细胞生物学实验教程

冻存细胞的复苏1、于液氮罐中取出冻存管。

2、37℃水浴锅中摇动，使之快速融化。

3、超净台内酒精棉球擦拭，打开冻存管，吸出细胞悬液，注入离心管中，再滴加2倍培养液，混匀。

4、离心：1500转/分，3分钟，弃上清。

5、吸取2-3ml培养液加入到离心管中，吹打制悬，接种到培养瓶中，37℃培养。

组织块法培养骨骼肌细胞1、将新生大鼠处死，再用酒精棉球擦拭其全身消毒，带入超净台内于肩关节和髋关节处剪取四肢（去爪），置培养皿中。

2、PBS液中，清理血污，剥去皮肤。

3、用PBS液洗涤两次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。

4、用将肌组织从骨骼上剪切下来，PBS液清洗后转移至干净培养皿中。

5、加少量培养液，将组织剪成1mm3小块，用吸管将其转移到培养瓶，贴附与瓶底面。

翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。

入37℃培养箱静置0.5-1小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。

贴壁细胞的传代和冻存1、超净台中打开细胞培养瓶，用吸管将培养液吸出。

2、加入PBS液，使其覆盖培养瓶底部，轻轻摇动后倒掉。

3、加入消化液，以覆盖整个培养瓶底部，盖好瓶盖，于倒置显微镜下观察，待见到细胞质回缩、细胞间隙增大后于超净台内倒掉消化液。

4、加培养液终止消化。

5、用吸管吸取培养瓶中的培养液，反复吹打瓶壁，制备细胞悬液。

6、将细胞悬液吸入离心管中，离心1500转/分，3分钟，倒掉上清。

7、加入3ml培养液于离心管中，吹打制悬。

8、取2ml细胞悬液进行接种后，剩余细胞悬液继续离心1500转/分，3分钟。

9、去上清，加入1ml冻存液，制悬，转移到冻存管，再按照-4℃1小时→-20℃2小时→-80℃2小时→液氮的顺序进行冻存。

细胞计数血球计数板每一大方格长为1mm，宽为1mm，高为0.1mm，体积为0.1mm3，可容纳的溶液是0.1μl，那么每ml溶液中所含细胞数即是视野中每一大方格中数出的细胞数的10000倍。

一、细胞生物学实验教程：细胞运动性检测实验详细介绍细胞的运动是机体新陈代谢与基本生命特征之一。

在低等生物中，原始细胞通过变形与伪足活动趋近食物与远离伤害。

在高级生物体的生命活动中，细胞的定向迁移与胚胎形成、神经发育、免疫应答、器官成熟等密切有关。

人类的许多重大疾病及其治疗，如肿瘤转移，神经修复、干细胞功能再生等等都与细胞运动息息有关。

细胞的运动依靠于细胞骨架（Cytoskeleton），细胞骨架除了承担胞内的物质运输之外，也是构成细胞运动性的物质基础，比如肌动蛋白是细胞运动伪足中最要紧的结构单位。

当细胞感受到外界的刺激信息（如食物信号等），会伸出扁平的片层伪足，通过其前沿的不断延展与基部的收缩，与细胞与支撑物之间的吸附、解吸附的动态循环，朝向刺激源运动。

细胞的运动还具有粘附性（Adhesion）与趋向性（Polarization）的特点，不一致的粘附因子与细胞外基质（Extracellular Matrix）相互作用一方面决定了细胞运动的分子信号调控，同时与大量的趋化因子共同决定了不一致细胞的特定组织转移与偏好。

图1：细胞的定向迁移运动图2：细胞的运动性与细胞骨架蛋白图3：神经干细胞分化与神经元的定向迁移图4：原生癌细胞的迁移与侵袭图5：一个正在穿孔的肿瘤细胞的运动图6：恶性黑色素瘤细胞侵入机体正常组织图7：上皮细胞在伤口部位增殖，运动迁移，进行组织修复二、细胞运动性常用检测方法细胞运动性研究在发育生物学、神经生物学、癌症与干细胞生物学等诸多前沿科学领域具有重大研究意义。

然而长期以来细胞运动性检测是一个技术难点，目前常规可用于细胞运动性评估的要紧方法有：基于显微镜的形态观察（含荧光标记）、体外组织移植、细胞集落划痕与Boyden Chamber法，这些方法各有千秋，但都无法实现定量检测细胞定向迁移、癌细胞侵袭性与细胞粘附性等，最近罗氏公司推出的基于Boyden Chamber原理的微电子细胞芯片检测技术（xCELLigence）实现了定量、动态、无标记关于大规模细胞迁移、侵袭、粘附性的检测，同时还可同步检测包含细胞增殖、凋亡等多项细胞生理学功能。

细胞生物学实验教程第二版课程设计一、课程简介细胞生物学实验教程是针对生物学、医学、生物工程等相关专业的本科生开设的实验课程。

本课程旨在通过实验教学，帮助学生了解细胞生物学的基本概念、实验技术和实验方法，培养学生的实验操作能力、数据处理和分析能力。

本课程的教学目标主要有以下几个方面：1.掌握细胞的基本结构和功能2.了解常用的细胞培养技术3.熟悉细胞实验的基本步骤和方法4.掌握常用的细胞实验技术和设备的操作方法5.培养学生的实验设计和数据分析能力二、课程设计2.1 课程内容本课程共分为以下几个实验环节：实验1：细胞培养基本操作1.细菌和真菌的培养和细胞的纯化2.细胞的培养基础和检测3.细胞的培养和细胞数目的计数实验2：细胞形态学常规染色1.细胞的镜检和取样2.细胞形态学的染色和检测3.细胞核的染色和检测实验3：基础的免疫细胞化学方法1.免疫细胞化学的基本操作流程2.免疫细胞化学试剂的制备和质量控制3.免疫细胞化学染色的步骤和结果分析实验4：基于PCR的细胞基因检测1.PCR的基本操作流程和原理2.基于PCR的细胞DNA的提取3.基于PCR的细胞基因检测的步骤和结果分析2.2 实验室教学教学分为理论讲解和实验演示实验操作。

在实验过程中，教师会对学生进行操作指导和实验安全教育。

实验过程中需要注意学生的实验操作规范和实验室安全。

2.3 课程总结和评估每个实验完成后，教师会分析实验结果并给出评估指导。

在课堂上，学生可以对讲授内容、实验操作和实验结果进行讨论和提问。

根据实验成绩和平时表现，教师将给出最终评估，并以此为依据给出课程总结。

三、参考文献1.Goldman L, Ausiello D A. Cecil Medicine. 23nd ed. ElsevierSaunders, 2007.2.Weimer A W. Instructional design in technical areas. JohnWiley & Sons, Inc., 2002.3.Boud D, Cohen R, Sampson J. Peer learning in highereducation: Learning from & with each other. Psychology Press, 1999.四、总结细胞生物学实验教程是培养生物学、医学和生物工程等相关专业本科生实验操作能力和科学素养的重要课程，本文通过对实验教程的课程设计和实验内容的分析，介绍了教学过程中需要注意的各个方面，希望对教师和学生对实验教程的理解和评估有所帮助。

细胞生物学实验
一、细胞培养
1、细胞复苏
将冻存有细胞的冻存管从－70ºC 冰箱中取出，迅速置于已预热37ºC的水浴箱中不断摇动使冻存液在1 min 内解冻。

在超净工作台内吸出细胞悬液并滴加在含6 ml DMEM 培养基的离心管中，放入离心机1 000 rpm 离心6 min, 弃上清液，向离心管中加入DMEM 培养基6 ml 吹打混匀制成细胞悬液种于培养瓶中, 放入37ºC 5%CO2培养箱中继续培养，24 h 内换液，以除去残存冻存液和未贴壁细胞。

2、细胞培养与传代
当细胞长满培养瓶底约85%～90%时弃去原培养液，用PBS 轻洗2～3 次，弃去PBS，加入适量胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察，若胞质回缩，细胞间不再连接成片时，吸弃胰蛋白酶液，加入DMEM 培养基终止消化，轻轻吹打直至细胞全部脱落悬浮，将细胞悬液吸出分装至2~3 个培养瓶中，再加入适量DMEM 培养基和胎牛血清，血清浓度为10%，放入培养箱中静置培养。

传代第2 天吸出原培养
液，加入新培养液。

细胞约2~3 天传代1 次。

3、细胞冻存
细胞冻存前一天更换培养基，观察细胞生长情况，使细胞处于指数生长期。

按照细胞传代的方法收集，去少量细胞悬液在倒置显微镜下进行细胞计数。

然后将细胞悬液吸入离心管，1000 rpm 离心6min，弃上清，吸取细胞冻存液，吹打混匀细胞，使细胞密度为1×107个/ml，将细胞悬液吸入冻存管中严密封口，冻存管做标记。

先将冻存管放入4ºC 冰箱30 min，接着置于-20ºC 冰箱1 h，再移入超低温冰箱中保存。

细胞生物学实验《细胞生物学实验教程》为生物科学所有本科生必修，训练学生实验动手能力、分析问题能力、解决问题能力，以及设计实验等能力。

从基础性实验、综合性实验和设计性实验3个层面设置实验项目，旨在培养学生的基本实验技能和综合创新能力，内容涵盖光学显微镜技术、细胞化学技术、细胞器的分离和鉴定技术、染色体标本制作技术、细胞培养和细胞融合技术、染色体畸变检测技术、细胞凋亡检测技术以及细胞生物学设计性实验的选题、设计和实施等内容。

第一部分基础性实验实验1 细胞的形态观察和大小测定实验2荧光显微镜的使用实验3细胞器的活体染色实验4细胞内核酸的原位显示实验5细胞内糖类的显示实验6细胞内脂类的显示实验7 细胞内蛋白质的定位实验8骨髓细胞染色体标本的制备第二部分综合性实验实验9 细胞器的分离和鉴定实验10 完整叶绿体和叶绿体亚组分的分离及其鉴定实验11细胞骨架的显示和光学显微镜观察实验12动物细胞融合实验13植物原生质体的分离、融合和培第三部分设计性实验实验14植物细胞悬浮培养实验15 微核的诱导和检测实验16 细胞凋亡的诱导和检测本教材首先介绍了常用实验动物了解和解剖器械的使用、细胞生物学实验绘图方法与要求、特殊显微镜的原理和应用，在此基础上，学生学习动物细胞的基本形态观察和显微测量、细胞显微摄影、细胞核与线粒体的分级分离；然后开始学习细胞化学：核酸细胞化学、酶细胞化学、吖啶橙荧光染色法、免疫细胞化学；再研究细胞生理活动：细胞生理活动的实验观察、细胞分裂的形态观察；最后是综合能力创新能力的培养：细胞的原代培养、细胞的传代培养、培养细胞的生长特征和形态分型、培养细胞的形态观察和计数、细胞生长曲线的测定、细胞的分裂指数、细胞融合、早熟染色体凝集(PCC)的诱导、观察和分析、正常细胞与肿瘤细胞常规核型的检测和分析。

《细胞生物学实验》教案一、实验目的1. 理解细胞生物学的基本概念和原理。

2. 掌握细胞生物学实验的基本方法和技能。

3. 培养观察、分析和解决问题的能力。

二、实验原理1. 细胞的结构和功能：细胞膜、细胞质、细胞核等。

2. 细胞培养技术：细胞培养基的制备、细胞的分离和培养等。

3. 细胞观察技术：显微镜观察、细胞染色等。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：细胞培养基、细胞悬液、染色剂等。

2. 实验仪器：显微镜、细胞培养箱、离心机等。

四、实验步骤1. 细胞培养：准备细胞培养基，将细胞悬液加入培养基中，放入细胞培养箱中培养。

2. 细胞染色：将染色剂加入细胞培养基中，观察细胞染色后的形态和结构。

3. 显微镜观察：使用显微镜观察细胞的形态和结构，记录观察结果。

4. 数据分析：分析实验结果，探讨细胞生物学相关问题。

五、实验报告要求1. 实验目的：简要描述本实验的目的。

2. 实验原理：简要介绍实验原理和相关概念。

3. 实验材料与仪器：列出实验中使用的材料和仪器。

4. 实验步骤：详细描述实验步骤和操作过程。

5. 实验结果：描述实验观察结果，附上显微镜照片。

6. 数据分析：对实验结果进行分析，探讨相关问题。

7. 结论：总结实验结果，回答实验问题。

8. 参考文献：列出实验中引用的参考文献。

六、实验一：细胞膜的渗透性实验1. 实验目的：通过观察红墨水对细胞膜的渗透作用，了解细胞膜的选择性通透性。

2. 实验原理：细胞膜具有选择性通透性，可以控制物质的进出。

红墨水中的染料分子会通过细胞膜进入细胞内部，导致细胞颜色变化。

3. 实验材料与仪器：红墨水、生理盐水、细胞膜模型、显微镜等。

4. 实验步骤：a. 准备细胞膜模型，模拟细胞膜的结构。

b. 将细胞膜模型放入含有生理盐水的容器中，观察细胞膜的初始状态。

c. 将红墨水滴在细胞膜模型上，观察红墨水通过细胞膜的渗透过程。

d. 使用显微镜观察细胞膜模型在不间点的颜色变化。

5. 实验报告要求：描述实验目的和原理。