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鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验作业指导书1、血凝试验1.1 材料与试剂1.1.1 器材：普通天平、分析天平、普通离心机、微型振荡器、煮沸消毒器、冰箱、高压灭菌器、微量移液器、滴头、96孔V 形血凝反应板。
1.1.2 pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS)配制方法参见附录A。
1.1.3 1%鸡红细胞悬液配制方法参见附录B。
1.1.4标准新城疫病毒抗原、购入的标准新城疫病毒应检测其血凝效价并进行无菌检验，以检查与所标HA效价是否相符。
若不符，应重复检测并到相关实验室验证。
2、血凝试验操作程序2.1 血凝试验操作程序如下：2.1.1 取96孔V形微量反应板，用微量移液器在1孔-12孔每孔加0.025mLPBS；2.1.2 吸取0.25mL病毒悬液加入第1孔中，吹打3次-5次充分混匀；2.1.3 从第1孔中吸取0..25mL混匀后的病毒液加到第2孔，混匀后吸取0.025mL加入到第3孔，依次进行系列倍比稀释到第11孔，最后从第11孔吸取0..25mL弃之，设第12孔为PBS对照；2.1.4 每孔再加入0.25mLPBS。
2.1.5 每孔均加入0.25mL体积分数为1%鸡红细胞悬液；2.1.6 振荡混匀反应混合液，室温20℃-25℃下静置40min 后观察结果，若环境温度太高，放4℃静置60min,PBS对照孔的红细胞成明显的纽扣状沉到孔底时判定结果。
2.2 结果判定2.2.1 在PBS对照孔出现正确结果的情况下，将反应板倾斜，观察红细胞是否完全凝聚。
以完全血凝的病毒最大稀释度为该抗原的血凝滴度。
完全凝集的病毒的最高稀释倍数为1一个血凝单位（HAU）。
2.2.2 如果没有血凝活性或血凝效价很低，则采用SPF鸡胚用初代分离尿囊液继续传两代，若仍为阴性，则认为新城疫病毒分离阴性。
2.2.3 对于血凝试验呈阳性的样品应采用新城疫标准阳性血清进一步进行血凝抑制试验。
3、血凝抑制试验3.1 材料与试剂3.1.1 器材同1.1.1.3.1.2 试剂同1.1.2.3.1.3 标准抗NDV血凝抑制抗体（血清）。
鸡新城疫血凝（HA）及血凝抑制(H1)试验（一）目的意义：1.掌握血凝试验（HA）与血凝抑制试验（HAI）的基本方法；2.了解HA与HI在新城疫病毒及其它病毒诊断和鉴定中的应用。
(二)基本原理：许多病毒表面具血凝素，具有凝集某些动物或人红细胞的特性，称为血凝现象，可用于鉴定病毒。
血凝现象可以被特异性抗体所抑制，称为血凝抑制现象，利用这种特性可进行血清学试验，称为血凝抑制试验。
（三）器材及试剂:待检病毒:鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液；待检血清：抗鸡新城疫病病毒阳性血清；生理盐水、1%鸡红细胞、96孔V形微量血凝板、加样器等。
（四）实验步骤：一、血凝试验（HA）取96孔板，按以下步骤操作：1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul，第二排1-12孔加生理盐水50ul 为红细胞对照；2、吸50ul病毒液于第一排第1孔，混匀后取50ul至第2孔，依次稀释至第12孔，弃去50ul，各孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1~2-12 。
3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微型震荡器震荡2min混匀。
4、室温静置10-30分，观察结果（见下表）。
5、结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数，作为病毒的血凝价，即HI 效价，用2n表示。
二、血凝抑制试验（HI）取一96孔板，按以下步骤操作：1、4个单位抗原的制备：按HA试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素的稀释度。
2、待检血清的稀释：第一、二、三排1-12孔各加生理盐水50ul，于第一排第1孔中加入50ul待检血清，反复吹吸3-5次混匀后，取50ul至第2孔混匀，吸取50ul至第3孔，依次稀释至第12孔，弃去50ul，经倍比稀释，血清的稀释倍数为21~212 。
3、第一、二排1-12孔各加4个单位血凝素50ul，微量震荡器震荡2min混匀；4、室温静置20min；5、第一、二、三排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微量震荡器震荡2min混匀混匀。
![血凝和血凝抑制实验[1]..](https://img.taocdn.com/s1/m/a03bb264fe4733687e21aa4a.png)
鸡新城疫病毒的红细胞凝集试验和凝集抑制试验操作方法摘要：NDV是引起新城疫的病原体，新城疫又叫亚洲鸡瘟。
本病具有高度的传染性，发病急，致死率高。
对养禽业发展构成了严重威胁，是世界养禽业最重要的疾病之一。
为有效地控制新城疫病毒，对21日龄的1000雏鸡注射鸡新城疫灭活苗进行免疫，并对其抗体效价进行监测。
红细胞凝集试验和凝集抑制试验是监测鸡新城疫免疫状态的一种简便，快捷，经济的血清学方法。
次试验可作为监测鸡群免疫效果，疫苗使用效果和制定合理免疫程序的依据。
关键词：鸡新城疫抗体效价监测试验为掌握病毒的红细胞凝集试验和凝集抑制试验的操作方法，对21日龄的1000只雏鸡注射了鸡新城疫灭活苗后9天，进行随机抽样检查。
作HI抗体滴度的测定，操作方法如：1.原理:NDV一个很重要的生物学特性就是能吸附于鸡，火鸡，鸭，鹅及某些哺乳动物（人，豚鼠）的红细胞表面，并引起红细胞凝集，而这种血凝现象能被NDV的抗体的抑制。
2.器材：2---5mL注射器、离心管、离心机、试管架、生理盐水、鸡新城疫疫苗弱毒Ⅳ系、1％鸡红细胞悬液。
3.操作步骤：①红细胞悬液的制作（0.7—1﹪）浓度低反应时间越长。
阿氏液：血液=1：1 肝素：血液=1：10取2mL阿氏液加2mL成年鸡血液于离心管中摇匀，放入离心机1500rPm,5min.吸取上清液及上层白细胞后加适量生理盐水混匀离心，重复三次，用生理盐水配成1﹪浓度。
②HA孔号(uL) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12生理盐水50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50}↘}↘}↘}↘}↘}↘}↘}↘}↘}↘}↘50鸡新城疫病毒50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50红细胞50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50振荡器上振荡1—2min. 18℃--22℃作用15min后观察结果。
结果# # # # # # # + ————结果表示病毒液的HA效价为27 ，HI时病毒Ag液50uL内须含4个凝集单位，测病毒Ag液作32倍稀释。
泰安市山农大药业有限公司血凝和血凝抑制试验随着养殖业的飞速发展和广大养殖户科学意识的不断提高，人们普遍认识到实验室检测技术在临床应用的重要性。
下面简单介绍一下鸡新城疫微量血凝试验和血凝抑制试验的注意事项及操作方法。
应用：用于新城疫、产蛋下降综合征和传梁性支气管炎等的母源抗体的检测、雏鸡首免日龄的确定、疫苗免疫后的免疫应答的监测、临床鸡病的鉴别诊断等。
下面以新城疫病毒为例，介绍血凝和血凝抑制试验的方法：注意事项：一、样本要具有代表性：所采样本要能代表整体，通常采用四角加中间的随机取样法，并且确定适当的样品数量，一般1000只以下的鸡群采样率在2～5%；5000只以下1～2%；5000只以上0.5～1%。
对产蛋期间的鸡群可采鸡蛋；对雏鸡或青年鸡，可采血。
方法是：取青霉素小瓶，洗净后用蒸馏水冲洗、控干水分，并注意不要用消毒剂，以免影响结果。
每只鸡采血量在1ml左右，最好不低于1ml，在室温下静置至血清自然析出。
二、四单位抗原的准确性：要获得准确的监测效果，先做红血球的凝集试验，即测得抗原的血凝价，尔后前移2孔作为四单位抗原的稀释度。
三、红血球洗脱的充分性：原则上，新城疫检测所用的红血球应来源于非疫苗免疫过的健康公鸡，但实际上却多采用免疫过疫苗的健康公鸡，有时甚至是病鸡。
因此，对红血球的洗脱的次数要多、要充分，并注意转速和时间，通常采用五次变速离心法：前四次为每分钟1500转，每次5分钟，最后一次为每分钟3000转，持续7～8分钟。
另外，洗红血球过程中，应注意动作要轻，玻璃仪器之间尽量减少碰撞，以免造成红血球破裂而影响结果。
四、结果判定的及时性：检测中，每次试验均应设抗原与生理盐水对照，加入红血球后，每隔5分钟观察一次，一旦两列对照孔图像清晰地显示出来时，应立即对样本进行结果判定，过早过晚都会影响判定结果的准确性。
血凝与血凝抑制试验的操作方法一、材料与仪器：新城疫抗原、1%鸡红血球、抗凝剂、生理盐水、被检血清、离心机、吸管、滴管、洗耳球、烧杯、量筒、注射器、长针头、96孔V型医用血凝板、微量移液器、微量振荡器、恒温培养箱、冰箱等。
鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法1．本次实验的目的和要求掌握鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。
2．实验内容或原理某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象(HA)。
这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验(HI)。
3．需用的仪器或试剂等动物健康成鸡2-5只，被检鸡15-25只。
器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025mm微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。
药剂（1）浓缩抗原；（2）生理盐水或磷酸缓冲盐水（PBS）；（3）Alsever细胞保存液；（4）红细胞悬液；（5）待检血清4．实验步骤(1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。
(2)诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体效价有4倍以上升高，即有诊断意义。
（3）免疫机体抗体效价的测定：3.鸡新城疫（ND）的HA和HI（1）试验准备①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原，进行试验。
② 0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂)内，迅速混匀。
如当时不用，可直接采血放入红细胞保存液内(保存液2份，血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。
红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000转／分钟，离心5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。
再用离心机3000转／分钟离心5-10分钟，弃上清，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液(0.7毫升红细胞泥加99.3毫升稀释液)。
鸡新城疫血凝（HA)和血凝抑制(HI）抗体水平测定法1．本次实验的目的和要求掌握鸡新城疫血凝（HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。
2．实验内容或原理某些病毒（如新城疫病毒,禽流感病毒等）能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象（HA)。
这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验（HI）。
3．需用的仪器或试剂等动物健康成鸡2-5只,被检鸡15—25只.器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0。
025mm微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。
药剂（1)浓缩抗原;（2）生理盐水或磷酸缓冲盐水（PBS）；（3）Alsever细胞保存液;（4）红细胞悬液;(5）待检血清4．实验步骤（1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。
（2）诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体效价有4倍以上升高,即有诊断意义。
（3)免疫机体抗体效价的测定：3。
鸡新城疫(ND）的HA和HI（1）试验准备①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原,进行试验。
② 0.7%细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂）内，迅速混匀.如当时不用,可直接采血放入红细胞保存液内(保存液2份,血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。
红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000转／分钟，离心5—10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水）洗涤。
再用离心机3000转／分钟离心5-10分钟，弃上清,再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液（0。
7毫升红细胞泥加99.3毫升稀释液）。
③被检血清:将被检鸡群编号登记,用消毒过的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内（微量法可用孔径2-3毫米塑料管由翅静脉采血),在室温中静置或离心，待血清析出后使用.每只鸡应更换一个注射器，严禁交叉使用。
④稀释液：为灭菌的生理盐水。
⑤红细胞保存液的配制方法：葡萄糖2。
05克，柠檬酸钠(SHOO)0。
80克，柠檬酸（2H20)0。
055克,氯化钠0.42克，蒸馏水加至100毫升。
过滤分装，高压灭菌10分钟，放4℃冰箱保存。
(2）红细胞凝集试验（HA）主要是测定病毒的红细胞凝集价，以确定红细胞凝集抑制试验所用病毒稀释倍数（抗原单位)。
鸡新城疫病毒的HA试验与HI试验现采用微量法，以u或v形微孔塑料板代替试管。
①首先用移液器向每个孔加入稀释液一滴（0.05毫升）。
②用微量移液器取病毒抗原0。
05毫升，加入第一孔，反复抽动6次后,吸出0.05毫升加入第二孔，在第二孔反复抽动6次后，吸出0.05毫升加入第三孔，如此连续稀释至第十一孔后吸出0.05毫升弃去。
第12孔不加病毒液为红细胞空白对照。
判断:沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动,说明红细胞被病毒所凝集.如上例:病毒液的HA效价以出现完全凝集的抗原最大稀释度为准.HI试验时，病毒抗原液为0.05毫升内须含4个凝集单位,则应将原病毒液作成64／4=16倍的稀释液.注意:+++为完全凝集++为部分凝集—为不凝集（3）红细胞凝集抑制试验(HI试验）：新城疫病毒凝集红细胞的作用，能被特异性抗体抑制,因此,可用HI试验（简称血凝抑制试验）测定鸡血清中的HI抗体效价（滴度），并可用标准血清，作新分离病毒的鉴定与未知病毒的诊断。
微量法:具体操作如下：①用移液器向每孔加0。
05毫升稀释液，十一孔加0.1毫升。
②用移液器吸取被检血清（或高免卵黄抗体）0。
05毫升注入第一孔，抽放6次后，吸出0。
05毫升，注入第二孔，如此连续稀释至第10孔，并从第十孔吸出0.05毫升弃去，血清稀释倍数依次为1:2～1024，11孔和12孔空白.③每孔再加入已标定好的四单位病毒液0。
05毫升，第十一孔为红细胞对照孔，不加病毒液。
④置振荡器上振荡1-2分钟,放18～22℃静置20分钟.⑤每孔再加入0.7%红细胞悬浮液0。
05毫升，放振荡器上振荡l-2分钟，置18-22℃，30—60分后判定结果.⑥第十一孔为红细胞对照孔,第十二孔作为抗原对照孔.结果观察:将反应板倾斜成45℃角，沉于管底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集;如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层,倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集.能将4单位病毒物质凝集红细胞的作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的红细胞凝集抑制效价，用被检血清的稀释倍数或以2为底的对数（log2）表示.如上例，该血清的红细胞凝集抑制效价为1：64或HI效价为6（log2）。
第十一孔仅含稀释液和红细胞为不凝集对照孔，第十二孔含稀释液，病毒液和红细胞为凝集对照孔。
结果分析如下:①一般认为鸡的免疫临界水平为1：8(成年)或1:16（雏鸡），但随地区不同而有差异.②鸡血清的HI抗体效价高于1:16时可适当推迟新城疫免疫的时间,HI抗体效价在1：16以下，须马上进行新城疫疫苗接种,在新城疫流行的地区或鸡场,鸡的免疫临界水平，应再提高.③鸡群的HI抗体水平是以抽检样品的HI抗体效价（1og2）的平均值表示的.如果某鸡群的10份样品中，HI抗体效价为8的有3份样品，为7的有5份样品，为6的有2份样品,它们的平均值为：平均水平在4（log2）,说明该鸡群为免疫鸡群。
若在检样中HI抗体效价的最高值与最低值相差太大时,则不能用上法计算平均水平，应根据临界水平以下的样品数在全部样品中所占的百分比决定免疫与否。
④大型养鸡场，每次进行抽测时，抽样率一般不低于0。
1％～0.5％，小型鸡群,抽样率应有所增加，一般认为理想的抽样率应为2%.⑤鸡群接种新城疫疫苗后,经2～3周测血清中的HI抗体效价，若提高2个滴度以上，表示鸡的免疫应答良好,疫苗接种成功；若HI抗体效价无明显提高，表示免疫失败。
附注：①采用HA试验对各生物药厂生产的新城疫疫苗产品有质量检测作用。
②采用HI试验对各厂家生产高免血清及卵黄抗体有质量检测作用。
实验二兔有机磷中毒的诊断和治疗1、本次实验的目的和要求掌握有机磷中毒的诊断要点熟悉有机磷中毒的简易检验方法。
了解有机磷中毒的解毒原理和治疗措施。
2．实验内容或原理1.阿托品(Atropinum）抗胆碱药原理:通过阻止乙酰胆碱和受体的结合而产生抗胆碱作用.但有机磷中毒病畜对阿托品的耐受性较高,故需用常规剂量的2（牛)～4（羊）倍。
2。
氯磷定（Pyraloximi Methyl—Chloriaum,PAM-CL或2-PAMCL)为胆碱酯酶复活剂。
原理：能与磷酰化胆碱酯酶中的有机磷结合,使胆碱酯酶释放并恢复其水解乙酰胆碱的活性；还能直接与有机磷结合为无毒物质排出体外。
3．需用的仪器或试剂等动物:有机磷中毒病例，或用试验动物（猪或兔）做人工病例复制。
器材：测瞳尺、磁反应板、磁蒸发皿、乳钵、分液漏斗、分液漏斗架、离心机、培养皿、玻璃容器、量筒、棕色玻璃、玻棒、微量吸管、25ml滴管、注射器、针头、听诊器、体温计、定性滤纸、新华滤纸、试纸、纱布、脱脂棉、剪刀、解剖器械、载玻片、皮筯等。
药物试剂:氯仿、氯化乙酰胆碱、溴麝香草酚蓝、无水乙醇、干燥马血消化、饱和溴水、0。
4mol/L氢氧化钠液，二氯甲烷、酒石酸、苯、三氯醋酸、无水硫酸钠、弗罗里矽士、丙硐、石油醚、蒸馏水、注射用水、精制敌百虫、0。
5％硫酸阿托品、氯磷定、解磷定、双复磷、碘酊棉、酒精棉等。
4．实验步骤一、诊断要点（一）流行病学调查（二)生前症状：主要为胆碱能神经受过量乙酰胆碱的作用所引起的过度兴奋现象。
出现以下三类症候群。
1.草蕈碱样症状2。
烟碱样症状3.中枢神经症状（三）有机磷检验1.检品的采取和处理2.有机磷检验法(1)酶化磷检验法（2）B。
T.B全血试纸片法（四）病理变化二、治疗措施具体方法为:①静脉注射阿托品1/3量的2%溶液以迅速取得效果；②皮下注射阿托品2/3量的生理盐水溶液以取得持续效果；③分点皮下注射氯磷定或其他胆碱酯酶复活剂的生理盐水溶液。
必要时重复使用.1。
阿托品(Atropinum）抗胆碱药。
2.氯磷定(Pyraloximi Methy Chloriaum，PAM-CL或2—PAMCL）为胆碱酯酶复活剂.3。
解磷定(Pyraloximi Methiodidum，PAM）胆碱酯酶复活剂。
4.双复磷(Toxogoninum，DM O-4）亦为胆碱酯酶复活剂。
5．教学方式讲述与实验6．考核要求实验报告7．实验报告要求1.有机磷中毒的诊断要点有哪些?2。
治疗在机磷中毒的最好方案是什么？其理论基础何在?实习三禽霍乱（禽巴氏杆菌病)诊断技术(综合性)（三个实验计9学时）1．本次实验的目的和要求（1）观察家禽巴氏杆菌病的临诊表现和病理解剖变化（2）掌握禽巴氏杆菌病的微生物学诊断方法2．实验内容或原理根据典型症状和病变，以及在显微镜下检查组织涂片发现的两极染色的杆菌,可初步诊断本病。
但确诊应依靠病原分离鉴定，病原分离鉴定原理为革兰氏染色法.3．需用的仪器或试剂等动物：鸡、小白鼠器材：外科镊子、外科剪、灭菌纱布、载玻片、糖发酵管等。
药品:草酸铵结晶紫、革兰氏碘、碳酸复红、瑞特氏染液、美蓝染液、棉拭子、接种环、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、甘露醇、鼠李糖、戊醛糖、纤维二糖、绵子糖、菊糖、赤藓糖、戊五醇、M-肌醇、水杨苷。
胰蛋白酶、L—胱胺酸、琼脂粉、酚红。
4．实验步骤一、临床症状和病理变化⒈症状（1）急性症状：描述（2）慢性症状:描述⒉病理变化：描述二、微生物学诊断⒈抹片的制备用镊子夹持病变组织肝或脾,然后以灭菌剪刀剪取小块,夹出后将其新鲜切面在载玻片上压印或涂抹成薄层；若取血液，用灭菌剪刀剪开心脏进行蘸取或剪取凝血块，用新鲜切面在载玻片上压印或涂抹成薄层。
自然干燥.将干燥好的抹片，涂抹面向上,以其背面在酒精火焰上来回通过数次，略作加热进行固定。
⒉革兰氏染色法固定好的抹片上滴加草酸铵结晶紫色液，染色2min→水洗+加革兰氏碘溶液于抹片上媒染2min→水洗→加95％酒精于抹片上脱色1min→水洗→加稀释碳酸复红复染30s→水洗→吸干→镜检。
巴氏杆菌为革兰氏阴性球杆菌或短杆菌，单个或成对存在，常有荚膜.⒊其他染色法甲醇固定，瑞特氏或美蓝染色呈两极浓染的菌体。
