ELISA试剂盒

用Elisa试剂盒检测人血清血浆中VEGF血管内皮生长因子的浓度引言VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor，血管内皮生长因子) 是一种重要的血管生成调节因子，在多种生理和病理状态下发挥着重要的作用。

测定血清血浆中VEGF的浓度可以为许多疾病的诊断和治疗提供有价值的参考依据。

本文将介绍如何使用Elisa试剂盒来定量检测人血清血浆中VEGF的浓度。

实验准备材料1.试剂盒：Elisa试剂盒 (VEGF检测)2.样本：人血清血浆样本3.校准曲线标准品：不同浓度的VEGF标准品仪器和设备1.Elisa酶标仪2.微量移液器和相应的移液枪尖3.微量离心机实验步骤1.将试剂盒中的标准品取出并溶解。

2.准备一系列不同浓度的标准品，包括0 pg/mL，10 pg/mL，20pg/mL，50 pg/mL，100 pg/mL，200 pg/mL和400 pg/mL。

标准品的浓度根据试剂盒的说明书进行稀释。

3.将标准品和待测样本加入已涂有VEGF抗体的微孔板中。

4.混合孔板中的标准品和样本，并在37°C的恒温孵育箱中孵育一段时间。

5.将孵育后的孔板倒置，用洗涤缓冲液洗涤孔板，去除未结合的物质。

6.加入带有酶标记的VEGF抗体，并在37°C的恒温孵育箱中孵育一段时间。

7.再次倒置孔板并洗涤，去除未结合的物质。

8.加入底物溶液，并在室温下孵育一段时间。

9.加入停止液，停止反应。

10.使用Elisa酶标仪测量各孔的吸光度。

11.利用标准曲线，根据各孔的吸光度读数来计算出样本中VEGF的浓度。

数据分析根据测得的吸光度读数，通过标准曲线可以计算出待测样本中VEGF的浓度。

将各样本的浓度数据进行统计分析，计算出平均值和标准差，以及样本之间的相关性。

通过使用Elisa试剂盒，我们可以方便、快速地检测人血清血浆中VEGF的浓度。

这对于疾病的诊断和治疗提供了有价值的参考依据，同时也为相关生物学研究提供了重要的数据支持。

elisa试剂盒原理ELISA试剂盒（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay，又译作免疫夹配酶联免疫吸附测定法）是一种常用的生物化学技术，它能够快速、灵敏地检测固定量的抗原或抗体。

它的原理建立在具有特异性的抗原与抗体发生免疫反应的基础上，并且利用酶联免疫吸附测定法将其特异性特性发挥到极致。

ELISA试剂盒的原理实际上是利用一种可用来衡量两种特定分子结合情况的“酶联免疫反应”，即抗体可以特异性地结合抗原（如病毒、细菌、细胞、植物体等），然后会把这种特异性关联变成数量上的增加。

这种数量上的增加是金属蛋白酶（enzyme）所带来的。

当抗原被特异性抗体结合时，同时伴随着金属蛋白酶在抗原上的结合，而金属蛋白酶又被某些特定物（如丙二醛或氯仿等）所诱导，从而使抗原上的特异性结合物产生数量上的增加。

ELISA试剂盒的工作原理以上就是ELISA试剂盒的基本原理，它主要利用酶联免疫吸附测定的特异性原理，将特定的抗原或抗体酶联到具有特异性的样品上，最后检测数量上的增加。

ELISA技术具有高灵敏度、简便快捷、操作可靠等优点，被广泛应用于疾病诊断、抗原定性与定量检测、免疫活性评价以及生物体病原学研究等诸多领域。

ELISA试剂盒的工作原理主要包括抗原与抗体的结合、酶的结合与产物的检测等环节。

首先呈现的是抗原及抗体的结合，抗原及抗体在液体相中可以特异性地结合；其后的酶的结合是将抗原及抗体结合后，利用具有特异性的金属蛋白酶，将酶与抗原结合，从而使得结合物数量上有所增加；最后一步是检测，也就是检测酶结合物产生的数量上的增加，从而获取结果。

ELISA试剂盒的优势如下：1、ELISA试剂盒测定结果灵敏，且能够进行大规模检测；2、较快，能将一个检测过程缩短到几个小时；3、机器操作简单，操作步骤以及参数设置较为容易；4、一次可进行大量检测，可降低成本；5、器具配置简单，耗材容易获得，操作较为方便；6、安全性较高，可大幅减少辐射风险；7、节省时间和成本，跨学科的分析。

ELISA检测试剂盒操作流程1.准备实验材料和试剂-检验样本：例如血清、尿液、细胞上清液等。

-ELISA试板：根据样本数量选择96孔或384孔的板。

- 试剂盒：包括标准品、washes缓冲液、检测抗体、底物等。

2.样本处理-对于血清等生物液体样本，可用离心将固体物质沉淀并分离下清液。

-样本需储存或运输途中应避免反复冻融。

3.实验板的板液处理-将实验板从包装中取出，将不需要的孔进行盖膜封闭。

- 根据试剂盒说明书，添加适量的板液（Coating Buffer）到每个孔中，使其充分覆盖孔内壁。

-封闭板液的孔，将实验板在2-8℃下放置静置一夜或在37℃下1-2小时孵育。

4.样本添加-倒掉盘液，用PBS或TBST洗板3次，去除残留物。

-将样本加到每个孔中，根据需要添加正样本、负样本和待测样本。

-注意每个样本的剂量和添加的体积，通过试剂盒说明书和实验设计标准控制。

5.抗体添加-清洗步骤同上，将洗板缓冲液加到孔中，重复3次。

-加入检测抗体，根据试剂盒说明书的建议将其添加到孔中。

-要确保抗体的浓度和添加的体积适宜。

6.洗涤-洗涤步骤同上，用洗涤缓冲液洗板，重复3次。

-每次洗涤时，将洗液完全加满孔，静置1分钟，然后倒出洗液。

-注意洗涤时间和洗涤次数的准确控制，以将非特异性结合物质彻底清除。

7.底物添加-清洗步骤同上，将洗液加到孔中，重复3次。

-加入底物，根据试剂盒说明书的建议将其添加到孔中。

-底物液体应完全覆盖孔底，防止反应过程中氧化。

8.反应停止-根据试剂盒说明书，将反应停止液加入到孔中，停止底物的反应。

-注意反应停止液的体积和浓度，以保证反应的准确停止。

9.色谱分析-用ELISA板读板仪读取各个孔的OD值。

-根据试剂盒说明书和实验设计的标准曲线确定样本中目标物质的含量。

-注意设置适当的控制组和标准曲线来保证测量结果的准确性。

总结：ELISA检测试剂盒的操作流程主要包括实验板处理、样本添加、抗体添加、洗涤、底物添加、反应停止和色谱分析。

产品说明书人血管内皮生长因子ELISA试剂盒（Human VEGF ELISA KIT）产品货号：H6139S, H6139M, H6139L产品规格：24T, 48T, 96T产品内容：注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。

储存条件4℃避光保存，有效期见外包装。

开封后，保存温度详见说明书。

产品介绍Human VEGF ELISA Kit (Human Vascular Endothelial Cell Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人血管内皮生长因子ELISA试剂盒，可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组VEGF浓度。

人VEGF是由两个相同亚基以二硫键交联组成的二聚体糖蛋白，基因定位于第6号染色体长臂，由8个外显子和7个内含子交替构成，约14 kb。

由于mRNA剪接方式不同，产生了单链分别含121，145，165，183，189和206个氨基酸的不同变异体。

VEGF 121分子量约为34-46 kDa，是可溶性分泌型蛋白质，以游离状态存在，不能与肝素结合；VEGF 165分子量为45 kDa，30-50%以可溶性形式分泌于细胞外基质，其余部分与细胞膜、基底膜或细胞外基质含有肝素的糖蛋白结合。

VEGF 145存在于胎盘细胞和女性生殖道肿瘤细胞。

VEGF 189及VEGF 206分泌后完全结合于细胞膜或基底膜含有肝素的糖蛋白上。

骨骼肌，心肌，肝细胞，成骨细胞，中性粒细胞，巨噬细胞，角质形成细胞，血小板，褐色脂肪组织，CD34+细胞，星形细胞，神经元和内皮细胞等多种细胞和组织均可产生VEGF。

血清和血浆样本均可检测到VEGF，由于血小板可释放VEGF，因此血清中VEGF含量较高。

VEGF是一种特异作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子，可增加血管通透性、促进血管形成、引起细胞外基质成分改变等。

人脂肪炎症因子(Apelin)ELISA检测试剂盒简介说明人脂肪炎症因子(Apelin)ELISA检测试剂盒说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被脂肪炎症因子（Apelin /APLN）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的脂肪炎症因子（Apelin /APLN）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。

实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称 96孔配置 48孔配置备注微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条无标准品 0.3mL*6管 0.3mL*6管无样本稀释液 6mL 3mL 无检测抗体HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液 6mL 3mL 无封板膜 2张 2张无说明书 1份 1份无自封袋 1个 1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、0.5、1、2、4、8 ng/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

elisa试剂盒原理elisa（外来酶联免疫吸附）试剂盒是一种以酶联技术为基础的免疫检测方法。

其原理是通过抗原-抗体间的特异性结合作用，构成抗原-抗体复合物，利用酶的特异性而形成的酶-抗体复合物，使得复合物具有了酶的催化效应，在定比浓度的颜料中产生一定吸光度（A 值），根据不同比例的抗原抗体分子以及酶反应产物，表现出不同程度的吸光度，通过比较试验吸光度与对照吸光度，计算出试验项目的质量，从而进行免疫诊断。

elisa试剂盒包含了抗原、抗体、活性介质和酶等组分，当抗原抗体相互结合时，就会形成抗原抗体复合物。

当复合物中含有活性介质时，它可以使一种特定的酶有活性，这种酶可以将抗原和抗体中的某一物质催化变成另一物质，产生具有一定的吸光度的产物，这就是elisa试剂盒的基本原理。

由于elisa试剂盒的容易操作、易于对药物反应性能进行管理和检测，以及检测准确、结果可靠等优点，它成为目前应用最为广泛的免疫学技术之一，是诊断疾病和检测抗原抗体的有力工具。

elisa技术主要包括抗原和抗体合成、夹心板绘制、抗体复合物检测、抗原抗体结合度测定、夹心板读数以及抗原抗体关系分析等步骤。

抗原和抗体合成是elisa试剂盒的基础，抗原的合成需要通过特定的生物学方法，进行生化合成抗原。

例如，采用抗原特异性酶联反应，利用酶联酶/核酸复合物，将酶联酶与酶联荧光物质连接，形成目标抗原，即抗原-酶联物，而抗体则是通过免疫学方法合成，一般有外源抗体和内源抗体。

夹心板绘制是elisa试剂盒的重要步骤，一般有二层夹心板和三层夹心板。

在elisa试剂盒中，夹心板上先用特定抗原和抗体涂敷，然后用供试物质涂及其他化学反应的物质，当抗原与抗体结合时，夹心板上就会形成抗体复合物，对比定比浓度中的抗原抗体，产生一定的吸光度信号，并检测出病毒抗原或抗体存在的情况。

抗原抗体结合度测定和夹心板读数是elisa试剂盒最重要的步骤，其测定抗原抗体复合物的程度，从而计算出试验项目的质量。

产品信息和操作指南Human IgE预包被 ELISA kit Cat# : DKW12-1820-048 / DKW12-1820-096本试剂盒专用于科研，而非用于诊断Human IgEDKW12-1820目录产品简介 (1)知识背景 (1)试剂盒提供的试剂 (2)需要实验者自行准备的试剂与仪器 (2)注意事项 (3)试剂的配制 (5)操作过程 (7)结果分析 (9)试剂盒的保存 (9)操作步骤一览表 (10)参考文献 (11)ELISA测定中可能会出现的问题及解决方法 (12)预包被ELISA 试剂盒系列产品 (15)1、产品简介：达优®人IgE ELISA试剂盒是通过酶联免疫吸附技术，体外定量检测人血清、血浆、缓冲液或细胞培养液中的IgE，可同时检测天然的和重组的IgE。

本试剂盒为预包被板，整个过程孵育时间不超过4小时，洗涤9次。

本试剂盒专用于科研，而非用于诊断。

使用前请仔细阅读说明书并检查试剂盒组分，若有任何疑问请与达科为生物工程有限公司联系，E-mail：*************.检测范围：32-0.5 ng/mL灵敏度：0.1ng/mL重复性：板内、板间变异系数均＜10％。

2、知识背景：抗体根据抗原性和抗体重链分为IgG、IgA、IgM、IgE和IgD 五种。

IgE是介导I型变态反应的重要抗体，在支气管哮喘、鼻炎、食物过敏、药物、病原体等特应性疾病的发病过程中发挥着关键作用。

而抗IgE单克隆抗体可以与血液中IgE结合，降低血清总IgE水平，并下调肥大细胞、嗜碱性粒细胞表面的IgE高亲和力受体FcεRI的表达，从而抑制了IgE介导的免疫反应（1-6）。

3、试剂盒提供的试剂：试剂规格配制Cytokine standard 2/1瓶* 干粉状，按瓶上说明操作Biotinylated antibody 2/1瓶* 1：100用Dilution buffer R（1×）稀释Streptavidin-HRP 2/1瓶* 1：100用Dilution buffer R（1×）稀释Dilution buffer R（1×） 3/2瓶* 即用型Washing buffer（50×）1瓶 150∶用蒸馏水稀释TMB 1瓶即用型Stop solution 1瓶即用型Precoated ELISA plate 8×12或8×6*即用型封板膜 2/1张* 即用型说明书1份*：96/48 Tests4、需要实验者自行准备的试剂与仪器：1．酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）2．微量加液器及吸头：P10，P50，P100，P200，P1000 3．蒸馏水或去离子水4．全新滤纸5．旋涡振荡器和磁力搅拌器5、注意事项：1．试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡20-30分钟。

elisa试剂盒检测原理以elisa试剂盒检测原理为标题，本文将介绍ELISA（酶联免疫吸附实验）试剂盒的工作原理及其在生物医学领域的应用。

ELISA是一种常用的免疫学实验技术，也是一种高度敏感和特异性的方法，用于检测和定量分析体内外的抗原或抗体。

ELISA试剂盒通常由多个组分组成，包括固相载体（通常是微孔板）、酶标记的抗体或抗原、底物和检测试剂。

ELISA的工作原理基于抗原与抗体的特异性结合。

首先，将待测样品加入到涂有特定抗原或抗体的微孔板孔中，使抗原或抗体与固相载体表面结合。

然后，洗涤孔中未结合的物质，以去除非特异性结合。

接下来，添加酶标记的抗体或抗原，使其与待测样品中的目标物质结合。

再次洗涤，去除未结合的物质。

最后，添加底物，使其与酶标记的抗体或抗原发生反应，产生可测量的信号。

通过测量底物的反应产物的光学密度，可以定量分析待测样品中目标物质的浓度。

ELISA试剂盒在生物医学研究和临床诊断中有广泛的应用。

它可以用于检测病原微生物、肿瘤标志物、激素、抗体等多种生物分子。

例如，在感染性疾病的诊断中，ELISA可以检测病原微生物的抗原或抗体，帮助医生准确判断病原体的种类和感染程度。

在肿瘤标志物的检测中，ELISA可以定量分析血液中特定蛋白质的浓度，从而判断肿瘤的存在和发展情况。

此外，ELISA还可以用于血液筛查、药物监测、食品安全等领域。

ELISA试剂盒的优点在于其灵敏度高、特异性强、操作简便、结果可靠等。

但同时也存在一些局限性，如可能受到样品中其他成分的干扰，需要对样品进行预处理等。

因此，在使用ELISA试剂盒进行实验时，需要仔细选择合适的试剂盒类型、优化实验条件，并结合其他检测方法进行确认。

ELISA试剂盒是一种重要的免疫学实验技术，具有广泛的应用前景。

通过了解其工作原理和应用领域，我们可以更好地理解和利用ELISA在生物医学研究和临床诊断中的作用，为疾病的早期诊断和治疗提供有力的支持。

ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测体内特定抗原或抗体的存在和浓度。

ELISA检测试剂盒是用于进行ELISA实验的组合套装，包括抗体或抗原、酶标记物、底物、缓冲液等。

本文将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，以帮助用户顺利进行ELISA实验。

1.准备实验材料：-ELISA检测试剂盒：根据实验需要选择适当的ELISA检测试剂盒，确保其在储存和运输过程中无损坏。

-样本：准备需要检测的样本，如血清、尿液、组织提取物等。

确保样本的质量和浓度满足实验要求。

-微孔板：根据试剂盒的要求选择合适的微孔板，同时注意其质量有无污染。

-基本实验设备：如计量器、洗板机、显微镜等。

2.实验步骤：-取出储存在4℃的试剂，确保其达到室温（一般为20-25℃），再根据实验步骤进行下一步操作。

-预处理样本：根据试剂盒的说明书，进行样本的预处理，包括稀释、纯化、稳定化等步骤。

-加样：将样本按照试剂盒要求的体积加入微孔板中，通常每个孔需要加入100-200μL的样品。

-洗板：使用洗板机或手工操作，将孔中的杂质洗净。

洗板时应注意洗涤缓冲液的使用浓度和洗涤次数。

-加入特异性抗体：根据试剂盒的说明书，将稀释好的特异性抗体加入各孔中，确保操作的准确性和每孔的稀释倍数。

-洗板：重复第4步的操作，将未结合的抗体洗净。

-加入酶标记物：根据试剂盒的说明书，将稀释好的酶标记物加入各孔中，确保加入的量准确无误。

-洗板：重复第4步的操作，将未结合的酶标记物洗净。

-加入底物：将稀释好的底物加入各孔中，使其与酶标记物反应，生成可视化的颜色。

-终止反应：根据试剂盒的要求，在一定的反应时间后，加入终止剂停止反应。

终止剂的选择需符合试剂盒的要求。

-检测结果：使用酶标仪或目视观察检测孔中的颜色变化，通过测量吸光度或颜色强度来确定样本中目标物的浓度。

3.数据分析：-计算样本的结果：根据试剂盒的说明书，根据吸光度或颜色强度测量结果，计算样本中目标物的浓度。

操作步骤1．取出试剂盒室温平衡30min，取出血样放至室温。

2．配标准品：取150uL标准品加入150uL标准品稀释液稀释，依次稀释5次。

3．加样：分别于各反应孔中加入标准品50uL，样品40UL，标准品做复孔，样品做3孔。

4．分别于样品孔中加入10UL抗体。

5．标准品和样品孔中分别加入50uL链酶亲和素-HRP，盖上封板膜,轻轻震荡混匀，37℃温育60min。

6．配洗涤液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

7．洗涤：小心揭开封板膜，弃去液体，甩干，每孔加200uL洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干。

8．显色：每孔先加入显色剂A 50uL，再加显色剂B 50uL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色6min。

9．终止：每孔加入终止液50uL，终止反应（此时蓝色立即转为黄色）。

10．测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度。

测定应在加终止液10min 之内进行。

22．保存结果，收拾桌面。

12．分析处理数据注意事项1. 取出板条前恢复到室温后再打开外包装袋，实验中不用的板条立即放回包装中，密闭封口，其余不用试剂应盖好。

2. 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。

3．实验板孔加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应孔的孵育时间一致。

4．洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。

5．试剂盒内试剂请在保质期内使用，不同批号试剂不要混用。

6．1000pg/ml以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。

大于1000pg/ml 的样品应以标准稀释缓冲液稀释后重做。

在结果分析时，结合考虑相应的稀释度。

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断小鼠小鼠（（MouseMouse））肿瘤坏死因子可溶性受体肿瘤坏死因子可溶性受体ⅠⅠ（TNFsR-TNFsR-ⅠⅠ）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ（TNFsR-Ⅰ）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ（TNFsR-Ⅰ）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

ELISA试剂盒检测过程中的注意事项ELISA的实验操作所要求的条件是比较严格的，无论是对实验的硬件条件还是对实验的操作人员的技术要求，都是如此。

下面所提到的就是一些在进行ELISA实验时所要注意的一些问题。

一、ELISA实验通用规则1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。

可用水和电子天平进行确定。

但最好有专业人员进行矫正。

2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。

吸取不同的液体后，要更换枪头。

即使是吸取标准品时。

3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。

4、实验时，要使底物避光保存。

5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。

6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。

8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。

也可以用酶标仪的晃动功能。

9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。

没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。

加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

12、底物是光敏感的，要在临用前现配。

13、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。

14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。

15、待检样品要澄清，否则会影响结果。

16、温浴时间应遵守试剂盒规定。

17、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。

18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。

二、下面所提到的是针对我公司的ELISA产品会出现的问题及解决办法1. 加入反应终止液后，没有吸光值或吸光值偏低。

a.原因：未加入酶标记物。

人白介素2可溶性受体α链（IL—2sRα/CD25）ELISA试剂盒简介说明中文简称：人白介素2可溶性受体α链（IL2sRα/CD25）ELISA试剂盒英文简称：IL2sRα/CD25）ELISAKIT特异性：HuIL2sRa；检测范围：62.5pg/ml～4000pg/ml；灵敏度：30pg/ml；标本用量：100ul/well；本试剂盒采纳双抗体夹心ELISA法的原理制备，适用于体外定量检测人血清、血浆、组织、体液或细胞培育上清液中的天然和重组的IL2sRa浓度。

白介素2（IL2）是通过结合多分子细胞受体复合物发挥生物活力的。

多年来，这个受体复合物被认为是由IL2Rα与IL2β两个糖蛋白链构成的，两个亚基相互结合在一起形成一个高亲和力受体来传递IL2信号的。

IL2Rα（也称为Tac抗原或CD25），是一个分子量为55kD跨膜糖蛋白，有351个氨基酸构成。

IL2β在1989年被克隆出来，它是个由575个氨基酸构成的跨膜糖蛋白，分子量为75kD，其中有286个氨基酸位于胞浆内，更显著地参加了细胞信号传导作用。

常认为它是IL2一种弱抑制剂。

在任何情况下，体液中增高的可溶性IL2Rα常跟随这T细胞与B细胞的加添与免疫系统的激活。

ELISA试验原理人白介素2可溶性受体α链（IL2sRα/CD25）ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素2可溶性受体α链（以下简称“A物质”）水平。

用纯化的A物质抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入A物质再与HRP标记的A物质抗体结合，形成抗体抗原酶标抗体复合物，经过彻di洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。

颜色的深浅和样品中的A物质呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中A 物质含量。

ELISA试剂盒构成人白介素2可溶性受体α链（IL2sRα/CD25）ELISA试剂盒包含：（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；（3）酶的底物；（4）阴性对比品和阳性对比品（定性测定中），参考标准品和掌控血清（定量测定中）；（5）结合物及标本的稀释液；（6）洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；（7）酶反应停止液，常用的HRP反应停止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的最后体积而异，在板式ELISA中一般采纳2mol/L。

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human Human））17-17-羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（17-OHCS 17-OHCS 17-OHCS））ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被17-羟皮质类固醇（17-OHCS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的17-羟皮质类固醇（17-OHCS）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

elisa试剂盒原理ELISA（又称酶连结免疫吸附试验）是一种常用的免疫分析研究手段，是一种用于检测特定抗原或抗体的生化分析方法，由分子生物学家Edward Kabat在1970年提出，通过酶连结表面抗原（ELISA）来检测抗原特异性抗体，可以在几小时内检测得到大量特异性抗体，目前ELISA试剂盒在生物化学、分子生物学、药物研究、免疫学以及肿瘤等学术研究中以及临床上发挥着重要的作用。

ELISA仪器可以检测出抗原特异性抗体，有两种形式，沉淀式和双抗原ELISA。

沉淀式ELISA试剂盒利用抗原结合试剂盒中的特异性抗体，将抗原特异性抗体沉积在反应物磁珠或磁芯上，这种方法通常用于特定的病毒检测。

双抗原ELISA试剂盒中，两种特异性抗体分别结合在抗原特异位点上，由于它们之间的特异性结合，使抗原结合试剂盒的两种特异性抗体的吸附形成一个特异性抗体复合物，这种方法通常用于细胞因子的检测。

ELISA试剂盒的原理是，当被检测物质被抗体识别时，抗体可通过两种方式与目标物质结合，一是特异性结合，二是特异性抗体-受体结合（一种特殊的蛋白质-蛋白质相互作用）。

当特异性结合或抗体-受体结合发生时，抗体与特定抗原的结合会形成一个复合物，这个复合物可与另一种特定的抗体结合能力非常弱，把特定抗原与第二种特异性抗体结合在一起形成一个抗原复合物，从而形成一个复合体。

ELISA试剂盒有两种，一种是发光ELISA（FELISA），另一种是酶标ELISA（ELISA），原理是将一种特定抗体和一个特定抗原结合后，形成一个抗原-抗体复合物，再加上酶，并利用酶的活性将反应物矿化，产生定量的发光信号，来检测与抗原结合的抗体的数量。

酶标ELISA依赖于特定的色素，将抗原及抗原特异性抗体复合物标记在特定的位置，然后加入能够将特定的色素变色的酶，最终可以根据变色程度来判别待检样本是否携带抗原。

ELISA试剂盒有三个主要部分，即抗原、特异性抗体和酶，各种ELISA试剂盒可以检测出不同的抗体和抗原，比如病毒抗原特异性抗体、细胞因子以及艾滋病抗原等抗体，ELISA试剂盒在检测用途、研究和临床诊断上都有不错的效果。

ELISA套装试剂盒说明书产品编号：SEKF-105仅供科研使用产品描述Solarbio ELISA套装包括进行ELISA实验的主要试剂，可作为Solarbio ELISA试剂盒的补充试剂，也可用作实验室ELISA实验的辅助试剂。

※本试剂盒中所有试剂一旦开封，请在一个月内使用，以免对实验结果产生影响。

试剂使用方法在实验前30 min将试剂盒放置于室温下，浓缩洗涤液如出现结晶，请放入37℃温浴，直到结晶全部溶解。

1．包被液用双蒸水将10x的包被液稀释成1x的应用液，将包被抗体用1x的应用液稀释成需要的浓度，进行ELISA包被。

2．封闭液即用型试剂。

用于封闭已包被抗体的ELISA酶标板，封闭后的酶标板可立即使用，也可干燥后4℃密封保存。

封闭后的酶标板使用前用1x洗液将酶标板洗涤3次。

3．通用稀释液即用型试剂。

用于标准品、样本、检测抗体的稀释。

特殊样本的稀释液请咨询本公司，或以客户自己实际实验为准。

4．洗液用双蒸水将20x的浓缩洗液稀释成1x的应用液。

用于ELISA实验中的洗板。

5．显色剂即用型试剂。

用于ELISA实验的显色步骤。

6．终止液即用型试剂。

用于ELISA实验的终止步骤。

终止时间控制在5min之内。

注意事项1．试剂盒应在有效期内使用,请不要使用过期的试剂。

2．试剂盒未使用时应保存在2-8℃冰箱。

3．试剂盒使用前请在室温恢复30 min,且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。

4．为避免交叉污染,请在试验中使用1次性试管,枪头,封板膜及洁净塑料容器。

5．不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外）安全提示试剂盒中的终止液为酸性溶液，操作人员在使用时请带上手套并注意防护；在操作过程中也要避免试剂接触皮肤和眼睛,如果不慎接触,请用大量清水清洗。