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高效液相色谱法测定栀子中栀子甙的含量
赵雪晶 （哈尔滨三乐生物工程有限公司，黑龙江哈尔滨１５００００） 摘要：现代药理研究表明栀子具有镇静、降压、凝血、抑制胃酸、泻下等作用。建立反相高效液相色谱法测定栀子中栀子甙的含量。方 法：采用奥泰公司Ｃ１８色谱柱（２２０ ｍｍ×４．６ｍｍ，５ ｍ），水一乙腈（８５：１５）为流动相，检测波长为２３８ｎｍ，流速为１．０ｍｌ／ｍｉｎ，柱温为 ３０￣（２。栀子甙在５～５ＯＩＸｇ・ｍＬ 范围内呈良好的线性关系。栀子甙平均回收率分别为９９．８％。结论：本法简便、准确，可用于栀子中栀子甙 的含量测定。 关键词：栀子；含量；测定 栀子别名黄栀子、黄果树、山栀子、红枝子、山栀、白蟾，是茜草 科植物栀子的果实。栀子具有护肝、利胆、降压、镇静、止血、消肿等 作用㈣。栀子的果实是传统中药，属卫生部颁布的第ｌ批药食两用 资源。栀子常用于治疗黄疸型肝炎、扭挫伤、高血压、糖尿病等症［３－６］。 《本草通玄》记载：“仲景多用枝子茵陈，取其利小便而蠲湿热也。古 方治心痛，每用枝子，此为火气上逆，不得下降者设也。（若）泥丹溪之 说，不分寒热，通用枝子，属寒者何以堪之。”栀子含有去羟栀子甙泊 素一１一葡萄糖甙、栀子素、藏红花素、格尼泊素一１一Ｂ—Ｄ一龙胆二糖 甙等。现代药理研究表明栀子具有镇静、降压、凝血、抑制胃酸、泻下 等作用。本实验采用高效液相色谱法对栀子中的栀子甙的进行了含 量测定。 １仪器与试药 １．１仪器：ＳＰＥＣＯＲＤ２５０ ＰＬＵＳ紫外可见分光光度计（德国耶拿 分析仪器股份公司）；ＦＡ１００４万分之一分析天平（上海书培实验设 备有限公司）；赛多利斯ＰＢ一１０酸度计（北京晨曦勇创科技有限公 司）；博翔兴旺８０ＫＨＺ高频超声波清洗机（北京博宇宝威实验设备 有限公司）；莱伯泰科ＬＣ６００高效液相色谱仪（北京莱伯泰科仪器股 份有限公司）；Ｒ一２１０瑞士ＢＵＣＨＩ旋转蒸发仪ｆＪ一州尚准仪器有限公 司）；ＨＱ一５０高端试剂级超纯水机（郑州华新电气公司）。 １．２色谱柱：奥泰公司ｃ 色谱柱（２２０ ｍｍ×４．６ｍｍ，５ＩＸｍ）。 １．３对照品：栀子甙 １．４试剂：甲醇（金坛市金冠化工厂）、乙腈（天津市顺呈化工有 限公司）、三乙胺（济南鸿鑫化工有限公司）、磷酸（金坛市金冠化工 厂）、醋酸铵（济南润尔特化工有限公司）。 １．５试药：栀子 ２测定方法确定 ２．１色谱条件 依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：水一 乙腈（８５：１５）为流动相，检测波长：２３８ｎｍ，流速：１．０ｍｌ・ｍｉｎ～。柱温： ３０￣Ｃ。理论板数按栀子甙峰计算应不得低于２０００。 ２．２对照品溶液的制备 精密称取栀子甙对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每 ｌｍＬ含２０ ｇ的溶液，即得。 ２．３供试品溶液的制备 取供试品粉碎，精密称取（相当于栀子甙２００ ｇ），置具塞锥形 瓶中，精密加入流动相１０ｍＬ，密塞，精密称定重量，超声处理２０分 钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，摇匀，滤过。取续滤液，即 得。 ２．４精密度试验 精密称取栀子甙对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为 ２Ｏ ｇ・ｍＬ－ 的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取１Ｏ ｌ，连续 进样６次，记录峰面积。结果，ＲＳＤ＝０．５５％，表明本方法精密度良好。 ２．５对照品的线性考察 精密称取适量栀子甙对照品，加人流动相溶液使溶解分别配制 成每毫升含５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０微克的溶液。分别精 密上述溶液吸取ｌ０ Ｌ，注人液相色谱仪，依照２．１项下的色谱条件 测定，记录色谱峰。以峰面积 ）为纵坐标，对照品进样量㈤为横坐 标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，栀子甙在５～５０ ｇ・ ｍＬ－ 范围内呈良好的线性关系。 ２．６重现性试验 称取同一批的栀子样品６份，按测定方法项下的方法制备供试 品溶液，测定含量，并计算样品的ＲＳＤ值，结果ＲＳＤ为０．６３％，结果 表明此方法的重现性良好。 ２．７准确度试验 取对照品适量，分别添加供试品中，含量分别相当于标示量的 １２０％、１５０％、１８０％。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计 算回收率为９９．８％，ＲＳＤ为０．５２％。 ２．８样品稳定性试验 取同一批栀子样品，按２＿３项下的供试品制备方法制备供试品， 将供试品置室温下放置，分别于第０、１、２、３、４、５、６小时，精密吸取 供试品溶液ｌＯ 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定栀子中栀子 甙的ＲＳＤ＝Ｏ．６３％。结果表明供试品６小时内稳定。 ２．９样品含量测定 依照上述含量测定方法，测定栀子三批样品中栀子甙的含量， 结果三批样品的含量分别为１．９％、２．Ｏ％、１．９％。 ３讨论 ３．１流动相的选择 分别考察水一甲醇一磷酸（４０：６０：０．０１），水一甲醇一乙腈一磷 酸（５０：１０：４０：０．０１），０．１％醋酸铵溶液一甲醇（８０：２０），水一甲醇一乙 腈（５０：１０：４０），甲醇一水一三乙胺（７０：３０：０．２），水一乙腈（８５：１５）不 同比例的流动相，结果以水一乙腈（８５：１５）为流动相为流动相，供试 品各峰分离效果最好，故选用水一乙腈（８５：１５）为流动相为流动相。 ３．２检测波长的选择 制备栀子甙对照品稀释液照紫外一可见分光光度法（中国药典 ２０１０版一部附录Ｖ Ａ），于１９０～９００ｎｍ波长范围内进行全波长光 谱扫描，记录吸收光谱。在２３８ｎｍ处有最大吸收峰，故选用２３８ｎｍ 为检测波长【１１。 本实验表明此方法分离效果好、方法简便、快捷、准确，、专属性 好，可用于栀子中栀子甙的含量测定。 参考文献 【１】李利娟，李宏霞，吴欣桐，鄢波，周东．栀子甙对血管性痴呆大鼠行为 学和脑组织病理改变的影响『Ｊ】．四川大学学报（医学版），２００９（４）． 【２】杨奎，闵志强，石娅萍，向靓，蒙亚江，邬春久，黄薇，唐波．栀予总环烯 醚萜苷对脑出血大鼠炎症反应与神经元凋亡的影响［Ｊ］．中药新药与 临床药理。２００９（１）． 【３］任强，孙丽华，刘新民，刘春雨，权丽辉，谢忱，廖永红．栀子的化学成 分及抗白血病活性研究『Ｊ１．广东药学院学报，２００９（２）． 『４】刘益华，李晶，林曼婷，周海虹，陈少东．栀子有效成分栀子苷的现代 研究进展『Ｊ１．中国药学杂志，２０１２（６）． 【５】丁嵩涛，刘洪涛，李文明，李秀英，于超．栀子苷对氧化应激损伤血管 内皮细胞的保护作用『Ｊ］．中国药理学通报，２００９（￣． 【６】李宝莉腾雅慧，杨暄＇古月锐，方志远，袁秉祥．栀子油的提取和对中枢 神经系统的作用『Ｊ］．第四军医大学学报，２００８（２３）．
RP—HPLC测定栀子中栀子苷的含量
[摘要] 目的 测定栀子中栀子苷的含量。方法:采用岛津-ODS-C18色谱柱(150 mm×4．6 mm，5μm)，流动相：乙腈-1％醋酸水溶液（15:85，v/v），流速：1．0 ml／min，检测波长：238 nm，柱温：室温，进样量：20μl 。 结果：
结论：
[关键词] 栀子、栀子苷、含量测定、柱色谱法、反相高效液相色谱法
中药栀子为茜草科植物栀子Gardenia 一minoides Ellis的干燥成熟果实，具有泻火除烦，清热利尿，凉血解毒之功效，为临床常用中药[1]。其主要活性成分为环烯醚萜苷类《中国药典}2005年版I部 对栀子药材中栀子苷的含量进行了测定并规定了限度。在文献报道中，也多参照药典的方法来测定栀子苷含量[2]。本实验采用RP—HPL测测定栀子中栀子苷的含量。
1 仪器与试药
1．1 仪器 层析柱（3㎝内径玻璃柱）；减压旋转蒸发仪；真空干燥箱；高效液相色谱仪（岛津）；电子分析天平
1.2 试药 栀子（江西产）；D101型大孔吸附树脂；栀子粗提物溶液和环烯醚萜苷类有效部位粉末；栀子苷对照品（纯度>98％）。
试剂 95％乙醇；醋酸（分析纯）；去离子水；乙腈（色谱纯）。
2 方法和结果
2．1 栀子中环烯醚萜苷类成分的提取及柱色谱法分离纯化
2．1．1 提取
干燥栀子苷药材100g置于1000ml烧杯中，加50％乙醇600ml，80℃回流提取2小时，过滤，滤渣再加50％乙醇500ml于80℃回流提取2小时，再过滤，合并滤液，40℃减压旋转蒸发回收溶剂，浓缩至120ml，离心除去沉淀，得到含有栀子环烯醚萜苷的提取液。留10ml浓缩提取液作为下次实验的样品，其余用于柱色谱分离纯化。
2.1.2 柱色谱分离纯化
2.1.2.1 大孔吸附树脂预处理
树脂用95％乙醇浸泡4小时，然后用乙醇淋洗，至流出液在试管中用水稀释不浑浊为止，最后用水反复洗地至无明显乙醇气味后即可使用。
HPLC法测定江西栀子中栀子苷含量研究
廖夫生;侯永春
【摘 要】用HPLC法测定了江西栀子中栀子苷的含量。色谱柱：Kromasil C18柱（250 mm×416 mm,5μm）;流动相：乙腈-水（15∶85）流速：1.0 mL.min-1;检测波线性长：238 nm;柱温：30℃。结果：栀子苷进样浓度在6.4～32.0μg.mL-1范围内线性关系良好,线性方程为Y=29.802X＋3.75（r=0.9996）,平均回收率为为98.3%。江西不同产地的栀子中栀子苷含量范围在2.9%～3.8%,高于2010版药典规定。%The determination of jasminoidin in Gardenia
jasminoides Ellis from Jiangxi was studied by HPLC.The conditions were
Kromasil C18 analyticalcolumn（250 mm×416 mm,5 μm）,mobile phase
consisted of acetonitrile-water（15：85）at a flow rate of 1.0
mL·min,detection wavelength was 238 nm and the column temperature
was 30 ℃.The method had good liear relationship in the ranges of 6.4～32.0 μg·mL-1 for jasminoidin（r=0.9996）.The average recoveries were
98.3%.The assay of jasminoidin in Gardenia jasminoides Ellis from Jiangxi
were 2.9%～3.8%.
【期刊名称】《广州化工》
【年(卷),期】2011(039)022
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RP-HPLC法测定栀榆洗剂中栀子苷含量
作者：许庆 荀秀彪 肖植国
来源：《医学信息》2020年第14期
摘要：目的; 建立反向高效液相色谱法（RP-HPLC）测定栀榆洗剂中栀子苷的含量。方法;
采用反相高效液相色谱法进行测定，色谱柱为十八烷基键合硅胶柱（Agilent Eclipse pius C18色谱柱，4.6×250 mm，5μm）;流动相为甲醇-水（5∶95）进行梯度洗脱，流速为1.0 ml/min;色龙源期刊网
谱柱温：30 ℃;检测器检测波长：238 nm。结果; 栀子苷浓度在22.4～168.0 μg/ml时与峰面积呈良好线性关系，r=0.9999，平均回收率为97.44%（RSD为1.27%）。结论; 本次建立的方法准确、快速、简便可靠，结果稳定，可用于栀榆洗剂中栀子苷的含量测定。
关键词：栀榆洗剂;栀子苷;高效液相色谱法
中图分类号：R29; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ;文獻标识码：A; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ;DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.14.059
文章编号：1006-1959（2020）14-0177-03
Determination of Jasminoidin in Zhiyu Lotion by RP-HPLC
XU Qing，XUN Xiu-biao，XIAO Zhi-guo
（Qujing Food and Drug Inspection and Testing Center，Qujing 655000，Yunnan，China）
Abstract：Objective; To establish a reverse high performance liquid chromatography （RP-HPLC） method for the determination of jasminoidin in Zhiyu lotion.Methods; The chromatographic
