真菌的分离及常用培养基

真菌用的培养基
真菌的培养基根据其特点和需求不同，可以分为以下几种常见的培养基：
1. 薄膜培养基：如麦芽琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂等。

适用于革兰氏阳性真菌和某些革兰氏阴性真菌的培养。

2. 液体培养基：如液体麦芽琼脂、液体马铃薯葡萄糖琼脂等。

适用于真菌的液体培养、发酵和产生次级代谢产物。

3. 饲养基：如麦麸葡萄糖培养基、马铃薯糖蛋白胨培养基等。

适用于饲养虫化真菌和真菌的寄生菌株。

4. 高营养培养基：如琼脂葡萄糖培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基等。

适用于真菌菌株的快速生长和高产菌。

5. 特殊培养基：如选择性培养基、鉴定培养基等。

根据不同的真菌种类和需求，可以添加抗生素、抑菌剂或特定的营养成分。

此外，还可以根据真菌的特殊要求，进行改良和添加其他成分，从而满足其生长和繁殖的需要。

[沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂，沙堡弱培养基，（一） 组成 40.0g 10.0g12.0- 15.0g 1000ml（二） 制法 上述混合后加入 200mg 氯霉素， 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。

（三） 目的 是常用的分离或保存菌种的培养基。

[ 沙氏液基， SDB]（一） 组成 葡萄糖 40.0g 蛋白胨 10.0g 蒸馏水1000ml（二） 制法 上述混合后加入 200mg 氯霉素， 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。

[ 加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，SDA with antibiotic]（一） 组成 葡萄糖 40.0g 蛋白胨 10.0g 琼脂 12.0〜15.0g 蒸馏水 1000ml（二） 制法上述混合后加入 200mg 氯霉素。

250mg 放线菌酮， 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。

[改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，modified SDA]（一） 组成 葡萄糖 20.0g 蛋白胨 10.0g 琼脂 12.0〜15.0g 蒸馏水1000ml（二） 制法 上述混合后 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。

（三） 目的 保存菌种培养基。

[ 马铃薯葡萄糖琼脂， PDA]（一） 组成 马铃薯 200.0g 葡萄糖 20.0g 琼脂12.0〜15.0gSDA]葡萄糖 蛋白胨 琼脂 蒸馏水蒸馏水1000ml（二）制法先将马铃薯洗净去皮切片，加水180ml ，煮沸30 分钟后过滤，再加葡萄糖、琼脂，将过滤液补足到1000ml ，121 摄氏度灭菌后备用。

（三）用途此培养基是培养真菌较好的培养基，同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。

鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。

[玉米吐温80 琼脂，CMA with T w80]（一）组成玉米粉琼脂蒸馏水吐温80（二）制法40.0g15.0g1000ml10ml先将玉米粉混于水中，65 摄氏度水浴一小时，过滤，再补足水量，然后加入琼脂和吐温80，121摄氏度10 分钟灭菌后备用。

菌类的分离和培养技术菌类（Fungi）是一类生物体，包括真菌（True Fungi）和微生物（Microfungi）两个大的类群。

菌类在生物圈中具有广泛的分布和重要的生态功能。

为了研究和利用菌类，科学家们开发了一系列分离和培养技术，以便从自然环境中获取纯种菌株以及大规模培养和应用特定的菌株。

本文将介绍菌类的分离和培养技术的基本原理和常用方法。

一、菌类的分离技术菌类的分离是指从混合菌群中获得纯种菌株的过程。

分离技术的关键是保持菌种的纯度和活力。

下面介绍几种常用的菌类分离技术。

1. 表层分离法表层分离法是最常用的菌类分离技术之一。

它适用于土壤、水域等含大量微生物的环境。

具体操作步骤为：取样→稀释→接种→均匀涂布→培养。

通过稀释操作可以使菌落分布在培养基表面，然后进行培养。

最后通过单菌落转接到新的培养基中得到纯种菌株。

2. 筛选法筛选法适用于需要寻找特定菌株的情况，例如寻找产生特殊代谢产物、拥有特定生态功能的菌株等。

筛选方法一般包括抗生素筛选、生理代谢筛选或染色筛选等。

在培养基中添加适当浓度的抗生素或其他化合物，只有目标菌株具有耐受能力，才能生长并形成菌落。

3. 寄主种菌法寄主种菌法是一种利用特定寄主与菌株共生的技术。

例如，某些菌株只通过与某种植物的根系共生才能生长。

通过将寄主植物的根系或其他寄主组织接种到含有该菌株的培养基上，就可以分离出特定的菌株。

二、菌类的培养技术菌类的培养是指将分离得到的纯种菌株在合适的环境条件下进行大规模的培养和繁殖。

下面介绍几种常用的菌类培养技术。

1. 液体培养法液体培养法是最常用的菌类培养方法之一。

通过将纯种菌株接种到含有营养物质的液体培养基中，利用摇床或震荡培养箱等设备进行培养。

液体培养法适用于大量培养、产生菌体、代谢产物等应用。

2. 固体培养法固体培养法是将菌株接种到固体培养基上，培养出菌落后进行培养的方法，常用的固体培养基有琼脂培养基等。

固体培养法主要用于分离和筛选菌株。

一、实验目的1. 观察和描述真菌的形态特征。

2. 学习真菌的培养和分离方法。

3. 了解真菌在自然界中的作用及其与人类生活的关系。

二、实验材料与试剂1. 实验材料：土壤、水果（如苹果、香蕉）、面包等富含真菌的食物。

2. 试剂：无菌水、无菌棉签、无菌培养皿、牛肉膏蛋白胨培养基、乳酸酚棉蓝染色液等。

三、实验方法1. 真菌的采集与分离（1）采集土壤样品，用无菌水将土壤样品稀释至一定浓度。

（2）用无菌棉签蘸取稀释后的土壤样品，均匀涂抹在牛肉膏蛋白胨培养基上。

（3）将培养皿倒置，放入恒温箱中培养。

（4）观察菌落生长情况，挑取典型菌落进行纯化。

2. 真菌的形态观察（1）将纯化后的真菌菌落接种于牛肉膏蛋白胨培养基上，培养至适宜时期。

（2）用无菌水轻轻洗去菌落表面的培养基，制成临时玻片。

（3）用乳酸酚棉蓝染色液染色，镜检观察真菌的形态。

3. 真菌的培养与繁殖（1）将分离得到的真菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基上，培养至菌落丰满。

（2）用无菌水稀释菌液，制成一定浓度的孢子悬液。

（3）将孢子悬液接种于新的牛肉膏蛋白胨培养基上，观察菌落生长情况。

四、实验结果1. 真菌的形态特征观察到的真菌菌落呈现出不同的形态，如绒毛状、蜘蛛网状、絮状等，有的菌落呈现出红色、褐色、绿色等不同的颜色。

2. 真菌的培养与繁殖在牛肉膏蛋白胨培养基上，真菌菌落生长迅速，繁殖能力强。

通过稀释孢子悬液，可以观察到真菌的繁殖过程。

五、讨论与分析1. 真菌在自然界中广泛分布，与人类生活密切相关。

本次实验观察到的真菌菌落形态各异，体现了真菌的多样性。

2. 通过培养真菌，可以了解真菌的生长条件和繁殖方式。

真菌的繁殖能力强，可以通过孢子进行繁殖，这也是真菌在自然界中广泛分布的原因之一。

3. 真菌在食品、医药、生物工程等领域具有广泛的应用价值。

例如，真菌可以用于生产抗生素、酶等生物制品。

六、实验总结本次实验成功观察到了真菌的形态特征，并学习了真菌的培养和分离方法。

通过实验，我们对真菌有了更深入的了解，认识到真菌在自然界和人类生活中的重要作用。

牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化10g钠琼脂15~20gpH 7.0~7.2水1000mL 121℃灭菌20min。

2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀20g粉硝酸钾1g氯化0.5g钠磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g琼20g脂水1000mLpH7.2～7.4配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。

121℃灭菌20min。

3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH 自然121℃灭菌20min。

4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红100mL（rose bengal，玫瑰红水溶液）琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。

临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。

5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）马铃薯200g蔗糖（或葡萄糖）20g琼脂15—20gpH 自然培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。

121℃灭菌30min。

6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。

(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。

加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

细菌和真菌的培养过程一、培养基的准备培养基是细菌和真菌生长必需的营养物质和环境条件。

常用的培养基分为无机培养基和有机培养基两类。

1.无机培养基无机培养基以无机盐和水为基础。

常用的无机培养基有普通营养盐基础培养基、肉膏蛋白水解物培养基、大肠杆菌培养基等。

2.有机培养基有机培养基则以富含有机物质的基质为基础，如土壤、植物提取物等。

有机培养基对一些特殊的细菌和真菌的培养更为适用。

二、无菌技术无菌技术是细菌和真菌培养中至关重要的一步。

通过无菌技术，可以杜绝外界的微生物污染，保证实验结果的准确性。

1.器具的消毒所有用于培养的器皿、培养基和培养试管等都要经过高温高压灭菌法或化学消毒法进行消毒处理。

三、菌种的选取对于细菌和真菌培养初期，通常会选择纯菌株进行培养。

纯菌株是指在培养基上生长的单一物种的菌落，可以确保实验的可靠性。

菌种可以通过分离自自然环境中的样品，例如土壤、水体、植物和动物组织等。

2.菌种的分离菌种的分离需要在无菌条件下操作。

将样品接种于含有适当培养基的平板上，然后在恰当的温度下培养，使不同的细菌和真菌产生单独的菌落。

四、菌落的鉴定菌种鉴定是培养过程中的关键步骤。

通过鉴定可以确定菌种的物种和特性，有助于后续实验的开展。

1.形态学鉴定首先，观察菌落的形态、颜色、质地等特征。

接着，通过显微镜观察细胞形态等微观特征。

2.生理生化鉴定通过菌落的生长特点和代谢产物来进行鉴定。

使用特殊培养基和试剂，判断菌种的生理特性和代谢产物。

五、菌种的保存为了长期保存和使用菌种，必须进行菌种的冻存和液氮保存。

1.冻存法将菌株培养液混合稀葡萄糖溶液制成菌株悬浮液。

然后将悬浮液分装到无菌的冻管中，使用低温冷冻冷藏保存。

2.液氮保存法将菌株培养液以10%的甘油进行保护，分装到无菌的冻管中，然后迅速放入液氮罐中进行冷冻保存。

此文档下载后即可编辑[沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂，沙堡弱培养基，SDA]（一）组成葡萄糖40.0g蛋白胨10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素，121摄氏度10分钟灭菌后备用。

（三）目的是常用的分离或保存菌种的培养基。

[沙氏液基，SDB]（一）组成葡萄糖40.0g蛋白胨10.0g蒸馏水1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素，121摄氏度10分钟灭菌后备用。

[加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，SDA with antibiotic] （一）组成葡萄糖40.0g蛋白胨10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素。

250mg放线菌酮，121摄氏度10分钟灭菌后备用。

[改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，modified SDA]（一）组成葡萄糖20.0g蛋白胨10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水1000ml（二）制法上述混合后121摄氏度10分钟灭菌后备用。

（三）目的保存菌种培养基。

[马铃薯葡萄糖琼脂，PDA]（一）组成马铃薯200.0g葡萄糖20.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水1000ml（二）制法先将马铃薯洗净去皮切片，加水180ml，煮沸30分钟后过滤，再加葡萄糖、琼脂，将过滤液补足到1000ml，121摄氏度灭菌后备用。

（三）用途此培养基是培养真菌较好的培养基，同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。

鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。

][玉米吐温80琼脂，CMA with Tw80（一）组成玉米粉40.0g琼脂15.0g蒸馏水1000ml吐温80 10ml（二）制法先将玉米粉混于水中，65摄氏度水浴一小时，过滤，再补足水量，然后加入琼脂和吐温80，121摄氏度10分钟灭菌后备用。

（三）用途用于观察白念珠菌厚壁孢子及假菌丝；红色毛癣菌在此培养基产色素较好。

[米饭培养基rice grain medium](一)组成大米300.0g蒸馏水1000ml（二）制法将3g大米放入试管中，加入10ml蒸馏水，高压121摄氏度10分钟灭菌后备用。

植物真菌类病害组织病原菌的分离及抑菌圈实验1、病原菌的分离培养及保存1.1材料：（1）病害组织（2）分离培养基（PDA培养基）：20%土豆煮汁，2%琼脂条，1%葡萄糖，蒸馏水，121℃高温灭菌（3）次氯酸钠（4）试管斜面培养基：成分为PDA培养基，121℃高温灭菌1.2方法：剪取作物病害部位，将病害部位用次氯酸钠表面消毒后，置于分离培养基上，然后放置于28℃恒温培养箱内培养。

7天后取出，通过菌落形态和孢子镜检挑选出所要分离的病原菌转接试管斜面，然后将斜面放置于28℃恒温培养箱内培养。

7天后取出，包好放于4℃冰箱内低温保存。

2、病原菌摇瓶菌丝体的培养及菌液的制备2.1材料：（1）试管斜面孢子（2）摇瓶培养基：20%土豆煮汁，1%葡萄糖，蒸馏水，121℃高温灭菌。

2.2方法：将试管斜面孢子转接到摇瓶培养基，然后将摇瓶放到220转/分的摇床上培养，2—3天后，摇瓶菌丝体长到一定的成熟状态（不同真菌菌丝体不同）后，取下摇瓶，放于4℃冰箱内低温保存，待需要做抑菌圈实验时，将摇瓶从冰箱内取出，用组织捣碎机将摇瓶菌丝体高速捣碎2分钟左右，至菌液状态。

3、供试药剂的抑菌圈实验3.1材料：（1）打碎的病原菌菌液（2）底层培养基：2%琼脂粉、蒸馏水，121℃高温灭菌。

（3）上层培养基：成分同PDA培养基，121℃高温灭菌。

（4）链霉素溶液：2400U/mL3.2方法：（1）融化底层培养基，待温度降至70℃，倒入测定木盘，放平至凝固。

（2）融化上层培养基，待温度降至54℃，用无菌移液管加入1mL链霉素溶液以防杂菌干扰；继续降温至48℃，用无菌移液管加入6—12mL的病原菌菌液后迅速晃匀后，倒入测定木盘，放平，待凝固后，即做成抑菌圈实验所用的测定盘。

（3）稀释供试药剂到制定浓度。

（4）在测定盘内摆放牛津杯。

（5）用P型移液器将稀释好的药剂滴入牛津杯内，滴液量为0.26mL/杯，然后盖上玻璃板，放置于28℃恒温培养箱内培养，培养时间为16—18小时。

牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）121℃灭菌20min。

2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。

121℃灭菌20min。

3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）121℃灭菌20min。

4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）112℃灭菌30min。

临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。

5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。

121℃灭菌30min。

6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。

(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。

加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

(4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。

121℃灭菌30min。

7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）113℃灭菌30min。

8、半固体肉膏蛋白胨培养基121℃灭菌20min。

9、合成培养基加12 mL0.04%的溴钾酚紫（pH5.2—6.8，颜色由黄变紫，作指示剂）。

121℃灭菌20min。

10、豆芽汁蔗糖（或葡萄糖）培养基培养基的配制：称新鲜豆芽100g，放入烧杯中，加入水1000mL，煮沸约30min，用纱布过滤。

用水补足原量，再加入蔗糖（或葡萄糖）50g，煮沸熔化。