3M细菌总数测试片操作以及判读

3M环境李斯特菌测试片操作以及判读3M 环境李斯特菌测试片操作以及判读一、测试环境李斯特菌数操作方法1.将未开封的测试片贮藏在<=8o C (46oF)的环境下，并在包装上标示的有效期内使用。

在高湿度的地方，最好在使用前将测试片回复到室温。

2.已开封的测试片，将开口反折，用胶带封好。

3.为防止暴露于潮湿的环境中，请不要冷藏已开封的测试片。

将胶带封好的测试片贮藏在低温干燥的地方，保持时间不超过1个月。

请勿将测试片放在温度>25oC (77oF)和(或)相对湿度>50%的环境中。

4.用涂抹棒、海棉或其它采样设备收集环境样本。

湿润采样设备的液体应<=10mL。

湿润剂可以是无菌水、缓冲蛋白胨水(Buffered Peptone Water,BPW)，或中和缓冲液，如Letheen 肉汤或Dey/Engley (DE)中和肉汤。

5.在无菌环境下在收集的样品中添加5mL，20-30oC，灭过菌的缓冲蛋白胨水(BPW)溶液。

不要将Petrifilm EL 测试片与Vermont 培养基(UVM)、Fraser 肉汤、李斯特菌增菌培养基(LE B)或缓冲李斯特菌增菌培养基(BLEB)共用。

6.混合，蠕动或旋转样品与BPW 的混合液将近一分钟。

将样品置于室温(20-30oC)1h，最久不超过1.5h，以修复损伤的李斯特菌。

7.将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。

8.用3M TM电子移液枪或其它移液器垂直滴加3mL 样品到下层膜的中央。

9.将上层膜缓慢盖下，以免产生气泡。

10.轻轻地将塑料压板放在位于接种区上层膜上。

不要压，扭转或滑动压板。

提起压板。

等至少10分钟，以使胶体凝固。

11.将测试片透明面朝上，可叠放至10片，在35o C±1o C或37o C±1o C下培养28h±2h。

12.Petrifilm EL测试片能够用标准的菌落计数器或其它光学放大器计数或判读。

《食品微生物检验技术》课程实训指导手册项目九方便面菌落总数快速检验-3M试纸片（依据SN/T 0168-2015进出口食品中菌落总数计数方法与3M试纸片操作说明书）一、实训目的以3M试纸片进行样品中菌落总数计数，熟练使用各类3M试纸片进行检验操作，明确常用微生物快速检验方法的原理与优缺点与注意事项。

二、实训原理Petrifilm TM是3M公司专利发明，将传统的琼脂平板或试管的培养方法浓缩在小小的一张测试片上，现阶段共有十余种测试片，比较常用的有：菌落总数测试片、大肠菌群计数测试片、快速大肠菌群计数测试片、高灵敏度大肠菌群计数测试片、大肠杆菌/大肠菌群计数测试片、肠杆菌科测试片、霉菌和酵母菌计数测试片、快速金黄色葡萄球菌计数测试片、环境李斯特菌测试片三、实训要求本项目3M试纸片进行样品中菌落总数计数快速检验依据SN/T 0168-2015进出口食品中菌落总数计数方法与3M试纸片说明书进行检验操作，标准与操作说明书规定了3M试纸片进行样品中菌落总数计数快速检验的基本要求、操作程序和结果判定。

本项目全面考察学生依据标准与操作说明进行微生物快速检验的能力。

本项目实施过程可分为样品准备、接种、培养、计数4个步骤。

本项目按2人/组为单位进行操作，要求在实验室完整使用3M试纸片进行样品中菌落总数计数快速检验。

四、实验材料和设备1试剂和溶液无菌生理盐水、75%乙醇。

2 仪器和设备除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料包括冰箱、天平、剪刀、镊子、移液管、锥形瓶、试管、恒温培养箱、均质器及耗材、达到精度要求的pH计，超净工作台或百级洁净实验室。

五、实训任务（包含结果计算）1、样品制备以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。

如有包装，用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。

a）固体和半固体样品：无菌操作，称取25 g样品置盛225 mL生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。

３Ｍ检测纸片与国标方法相关性实验观察赵君周媛媛(本文字数：2798)《中国食品工业》2005年第8期字号：【大中小】传统的微生物学检测方法是概率理论与实验设计方法在细菌测定上的实际应用，被定为国标法；3M公司生产的细菌总数及大肠菌群检测纸片，含有VRB(Violet Red Bile)，一种冷水可溶性的凝胶剂和四唑翁（tetrazolium）指示剂，可增强菌落计数效果，其表面覆盖的胶膜，可留住发酵乳糖的大肠菌群产生的气体。

美国3M的细菌总数及大肠菌群检测纸片，目前尚未在国内实验室普遍应用。

为进一步了解其与目前实行的国标法之间的相关性，同时使用国标法和3M纸片法，对随机抽取的252件食品样本，进行了1:1配对实验比较和计数资料结果的统计分析，现将结果报告如下。

材料及方法1 样本所辖19家宾馆、招待所随机抽取的252件冷荤凉菜，其中熟肉制品71份，豆制品45份，冷食菜136份，采样方法见GB 4789.1-94,冷链箱保存，4小时内检测。

2培养基及制备2.1 营养琼脂培养基2.2 磷酸盐缓冲稀释液2.3 生理盐水2.4 75%乙醇2.5 乳糖胆盐发酵管2.6 伊红美蓝琼脂平板2.7 EC肉汤2.8 革兰氏染色液2.9 3M公司的细菌总数及大肠菌群快速检验测试片3方法3.1 实验设计按1:1配对设计。

所有样品均以国标法(细菌总数为平皿法，大肠菌群为9管发酵法)、3M 纸片法同时进行试验。

3.2 试验方法国标法3M 纸片3.3 SPSS统计软件，进行1:1配对资料的χ２检验，计算双侧精确概率（P）、相关系数（r），观察显著性和相关性；进行Kappa检验, 计算系数（k），观察吻合度。

4结果判定传统国标法熟肉制品：细菌总数≤80000cfu/g视为阴性，大肠菌群≤150个/100g视为阴性。

豆制品、冷食类：细菌总数≤ 5000cfu/g视为阴性，大肠菌群≤150个/ 100g视为阴性。

纸片法：见细菌总数快速检验测试片判读手册，大肠菌群及大肠杆菌快速检验测试片判读手册。

测菌片使用方法
1、取冷却液的工作液一烧杯，拧开测菌片，把测试片放入
工作液中，使测试片的两面都完全接触工作液，取出测试片，拧紧盖子，放入温度为27－30℃的环境中。

2、放置24－48小时后，观察细菌面（即浅色面）的情况，
与对比表对比，得出细菌值。

3、放置3－4天或4－7天后，观察真菌面（即深色面）的
情况，与对比表对比，得出真菌值。

注意：
1、未使用的测菌片必须保存在15－25℃的环境中，否则易
变质。

2、接触工作液时，请避开工作液表面的浮油，以免影响测
试结果。

3、在未得到结果时，不要随意拧开测试片。

美国3M 快速生物阅读器操作说明自动阅读器3M ™ Attest ™自动阅读器阅读由阳性的快速生物指示剂1291和1292产生的荧光以提示灭菌过程失败。

操作方便 勿需校正 自动阅读结果 有报警功能 轻松保养生物监测系统的一部分 担保担保：：自动阅读器一年自动阅读器一年，，阅读灯两年阅读灯两年。

3M™ Attest™ 290 自动阅读机图解:①孔盖②培养/阅读孔③压碎孔④红灯亮阳性⑤黄灯亮指示剂检测中⑥绿灯亮指示剂阴性⑦警告蜂鸣器开/关按钮⑧数字显示面板⑨剩余时间按钮适用范围3M™Attest™ 290是专为自动阅读由3M™ Attset™ 1291(蓝色帽) 和3M™ Attset™ 1292(棕色帽)两种快速生物指示剂产生荧光呈阳性而设计的，可避免人为干扰。

发现荧光表明灭菌过程失败。

其他生物指示剂与本设备不匹配也不能使用。

此机器仅为3M™公司设计、测试并仅能在由3M™公司指定和支持的电源下使用。

使用说明 电源操作连接合适的接地的交流电源，启动机器。

在将生物指示剂放进培养孔前需30分钟的预热时间。

推荐将机器保持此种状态以消除预热过程，当然，如果预知长期不用，则关闭电源。

读取过程警告警告！！始终在操作生物指示剂前将其冷却到室温！每次阅读请按下列步骤：－1、在戴好防护眼镜后，按压以关闭生物指示剂帽。

－2、在压碎孔挤破含培养基的玻璃安瓿。

－3、捏住生物指示剂帽端，在桌面上轻敲小瓶底部，使 培养基湿润在小瓶底部的芽孢片。

为了您的安全为了您的安全，，请注意以下警告：在冷却前压碎或者过多的处理生物指示剂可能会引起玻璃安瓿爆破。

当从灭菌器取出生物指示剂时要戴防护眼镜及手套。

当压碎生物指示剂时要戴防护眼镜。

捏住帽端挤碎和轻敲生物指示剂。

不要用你的手指来压碎生物指示剂，不要在手指间滚动来湿润芽孢片，因为这样可能会导致手指割伤。

－4、将生物指示剂放进合适的培养/阅读孔。

阅读孔有和每一种生物指示剂帽相匹配的颜色代码：就是1291生物指示剂有蓝色的帽子和蓝色的阅读孔匹配，1292生物指示剂有棕色的帽子和棕色的阅读孔匹配。