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FACSCanto Clinical 四色免洗淋巴细胞亚群的绝对计数【实验原理】：用已知总数的荧光微球Beads 作标准内参，加入血中，再加入荧光抗体，应用流式细胞仪中的获取和分析软件，就可以得出血中CD3、CD4，CD8、B 、NK 细胞的绝对数。
【主要试剂】：（1） 抗体：CD3/CD8/CD45 /CD4；CD3/CD16+56/CD45 /CD19四色荧光抗体。
（2）Trucount tube （内含数量已知的Beads ）。
（3）FACS Lysing Solution （溶血素）（10×,使用前用蒸馏水稀释成1×）。
【实验步骤】：1、 取两支TruCount Tube ，编号A 和B ；2、 用反向加样法在Tube 中加入50ul 充分混匀的抗凝全血，注意血不要碰到试管底部的微球（Beads ）。
3、 取20ul CD3/CD8/CD45/CD4抗体加入到A 管中、取20ul CD3/CD16+56/CD45/CD19标记的抗体加入B 中，注意：不要碰到血。
涡旋混匀，室温避光放置15－20min 。
4、 取出加入450ul 1×FACS 溶血素，充分混匀，避光放置15min 。
5、 24小时内上机用FACSCanto Clinical 软件获取2500个淋巴细胞进行检测，上机前应充分混匀。
；【注意事项】：1、 样本使用EDTA 抗凝全血，室温放置，24小时内处理，处理前充分混匀。
2、 取血时要采用反向加样法，即加样枪吸取血样时，打到第二档，放时打到第一档，保证血量的准确，减少误差。
3、 染色和溶血步骤应在室温避光进行，并充分混匀过程中，尽量防止血样的飞溅，以免血样留在管壁上。
4、 本实验为免洗试剂，操作简单，减少细胞的丢失提高工作效率和计数精确度。
5、TruCOUNT 管2-25°C 保存，从冰箱取出后，应恢复室温再打开封条，保证TruCOUNT 管包装袋密闭，袋内干燥剂变成粉红色时，TruCOUNT 管应弃去不用。
CD4+和CD8+T淋巴细胞检测技术规范1 范围本章规定了CD4+和CD8+T淋巴细胞检测的意义、实验室要求、检测方法、结果报告及质量控制要求。
适用于从事相关检测的各级艾滋病实验室。
2 规范性引用文件《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-2008）《国家免费艾滋病抗病毒药物治疗手册（第二版）》（人民卫生出版社，2007年12月）《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南（试行）》（中国疾病预防控制中心，2006年2月）《病原微生物实验室生物安全管理条例》（中华人民共和国国务院令第424号，2004年11月12日）3 CD4+ 和CD8+T淋巴细胞检测的意义3.1 HIV感染临床分期CD4+T淋巴细胞数量可评价HIV感染者免疫状况，辅助临床进行疾病分期。
我国《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-2008）将CD4+T淋巴细胞值作为成人及15岁（含15岁）以上青少年HIV/AIDS 临床分期标准的主要依据之一。
3.2HIV感染儿童免疫抑制分级和治疗辅助指标CD4+T淋巴细胞百分数可以作为儿童免疫抑制分级指标，可以作为儿童临床治疗分期和辅助条件。
3.3 疾病进展监测《国家免费艾滋病抗病毒药物治疗手册（第二版）》推荐对无症状HIV感染者及CD4+T淋巴细胞计数高的感染者每六个月进行一次CD4+ T淋巴细胞计数检测，以评估疾病进展，判断预后状况。
3.4 机会性感染的风险评估机会性感染是艾滋病患者死亡的主要原因，CD4+T淋巴细胞可评估HIV感染者机会性感染的风险，辅助判断是否进行预防性治疗（如当CD4+ T淋巴细胞＜200/μl时，应给予抗肺孢子菌肺炎的预防性治疗。
3.5 抗病毒治疗适应症选择及疗效评价《国家免费艾滋病抗病毒药物治疗手册（第二版）》将CD4+T淋巴细胞数量作为是否开始抗病毒治疗的重要实验室指标之一，并规定治疗后定期检测CD4+T淋巴细胞数量，判断免疫系统恢复情况。
艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测及质量保证指南A Guideline for CD4+ T Lymphocyte Counting and QualityAssurance in People Living with HIV/AIDS中国疾病预防控制中心2013年08月本指南由中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心艾滋病参比实验室组织有关专家撰写，由中国疾病预防控制中心批准执行。
编写主持人：蒋岩主要编写人员：肖瑶徐建青尚红仲人前蒋岩汪宁钟平李敬云邱志峰姚均潘品良邢文革邱茂锋编写单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心参编单位：复旦大学公共卫生中心中国医科大学附属第一医院上海第二军医大学长征医院上海疾病预防控制中心中国人民解放军军事医学科学院北京协和医院顾问：世界卫生组织，Seguy Nicole，Zhang Lan中美艾滋病项目，Ou, Chin-Yih，Bulterys, Marc前言随着我国艾滋病病毒感染者及艾滋病病人抗病毒治疗和检测咨询工作的深入开展，对CD4+T淋巴细胞的检测需求日益增加。
截至2012年，全国已经有超过400台各型流式细胞仪和CD4+T淋巴细胞计数仪，服务于艾滋病病毒感染者和艾滋病病人，这些仪器在艾滋病防治工作中发挥着重要作用。
为了满足基层CD4+T淋巴细胞检测技术需求，保证检测质量，中国CDC于2006年颁布了《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南》（试行，以下简称《指南》），为保证实验室质量发挥了重要作用。
近几年，相关领域技术方法取得了很多新发展，同时在《指南》使用过程中也发现了一些问题，为此，以我国艾滋病防治现行政策和相关技术标准为依据，参考世界卫生组织、美国、加拿大和澳大利亚等国家的现行指南，对我国现行《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南》（试行）进行了修订。
本次《指南》（试行）修改，重点补充了检测方法，细化了质控要求。
外周血T淋巴细胞亚群绝对计数中CD4计数在菌阴结核及肺外结核病诊断中的意义2018年全球结核病控制报告结核病流行最新情况。
全球每年新发结核病患者超过1000万例。
有近170万例患者死亡。
我国仍为全球30个结核病高负担国家之一。
目前根据2017年11月9日国家卫生计生委最新发布《肺结核诊断》新标准WS288-2017已于2018年5月1日正式施行。
对肺结核诊断明确了诊断标准。
而菌阴肺结核及肺外结核的诊断较困难。
据估算，我国菌阴肺结核患者约占肺结核患者的70%。
菌阴肺结核患者因缺乏特异性临床表现仅依赖免疫学相关检查（血结核抗体、PPD试验、血γ-干扰素释放试验）及排除其他肺疾病，临床医生给予临床诊断易造成误诊、漏诊。
因结核病是细胞免疫低下所致的疾病。
担负细胞免疫功能的细胞主要是T淋巴细胞。
这是一种在胸腺内发育成熟的淋巴细胞。
主要针对被抗原入侵的宿主细胞。
它可以对侵入人体的细菌、病毒和病原微生物直接发挥免疫杀伤作用。
其作用方式是效应T细胞与宿主细胞紧密接触，通过抗原识别递呈等，发生效应产生淋巴因子，淋巴因子引导吞噬细胞和T细胞分化并共同参与清除抗原物质。
还有部分T细胞还可以形成记忆细胞，记忆T细胞可以清除再次入侵的同类抗原物质形成过敏反应。
T细胞亚群的检测是细胞免疫检测的最新指标之一。
随着抗T细胞单克隆抗体的问世及各种检测方法的建立。
T淋巴细胞亚群检测已经在基础医学及临床医学研究中得到广泛应用。
T淋巴细胞亚群包括CD4-T、CD8-T等细胞。
细胞免疫中，CD4-T淋巴细胞是T淋巴细胞亚群中的一项，是人体免疫系统中最重要的免疫细胞。
CD4代表T辅助细胞，CD8代表T抑制细胞和杀伤细胞。
CD4+T淋巴细胞是免疫反应的中心细胞。
正常人CD4+T淋巴细胞约占总的T细胞的65%。
故CD4+T淋巴细胞计数可以作为直接检测细胞免疫功能的方法。
另有研究说明CD4+T细胞还参与被感染细胞的凋亡。
抗原特异的溶细胞性CD4+T细胞杀灭吞噬了结核杆菌的巨噬细胞，其中对细胞的溶解会导致细菌的扩散，但是释放出的细菌又会被机体中的其他巨噬细胞吞噬，这样形成恶性循环。
cd4指标CD4指标是指人体免疫系统中的一种特殊细胞，也就是CD4+T细胞，是免疫系统中最重要的细胞之一。
CD4指标能够识别、诱导和调节其他免疫细胞，包括B细胞和CD8+T细胞，并且对于身体对于各种病原体的抵御能力至关重要。
那么，CD4指标的相关检测是如何进行的呢？首先，来谈一下CD4指标的意义和检测目的。
CD4指标可以用来评估病毒性疾病感染的严重程度，例如艾滋病、乙肝、丙肝等。
通过对CD4指标的监测，可以更精准地判断病人是否需要接受治疗，或者是调整治疗方案。
并且，在治疗期间，CD4指标的监测也能够帮助医生了解治疗效果及其对免疫系统的影响。
目前，CD4指标的检测主要有两种方法：流式细胞术和免疫酶标法。
流式细胞术是一种通过荧光标记和流式细胞仪技术进行检测的方法。
通过将血液样品处理好后，加入多种标记荧光抗体，并用流式细胞仪对样品进行检测，可以快速、准确地得到CD4指标的检测结果。
这种方法检测出的CD4指标数据波动较小、稳定性较高，准确性也相对较高。
免疫酶标法是一种通过化学反应进行检测的方法。
将患者的血液样品加入试剂盒中，根据试剂盒的说明进行处理后，利用酶标仪进行检测。
这种方法的检测结果比较容易受到其他因素干扰，例如阳性反应率偏高、检测结果受到治疗干预的影响等，但相对使用的设备简单。
无论是哪种检测方法，都需要患者进行准确、规范的样品采集和标本处理。
此外，在进行CD4指标检测时，还需要注意正确的计算和解读数据，并结合其他指标进行综合判断。
总之，CD4指标是评估免疫系统功能的重要标志，检测方法准确而迅速，是临床医生进行疾病诊断、疗效监测的重要工具之一。
cd4+相对计数方法
CD4+细胞是一种免疫细胞，它在免疫系统中起着重要作用。
CD4+细胞的相对计数是用来评估患者免疫系统功能的一种方法。
在
临床实践中，有几种常见的方法用于测量CD4+细胞的相对计数。
首先，流式细胞术是一种常用的测量CD4+细胞相对计数的方法。
这种方法利用荧光标记的抗体结合到细胞表面的CD4抗原上，然后
通过流式细胞仪来测量标记细胞的数量。
这种方法可以快速准确地
测量CD4+细胞的相对计数，因此在临床诊断中被广泛应用。
其次，免疫荧光显微镜也可以用来测量CD4+细胞的相对计数。
这种方法通过将荧光标记的抗体与细胞样本结合，然后在荧光显微
镜下观察和计数标记的细胞。
虽然这种方法比流式细胞术更为费时
费力，但在一些实验室条件有限的情况下仍然是一种有效的选择。
此外，还有一种常见的方法是利用全血细胞计数仪来测量CD4+
细胞的相对计数。
这种方法通过对血液样本进行自动化处理和分析，可以快速地得出CD4+细胞的相对计数结果。
虽然这种方法相对简单
快捷，但在一些特殊情况下可能会受到其他血液细胞的干扰。
总的来说，测量CD4+细胞的相对计数是评估免疫系统功能的重要手段，而以上提到的方法只是其中的几种常见选择。
在临床实践中，医生会根据具体情况选择合适的方法来进行测量，以确保得到准确可靠的结果。
