定蛋白质活性的方法。
实验原理
❖ 一、沉淀法粗分离蛋白质
❖ 由于各种蛋白质分子表面的极性基团所带电荷数目不同，它 们在蛋白质表面上的分布情况也不一样，因此，将不同蛋白 质盐析出来所需要的盐浓度也各异，盐析法就是通过控制盐 的浓度，使蛋白质混合液中的各个成分分步盐析出来，达到 粗分离蛋白质的目的。
实验原理
❖ 鸡蛋清的主要成分是球蛋白和白蛋白（卵清蛋白），球蛋白可在 半饱和硫酸铵溶液中析出，而卵清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才 能析出。
❖ 蛋白质分子表面含有带电荷基团，这些基团与水分子有较大 的亲和力，故蛋白质在水溶液中能形成水化膜，增加了蛋白 质水溶液的稳定性。如果在蛋白质溶液中加入大量中性盐， 导致蛋白质分子表面电荷被中和，水化膜被破坏，最终引起 蛋白质分子间相互聚集并从溶液中析出，这就是盐析作用。
管溶液的A280值。以A280值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
试管号 试剂
1
2
3
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5
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7
8
9 提取液
标准蛋白溶液
/mL
0
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 4.0 1.0
蒸馏水/mL
蛋白质浓度 /mg/mL
4.0
3.5
3.0
2.5 2.0 1.5 1.0 0
3.0
0 0.125 0.25 0.375 0.50 0.625 0.75 1.0
实验设计：卵清蛋白
Contents
实验目的 实验原理 实验方法 实验材料及用品 实验步骤 实验注意事项
实验目的
1.掌握提取鸡蛋清中卵清蛋白的基本原理和方法。 2.掌握紫外分光光度计的使用方法及注意事项。 3.掌握用紫外吸收法测定蛋白质活性，了解其他测 定蛋白质活性的方法。
实验原理
❖ 一、沉淀法粗分离蛋白质
❖ 由于各种蛋白质分子表面的极性基团所带电荷数目不同，它 们在蛋白质表面上的分布情况也不一样，因此，将不同蛋白 质盐析出来所需要的盐浓度也各异，盐析法就是通过控制盐 的浓度，使蛋白质混合液中的各个成分分步盐析出来，达到 粗分离蛋白质的目的。
实验原理
❖ 鸡蛋清的主要成分是球蛋白和白蛋白（卵清蛋白），球蛋白可在 半饱和硫酸铵溶液中析出，而卵清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才 能析出。
医学生物化学实验_教(学)案
《医学生物化学实验》教案第1 次课2学时《医学生物化学实验》教案第2次课2学时《医学生物化学实验》教案第3次课2学时12、0.1mol/L盐酸溶液300mL13、0.1mol/L氢氧化钠溶液300mL14、0.05mol/L碳酸钠溶液300mL15、甲基红溶液20mL（三）器具水浴锅、温度计、200mL锥形瓶、100mL容量瓶、吸管、试管及试管架实验容1.实验原理★：蛋白质是两性电解质。
在蛋白质溶液中存在下列平衡：最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。
蛋白质的沉淀反应可分为两类。
（1）可逆的沉淀反应此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。
提纯蛋白质时，常利用此类反应。
（2）不可逆沉淀反应此时蛋白质分子部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。
加热引起的蛋白质沉淀与凝固。
蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。
因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
二、实验步骤：《医学生物化学实验》教案第4 次课2学时《医学生物化学实验》教案第5次课2学时《医学生物化学实验》教案第6次课2学时《医学生物化学实验》教案第7次课2学时《医学生物化学实验》教案第8 次课2学时《医学生物化学实验》教案第9次课2学时《医学生物化学实验》教案第10次课2学时《医学生物化学实验》教案第11次课2学时《医学生物化学实验》教案第12次课2学时《医学生物化学实验》教案第13次课2学时《医学生物化学实验》教案第14 次课2学时《医学生物化学实验》教案第15 次课2学时《医学生物化学实验》教案第16 次课2学时。
膜法水处理综合设计性实验-超滤膜截留分子量实验设计
超滤膜技术因其优良的出水水质和固液分离性能，已经在饮用水、再生水等水处理领域中得到越来越广泛的应用。
但超滤膜有多种分离精度，针对不同的水体应该选择不同的分离精度超滤膜，这对减缓膜污染、保障膜产水通量和出水水质至关重要。
因此，作为从事水处理领域的环境工程人员，必须掌握超滤膜分离精度的测定和评价方法-超滤膜截留分子量测定，这是合理选择超滤膜的基础和前提。
一、实验目的与原理（一）实验目的了解超滤膜分离精度的评估是通过测定膜截留分子量实现的，掌握超滤膜截留分子量测定的基本方法和途径，了解不同标准溶液对膜截留性能表征的差异。
学会如何针对不同水质选择合适的超滤膜。
（二）实验原理超滤膜的截留分子量是指在一定过滤条件下，采用系列已知分子量的有机物溶液进行膜过滤实验，计算不同分子量有机物溶液被膜的截留效率，其中被膜截留率达到或大于90%时的最小分子量即为该超滤膜的截留分子量。
由于实际使用的有机物分子形形状不会是绝对的球形，因此测定的有机物截留效率率和有机物分子尺度之间不一定绝对对应，用该实验所得的截留率表征超滤膜的截留分子量存在一定的误差。
加之，膜的制备方法决定了膜孔本身的尺寸大小并不是一致，而是围绕某一中心值呈现一定的分布。
因此，截留分子量并不能完全代表膜的分离能力。
本实验使用紫外分光光度法测试平板超滤膜对两种不同分子量大小的蛋白质溶液的截留效果。
根据透过液中蛋白质含量，计算超滤膜截留率，估算平板超滤膜孔径大小，确认平板膜的性能。
实验原理如下：配制不同分子量的蛋白质溶液，分别用紫外分光光度法分别测定板式超滤膜装置进出水中蛋白质溶液浓度，计算平板超滤膜对不同分子量蛋白质的截留率，估算膜的截留分子量。
二、实验仪器设备与药品图1 实验装置图（一）仪器设备自制平板膜过滤装置一套，含隔膜泵、压力表、流量计、膜组件支架等单元，如图1所示。
超滤平板膜，截留分子量约为50kDa。
使用前膜片浸泡在去离子水中；紫外分光光度计；千分之一电子天平；pH计；容量瓶、吸管、烧杯等；（二）实验药品去离子水；卵清蛋白（分子量45000）；牛血清白蛋白（分子量67000）；氯化钠（NaCl）；氯化钾（KCl）；磷酸二氢钾（KH2PO4）；磷酸氢二钾(K2HPO4）；HCl。
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生命科学学院生化实验操作大赛
鸡蛋清中卵清蛋白的 提取及其
实验原理
实验方法
实验材料及用品 实验步骤 实验注意事项
实验目的
1.掌握提取鸡蛋清中卵清蛋白的基本原理和方法。
2.掌握紫外分光光度计的使用方法及注意事项。 3.掌握用紫外吸收法测定蛋白质活性，了解其他测 定蛋白质活性的方法。
实验注意事项
1 2 3
蛋白质浓度过大，盐析时发生共沉，分离效果不好。 • 蛋白质浓度太稀，耗盐量过大，蛋白质回收率较低。一 般蛋白质浓度在2.5%～3.0%较适中。
蛋白质提取过程中须注意温度的控制，一般在20℃ 以下进行
调节等电点一定要准确，在本实验中，球蛋白和卵 清蛋白的等电点相差较小，若不准确，会导致蛋白 质不纯。
.
弃上清液
实验步骤
二.卵清蛋白活性测定：
（一）紫外吸收法测定卵清蛋白的含量 1、标准曲线法 （1）标准曲线的绘制 按下表分别向每支试管加入各种试剂，摇匀。在280nm波长处分别测定各 管溶液的A280值。以A280值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
试管号 试剂 标准蛋白溶液 /mL 蒸馏水/mL 蛋白质浓度 /mg/mL A280 1 2 3 4 5 6 7 8
其他方法
（一）根据蛋白质溶解度不同的分离方法：低温有机溶剂沉淀法 （二）根据蛋白质分子大小的差别的分离方法：透析与超滤 、凝胶过 滤法 （三）根据蛋白质带电性质进行分离：电泳法、离子交换层析法
实验方法
二.蛋白质活性测定 紫外吸收法
紫外线吸收法测定蛋白质含量的优点是迅速、简便、 不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。
实验原理
一、沉淀法粗分离蛋白质 沉淀法是分离纯化生物大分子物质常用的一种经典方法，可 分盐析法、等电点沉淀法和有机溶剂沉淀法等。 蛋白质分子表面含有带电荷基团，这些基团与水分子有较大 的亲和力，故蛋白质在水溶液中能形成水化膜，增加了蛋白 质水溶液的稳定性。如果在蛋白质溶液中加入大量中性盐， 导致蛋白质分子表面电荷被中和，水化膜被破坏，最终引起 蛋白质分子间相互聚集并从溶液中析出，这就是盐析作用。 由于各种蛋白质分子表面的极性基团所带电荷数目不同，它 们在蛋白质表面上的分布情况也不一样，因此，将不同蛋白 质盐析出来所需要的盐浓度也各异，盐析法就是通过控制盐 的浓度，使蛋白质混合液中的各个成分分步盐析出来，达到 粗分离蛋白质的目的。
实验原理
鸡蛋清的主要成分是球蛋白和白蛋白（卵清蛋白），球蛋白可在 半饱和硫酸铵溶液中析出，而卵清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才 能析出。 蛋白质的盐析作用是可逆过程，由盐析获得的蛋白质沉淀，当降 低其盐类浓度时，又能再溶解，因而可初步纯化蛋白质。 等电点沉淀法是利用蛋白质在其等电点时溶解度最小来分离具有 不同等电点蛋白质的方法。蛋白质是两性电解质，蛋白质分子的 电荷性质和数量因PH不同而变化，蛋白质处于等电点时，其净 电荷为零，由于相邻蛋白质分子之间没有静电斥力而趋于聚集沉 淀，因此，在其他条件相同时，它的溶解度达到最低点。 卵清蛋白的等电点为4.6-4.8，而球蛋白的等电点是5.1。
9 提取液
1.0 3.0
0 4.0 0
0.5 3.5 0.125
1.0 3.0 0.25
1.5 2.5 0.375
2.0 2.0 0.50
2.5 1.5 0.625
3.0 1.0 0.75
4.0 0 1.0
实验步骤
（二）蛋白提取液中蛋白质含量测定 1、提取液分别稀释1倍、10倍、20倍后，取待测蛋白质 溶液1ml，加入蒸馏水3ml，摇匀，按上述方法在280nm 波长处测定光吸收值，并从标准曲线上查出经稀释的待测 蛋白质的浓度。 排除干扰：将待测蛋白质溶液适当稀释，在波长260nm 和280nm处分别测出A值，然后利用280nm及260nm下的 吸收差求出蛋白质浓度。 2.计算：蛋白质浓度（mg/ml）=1.45A280-0.74A260 （式中A280和A260分别是该溶液在280nm和260nm波长下 测得的光吸收值）
实验方法
一.蛋白质提取
盐析+等电点沉淀法
可用作盐析的中性盐有过硫酸钠、氯化钠、磷酸钠、硫酸铵等。其 中应用最广的是硫酸铵，硫酸铵在水中溶解度大，25℃可达4.1mol/L 的浓度，化学性质稳定，溶解度的温度系数变化较小，价廉易得；分 段效果较其他盐好，性质温和，即使浓度很高时也不会影响蛋白质的 生物学活性。等电点沉淀法是利用蛋白质在其等电点时溶解度最小来 分离具有不同等电点蛋白质的方法。
其他方法
凯氏定氮法，双缩尿法、Folin－酚试剂法、考马斯 亮蓝法
实验材料及用品
1、材料： 新鲜鸡蛋 2、试剂： 饱和硫酸铵、硫酸铵结晶、生理盐水、 1mg/mL标准牛血清白蛋白液 3、器具：紫外分光光度计、离心机、恒温水浴锅、 冰箱、电子天平
实验步骤
一 卵 清 蛋 白 的 提 取
5mL 鸡蛋清（20℃） 5mL 生理盐水（20℃） 稀释液（以减少共沉淀） 逐滴加入 10mL 饱和硫酸铵溶液 边加边搅拌，饱和度为 50% 静置 10min 3000r/min 离心 15min 弃沉淀 上清液 加入硫酸铵固体至不溶解为止 静置 10min 3000r/min 离心 15min 沉淀 10mL 生理盐水（20℃） 溶解 用 0.1mol/L 醋酸调 pH=4.6-4.8（卵清蛋白等电点） 静置 10min 3000r/min 离心 15min 弃上清液 沉淀（卵清蛋白晶体） 5mL 生理盐水（20℃） 溶解（粗产品于 20℃以下保存）
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蛋清中各种蛋白的理化性质 名称
卵清蛋白 伴清蛋白 溶菌酶
比例
分子量KDa
等电点
52%
13% 11%
45
78 28
4.5
6.6 4.0-4.3
卵类粘蛋白
卵粘蛋白
3.5%
1.5%
14
18(α ) 400(β) 不同
10.7
4.7
免疫球蛋白
<1.0%
不同
实验原理
二、蛋白质的活性测定 根据蛋白质的物理化学性质，测定蛋白质的方法有凯氏定 氮法、紫外吸收法、Folin-酚法、考马斯亮蓝G-250染色 法等。 由于蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双 键，因此蛋白质具有吸收紫外线的性质，吸收高峰在 280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值 （A280）与其含量呈正比关系，可用作定量测定。 由于核酸在280波长处也有光吸收，对蛋白质的测定有干 扰作用，但核酸的最大吸收峰在260nm处，如同时测定 260nm的光吸收，通过计算可能消除其对蛋白质测定的影 响，因此溶液中存在核酸时必须同时测定280nm及260nm 的光密度，方可通过计算测得溶液中的蛋白质浓度。
生命科学学院生化实验操作大赛
鸡蛋清中卵清蛋白的 提取及其
实验原理
实验方法
实验材料及用品 实验步骤 实验注意事项
实验目的
1.掌握提取鸡蛋清中卵清蛋白的基本原理和方法。
2.掌握紫外分光光度计的使用方法及注意事项。 3.掌握用紫外吸收法测定蛋白质活性，了解其他测 定蛋白质活性的方法。
实验注意事项
1 2 3
蛋白质浓度过大，盐析时发生共沉，分离效果不好。 • 蛋白质浓度太稀，耗盐量过大，蛋白质回收率较低。一 般蛋白质浓度在2.5%～3.0%较适中。
蛋白质提取过程中须注意温度的控制，一般在20℃ 以下进行
调节等电点一定要准确，在本实验中，球蛋白和卵 清蛋白的等电点相差较小，若不准确，会导致蛋白 质不纯。
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弃上清液
实验步骤
二.卵清蛋白活性测定：
（一）紫外吸收法测定卵清蛋白的含量 1、标准曲线法 （1）标准曲线的绘制 按下表分别向每支试管加入各种试剂，摇匀。在280nm波长处分别测定各 管溶液的A280值。以A280值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
试管号 试剂 标准蛋白溶液 /mL 蒸馏水/mL 蛋白质浓度 /mg/mL A280 1 2 3 4 5 6 7 8
其他方法
（一）根据蛋白质溶解度不同的分离方法：低温有机溶剂沉淀法 （二）根据蛋白质分子大小的差别的分离方法：透析与超滤 、凝胶过 滤法 （三）根据蛋白质带电性质进行分离：电泳法、离子交换层析法
实验方法
二.蛋白质活性测定 紫外吸收法
紫外线吸收法测定蛋白质含量的优点是迅速、简便、 不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。
实验原理
一、沉淀法粗分离蛋白质 沉淀法是分离纯化生物大分子物质常用的一种经典方法，可 分盐析法、等电点沉淀法和有机溶剂沉淀法等。 蛋白质分子表面含有带电荷基团，这些基团与水分子有较大 的亲和力，故蛋白质在水溶液中能形成水化膜，增加了蛋白 质水溶液的稳定性。如果在蛋白质溶液中加入大量中性盐， 导致蛋白质分子表面电荷被中和，水化膜被破坏，最终引起 蛋白质分子间相互聚集并从溶液中析出，这就是盐析作用。 由于各种蛋白质分子表面的极性基团所带电荷数目不同，它 们在蛋白质表面上的分布情况也不一样，因此，将不同蛋白 质盐析出来所需要的盐浓度也各异，盐析法就是通过控制盐 的浓度，使蛋白质混合液中的各个成分分步盐析出来，达到 粗分离蛋白质的目的。
实验原理
鸡蛋清的主要成分是球蛋白和白蛋白（卵清蛋白），球蛋白可在 半饱和硫酸铵溶液中析出，而卵清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才 能析出。 蛋白质的盐析作用是可逆过程，由盐析获得的蛋白质沉淀，当降 低其盐类浓度时，又能再溶解，因而可初步纯化蛋白质。 等电点沉淀法是利用蛋白质在其等电点时溶解度最小来分离具有 不同等电点蛋白质的方法。蛋白质是两性电解质，蛋白质分子的 电荷性质和数量因PH不同而变化，蛋白质处于等电点时，其净 电荷为零，由于相邻蛋白质分子之间没有静电斥力而趋于聚集沉 淀，因此，在其他条件相同时，它的溶解度达到最低点。 卵清蛋白的等电点为4.6-4.8，而球蛋白的等电点是5.1。
9 提取液
1.0 3.0
0 4.0 0
0.5 3.5 0.125
1.0 3.0 0.25
1.5 2.5 0.375
2.0 2.0 0.50
2.5 1.5 0.625
3.0 1.0 0.75
4.0 0 1.0
实验步骤
（二）蛋白提取液中蛋白质含量测定 1、提取液分别稀释1倍、10倍、20倍后，取待测蛋白质 溶液1ml，加入蒸馏水3ml，摇匀，按上述方法在280nm 波长处测定光吸收值，并从标准曲线上查出经稀释的待测 蛋白质的浓度。 排除干扰：将待测蛋白质溶液适当稀释，在波长260nm 和280nm处分别测出A值，然后利用280nm及260nm下的 吸收差求出蛋白质浓度。 2.计算：蛋白质浓度（mg/ml）=1.45A280-0.74A260 （式中A280和A260分别是该溶液在280nm和260nm波长下 测得的光吸收值）
实验方法
一.蛋白质提取
盐析+等电点沉淀法
可用作盐析的中性盐有过硫酸钠、氯化钠、磷酸钠、硫酸铵等。其 中应用最广的是硫酸铵，硫酸铵在水中溶解度大，25℃可达4.1mol/L 的浓度，化学性质稳定，溶解度的温度系数变化较小，价廉易得；分 段效果较其他盐好，性质温和，即使浓度很高时也不会影响蛋白质的 生物学活性。等电点沉淀法是利用蛋白质在其等电点时溶解度最小来 分离具有不同等电点蛋白质的方法。
其他方法
凯氏定氮法，双缩尿法、Folin－酚试剂法、考马斯 亮蓝法
实验材料及用品
1、材料： 新鲜鸡蛋 2、试剂： 饱和硫酸铵、硫酸铵结晶、生理盐水、 1mg/mL标准牛血清白蛋白液 3、器具：紫外分光光度计、离心机、恒温水浴锅、 冰箱、电子天平
实验步骤
一 卵 清 蛋 白 的 提 取
5mL 鸡蛋清（20℃） 5mL 生理盐水（20℃） 稀释液（以减少共沉淀） 逐滴加入 10mL 饱和硫酸铵溶液 边加边搅拌，饱和度为 50% 静置 10min 3000r/min 离心 15min 弃沉淀 上清液 加入硫酸铵固体至不溶解为止 静置 10min 3000r/min 离心 15min 沉淀 10mL 生理盐水（20℃） 溶解 用 0.1mol/L 醋酸调 pH=4.6-4.8（卵清蛋白等电点） 静置 10min 3000r/min 离心 15min 弃上清液 沉淀（卵清蛋白晶体） 5mL 生理盐水（20℃） 溶解（粗产品于 20℃以下保存）
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蛋清中各种蛋白的理化性质 名称
卵清蛋白 伴清蛋白 溶菌酶
比例
分子量KDa
等电点
52%
13% 11%
45
78 28
4.5
6.6 4.0-4.3
卵类粘蛋白
卵粘蛋白
3.5%
1.5%
14
18(α ) 400(β) 不同
10.7
4.7
免疫球蛋白
<1.0%
不同
实验原理
二、蛋白质的活性测定 根据蛋白质的物理化学性质，测定蛋白质的方法有凯氏定 氮法、紫外吸收法、Folin-酚法、考马斯亮蓝G-250染色 法等。 由于蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双 键，因此蛋白质具有吸收紫外线的性质，吸收高峰在 280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值 （A280）与其含量呈正比关系，可用作定量测定。 由于核酸在280波长处也有光吸收，对蛋白质的测定有干 扰作用，但核酸的最大吸收峰在260nm处，如同时测定 260nm的光吸收，通过计算可能消除其对蛋白质测定的影 响，因此溶液中存在核酸时必须同时测定280nm及260nm 的光密度，方可通过计算测得溶液中的蛋白质浓度。