HEK-293T细胞转染操作步骤

使用 X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent 转染 HEK-293T 细胞系 慢病毒生产的优化实验步骤
在转染实验前 18~24 小时，将 HEK-293T 细胞按照 5.0× 105 细胞/孔的 密度接种到 6 孔板中，每孔中含有 2ml 完全生长培养基（60~80%的细 胞汇集度）。细胞培养过夜。
在细胞培养板中以逐滴加入的方式，在每孔中加入 200 μl 转染复合 物。轻柔晃动 6 孔板，将转染复合物和细胞培养物混匀。 细胞继续培养 24-72h 后，进行病毒滴度检测。
在无菌管中加入 180 μl 稀释培养基。 加入 2 μg 质粒 DNA（按摩尔化学计量混合 1:2:2 比例的表达载体， 包装质粒和包膜质粒，体积共计 20μl)，轻柔混匀。
在上述 DNA 稀释液中加入 6Байду номын сангаасl X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent（转染试剂：DNA=3：1），轻柔混匀。 +15 至+25℃下孵育 15~30 min，形成转染复合物。
经优化的转染结 果。转染质粒： pGIPZ- eGFP
将 X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent，DNA 和稀释培养基（如 Opti-MEM® I Reduced Serum Medium 或无血清培养基）孵育到室温 （+15 至+25℃）。使用前将转染试剂轻柔混匀。