RH血型鉴定操作规程

检验科ABO及RH血型标准操作规程

1. 【目的】

确保红细胞ABO及RH(D)血型鉴定试验的准确性，防止误定型，特制定本规程。

2. 【职责】

2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

3. 【样本类型及实验前准备】

3.1样本类型：EDTA -K2抗凝管采集血液2ml (标本应新鲜，注意避免污染)

3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。

3.3容器添加剂类型：EDTA -K2抗凝管

3.4实验试剂：1.ABO： 1. 1抗A、抗B和抗AB血型定型试剂。

1.2 5%A、B及O型试剂红细胞悬液。

1.3受检者血清。1.4受检者5%红细胞盐水悬液。

2. RH 2.1IgG型抗D标准血清。

2.2 5%D阳性红细胞生理悬液。2.3 5%D阴性红细胞生理悬液。

4. 【测定原理】

ABO血型鉴定：

生理盐水凝集法一试管法

常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。常用的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。

RH鉴定：

红细胞RH表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清来鉴定。虽然Rh血型系不能在盐水介不能在盐水介质中与红统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。Rh(D)抗体属于IgG类，细胞发生凝集，因此必须采用低离子强度盐水试验或酶介质法。

5. 【操作步骤】

ABO鉴定步骤：

1. 试管架每一竖排准备2只试管，分别为抗A，抗B试管。

2. 标本接收后进行标号，对应相应的试管标号。

3. 分别加入A，B型标准血清和受试者的红细胞悬液各两滴，混匀后离心2分钟。

ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程

(一)检验目的

检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。

(二)检验原理

1.手工试管法、玻片法或纸板法 利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。

2.微柱凝胶法 ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。

3.玻璃珠微柱法 ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。 (三)适用范围

适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。

(四)设备性能参数

各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。

(五)器材与试剂

1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue

Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100mm×12mm和75mm×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。

ABO和RH（D）血型鉴定操作规程

一、目的：规范ABO和RH(D)血型鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。

二、适用范围：适用于血库ABO和RH（D)血型鉴定

三、所需材料和设备:

1、材料：抗—A、抗—B、抗—D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞,生理盐水，滴管，患者标本。

2、设备：离心机，显微镜.

四、操作规程

1、试管法:

（1） 取洁净试管3支，分别标明抗A、抗B及抗D,分别加入抗A、抗B及IgM抗D单克隆血清各1滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5％红细胞生理盐水悬液1滴,轻摇混匀。

（2） 另取洁净试管3支，分别标明A、B和O，用滴管分别加入受检者血浆1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液1滴,轻摇混匀。

（3） 立即以1000r/min离心1分钟后将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(溶血）现象。如肉眼不见凝集,应将反应物取置于玻片上，再以低倍显微镜检查。

（4） 观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度，有助于A、B亚型,类B或嵌合体血型的发现。

2、玻片法：

(1) 取血型鉴定专用玻璃板一块，在凹孔旁分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B及抗D单克隆血清1滴，再各加受检者5%红细胞悬液1滴,混匀。

(2） 标明A、B及O细胞，分别加入受检者血浆1滴,再各加入A、B及O型试剂红细胞悬液1滴，混匀.

（3） 轻轻转动玻板，使血清与红细胞充分混匀,连续15分钟以肉眼观察有无凝集(溶血)反应。有需要时也可用低倍显微镜观察结果.

(4) Rh（D）血型鉴定时应作阳性对照及阴性对照。

3、结果判断:

单克隆血清＋受检者红细胞 受检者血型 受检者血浆＋试剂红细胞 抗A 抗B 抗D A细胞 B细胞 O细胞

＋ — ＋/－ A 型 Rh(D)＋/－ － ＋ －

ABO、RH血型检测（试管法）标准操作规程

【操作人员】经批准人授权的同志

【部门主管】

【质量控制员】

【目的】

保证测试结果的准确性。

【适用仪器范围】

双目显微镜、普通离心机。

【该SOP变动程序】

该标准操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管及科主任签字后生效。

【应用范围】

ABO、RH血型检测的手工操作。

【标本采集和处理】

由临床科室采用真空负压EDTA K2抗凝管采集3ml-5ml，作好标记，立即送检。检验人员认真核对患者姓名、性别、床号、检验目的以及标本是否与申请单一致。确认无误后用专用记号笔在试管与申请单上编写对应数字序号，并按日期索引进行登记。将标本置于台式离心机内，放置保证平衡，以1500转/min离心10分钟。保证血浆于血球有效分离。溶血标本应重采取、乳糜血及标本量不足应加以登记，溶血性疾病应注明。

【检查项目】

一、ABO血型

（一）原理

根据红细胞上有或无A抗原或（和）B抗原，将血型分为A型、B型、AB型和O型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B 分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原；所谓反定型，是用已知A红细胞B 红细胞来测定血清中有无相应的抗-A 或（和）抗-B。

（二）试剂和材料

1．抗-A（B 型血）、抗-B（A 型血）。

2．5％A 、B 试剂红细胞盐水悬液。

3．受检者血浆。

4．受检者5％红细胞悬液。

试剂可在室温2～8℃下避光保存至有效期。 （三）操作步骤

1．试管法

(1)正向定型

a．取试管2支，分别标上A、B字样。

b．向A管滴加抗A分型试剂1滴，向B管滴加抗B分型试剂1滴。

c．向A、B管各滴加5％的待检红细胞悬液各1滴。

d．混匀（天冷时试管架置370C水浴箱15分钟）后配平衡，在离心机内1000转/min离心1分钟。将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象，如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以低倍镜检查。