植物吲哚乙酸(IAA)ELISA试剂盒分析检测

吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定一、原理1、吲哚乙酸产品概述:吲哚乙酸可占植物体内吲哚乙酸的50-90%，可能是生长素在植物组织中的一种储藏形式，它们经水解可以产生游离吲哚乙酸。

吲哚乙酸可刺激形成层细胞分裂;吲哚乙酸刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长;促进木质部、韧皮部细胞分化，促进插条发根、调节愈伤组织的形态建成。

吲哚乙酸在器官和整株水平上，吲哚乙酸从幼苗到果实成熟都起作用。

吲哚乙酸控制幼苗中胚轴伸长的可逆性红光抑制;当吲哚乙酸转移至枝条下侧即产生枝条的向地性;当吲哚乙酸转移至枝条的背光侧即产生枝条的向光性;吲哚乙酸造成顶端优势;延缓叶片衰老;施于叶片的生长素抑制脱落，而施于离层近轴端的生长素促进脱落;吲哚乙酸促进开花，诱导单性果实的发育，延迟果实成熟。

2、试验原理:吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。

植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平，起着重要的作用，而影响植物的生长。

酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。

吲哚乙酸的含量可用比色法测定。

二、准备仪器及药品T6新悦型分光光度计离心机恒温水浴锅天平研钵试管移液管烧杯20mmol/L磷酸缓冲液，pH6.0(见附表2)。

1mmol/L2，4—二氯酚:称取二氯酚16.3mg用蒸馏水配制成100ml。

1mmol/L氯化锰:称取MnCl?4HO 19.8mg用蒸馏水配制成100ml。

221mmol/L吲哚乙酸:称取IAA 17.5mg用少量乙醇溶解，然后将其倒于盛有约90ml蒸馏水的容量瓶中(100ml)，稀释至刻度。

吲哚乙酸试剂A或B(任备其中之一):试剂A:15ml 0.5mol/L FeCl3，300ml浓硫酸(比重为1.84)，500ml蒸馏水，使用前混合之即成，避光保存。

用时1ml样品中加入试剂4ml。

试剂B:10ml 0.5mol/L FeCl3,500ml 35%过氯酸，使用前混合之即成，避光保存。

植物中吲哚乙酸生命学检测分析技术的研究随着科技的不断进步，生命科学领域的研究也逐渐深入。

植物作为自然界中最重要的生物之一，其在生存、繁衍、免疫防御等方面的生化过程一直备受科学家们的关注。

吲哚乙酸（Indole-3-Acetic Acid，IAA）作为植物中最常见的植物生长素之一，其作用已经被科学家们广泛研究。

而如何高效地检测和分析植物中的吲哚乙酸含量，则成为了生命科学领域中的重要课题之一。

植物中吲哚乙酸的生化过程植物中的吲哚乙酸生化过程非常复杂，包括生物合成、代谢、信号转导等多个环节。

其中，植物产生吲哚乙酸的主要途径为嫁接、花药、根系、新梢等处。

经过生物合成后，吲哚乙酸会被送到各个部位，并因受到机械、光线、温度等刺激而释放。

同时，在吲哚乙酸代谢的过程中，植物还会产生各种代谢产物，如3-吲哚醋酸（3-Indoleacetic Acid，3-IAA）、吲哚酰-L-天冬氨酸（Indoleacetyl-L-aspartic acid，IAA-Asp）等。

植物中吲哚乙酸的检测方法在植物研究领域中，检测吲哚乙酸的含量是极为重要的。

目前，常用的吲哚乙酸检测方法主要有高效液相色谱（High Pressure Liquid Chromatography，HPLC）、气相色谱质谱联用（Gas Chromatography-Mass Spectrometry，GC-MS）等。

HPLC法是目前应用最为广泛的检测方法之一，它采用了一种复杂的分离和检测技术，可以对样品进行快速的分离和定量。

而GC-MS法则是一种在高温下将样品中的化合物转化为气态，然后通过质谱分析进行检测的方法，可以对样品进行更加精确的分析。

另外，随着人类对生命科学的认识不断提高，新兴的技术也不断出现。

比如，近年来兴起的生物传感器技术，其原理是通过将感受器和传感器结合，建立起一种快速、准确的化学检测系统。

将其应用于吲哚乙酸的检测中，可以大大提高检测的准确性和效率。

吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定一、原理1、吲哚乙酸产品概述:吲哚乙酸可占植物体内吲哚乙酸的50-90%，可能是生长素在植物组织中的一种储藏形式，它们经水解可以产生游离吲哚乙酸。

吲哚乙酸可刺激形成层细胞分裂;吲哚乙酸刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长;促进木质部、韧皮部细胞分化，促进插条发根、调节愈伤组织的形态建成。

吲哚乙酸在器官和整株水平上，吲哚乙酸从幼苗到果实成熟都起作用。

吲哚乙酸控制幼苗中胚轴伸长的可逆性红光抑制;当吲哚乙酸转移至枝条下侧即产生枝条的向地性;当吲哚乙酸转移至枝条的背光侧即产生枝条的向光性;吲哚乙酸造成顶端优势;延缓叶片衰老;施于叶片的生长素抑制脱落，而施于离层近轴端的生长素促进脱落;吲哚乙酸促进开花，诱导单性果实的发育，延迟果实成熟。

2、试验原理:吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。

植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平，起着重要的作用，而影响植物的生长。

酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。

吲哚乙酸的含量可用比色法测定。

二、准备仪器及药品T6新悦型分光光度计离心机恒温水浴锅天平研钵试管移液管烧杯20mmol/L磷酸缓冲液，pH6.0(见附表2)。

1mmol/L2，4—二氯酚:称取二氯酚16.3mg用蒸馏水配制成100ml。

1mmol/L氯化锰:称取MnCl?4HO 19.8mg用蒸馏水配制成100ml。

221mmol/L吲哚乙酸:称取IAA 17.5mg用少量乙醇溶解，然后将其倒于盛有约90ml蒸馏水的容量瓶中(100ml)，稀释至刻度。

吲哚乙酸试剂A或B(任备其中之一):试剂A:15ml 0.5mol/L FeCl3，300ml浓硫酸(比重为1.84)，500ml蒸馏水，使用前混合之即成，避光保存。

用时1ml样品中加入试剂4ml。

试剂B:10ml 0.5mol/L FeCl3,500ml 35%过氯酸，使用前混合之即成，避光保存。

吲哚乙酸氧化酶活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC4105规格：100T/48S产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加入5mL蒸馏水备用。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加入3mL蒸馏水备用。

试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存。

临用前加入5.71mL50%乙醇（乙醇（V）：HO（V）=1：1）溶解备用。

2可以分装后-20℃保存，避免反复冻融。

试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存。

试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加入15mL试剂四溶解。

O（V）标准品：粉剂×1支，-20℃保存，10mg吲哚乙酸。

临用前加入1.14mL50%乙醇（乙醇（V）：H2=1：1）溶解制成50μmol/mL的标准溶液。

可分装后-20℃保存。

产品说明：吲哚乙酸（IAA）在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。

IAA氧化酶能调节植物体内吲哚乙酸的的水平，从而影响植物的生长。

作用生成红色产物，在530nm下有最大吸收峰。

酶活力的大小可用破坏IAA IAA在无机酸条件下与FeCl3的速率表示。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、乙醇、冰和蒸馏水。

测定操作：1、样本处理：第1页，共3页（1）组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。

12000g4℃离心15分钟，取上清，置冰上待测。

（2）细胞或微生物样品的制备：先收集细胞或微生物样品到离心管内，弃上清，按照每500万细胞或微生物加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）。

12000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。

2、操作步骤：（1）可见分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至530nm。

1吲哚乙酸检测方法标准品检测：称取标准品0.0100g，用1ml无水乙醇溶解，再取0.1ml吲哚乙酸液体，加0.9ml超纯水，即为浓度为1.0mg/ml的吲哚乙酸标准品溶液。

样品处理：取样品0.1000g，用少量无水乙醇溶解后用超纯水定容至100ml，再用0.45μm滤膜过滤待检测。

HPLC检测条件为：色谱柱：C18反相柱检测器：紫外检测器检测波长：225nm进样量：2μL流速：1ml/min流动相：乙腈：0.5%磷酸溶液=4:1吲哚乙酸含量（%）=样品峰面积×标样浓度/（标样峰面积×样品浓度）×100%。

2 烯效唑检测方法标准品检测：称取标准品0.0100g，用1ml无水乙醇溶解，再取0.1ml烯效唑液体，加0.9ml超纯水，即为浓度为1.0mg/ml的烯效唑标准品溶液。

样品处理：取样品0.1000g，用少量无水乙醇溶解后用超纯水定容至100ml，再用0.45μm滤膜过滤待检测。

HPLC检测条件为：色谱柱：C18反相柱检测器：紫外检测器检测波长：254nm进样量：2μL流速：1ml/min流动相：乙腈：0.5%磷酸溶液=4:1烯效唑含量（%）=样品峰面积×标样浓度/（标样峰面积×样品浓度）×100%。

3 丁二酸检测方法标准品检测：称取标准品0.0100g，用1ml无水乙醇溶解，再取0.1ml丁二酸液体，加0.9ml超纯水，即为浓度为1.0mg/ml的丁二酸标准品溶液。

样品处理：取样品0.1000g，用少量无水乙醇溶解后用超纯水定容至100ml，再用0.45μm滤膜过滤待检测。

HPLC检测条件为：色谱柱：C18反相柱检测器：紫外检测器检测波长：215nm流速：1ml/min进样量：2μL流动相：乙腈：0.5%磷酸溶液=4:1丁二酸含量（%）=样品峰面积×标样浓度/（标样峰面积×样品浓度）×100%。

doi ：10.3969／j.issn.2095⁃1736.2021.02.065一株产吲哚乙酸菌的筛选、鉴定及培养条件优化周铭典1，2，蔡冠竟1，宁静1，朱葛夫1（1.中国科学院城市环境研究所，厦门361021；2.中国科学院大学，北京100049）摘要通过平板涂布培养法和Salkowski 比色法对堆肥中具有产吲哚乙酸（IAA ）能力的菌株进行初步筛选，并进一步利用分光光度法定量复筛其中具有高产IAA 能力的菌株。

试验共分离得到3株具有产IAA 能力的菌株，其中菌株29B 具有较强分泌IAA 的能力，培养96h 时IAA 产量达到54.73μg /mL 。

通过菌株形态观察、部分生理生化特性测定及16S rDNA 基因序列分析对菌株29B 进行分类鉴定，初步确定菌株29B 为停滞棒杆菌（Corynebacterium stationis ）。

设计单因素试验以IAA 含量为评价指标，对菌株29B 产IAA 能力进行条件优化。

结果表明，菌株29B 最佳培养条件是初始pH 值为7.0，接种量（体积分数）为2%，35℃摇床培养108h 。

在此最优条件下，菌株29B 的IAA 产量可达138.87μg /mL ，比优化前提高153.74%。

研究结果为菌株29B 在农业生产中的应用提供了实验基础和理论依据。

关键词吲哚乙酸（IAA ）；筛选；条件优化；堆肥中图分类号Q939.9文献标识码A文章编号2095⁃1736（2021）02⁃0065⁃05Screening ，identification and culture condition optimization ofan indole-3-acetic acid producing bacterial strainZHOU Mingdian 1，2，C AI Guanjing 1，N ING Jing 1，Z HU Gefu 1（1.Institute of Urban Environment ，C hinese Academy of Sciences ，X iamen 361021，C hina ；2.University of Chinese Academy of Sciences ，B eijing 100049，C hina ）Abstract The indole-3-acetic acid （IAA ）-producing strains were preliminarily screened by using spread plate and Salkowski colori⁃metric method ，a nd quantitative analysis of spectrophotometry was used to rescreen the strain with high IAA producing capacity.Three IAA-producing strains were isolated from the compost sample ，a nd strain 29B showed the highest IAA productivity with the yield reached 54.73μg /mL in 96h of cultivation.Based on morphological observation ，p art of physio-biochemical characteristics and analysis of 16S rDNA gene sequences ，t he strain 29B was identified as Corynebacterium stationis .The single factor tests were de⁃signed to optimize the IAA production of strain 29B.Results showed that the optimum culture conditions were as follows ：initial pH value ，7.0；i noculum amount （volume fraction ），2%；s haking culture at 35℃for 108h.Under the optimal culture conditions ，t he yield of IAA reached up to 138.87μg /mL ，w hich was increased by 153.74%compared with that before optimization.These results would provide an experimental and theoretical basis for the application of strain 29B in agricultural production.Key words indole-3-acetic acid （IAA ）；screening ；optimization ；compost吲哚乙酸（Indole-3-acetic acid ，I AA ）是一种重要的植物生长激素，对植物的新陈代谢、生长发育都起着重要作用［1］。

吲哚乙酸（IAA）检测
吲哚乙酸（Indole-3-acetic acid，IAA），又称为吲哚-3-乙酸，属于吲哚类化合物，是一种植物内源生长素，广泛分布于多种植物体内。

此外，生长素（Auxin）是最早被发现的植物激素，其化学本质是吲哚乙酸，因而习惯上常把吲哚乙酸作为生长素的同义词。

吲哚乙酸及其分子结构式
迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)和液相色谱质谱联用(HPLC-MS或LC-MS/MS)的方法，可检测各类植物和土壤样品中吲哚乙酸含量变化。

此外，我们还提供其他植物激素检测服务，以及植物激素系列检测试剂盒产品，以满足您的不同需求。

样品制备
吲哚乙酸提取方法（此部分涉及到公司的核心工艺，以下提供常规的提取工艺）
1）称量约0.5 g的新鲜植物样品；
2）液氮研磨至粉碎；
3）加入5 mL异丙醇/盐酸缓冲液，4℃震荡30 min；
4）加入10 mL二氯甲烷，4℃震荡30 min；
5）4℃，13000 rpm离心5 min，取下层有机相；
6）避光，氮气吹干有机相，用250 μL-500 μL甲醇(0.1%甲酸)溶解；
7）0.45 μm的微孔滤膜过滤，用HPLC-MS/MS检测。

HPLC和LC-MS测定吲哚乙酸样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周
项目报告
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关参数（中英文）
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 吲哚乙酸含量信息
相关服务
植物激素HPLC检测植物激素LC-MS检测。

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断植物（Plant）吲哚乙酸（IAA）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被吲哚乙酸（IAA）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的吲哚乙酸（IAA）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。

3.植物萃取液或其它相关样本：请1000x g离心20分钟，取上清即可检测。

4.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

上海笃玛生物科技有限公司试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、3、6、12、24、48pmol/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

植物吲哚乙酸（IAA）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中吲哚乙酸（IAA）含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物吲哚乙酸（IAA）水平。

用纯化的植物吲哚乙酸（IAA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物吲哚乙酸（IAA），再与HRP标记的植物吲哚乙酸（IAA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的植物吲哚乙酸（IAA）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物吲哚乙酸（IAA）浓度。

试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：3600pmol/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存标本要求：1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。