细菌总数测定操作规程

细菌总数检查标准操作规程1目的建立规范细菌总数检查标准操作规程，确保检查操作正确。

2范围适用于本公司的细菌总数检查操作。

3职责4术语及定义无5 内容5.1实验5.1.1仪器设备：电热恒温培养箱、电动移液器、生物安全柜、电子天平、PH计。

水浴锅、研钵、玻璃珠、三角瓶。

5.1.2试剂：生理盐水、卵磷脂吐温80-营养琼脂培养基、吐温80、液体石蜡、0.5%氯化三苯四氮唑。

5.1.3耗材：10 mL刻度移液管、90mm培养皿5.2实验前准备5.2.1检查样本是否保持原有的包装状态。

容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。

5.2.2接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。

5.2.3若只有一个样品而同时需做多种分析，如微生物、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做微生物检验，再将剩余样品做其他分析。

5.2.4在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在符合生物安全要求的实验室中进行。

5.2.2供试品处理5.2.2.1液体样品5.2.2.1.1.水溶性的液体样品，用灭菌吸管吸取10mL 样品加到90mL 灭菌生理盐水中，混匀后，制成1：10 检液。

5.2.2.1.2油性液体样品，取样品10g，先加5mL灭菌液体石蜡混匀，再加10mL灭菌的吐温80，在40℃—44℃水浴中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐水75mL（在40℃—44℃水浴中预温），在40℃—44℃水浴中乳化，制成1：10 的悬液。

5.2.2.2膏、霜、乳剂半固体状样品5.2.2.2.1亲水性的样品：称取10g，加到装有玻璃珠及90mL 灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡混匀，静置15min。

用其上清液作为1:10 的检液。

5.2.2.2.2疏水性样品：称取10g，置于灭菌的研钵中，加10mL 灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加入10mL 灭菌吐温80，研磨待溶解后，加70mL 灭菌生理盐水，在40℃—44℃水浴中充分混合，制成1：10 检液。

一般生菌数检验方法
一般生菌数检验方法如下：
1.制备10倍品匀液。

按上一步操作程序，每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。

2.取样并制备平板。

同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内空白对照。

及时将15mL-20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃士1℃恒温水浴锅中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。

3.待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃士1℃培养48h+2h。

如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按2.1条件进行培养。

4.平板上菌落计数可使用自动化菌落计数仪，也可用肉眼观察（必要时可用放大镜观察）记录培养基上菌落数量和相应的稀释倍数。

选取菌落数在30-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。

以上就是一般生菌数检验方法，希望对解决您的问题有所帮助。

第1篇一、实验目的1. 掌握细菌总数检查的基本原理和方法。

2. 了解细菌总数在食品、水质等领域的应用。

3. 培养实验操作技能，提高对微生物检测工作的认识。

二、实验原理细菌总数是指在一定条件下，每克（或每毫升）样品中所含有的细菌总数。

细菌总数是衡量样品微生物污染程度的重要指标。

本实验采用平板计数法测定细菌总数。

三、实验材料与仪器1. 材料：牛奶、自来水、土壤等样品。

2. 仪器：恒温培养箱、天平、无菌试管、无菌棉签、无菌操作台、无菌水、营养琼脂平板、计数器等。

四、实验方法1. 样品处理：将样品按照一定比例加入无菌水中，充分振荡，制成均匀的样品悬液。

2. 制备菌悬液：取适量样品悬液，用无菌吸管加入无菌试管中，依次稀释10倍、100倍、1000倍，备用。

3. 制备平板：将营养琼脂平板在恒温培养箱中培养至凝固。

4. 接种：用无菌棉签蘸取适量菌悬液，均匀涂布于平板表面。

5. 培养与计数：将接种好的平板放入恒温培养箱中，培养24小时后，观察菌落生长情况。

按照菌落数在30～300之间的平板进行计数。

6. 计算细菌总数：根据菌悬液稀释倍数，计算每克（或每毫升）样品中的细菌总数。

五、实验结果与分析1. 实验结果：样品A（牛奶）细菌总数：3.2×10^7 CFU/g样品B（自来水）细菌总数：2.1×10^5 CFU/mL样品C（土壤）细菌总数：5.8×10^7 CFU/g2. 结果分析：样品A（牛奶）的细菌总数较高，可能是因为牛奶在储存、运输过程中受到污染。

样品B（自来水）的细菌总数较低，符合我国饮用水标准。

样品C（土壤）的细菌总数较高，可能与土壤环境有关。

六、实验结论1. 本实验成功掌握了细菌总数检查的基本原理和方法。

2. 通过对样品的细菌总数检测，可以了解样品的微生物污染程度，为食品、水质等领域的质量控制提供依据。

3. 在实验过程中，需要注意无菌操作，避免污染样品。

七、实验反思1. 实验过程中，操作要规范，避免人为因素对实验结果的影响。

生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法-
V1
生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法
测定生活饮用水中细菌总数的一种方法是平皿计数法，本文将对这种方法进行详细介绍。

一、实验原理
平皿计数法是利用细菌在液体培养基表面生长成菌落的原理，通过计算菌落个数来确定水中的细菌总数。

二、实验步骤
1. 准备培养基，将培养基倒入无菌平皿中；
2. 取样，将水样取自自来水管道或自然水源中；
3. 稀释，将取样液进行10倍、100倍、1000倍稀释，分别将每份稀释液分别均匀分散在培养基表面，避免液滴残留；
4. 写标签，标注菌落计数的相关信息，例如样品名称、稀释倍数、菌落计数的日期等；
5. 培养，将培养皿放置在恒温培养箱中，设定温度为37℃，并在3-5天内进行观察和计数。

三、实验注意事项
1. 取样应避免超过24小时，以免菌群失去代表性；
2. 取用的平皿应事先灭菌处理，以避免外来细菌的污染；
3. 实验室应有专门的抽风设备、消毒液等清洁工具，以维持实验室的高度卫生。

通过以上三个步骤，我们就可以精确地测定出生活饮用水中细菌总数。

同时，这种方法也可以应用在其他领域，例如食品安全、环境监测等
方面。

但需要注意的是，实验过程中必须遵守实验室操作规程，以保
证实验结果的可靠性。

霉菌和酵母菌总数、控制菌的检查。

二、引用标准：《中国药典》2015年版(通则1105-1106)三、目录1．微生物限度标准2．设备、仪器及用具3．消毒液、稀释剂、试液及培养基4．检查总则（通则1105：非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法，通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法）5．微生物计数法检查6．控制菌检查法7．实验技术8. 附件1．微生物限度标准非无菌药用原料及辅料的微生物限度标准(2)．目测霉变者以不合格论。

(3)．“无”为标准依据或无相应规定。

准依据或无相应规定。

2．设施、仪器及用具2.1、设施：2.1.1．微生物限度检查室及相关设施：微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。

2.1.2．其他设备：高压蒸汽灭菌器；细菌培养箱（30~35℃）；霉菌培养箱（25~28℃）；电炉（或其他适宜的加热装置）；恒温水浴；电热干燥箱（250~300℃）；电冰箱。

生化试剂储存箱。

2.2仪器及器皿2.2.1．菌落计数器；显微镜（1500X）；电子天平或药物天平（感量0.1g）；pH系列比色计。

2.2.2．玻璃器皿：锥形瓶（250~300ml，内装玻璃珠若干）、研钵（玻璃或陶瓷制，∮10~12cm）、培养皿（∮9 cm）、量筒（100 ml）、试管（18×180mm）及塞、吸管（1ml 分度0.01，10 ml分度0.1）、载玻片、盖玻片、玻璃消毒缸（带盖）。

2.2.3新购的玻璃器皿的清洁：先用流水冲洗，浸泡于1%~2%盐酸（工业用）液中约2~6小时，除去游离碱质，再用流水冲洗。

用于化学分析的玻璃仪器，需用重铬酸钾清洁液浸泡数分钟后，再用流水冲洗，最后以纯化水涮洗2~3次，晾干备用。

2.3用过的玻璃器皿：2.3.1未被病原微生物污染的器皿：可随时洗涤。

《水处理微生物》教案教学重点教学难点无菌操作的实施各环节操作要求参考资料环境微生物陈剑虹、胡肖容主编科学出版社环境微生物周凤霞、白京生主编化学工业出版社一、训练目标1．能准确地采样和稀释样品，会制备平板。

2．能正确报告样品中的活菌数。

二、材料用具1.材料与试剂待测样品，牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，琼脂，75%酒精棉球，试纸等。

2.仪器与用具天平，培养箱，干燥箱，超净工作台，水浴锅，称样瓶，吸管，培养皿，玻璃珠，试管，三角瓶，试管架，酒精灯，记号笔等。

三、训练操作规程1、稀释平板菌落计数法操作流程及技术要点操作流程操作技术要点训练准备提前分组，建议2人一组，每组准备以下物品：1．培养基：150mL牛肉膏蛋白胨培养基1瓶2．无菌水：9mL无菌水5～7支（吸取9mL蒸馏水装入试管中，所需数量根据样品中含菌量而定），然后塞上塞子培养基、无菌水采取高压蒸汽灭菌，于121℃灭菌20min3．1mL吸管8支，10mL吸管1支，培养皿9套。

用报纸包扎好，在干燥箱中于160℃灭菌2h取样超净工作台里操作，也可室内操作（需70%酒精净空，酒精灯无菌区操作）1．提前30min打开超净工作台风机和紫外线开关（注意：操作前关闭紫外灯）2．在超净工作台上，按无菌操作法准确量取待测样品1mL，注入到第1装有9mL无菌水试管中（注意：吸管吸液端不要接触到液面），振荡制成10-1菌悬液系列稀释再取1支吸管伸进10-1菌悬液吹吸数次，吸取1mL菌液注入到第2支装有9mL无菌水的试管中，混匀即成10-2菌液依此法按10倍序列稀释至适宜稀释度（图6-3）（注意：每换一个稀释度取1支新吸管）标记取12套培养皿，在皿底注明稀释度，每个稀释度重复3皿（含无菌水3加样取连续的3个稀释度菌液，用一支无菌吸管吸取1mL菌液加入对应的培养菌落计数一般选择每个平板上长有30～300个菌落的稀释度，算出同一稀释度3重复的菌落平均数，再根据公式求出样品的含菌量平板菌液注入量稀释释倍数平均同一稀释ml)(cf u/样品含菌数⨯=菌落度菌数报告1.若只有一个稀释度的平均菌落数在30～300，则该平均菌落数乘以稀释倍数即为该样品中的细菌总数2.若有两个稀释度的平均菌落数均在30～300，则视二者之比如何来决定。

微生物检验操作规程为规范检验程序，提高检验结果的准确性，要求微生物检验员严格按照本操作规程检验。

样品准备：准确称取10g±1g样品，剪碎后加入到200ml已灭菌的生理盐水中，充分混匀，静置10分钟，待生理盐水样液自然沉降后取上清液作菌落计数，液体样品可用原液直接做样液。

如果被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释量可按每次50ml递增，直至能吸出足够测试用样液。

在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时相应调整稀释度。

1.细菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱35℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。

2）试液：0.9%生理盐水、营养琼脂。

3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。

然后用冷却至45℃左右熔化的营养琼脂培养基15～20ml倒入每个平皿内混合均匀。

待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置35℃±2℃培养48h后，计算平板上的菌落数。

结果计算：X1=A*K/5式中：X1→细菌菌落总数，cfu/g或cfu/mlA→5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数K→稀释度4）如果样品菌落总数超过标准的规定，应进行复检。

将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到标准规定，则判定被检样品合格，其中有任何1次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。

2.真菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱25℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。

2）试液：0.9%生理盐水、玫瑰红钠琼脂。

3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。

然后用冷却至45℃左右熔化的玫瑰红钠琼脂培养基15～20ml 倒入每个平皿内混合均匀。

待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置25℃±2℃培养7天，分别于3、5、7天观察,计算平板上的菌落数，如果发现菌落蔓延，以前一次的菌落计数为准。

04公共场所毛巾床上卧具微生物检验方法细菌总数测定操作规程公共场所的毛巾、床上卧具是人们日常生活中必不可少的物品，然而，由于长时间使用和保养不当，微生物在其表面繁殖滋生，给人们带来了健康隐患。

因此，对这些物品进行微生物检验是十分必要的。

一、器具与试剂准备1.微生物采集器具：包括消毒后的无菌采集棉签、无菌吹球、无菌培养棉签和空气微生物采集器；2.无菌培养皿：选用符合国家标准的无菌培养皿，分为营养琼脂培养基和留样琼脂培养基；3.无菌生理盐水：用于样品的稀释；4.生物安全柜：用于样品处理过程的操作；5.高效过滤器：用于空气样品的操作；6.焙烧卫生箱：用于消毒操作；7.琼脂平板培养箱：用于培养微生物。

二、微生物检验方法1.采样准备（1）毛巾采样：用无菌钳子将毛巾上的样品切下，将样品置入消毒后的样品袋中。

（2）床上卧具采样：用无菌吹球吹取床上卧具上的样品，将样品置入消毒后的样品袋中。

（3）空气微生物采样：连接空气微生物采集器和高效过滤器，在指定时间内采集空气微生物样品，将高效过滤器拆下，置入消毒后的样品袋中。

2.样品处理（1）将样品袋放入生物安全柜中，将样品与适量的生理盐水混合均匀，制备不同稀释度的稀释液。

（2）用吸管吸取稀释液，分别滴入培养皿中，待其凝固并标记好。

（3）将标记好的培养皿放入琼脂平板培养箱中，置于恒温箱内培养一定时间。

3.计数和统计（1）培养箱内培养完毕后，取出培养皿进行研究。

（2）在无菌操作台上，使用显微镜和计数板对培养皿内的菌落进行计数。

（3）根据计数结果，可得到微生物菌落的数量。

将结果进行统计和分析。

三、注意事项1.进行检验操作时，必须保持操作区域的洁净和消毒，从而防止外源性细菌的干扰。

2.所使用的器材和试剂必须进行消毒处理，以确保操作的可靠性和准确性。

3.对于不同样品的处理，需遵循各自的操作规程，防止交叉感染。

5.在操作过程中，应注意个人防护，如佩戴口罩、手套和实验服等，避免微生物的外源性污染。

菌落总数检验操作规程目的：该操作规程用于规范公司产品及原料的活菌数量检验操作。

范围：该操作规程适用于公司要求检查该项的产品和原料的菌落总数检验责任人：微生物检验员，QC主管内容：1 技术依据及原理菌落总数计数采用平板菌落计数法，这是活菌计数方法之一。

该方法以在琼脂平板上，样品经过处理在一定条件下培养后，所得1ml（或1g）检样中形成菌落的总数。

测定结果只反映在规定条件下，只包括一群在平板计数琼脂生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数。

在进行本法测定时，必须严格按本法规定的条件操作，以免产生实验误差。

2 材料、仪器、试剂的准备及基本要求2.1 无菌室2.1.1 结构和要求无菌室面积不超过10m2，高度不超过2.4m，应采光良好、避免潮湿、远离厕所所及污染区，有缓冲间（2个）、操作间组成。

操作间与缓冲间之间应有样品传递窗（箱），出入操作间和缓冲间的门不应直对。

无菌室应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。

墙与地面及墙壁、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。

操作间内不得安装下水道。

无菌室照明灯应嵌装在天花板内，室内光照分布均匀，光照度不低于300勒克斯。

缓冲间和操作间均应设置紫外线杀菌灯（2～2.5W/m3）, 紫外线杀菌灯距实验台面高度不超过1 m，并定期检查其辐射强度，辐射强度不低于70µW·cm-2（1 m距离），不符合要求的紫外线杀菌灯应即使更换。

2.1.2 温度、湿度无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外线杀菌灯的杀菌效果，故应控制温度18～26℃，相对湿度40～60%。

操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，压差不低于4.9Pa。

2.1.3 操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。

洁净度应不低于10000级，局部净化度100级，或放置同等级净化工作台，并准备药物天平，乙醇灯、打火机、大小橡皮乳头等。

2.1.4 缓冲间缓冲间应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。