生化与分子生物学实验指导

生物化学与基础分子生物学实验本实验旨在增进学生对于生物化学与基础分子生物学知识的理解，同时也希望借此机会增强学生的实验动手能力和实验数据分析能力。

本实验主要分为两部分，第一部分是生物化学实验，主要包括蛋白质的提取、纯化和酶促反应的研究。

第二部分是基础分子生物学实验，主要涉及DNA的提取、PCR扩增和凝胶电泳检测等。

一、生物化学实验1. 蛋白质的提取蛋白质的提取是研究蛋白质功能和结构的基础。

常用的蛋白质提取方法有机械破碎法、化学破碎法和生物学破碎法等。

本实验以细胞生物学破碎法为主要方法，即利用超声波或手工研磨等方法将细胞破碎。

其中，手工研磨可以选择石英砂或三氧化二铬等研磨介质。

破碎过程中需加入适量浓度等渗液和抑制剂，以防止蛋白质的降解和氧化。

2. 蛋白质的纯化蛋白质的纯化是进一步研究蛋白质结构和功能的关键。

常用的蛋白质纯化方法包括离子交换、凝胶过滤、透析、亲和层析和电泳等方法。

本实验以离子交换和凝胶过滤为主要方法。

其中，离子交换可利用正离子交换和负离子交换两种模式进行，考虑到蛋白质电荷状态的不同以及离子交换树脂的不同选择，从而使得目标蛋白质与其它蛋白质的区分度大大增加。

凝胶过滤则利用凝胶的孔径大小进行分离纯化。

3. 酶促反应的研究酶促反应是生物化学研究的重要组成部分，可以研究酶的特性、动力学以及酶对于特定底物和抑制剂的亲和性等。

本实验选择酶促细胞色素C氧化为模型反应。

反应中需要考虑诸多因素，如温度、pH、反应时间等，同时还需考虑反应体系中酶、底物和抑制剂的摩尔比例关系。

二、基础分子生物学实验1. DNA的提取DNA的提取是基础分子生物学实验的关键步骤，其目的是提高纯度和量。

常用的DNA提取方法有化学法、机械法、热平衡法和离心法等。

本实验以盐酸摇法为主要方法进行DNA的提取。

其中将细胞经过适当处理后加入盐酸和β-己糖苷酯，在恒温和摇动条件下分离得到DNA。

2. PCR扩增PCR是分子生物学中的核心技术之一，是一种复合酶链反应。

《生物化学与分子生物学实验》实验教学大纲课程名称：生物化学与分子生物学实验课程类别：必修课适用专业：生态学所属实验室：生物化学实验学时、学分：32学时1学分―、实验教学目的《生物化学与分子生物学实验》是和《生物化学与分子生物学》课程同时开设的实验课程，是理论教学的深化和补充，具有较强的实践性，是一门重要的技术基础课，可作为生物技术、生物科学、生态学专业学生的必修课。

通过实验教学，观察某些生化与分子生物学反应现象，使学生巩固和加深对生物化学与分子生物学基本知识和基本理论内容的理解，掌握生化与分子生物学实验的基本操作、实验原理及相关仪器的使用。

通过实践进一步培养学生的科学实验技能与严谨的科学态度，学生通过准确记录、科学分析并作出实事求是的实验报告能够加强提高自身观察问题、分析问题和解决问题的能力及设计和创新能力的培养。

二、实验教学要求本实验课程是生命科学本科实验教学的一个重要组成部分，在实验过程中要求学生自己动手，独立观察并完成实验报告，注重培养学生创新思维与能力。

实验通过学习滴定，比色，层析，电泳、PCR等生化与分子生物学相关基础实验技术，以及实验方法，操作技术，仪器的使用，来分析生物体中糖，蛋白质，核酸，酶等生化物质及代谢过程，培养学生具有初步的科学使用能力及严格的科学作风，掌握基本的生化与分子研究技能为深入各学科研究打下良好基础。

三、对学生的指导和要求（一）实验内容的安排实验课程内容涵盖了验证性实验、综合性实验，设计性创新性实验，在加强学生基本实验技能训练的同时通过设计创新性实验锻炼学生自己查找资料并结合所学基本知识进行实验设计，增加学生自身科研主动性，实验设置能够很好的培养学生的科研素养及动手能力。

(二)学生任务经过多层次的训练后，学生应达到下列要求：1•进一步巩固和加深对生物化学基本知识的理解，掌握生物化学实验的基本知识和基本操作技能。

如生物化学分离、制备、分析和鉴定技术。

2•提高观察问题、分析问题和解决问题的能力。

⽣化与分⼦⽣物学实验指导⽣化与分⼦⽣物学实验指导-（)————————————————————————————————作者:————————————————————————————————⽇期:实验⼀氨基酸纸层析法⼀、实验⽬的通过氨基酸的分离，了解层析法的基本原理和操作⽅法。

⼆、实验原理纸层析法(ｐａp ｅｒ c ｈro ｍａt ｏgr ａphy ）是⽣物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常⽤技术,可⽤于蛋⽩质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。

纸层析法⼜称纸⾊谱法,是⽤滤纸为⽀持物,所⽤展层溶剂⼤多由⽔和有机溶剂组成,滤纸纤维与⽔的亲和⼒强,与有机溶剂的亲和⼒弱,因此在展层时，纸纤维上吸附的⽔分是固定相,有机溶剂是流动相。

溶剂由下向上移动的,称上⾏法；由上向下移动的,称下⾏法。

将样品点在滤纸上(此点称为原点),进⾏展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进⾏分配。

由于它们的分配系数不同,不同氨基酸随流动相移动的速率就不同,于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。

溶质在滤纸上的移动速率⽤Rf 值表⽰：在⼀定条件下某种物质的Ｒf 值是常数。

Ｒf 值的⼤⼩与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。

只要条件(如温度、展层溶剂的组成）不变,Rf 值是常数,故可根据Ｒf 值作定性判断。

样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的R ｆ值相同或相近,此时如只⽤⼀种溶剂展层,就不能将它们分开。

为此，当⽤⼀种溶剂展层后，将滤纸转动90度,再⽤另⼀溶剂展层,从⽽达到分离⽬的,这种⽅法称为双向纸层析法。

氨基酸⽆⾊,可利⽤茚三酮显⾊反应,将氨基酸层析点显⾊作定性、定量⽤。

所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽与茚三酮反应都产⽣蓝紫⾊物质,只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产⽣(亮)黄⾊物质。

三、药品器材1器材层析滤纸（新华1号)、喷雾器、剪⼑、层析缸、⽑细管、电吹风、刻度尺、铅笔。

R ｆ=原点到层析斑点中⼼的距离原点到溶剂前沿的距离2试剂(1)氨基酸溶液:赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸溶液以及他们的混合溶液(各组分浓度0．5％)。

分子生物学实验指导(总45页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除分子生物学实验指导分子生物学实验课程的内容是从亚克隆一个基因直到最终表达出该基因产物的一个完整的科研项目。

以表达纳豆激酶为例，从已经克隆在pMD-18-T 载体上的纳豆激酶酶原基因上用PCR扩增出837bp的纳豆激酶成熟肽基因片段，与T载体连接后转入DH5菌中筛选鉴定，然后用双酶切下纳豆激酶成熟肽基因片段，插入带有6个组氨酸标签的原核表达载体pET-Trx，在表达菌BL(21)DE3中诱导表达出纳豆激酶蛋白质并用SDS-PAGE鉴定。

整套实验围绕纳豆激酶基因的亚克隆、重组、转化、筛选直到表达这一研究顺序进行操作。

其间共涉及学习约11种基因操作的基本技术，我们按这些操作技术出现的先后顺序分别编为实验一至实验十一。

各个实验之间具有很强的逻辑性和连贯性，前一个实验的结果就是下一个实验的原料。

整套实验设计实际上是一个基因操作实验平台，随时能根据需要更改外源基因和表达载体或进一步扩充实验内容。

我们在每年的教学实践中会不断增加目的基因和表达载体的种类，以便于学生实验小组能够从事不同的项目，减少雷同，增加兴趣。

分子生物学实验的宗旨是让学生在独立实践操作中学习分子生物学的基本研究方法和体会分子生物学研究的严密逻辑和科研理念。

实验教学的组织方式是科研项目式管理，即在教师的总体指导下，在给定的实验材料和实验条件的基础上，让学生独立思考、自行规划实验流程、制定实验计划、准备实验材料、动手操作、整理和分析实验结果，最后完成实验项目，写出实验论文。

因此学生在实验前要认真预习实验内容，结合学过的分子生物学原理，弄懂每一步实验的目的和原理，了解实验的内容和总体实验方案，写出分子生物学大实验《开题报告》，交教师审阅和讨论修改后才能进入实验室操作。

在实验过程中，教师不干涉学生的实验安排和操作程序，仅以导师的身份对学生的实验操作进行现场巡回指导、回答学生的疑问、为学生示范一些高档实验仪器和软件的使用，提供公用的试剂（如酶）等，并对学生的每一步实验结果进行评价和把关。

实验五：血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳（验证性；4学时）【实验目的】1.掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。

2.熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作过程。

3.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳的特点和应用范围。

【实验原理】1．聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理聚丙烯酰胺凝胶(PAG)是一种人工合成的凝胶，由丙烯酰胺（Acrylamide简写为Acr）和交联剂甲叉双丙烯酰胺（N，N¹-methylene-bisacrylamide，简写Bis）在催化剂（过硫酸胺或核黄素）的作用下，聚合成含有酰胺基侧链的脂肪族长链，相邻的两个链通过甲叉桥交联形成就具有三维网状结构的聚丙烯酰胺凝胶。

为了加速聚合，在合成凝胶时还加入四甲基乙二胺作为加速剂。

聚丙烯酰胺凝胶具有三维网状结构，能起分子筛作用。

用它作电泳支持物，对样品的分离不仅取决于各组分所带电荷的多少，也与分子大小有关。

凝胶网孔的大小主要受成胶物的总浓度及Acr和Bis的比例的影响。

一般电泳采用成胶物质总浓度为7.5%，此浓度称为标准凝胶浓度。

如果改变总胶浓度，也应相应改变Acr和Bis的比例。

2．不连续聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳的原理根据凝胶各部分缓冲液的种类及pH值，孔径大小是否相同等，可分为连续系统和不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。

连续系统是指电泳槽内缓冲液的pH值与凝胶中的相同，不连续系统则不同。

不连续圆盘电泳一般是在小玻璃管内进行的。

把三种性质不完全一样的聚丙烯酰胺凝胶重叠起来。

上层为样品胶，中间为浓缩胶，这两层胶的凝胶浓度为3%是大孔胶，应用Tris-HCl 缓冲液，其pH6.7。

下层是分离胶，此层凝胶总浓度为7.5%，是小孔胶，也用Tris-HCl缓冲液，pH8.9。

上下电泳槽缓冲液是Tris-甘氨酸缓冲液，pH=8.3。

由于凝胶的孔径和缓冲液的pH值不同，产生浓缩效应、电荷效应和分子筛效应，使电泳的灵敏度、分辨率提高。

（1）浓缩效应：无论哪种电泳方式，要想得到良好的分离效果，电泳开始前必须使样品中各种成分同处于同一起跑线上。

生物化学与分子生物学教案标题：生物化学与分子生物学教案一、课程简介生物化学和分子生物学是生命科学领域的重要学科，它们从分子水平研究生命的现象和本质。

本教案旨在帮助学生理解生物化学和分子生物学的概念、技术和方法，掌握生命体系内化学反应的原理和机制。

二、课程目标1、理解生物化学和分子生物学的基本概念，掌握生命体系内的重要化学反应。

2、理解基因、蛋白质等生物大分子的结构与功能，掌握基因表达的调控机制。

3、掌握生物大分子的分离、分析、鉴定技术，了解生物学研究的实验设计和方法。

4、培养学生的科学素养，提高其分析问题、解决问题的能力。

三、课程内容1、生物化学基础：介绍生命体系内的化学反应、能量转换、物质代谢等基本概念和过程。

2、分子生物学：介绍基因、DNA、RNA、蛋白质的结构与功能，基因表达的调控机制等。

3、生物大分子的分离与分析：介绍生物大分子的分离、纯化、分析、鉴定技术，如蛋白质分离纯化、氨基酸序列分析、DNA测序等。

4、实验技术：介绍生物化学和分子生物学实验的基本技术和方法，如基因克隆、DNA重组、基因敲除等。

5、实验设计：培养学生根据研究问题设计实验、分析实验结果的能力。

四、教学方法1、课堂讲解：教师讲解基本概念、理论和实验技术。

2、案例分析：通过具体案例分析，帮助学生理解生物化学和分子生物学的应用。

3、实验室实践：学生在教师指导下进行实验操作，掌握实验技能。

4、小组讨论：学生分组讨论，培养团队协作和沟通能力。

5、问题解答：鼓励学生提问，教师解答学生的疑问。

五、评估方式1、课堂表现：学生的课堂参与度、小组讨论表现等。

2、作业：学生完成课后作业，检验学习成果。

3、实验报告：学生在实验后提交实验报告，包括实验目的、过程、结果和分析。

4、期末考试：全面考察学生对课程内容的掌握情况。

六、教学资源1、教材：选用优秀的生物化学和分子生物学教材，如《生物化学原理》、《分子生物学》等。

2、参考书：推荐相关领域的参考书，帮助学生深入学习。

生物化学与分子生物学实验技术湖南农业大学植物科学实验教学中心2007年4月生物秀—专心做生物！ｗｗｗ．ｂｂｉｏｏ．ｃｏｍ易生物－领先的生物医药商务平台ｗｗｗ．ｅｂｉｏｅ．ｃｏｍ生物秀论坛－学术交流，资源共享，互助社区ｗｗｗ．ｂｂｉｏｏ．ｃｏｍ／ｂｂｓ／目录实验一植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法） (3)实验二醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 (6)实验三水稻种子中蛋白质和淀粉含量的测定 (8)实验四水稻萌发及幼苗期淀粉酶和过氧化氢酶活性测定 (14)实验五植物组织中氨基转移反应及氨基酸的层析分离 (19)实验六不同作物不同发育时期过氧化物酶同工酶的比较分析 (21)实验七用SDS―聚丙烯酰凝胶电泳法测定蛋白质的分子量 (24)实验八植物基因组DNA的提取及含量纯度检测 (27)实验一植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、目的：糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

二、原理糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，反应如下：HO—CH—CH—OH CH—CH| | 浓H2SO4 || ||H—CH CH—CHO CH C—CHO + 3H2O| | △戊糖糠醛HO—CH—CH—OH CH—CH| | 浓H2SO4 || ||HO—CH2—CH CH—CHO HO— CH2—C C—CHO + 3H2O | | △OH OH O已糖羟甲基糠醛糠醛或羟甲基糠醛进一步与蒽酮试剂缩合产生蓝绿色物质，其在可见光区620nm波长处有最大吸收，且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。

此法可用于单糖、寡糖和多糖的含量测定，并具有灵敏度高，简便快捷，适用于微量样品的测定等优点。

三、实验材料、仪器及试剂1．材料：白菜叶、柑桔2．仪器：分光光度计恒温水箱 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗 100ml 容量瓶刻度试管试管架剪刀研钵3．试剂：（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。

实验一、动、植物组织总RNA的提取一、材料、试剂和仪器材料：动物组织，一次性塑料手套，200 μl、1000 μl吸头。

试剂：TRIzol总RNA提取试剂，氯仿，异丙醇，0.1％DEPC，75％乙醇（用RNase-free 水配制），RNase-free水。

仪器：烘箱，超低温冰箱，高速冷冻离心机，普通离心机，高压灭菌锅，微量取样器，研钵二、提取操作步骤1、匀浆处理：a、动物组织：以鼠肝脏RNA提取为例。

取新鲜或-70'C冻存组织，大约10-30 mg组织加1m1 TRIquick，用一次性组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。

b、单层培养细胞：直接在培养板中加入TRIquick裂解细胞，每10cm2面积加1ml TRIquick。

用取样器吹打混匀。

c、细胞悬液：离心收集细胞。

每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1 ml TRIquick。

d、血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，8，000-10，000 rpm离心1分钟。

彻底吸弃上清，收集白细胞沉淀。

每100-200 μl 血液收集的白细胞沉淀加入1 ml TRIquick。

2、将匀浆样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。

如不连续进行实验，加入TRIquick的匀浆样品可在－70'C下保存1-2个月。

3、可选步骤：4℃12，000 rpm离心5-10分钟，取上清。

如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。

离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。

处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。

取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。

4、每使用1ml TRIquick向匀浆样品中加0.2 ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟，使其自然分相。

如不能旋涡混匀，可手动颠倒混匀2分钟代替。

5、4℃12，000 rpm离心10-15分钟。

北京化工大学分子生物学实验指导实验一 少量质粒DNA的制备一、实验目的（1）了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的作用。

（2）掌握质粒DNA分离、纯化的原理。

（3）学习碱裂解法分离质粒DNA的方法。

二、实验原理质粒（plasmid）是一种双链的共价闭环状的DNA分子，它是染色体外能够稳定遗传得因子。

质粒具有复制和控制机构，能够在细胞质中独立自主地进行自身复制，并使子代细胞保持它们恒定的拷贝数。

从细胞生存来看，没有质粒存在，基本上不妨碍细胞的存活，因此质粒是寄生性的复制子。

根据质粒的这种特性，通常采用DNA体外重组技术和微生物转化等基因工程的技术和方法，使重组到质粒的某种基因（如干扰素基因）带进受体细胞（如具有一定特性的大肠杆菌细胞等）表达它的遗传性质，改变或修饰寄主细胞原有的代谢产物，或产生新的物质（如干扰素）。

目前，质粒已广泛地用作基因工程中的DNA分子无性繁殖的运载体，同时它也是研究DNA结构与功能的较好模型。

在细菌细胞中，质粒DNA通常为染色体DNA的2%左右，但是细菌质粒DNA的含量与其复制类型有关。

质粒在细胞内的复制，一般分为两种类型：严密控制（stringent control）复制型和松弛控制型（relaxed control）复制型。

严密控制复制型的质粒只在细胞周期的一定阶段进行复制，染色体不复制时，质粒也不复制。

每个细胞内只含1个或几个质粒分子（即有1个或几个拷贝）。

松弛控制复制型的质粒在整个细胞周期中随时可以复制，当染色体复制已经停止时，该质粒仍然能够继续复制。

该质粒在一个细胞内有许多拷贝，一般在20个以上，例如col E1 质粒（含有产生大肠杆菌素E1 基因）及其衍生质粒，在每个细胞内约有20多个拷贝。

所有分离质粒DNA的方法都包括3个基本步骤：培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。

目前应用于质体DNA的纯化或抽取的方法众多，例如碱溶裂法（alkaline lysis）、热裂解法（boiling method）、氯化铯（CsCl）纯化法，及市售柱层析套管法等。

生物化学实验指导书生命科学与工程学院目录实验一总糖的测定 (2)实验二蛋白质及氨基酸的呈色反应 (5)实验三蛋白质的等电点测定和沉淀反应 (9)实验四氨基酸的分离鉴定―纸层析法 (13)实验五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 (15)实验六酪蛋白的制备 (18)实验七酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 (20)实验八肝细胞核中核酸（RNA和DNA）的分离与测定 (22)实验九紫外吸收法测定DNA含量 (25)实验十维生素C的定量测定 (26)实验十一酶的特性 (29)实验十三小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 (37)实验十四植物体内的转氨基作用 (40)实验十五SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 (44)实验十六葡聚糖凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量 (50)实验十七质粒DNA的提取 (55)实验十八质粒DNA的酶切 (57)实验十九 PCR基因扩增 (59)实验二十琼脂糖凝胶电泳检测DNA (61)实验二十一真核生物基因组DNA制备 (63)附录 (65)实验一总糖的测定一、目的掌握直接测定法测定总糖的原理和方法。

二、原理样品经处理除去蛋白质等杂志后，加入盐酸，在加热条件下使蔗糖水解为还原性单糖，以直接滴定法测定水解后样品中的还原糖总量。

三、器材1.电炉2.滴定管3.锥形瓶4.容量瓶四、试剂1.6mol/L 盐酸溶液2.%甲基红乙醇溶液：称取甲基红，用60%乙醇溶解并定容至100ml。

3.20%氢氧化钠溶液。

4.%转化糖标准溶液：称取105℃烘干至恒重的纯蔗糖，用水溶解并移入1000ml 容量瓶中，定容，混匀。

取50ml 于100ml 容量瓶中，加6mol/L盐酸5ml，在68-70℃水浴中加热15min，取出于流动水下迅速冷却，加甲基红指示剂2 滴，用20%NaOH 溶液中和至中性，加水至刻度，混匀。

此溶液每毫升含转化糖1mg。

5.费林氏A液：称取15g（CuSO4·5H2O）及次甲基蓝，溶于水并稀释到1L。

生物化学与分子生物学实验教程第三版教学设计1. 实验目的本实验旨在让学生通过实践了解生物化学和分子生物学的基本原理和实验方法，培养学生观察和分析实验结果的能力，掌握实验操作和数据处理的技能。

2. 实验内容2.1. 生物化学实验实验一：蛋白质的定性分析实验目的：通过观察与检测不同蛋白质的特异性反应和化学性质，了解蛋白质的定性分析方法。

实验步骤：1.分别取鸡蛋清、牛奶、豆浆、红肉、白笋、蜜蜂花粉等不同来源的蛋白质样品，制备蛋白质溶液；2.分别进行百里酮、迈克尔试剂、伯胺酸试剂的反应，观察其颜色和沉淀等变化，以判断蛋白质的特异性反应和化学性质。

实验二：酶的活性测定实验目的：通过测定不同条件下不同酶的活性，了解酶的特性和活性测定方法。

实验步骤：1.制备适量的淀粉、蜂蜜等样品；2.分别制备酶和对照组，分别在不同条件下进行反应，如温度、pH、底物浓度等变化；3.根据反应结果测定酶的活性。

2.2. 分子生物学实验实验三：DNA的抽提实验目的：通过DNA的抽提，了解DNA的物理性质和抽提方法。

实验步骤：1.从植物、动物细胞或血液中抽取DNA；2.使用酶切、PCR等方法进行DNA检测。

实验四：蛋白质的表达与纯化实验目的：通过大肠杆菌等常见细菌表达蛋白质，了解蛋白质表达和纯化方法。

实验步骤：1.构建表达载体并转化至大肠杆菌中；2.制备蛋白质溶液并进行纯化。

3. 实验方法3.1. 实验前准备1.备齐实验仪器、材料；2.熟悉实验内容、方法和安全注意事项；3.按照实验要求进行制备试剂、培养菌种等。

3.2. 实验操作1.严格按照实验步骤和要求操作；2.实验过程中注意安全、卫生和环境保护；3.记录实验结果、数据和观察记录。

3.3. 数据处理1.对实验数据进行统计和分析；2.制作实验报告和结论；3.学生讨论和交流实验结果和体会。

4. 教学评估4.1. 实验报告1.学生需要按照要求编写实验报告；2.实验报告需要包括实验背景、目的、方法、结果、结论等内容；3.评分标准包括实验操作、数据处理、实验报告质量和论文撰写能力等方面。

分子生物学实验指导分子生物学实验指导动植物检疫专业2012，2分子生物学实验注意事项1．课前要提前预习实验内容，了解实验设计的原理，理清实验顺序，制定实验方案（没有方案或方案不合理者不能进入实验操作）。

2．由于实验内容多，时间短，多数实验需要同时或穿插进行，一定要做好统筹安排。

3．实验课中的所有单项实验都属于一个整体流程。

实验时间安排上没有上下午晚上等严格的作息安排，一切服从实验进度，必须在理论课上课期间完成。

4．实验的每一步都要详细地记录操作内容、时间、步骤、结果等，以备查询！5．对任何自己不熟悉的实验仪器都不要随意操作（尤其是微量移液器！）。

在操作的过程中发现任何意外的现象都要及时向任课教师汇报。

6．写作实验报告或实验论文一定要文理通顺、逻辑清晰、图表说明详细，讨论分析透彻。

7．在实验室内不能大声喧哗。

8．在实验的过程中制造的任何垃圾都要丢到垃圾筐里（或先放在自己的桌面一角），严禁随地丢弃！特别注意对废弃细菌的杀灭和有毒垃圾的定点投放。

9．实验结束后要把用过的器皿清洗后归放整齐并清点数目，向教师汇报征得同意后方可离开实验实。

10．值日组的同学最后离开，等待清扫实验室的卫生，关闭门窗水电。

11．实验时损坏的任何物品都要及时申报。

实验一质粒DNA的提取1．目的学会最常用的小量制备质粒DNA的碱裂解方法。

2．原理根据共价闭合环状质粒DNA与线性DNA在拓扑学上的差异来分离。

在pH12.0 12.5这个狭窄的范围内，线性DNA双螺旋结构解开而被变性。

尽管在这项的条件下共价闭合环状质粒DNA也会变性，但两条互补链彼此互相盘绕，仍会紧密结合在一起。

当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液使pH恢复中性时，共价闭合环状质粒DNA复性快，而线性的染色体DNA复性缓慢，经过离心与蛋白质和大分子RNA一起沉淀下去。

3．器材超净工作台，接种环，酒精灯，台式离心机，旋涡混合器，微量移液取样器，1.5ml微量离心管，恒温摇床，摇菌试管，双面微量离心管架，试管架，标签纸，磁力搅拌机。

《分子生物学》实验指导实验1 植物总DNA的提取生物总DNA的提取是分子生物学实验的一个重要内容。

由于不同的生物材料细胞壁的结构和组成不同，而细胞壁结构的破坏是提取总DNA的关键步骤。

同时细胞内的物质也根据生物种类的不同而有差异，因此不同生物采用的提取方法也不同，一般要根据具体的情况来设计实验方法。

本实验介绍采用CTAB法提取植物总DNA的技术。

[实验目的]学习和掌握学习CTAB法提取植物总DNA的基本原理和实验技术。

学习和掌握紫外光吸收法鉴定DNA的纯度和浓度。

[实验原理]植物叶片经液氮研磨，可使细胞壁破裂，加入去污剂（如CTAB），可使核蛋白体解析，然后使蛋白和多糖杂质沉淀，DNA进入水相，再用酚、氯仿抽提纯化。

本实验采用CTAB法，其主要作用是破膜。

CTAB 是一种非离子去污剂，能溶解膜蛋白与脂肪，也可解聚核蛋白。

植物材料在CTAB的处理下，结合65℃水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA 被释放出来。

CTAB与核酸形成复合物，此复合物在高盐（>0.7mM）浓度下可溶，并稳定存在，但在低盐浓度（-0.5mM NaCl）下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。

经过氯仿/ 异戊醇(24:1) 抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA，最后经异丙醇或乙醇等沉淀剂将DNA 沉淀分离出来。

由于核酸、蛋白质、多糖在特定的紫外波长都有特征吸收。

核酸及其衍生物的紫外吸收高峰在260nm。

纯的DNA样品A260/280≈，纯的RNA样品A260/280≈，并且1μg/ml DNA溶液A260=。

[实验器材]1、高压灭菌锅2、冰箱3、恒温水浴锅4、高速冷冻离心机5、紫外分光光度计6、剪刀7、陶瓷研钵和杵子8、磨口锥形瓶（50ml）9、滴管10、细玻棒11、小烧杯（50ml）12、离心管（50ml）13、植物材料[实验试剂]1、3×CTAB buffer（）100mM Tris25mM EDTA1.5M NaCl3% CTAB2% β-巯基乙醇2、TE缓冲液（）10mmol/L Tris·HCl1mmol/L EDTA3、氯仿-异戊醇混合液（24：1，V/V）4、95％乙醇5、液氮[实验步骤]1、称取2g新鲜的植物叶片，用蒸馏水冲洗叶面，滤纸吸干水分。

第一部分分子生物学实验入门一、实验室规则（一）实验室安全规则1．水电使用安全规则：注意节约用水（不管是自来水还是纯净水），清洗器皿时，先用自来水洗干净后，根据实验需要再用纯净水冲洗l～3遍；随时注意水龙头是否关掉，水池是否堵塞、漏水；注意节约用电，不能随意调节空调，仪器使用前应了解是否漏电、短路，使用完后按操作程序关掉电源；最后离开实验室的同学应检查实验室的照明灯、仪器电源、水龙头是否关掉。

2．药品使用安全规则：易燃易爆药品远离火源；注意有毒或腐蚀性药品—的使用方法；绝对禁止药品、试剂间的相互污染；废弃液体入水池后用水冲掉，固体废弃物严禁入水池；有毒废弃物倒到指定地点。

3．仪器使用安全规则：实验室任何仪器不能随意操作，严格按照操作规程进行；仪器在使用过程中出现故障要报告，不能自行处理；使用完仪器后要清洁仪器和台面并记录仪器使用情况。

（二）实验室卫生规则1．维护实验室的清洁卫生：不能随地吐痰，乱扔废纸屑等物品。

每小组实验完后清洗器皿和清理台面。

2．严格执行卫生值日制：实验完后实验室的清洁卫生由值日小组按照布置严格执行，不能无故不做。

（三）学生守则1．每位同学都应衣冠整齐，自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不得无故迟到早退，保持室内安静。

2．注意实验室环境、仪器和实验桌面的整洁，每次实验完成后该清洗的器皿清洗完后按原位放好，经老师检查后方可离开。

3．每次开始做实验前，应预习好实验指导，要充分了解实验原理、方法及仪器设备的使用方法，原则上按照实验指导的方法进行，如经预习，查资料后，有更好的实验方法，可与老师讨论后进行，鼓励创新。

4．使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约，应特别注意保持药品和试剂的纯净，严防混杂。

5．注意安全。

易燃易爆物远离火源，注意有毒或腐蚀药品的使用方法，玻璃器皿的使用、洗涤，尽可能减少损坏、割伤手。

行走时不要碰撞他物。

废弃液体倒入水槽并用水冲走，固体废弃物严禁入水槽，应丢入垃圾桶中。

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《生物化学》和《分子生物学》课程实验教学大纲
课程名称：生物化学与分子生物学实验技术
英文名称：Experiment Technology of Biochemistry and Molecular Biology
课程编号：实验课性质：必修
课程负责人：崔行开放实验项目数：3
一、学时、学分
课程总学时：70 课程总学分：
二、适用专业及年级
本大纲适用于医疗、公共卫生、口腔、护理、预防医学七年制学生。

三、实验教学目的与基本要求
掌握人体生命的物质基础，生物大分子的结构和功能。

掌握各种生物物质能
量的正常代谢过程，代谢调节，代谢障碍和临床疾病的关系。

通过实验掌握基本
的生物化学实验技术及验证部分课堂理论知识。

在实验教学中，要求学生掌握电泳技术、层析技术、分光光度法、离心技术、
蛋白质及分子生物学等技术。

掌握蛋白质、核酸、酶类的提取、测定，学习血液
成分生化测定，以及部分生物化学理论知识的验证。

掌握紫外—可见分光光度计、
高速离心机、PCR仪、层析系统、电泳仪系统、电热恒温水浴箱、凝胶扫描仪、
电动匀浆器等仪器的使用，了解其性能、适用范围及注意事项。

四、主要仪器设备
紫外—可见分光光度计、高速离心机、PCR仪、层析系统、电热恒温水浴箱、
凝胶扫描仪、电泳仪、电动匀浆器等。

分子生物学实验指导1. 实验背景分子生物学是研究生物大分子的结构、功能和相互作用的一门科学。

它包括DNA、RNA、蛋白质等生物大分子的研究，以及研究它们在细胞内的功能和相互作用的方式。

分子生物学的发展对于理解生物现象、治疗疾病和推动基因工程等都起到了重要的作用。

在进行分子生物学实验之前，我们需要了解一些基本的实验原理和步骤，以确保实验的准确性和可重复性。

本文将介绍一系列分子生物学实验的指导，包括DNA提取、PCR、凝胶电泳等。

2. 实验材料•细菌培养基•细菌菌株•试剂盒（DNA提取、PCR、凝胶电泳）•离心管、PCR管、琼脂糖凝胶板等实验器材3. 实验步骤3.1 DNA提取1.取一定数量的细菌菌株，并将其转接到细菌培养基中。

2.在转接后的细菌培养基中培养一夜，使细菌得到充分生长。

3.将培养好的细菌菌液转移到离心管中，进行离心。

4.移除上清液，加入细菌细胞裂解液，并进行充分混合。

5.进行高速离心，将裂解后的细菌细胞碎片与上清液分离。

6.取得上清液，为DNA提取做好准备。

3.2 PCR1.准备PCR反应试剂盒，包括模板DNA、引物、dNTPs等。

2.处理PCR管，加载模板DNA、引物、dNTPs和酶。

3.设置PCR反应器的温度程序，包括变性、退火和延伸等步骤。

4.将PCR反应管放入PCR机中，进行PCR反应。

3.3 凝胶电泳1.准备琼脂糖凝胶板，根据需要调整琼脂糖浓度和凝胶浓度。

2.准备样本，将PCR反应产物与DNA标准样品一同加载到凝胶孔中。

3.加载电泳缓冲液，确保凝胶完全被浸泡。

4.打开电泳仪，进行凝胶电泳，设定一定的电流和时间。

4. 结果分析通过实验，我们可以获得一系列结果。

在DNA提取实验中，我们可以通过测量DNA的浓度和质量来评估提取的效果。

在PCR实验中，可以通过检测PCR产物的大小和数量来评估PCR反应的效果。

在凝胶电泳实验中，可以通过观察凝胶图像来判断PCR产物的大小和纯度。

5. 实验注意事项在进行分子生物学实验时，需要注意以下事项：•实验前要充分准备。

可编辑修改精选全文完整版生物化学与分子生物学实验原理Principles of Biochemistryand Molecular Biology Techniques课程简介本课程主要是介绍常用分子生物学技术测定的原理和机制，以利于研究生了解分子生物学常用技术，并能活用这些技术。

这门课既不同于一般的分子生物学理论课，也不同于实验方法流程的介绍。

该课程分实验技术理论和实验操作两部分。

实验技术理论部分主要通过基因重组技术、目的基因的获得、分子杂交、基因多态性和基因表达调控等，介绍分子生物学实验的方法、设计思路、原理、操作技巧及应用等。

力求培养学生掌握现代分子生物学实验的基础与操作要点，同时邀请校外资深专家介绍分子生物学的新技术及新方法，为今后进一步深入研究奠定良好基础。

实验操作部分另设课程为“分子生物学实验技术”。

This course includes two sections. One section focus on the principles of the techniques used to isolate, identify, modify and analyze three key molecules: DNA, RNA and proteins. The first section includes: DNA recombination technology, molecular hybridization, gene polymorphism, and regulation of gene expression. The second section will be a separate course named the Techniques of Molecular Biology. The goal of this course is to giving students an on-bench training of basic molecular biology techniques.教学大纲一、课程名称：生物化学与分子生物学实验原理二、总学时数及学分：32学时，1.5学分理论课32学时三﹑授课对象：博士生、硕士生预修知识要求：要求有化学、生物学、遗传学、生物化学及微生物学相关知识四、教学目的及要求：目的：通过教学力求培养博士生、硕士生掌握现代生物化学与分子生物学实验的基础理论与基本操作要点，为今后的研究工作奠定良好基础。

班级生科1101 学号16 姓名雍婕实验1 RNA的提取及鉴定（综合）㈠实验目的1、学习和掌握提取RNA的原理和方法。

2、学习和掌握质粒RNA的鉴定方法。

㈡实验内容与基本要求1、RNA抽提：细胞和组织RNA的抽提按TRIzol TM操作程序。

组织RNA的提取：把小鼠的肝脏、骨骼肌和心肌等组织放到冰冻的碾钵中碾碎，加入适量的Trizol 试剂（1mL/100mg组织）裂解组织，冰上放置5 min。

吸入1.5mL离心管中，加入氯仿(0.2mL/mL Trizol)，冰上放置5 min。

10 000×g 离心10 min，吸取上清于另一离心管，加入等体积的异丙醇，室温放置10 min。

10 000×g离心15 min，去上清，70%乙醇洗涤沉淀，10 000×g离心2 min，去上清，室温风干，加DEPC处理的双蒸水溶解。

对提取的组织RNA进行鉴定：用紫外分光光度计测定RNA浓度和纯度。

用1.0% 琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的质量。

电泳检测结果有三条清晰的rRNA 带：28S，18S和5S，表明RNA未降解。

㈢主要仪器设备及器材1、设备：低温离心机、恒温水浴器、台式离心机、琼脂糖凝胶电泳系统、恒温培养箱、高压灭菌锅、紫外线透射仪、液氮罐、陶瓷研钵、吸头、紫外分光光度计、PCR仪、电泳仪、水平式电泳槽、微量离心管。

2、试剂：TRIzol TM试剂、DEPC、氯仿、异丙醇、乙醇、琼脂糖、溴化乙锭。

㈣试验结果与分析实验2 RT-PCR扩增获取目的基因（综合）㈠实验目的学习和掌握RT-PCR扩增的原理和方法。

㈡实验内容与基本要求1、RNA抽提及鉴定：组织RNA的抽提按TRIzol TM操作程序。

采用紫外分光光度计测定RNA浓度和纯度。

2、RT-PCR扩增：采用两步法RT-PCR。

(1) 逆转录反应获得组织cDNA；(2) PCR反应，采用序列特异性引物（看家基因GAPDH或者β-actin），以组织cDNA为模板，进行PCR扩增。

高中生物分子生物学实验指导实验简介在这个实验指导中，我们将学习和探索高中生物学领域中的分子生物学。

通过一系列实验，我们将了解分子组成和功能、基因表达和遗传变异等重要概念。

以下是一些实验项目，旨在帮助您更好地理解和应用这些概念。

实验1：DNA提取实验目的了解DNA的结构、提取方法以及其在生物体内的作用。

材料与设备•细胞样本（如水果、口腔拭子或草叶）•蛋白酶K溶液•盐溶液•乙醇•热水浴或振荡培养箱实验步骤1.收集细胞样本并切碎。

2.加入蛋白酶K溶液和盐溶液，并轻轻混合。

3.将混合物置于热水浴或振荡培养箱中加热一段时间。

4.加入冷乙醇，使DNA沉淀。

5.用小棒或管嘴捕捉DNA。

结果与讨论观察提取到的DNA样本，并讨论其外观、形状和特点。

探讨DNA在生物体内的重要作用，例如遗传信息的传递和基因表达。

实验2：凝胶电泳实验目的学习凝胶电泳技术，并了解它在分子生物学中的应用。

材料与设备•DNA样本（可以是已经提取好的或商购）•凝胶（如琼脂糖凝胶）•缓冲液•电泳槽•电源实验步骤1.准备凝胶并制定好缓冲液。

2.加载DNA样本到凝胶孔中。

3.打开电源，进行电泳过程。

4.观察DNA带移动情况，记录结果。

结果与讨论根据DNA样本在凝胶上移动的速度和距离，可以分析其大小和形态差异。

通过对结果进行分析，可以探讨DNA片段大小、测序技术等与人类遗传疾病相关问题。

实验3：PCR反应实验目的学习聚合酶链式反应（PCR）技术，并了解其在基因检测、遗传工程等领域的应用。

材料与设备•DNA样本•PCR试剂盒（含有聚合酶、引物和核苷酸）•PCR仪实验步骤1.配制PCR反应混合液。

2.加入DNA样本到PCR反应管中。

3.将管放置在PCR仪中，进行温度循环。

结果与讨论观察PCR反应后的结果，检测是否扩增了DNA片段。

讨论PCR技术在基因检测、基因工程等领域的重要性和应用。

总结通过这些实验，我们逐步了解了分子生物学的一些核心概念和实验技术。

我们不仅能够提取DNA并观察其特点，还能使用凝胶电泳和PCR反应来分析DNA片段以及进行基因检测。