试管法RH血型鉴定

血型的鉴定方法及操作全解

血型是指人体血液中红细胞表面的抗原特征，主要分为A、B、AB和O四种血型。了解一个人的血型对献血、输血和婚姻等方面都有重要意义。下面将详细介绍血型的鉴定方法及操作步骤。

一、血型鉴定的试剂

1.抗A血清：含有抗A抗体，加入A型血液会凝集。

2.抗B血清：含有抗B抗体，加入B型血液会凝集。

3.抗AB血清：含有抗A和抗B抗体，加入A型、B型和AB型血液会凝集。

4.抗Rh血清（抗D血清）：含有抗Rh抗体，加入Rh阳性的血液会凝集。

二、操作步骤

2.涂血滴定法鉴定血型：

步骤一：取一根牙签，将其浸入患者或供血者的新鲜封闭伤口、创口或皮肤直至有微量血液，然后将牙签上的血涂于三个试管中的三个凹槽中。

步骤二：加入抗A、抗B和抗Rh血清。

步骤三：用滴管分别向三个试管中加入一滴抗A血清，观察结果。如果出现凝集反应，则表示該人的血液中有A抗原，血型为A型；如无凝集反应，则表示人的血液中无A抗原，进入下一步鉴定。 步骤四：用滴管分别向三个试管中加入一滴抗B血清，观察结果。如果出现凝集反应，则表示該人的血液中有B抗原，血型为B型；如无凝集反应，则表示人的血液中无B抗原，进入下一步鉴定。

步骤五：用滴管分别向三个试管中加入一滴抗AB血清，观察结果。如果出现凝集反应，则表示該人的血液中有A和B抗原，血型为AB型；如无凝集反应，则表示人的血液中无A和B抗原，进入下一步鉴定。

步骤六：用滴管分别向三个试管中加入一滴抗Rh血清，观察结果。如果出现凝集反应，则表示該人的血液中有Rh抗原，血型为阳性（+）；如无凝集反应，则表示人的血液中无Rh抗原，血型为阴性（-）。

3.精确测定法鉴定血型：

步骤一：利用滴管取适量血液加入试管中。

步骤二：加入抗A血清滴定至血液凝结。

步骤三：记录滴定的比率，若比率超过1∶3，即滴入的抗A血清多于血液凝集，则表示为A型血液。

步骤四：继续加入抗B血清滴定至血液凝结。

检验科ABO及RH血型标准操作规程

1. 【目的】

确保红细胞ABO及RH(D)血型鉴定试验的准确性，防止误定型，特制定本规程。

2. 【职责】

2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

3. 【样本类型及实验前准备】

3.1样本类型：EDTA -K2抗凝管采集血液2ml (标本应新鲜，注意避免污染)

3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。

3.3容器添加剂类型：EDTA -K2抗凝管

3.4实验试剂：1.ABO： 1. 1抗A、抗B和抗AB血型定型试剂。

1.2 5%A、B及O型试剂红细胞悬液。

1.3受检者血清。1.4受检者5%红细胞盐水悬液。

2. RH 2.1IgG型抗D标准血清。

2.2 5%D阳性红细胞生理悬液。2.3 5%D阴性红细胞生理悬液。

4. 【测定原理】

ABO血型鉴定：

生理盐水凝集法一试管法

常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。常用的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。

RH鉴定：

红细胞RH表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清来鉴定。虽然Rh血型系不能在盐水介不能在盐水介质中与红统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。Rh(D)抗体属于IgG类，细胞发生凝集，因此必须采用低离子强度盐水试验或酶介质法。

5. 【操作步骤】

ABO鉴定步骤：

1. 试管架每一竖排准备2只试管，分别为抗A，抗B试管。

2. 标本接收后进行标号，对应相应的试管标号。

3. 分别加入A，B型标准血清和受试者的红细胞悬液各两滴，混匀后离心2分钟。

ABO＼RhD血型3种鉴定方法的比较

目的:探讨进行ABO、RhD正反定型手工微柱法在血型鉴定中的应用。方法:对门诊送检血样同时采用手工微柱凝胶法及手工盐水试管和玻片法进行ABO、RhD正反对比定型鉴定。结果:一次性正确率,手工微柱凝胶法正定型为100%、反定型为99.92%;试管法分别达到99.92%、99.83%;玻片法正定型率正确率为98.91%。结论:手工微柱凝胶法操作简单、快速,易于观察。其灵敏度高于试管法与玻片法。血型标本便于保存,利于事后复查,值得在二甲以上医院推广。

标签： 微柱凝胶法;试管法;玻片法

在做ABO血型鉴定时,临床广泛应用的玻片法虽操作简单、方便快捷,但在临床实际工作中却时有发生血型鉴定错误现象,而且往往是在患者需要输血治疗申请配血时被发现错定血型,导致临床科室对检验科产生不良印象,认为检验质量差,检验结果不准确、不可靠。对检验科工作会产生很大的负面影响。试管法是传统经典的ABO、RhD血型鉴定方法,其结果准确可靠,但与微柱凝胶法相比,敏感性较差,操作难以规范化、自动化、检测结果不易保存,而微柱凝胶法用于ABO、RhD血型鉴定易于自动化、标准化、结果准确可靠,特异性强等优点被许多大医院所采用。笔者在湘雅三院输血科进修学习期间,对于门诊每天送检血型鉴定标本同时采用手工微柱凝胶法鉴定ABO、RhD血型结果与试管和玻片法进行ABO、RhD血型鉴定结果进行比较。

1材料与方法

1.1材料

湖南省湘雅三院输血科2009年1月~2009年6月门诊血型鉴定1 193例,抽取静脉血1 ml用EDTA-K2抗凝,年龄1 d～90岁。

1.2试剂

ABO、RhD血型定型微柱凝胶试剂卡(单克隆抗体)(长春博迅生物技术有限责任公司提供)反定型用的A型标准试剂细胞、B型标准试剂细胞由本实验室自制2%~5%试剂红细胞,按第一版《临床输血手册》[1]操作。

1.3设备

TD-3A型血型血清学专用离心机(长春博研科学仪器有限责任公司生产)

Rh血型定型操作规程

1.原理

1.1单克隆混合试剂测定法：根据凝集反应原理，当被检测行红细胞上有D抗原存在时，可与抗D混合型血型定型试剂产生特异性的抗原反应，出现红细胞凝集现象。

1.2酶介质测定法：当IgG类小分子特异性血型抗体与具有相应抗原的红细胞相遇时，虽能与红细胞上的特异性抗原结合，却因IgG分子间两个抗原决定簇的跨度小于红细胞间斥力而产生的距离（250nm），不能将相邻的红细胞彼此连接起来。酶介质可破坏红细胞表面的唾液酸，降低红细胞表面负电荷，减少细胞间斥力，使红细胞间的距离缩小，有利于IgG类抗体在两个抗原位点间的连接，使抗原抗体间的反应成为肉眼可见的凝集。

2.操作步骤

2.1玻片法（IgM+IgG型）

2.1.1在玻片方格中加1滴抗D（IgM+IgG）混合试剂。

2.1.2再加2滴2%~5%红细胞生理盐水悬液于抗D混合试剂中。

2.1.3用干净的玻棒完全搅拌上述红细胞与抗D混合液。

2.1.4前后左右倾斜玻片且同时观察凝集现象。

2.1.5如出现凝集，则判断为Rh（D）阳性，反之为Rh（D）阴性。

2.2试管法（IgM+IgG型）

2.2.1在试管中加1滴抗D混合试剂。 2.2.2再加1滴2%~5%红细胞生理盐水悬液于上述试管中，混匀。

2.2.3以3200~3400r/min离心15~30秒。

2.2.4轻轻振摇试管使红细胞重悬，肉眼或显微镜观察有无凝集现象。

2.2.5记录结果，凝集者为阳性反应，反之为阴性反应。

2.3微柱凝胶法：按ABO血型鉴定中微柱凝胶法进行检测，结果判断见ABO血型鉴定操作规程图3-1。

3.注意事项

3.1 Rh血型系统的抗体多由免疫产生，血清中有很多天然抗体存在，故不需作反定型试验。

3.2阳性对照，取3人O型红细胞混合配血。阴性对照不易得到，一般配置方法为正常人AB型血清1滴，5%RhD阳性红细胞悬液1滴和菠萝蛋白酶试剂1滴混匀，与受检管一同置于37℃水浴1小时。