输血科RhD血型鉴定
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输血科Rh（D）血型鉴定
1、实验原理
红细胞与抗D抗体发生凝集反应表明该细胞有D抗原，反之，无凝集现象表明试验的红细胞缺少正常强度的D抗原。
2、标本收集和制备
无菌操作收集血液标本,收集后尽可能立即进行实验。如果不能立即实验,应将样品贮存于 2-8C。收集在
ACD、CPD、CPD－2A 液中的血液标本,不超过 21天仍可进行实验，但是加EDTA、肝素和凝集的血液标本，实验应在2天内进行。
3、仪器、试剂、校准品、质控品、培养基、以及其他所需物品：
Rh(IgM)血型定型试剂（单克隆抗体）： 4、操作步骤
4.1 玻片法：
4.1.1 干净玻片上加1滴抗D。
4.1.2 再加入1滴40%-50%的被检红细胞悬液。该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞。
4.1.3 在圆形的玻片区域中混匀，前后缓慢摇晃玻片。2分钟左右肉眼判读结果。不要将试剂的干燥与凝集相混淆。
4.1.4 如果是阴性，需要试管法重做一遍实验。
4.2 盐水试管法
4.2.1 加一滴抗D试剂于预先标记好的试管中
4.2.2 再加1滴约3%—5%红细胞生理盐水悬液于试管中。混匀。
4.2.3 离心，速度和时间可选择以下二种之一： 转速1000rpm，时间一分钟1分钟或3400rpm，时间15秒。
4.2.4 检查是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，是细胞再悬浮起来。
4.2.5 观察凝集状况，并立即记录结果。必要时可借助显微镜。
4.2.6 若是阴性结果，需在37℃孵育15分钟-30分钟，然后再离心观察结果。结果若呈阴性需进一步确认是否是弱D。
4.3 微量板法（U型板）
4.3.1 加一滴抗D试剂于U型底的微孔中。
4.3.2 再在微孔中一滴约 3-5%的被检红细胞悬液，细胞悬液需事先制备于生理盐水中。
4.3.3 用机械的方法将U型板混匀。
4.3.4 用板式离心机离心：2000rpm,时间 30 秒。不同的离心机，不同的微量板所需要的离心条件有所区别，正确实验的结果需要适当的离心，使反应板产生清晰的细胞扣及透亮的上清液。
4.3.5 检测溶血情况（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染）。
4.3.6 结果判断：用机械震荡U型板，再悬浮细胞，根据悬浮情况来判断凝集。阳性反应，出现红细胞凝集，而阴性反应在微孔中会出现均匀细胞悬液。
4.3.7 可用肉眼和自动化判读结果。
4.3.8 如果呈阴性，需要试管法重做一遍实验。
5、参考值范围
阳性反应：出现红细胞凝集，为RhD阳性。
阴性反应：红细胞不出现凝集，为RhD阴性。
6、产品性能指标 抗D（IgM）效价大于等于1：64（ccDeeO型） 7、 方法的局限性
VI本实验不能凝集CategoryD 细胞，对于阴性和弱阳性结果，按有关安全输血规范进行确认实验，必要时送血型参比实验室进行确认。
8、注意事项
8.1 试剂含有0.1%W/V叠氮钠，如果摄入会中毒。
8.2 试剂如出现混浊则不能使用，若开瓶使用时间较长后，最好用已知RhD阴性、RhD 阳性红细胞检查结果是否符合，以防制品污染、变质失效，而造成错误。及时贴上开封时间标签，在效期内使用。
8.3 由于人红细胞的D抗原往往表现较弱，故必要时进行显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。
8.4 Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。 8.5 对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检验。
9、 操作性能概要
9.1 假阳性反应原因分析：
9.1.1 试剂中存在具有其他特异性的抗体（指不完全抗
D 抗体），因此，对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份实验。因为使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检验人员意识到有进一步实验的必要。
9.1.2 多凝集红细胞与任何人血清会发生凝集。
9.1.3 当用未经洗涤的细胞做实验时，试样中的自身凝集和异常蛋白质可能引起假阳性结果。
9.14 试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染。
9.2 假阴性反应原因分析：
9.2.1 搞错抗血清 每次试验时应细心核对抗血清瓶子上的标签。
9.2.2 试管中漏假抗血清 在加入细胞悬液之前，必须检查试管中有无抗血清。
9.2.3 某种特定的抗血清不能和其他相应抗原的变异型起反应。
9.2.4 如某种抗血清含有主要对抗 Rh 复合抗原的抗体，则可能与独立的基因产物的个别抗原不发生反应。这在抗C血清最为常见，因为很多抗C血清含有反应性更强的抗Ce成分。
9.2.5 未遵照抗血清使用说明书做试验，如抗血清和细胞的比例以及温育的温度和时间不正确。
9.2.6 抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。
10、参考文献：
全国临床检验操作规程（第3版）
