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食品微生物学检验 沙门氏菌检验GB GB 4789.44789.44789.4-20-20-201010北京陆桥技术有限责任北京陆桥技术有限责任公司公司技术服务电话：010-******** 销售服务电话：010-********技术部邮箱：luqiaotech@www. beijinglandbridge .com北京陆桥技术有限责任公司目 录�沙门氏菌简介�2010版国标主要修订内容�沙门氏菌的检验步骤及注意事项�沙门氏菌检验过程中的常见问题www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司沙门氏菌简介�沙门氏菌属沙门氏菌属：肠杆菌科：肠杆菌科�沙门氏菌能引起胃肠炎、伤寒、败血症等人类疾病，严重时能导致死亡。
�种类繁多，抗原结构复杂，种类繁多，抗原结构复杂，在在《ANTIGENIC FORMULAE OF THE SALMONELLA SEROVARS FORMULAE OF THE SALMONELLA SEROVARS》》(2007 9th edition)(2007 9th edition)中已公布了中已公布了2579个血清型个血清型。
�食物是人类感染沙门氏菌的主要途径。
www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司�形态特征：形态特征：革兰氏阴性革兰氏阴性革兰氏阴性、、两端钝圆短杆菌两端钝圆短杆菌，，无芽孢无芽孢，，一般无荚膜，除鸡沙门氏菌一般无荚膜，除鸡沙门氏菌和和雏沙门氏菌外，都有周身鞭毛，运动力强�培养特性：需氧或兼性厌氧，10℃~42℃都可生长，最适生长温度为37℃，最适pH 为6.8~7.8�革兰氏阴性、需氧或兼性厌氧无芽孢杆菌沙门氏菌简介：生物学特征www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司�修改了标准的中英文名称�修改了标准的范围�修改了培养基和试剂；�修改了设备和材料；�修改了附录修改了附录A A （规范性附录）培养基和试剂2010版国标主要修订内容www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司——关于培养基和试剂的修订说明�修改了修改了HE HE HE琼脂和三糖铁琼脂的配方。
检测沙门氏菌的注意事项沙门氏菌是一种革兰氏阴性杆菌，常引起人和动物的食物中毒。
如何正确地进行沙门氏菌的检测非常关键，下面是一些注意事项：1.实验室条件：执行沙门氏菌的检测需要一个干净、整洁、无菌的实验室环境。
实验室应具备适当的设备，如培养箱、显微镜、离心机等，并保持适宜的温度和湿度。
2.培养基的选择：沙门氏菌的生长需要适宜的培养基。
常用的培养基包括牛肉提取物琼脂（B G A）、X L D琼脂、S S琼脂等。
在选择培养基时，应根据需要检测的样品类型和具体实验要求进行选择。
3.样品处理：在进行沙门氏菌检测前，需要对样品进行适当的处理。
不同样品的处理方法有所不同，如食品样品通常需要经过样品预处理、富集培养和菌落鉴定等步骤。
要注意避免交叉污染，使用无菌操作器具，避免使用过期的培养基和试剂。
4.培养条件：沙门氏菌的最适温度为37℃，在此温度下生长最佳。
因此，在进行培养时需要控制适宜的温度。
同时，还需要提供适当的氧气条件，如使用倾斜培养法，避免菌落重叠。
5.鉴定方法：沙门氏菌的鉴定通常包括生理生化试验和分子检测方法。
常用的生理生化试验如糖发酵试验、产气试验、硫代硫酸盐试验等。
分子检测方法如聚合酶链式反应（P C R）、荧光原位杂交（F I S H）等。
为了提高准确性和可靠性，建议在实验过程中使用多种方法进行鉴定。
6.质量控制：为了保证检测结果的准确性，需要进行质量控制。
质控样品可以是已确认为阳性或阴性的样品，用于验证检测方法的灵敏度和特异性。
同时，在实验过程中还需要进行一些质量控制措施，如检测前对培养基进行无菌性验证，对实验操作进行记录和审核等。
7.数据分析和解读：在完成实验后，需要对结果进行适当的数据分析和解读。
对于阳性结果，应注意区分真阳性和假阳性。
可以使用统计学方法对阳性结果进行分析，评估其显著性和可靠性。
总之，正确进行沙门氏菌的检测非常重要，需要注意实验室条件、培养基的选择、样品处理、培养条件、鉴定方法、质量控制以及数据分析和解读等方面。
第 页，共 页沙门氏菌检验原始记录表检测员： 校核人： 审核人：年 月 日 年 月 日 年 月 日样品编号检测类别环境条件温度： ℃ 湿度： ％检测标准 医疗水污染物排放标准 医疗机构污水和污泥中沙门氏菌的检验方法 GB18466-2005 附录B设备名称设备编号增菌□ 污水 移取200mL 污水，用灭菌滤膜抽滤，用100mL 二倍浓度SF 增菌液将滤膜上的杂质洗脱到灭菌三角烧瓶中，摇匀。
37℃下培养12~24h□ 污泥 称取20g 污泥，加200mL 灭菌水，制成1:10混悬液，移取100mL 混悬液，加入到装有100mL 二倍浓度SF 增菌液的已灭菌三角烧瓶中，摇匀。
37℃下培养24h检验项目现象初判断分离 培养SS 培养基平板 37℃培养， h （24~48h ）BS 培养基平板 37℃培养， h （24~48h ）生化试验表1 在TSI 试验培养基内的反应结果TSI 培养基 37℃培养， h （18~24h ）初步判断斜面 底层 产气 硫化氢注：K ：产碱，A ：产酸；+：阳性，—阴性：初步判断：可疑沙门氏菌或非沙门氏菌。
表2 生化反应初步鉴定表葡萄糖甘露醇 麦芽糖乳糖 蔗糖 靛基质 硫化氢 动力 尿素酶注：＋阳性；－阴性；＋/－阳性或阴性表3 补做试验（选做）侧金盏花醇水杨素 氰化钾结果判断注：＋：阳性，－：阴性；结果判断：沙门氏菌或非沙门氏菌。
血清学鉴定盐水 ，多价抗O 型抗血清（ A-F ） 。
结果 mL 样品中 沙门氏菌 备注。
德州市德城区疾病预防控制中心
检测原始记录之一
共页第页检品编号物态/颜色
检测项目沙门氏菌检验检测依据GB 4789.4-2010 食品微生物学检验沙门氏菌检验
设备名称隔水式电热恒温培养箱设备编号
1 检验方法：
1.1 前增菌：加225mL BPW增菌液均质混匀，℃培养小时，日时至日时。
1.2 增菌：轻轻摇动培养物，取1mL接种于10 mL TTB内，℃培养小时，日时至日时。
同时另取1mL接种于10mL SC内，℃培养小时，日时至日时。
1.3 分离：分别用接种环取增菌液1环划线接种BS琼脂平板一个，℃培养小时，日时至日时。
同时另取增菌液1环划线接种沙门氏菌显色培养基平板一个，℃培养小时，日时至日时。
观察菌落生长状况：可疑菌落生长。
1.4 初步生化：若有可疑菌落生长，挑取各选择性平板上2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于℃培养小时，日时至日时，也可同时接种蛋白胨水（供作靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN），于℃培养小时，日时至日时，必要时进行系统生化鉴定及血清学凝集。
初步生化结果：
葡萄糖乳糖蔗糖H2S 产气动力靛基质pH7.2尿素氰化钾赖氨酸脱羧酶
1.5系统生化鉴定：API 20E 生化条：
1.6 血清学凝集：
2 检验结果：根据GB 4789.4-2010食品微生物学检验沙门氏菌检验，在中沙门氏菌。
检测起止时间：年月日时至年月日时
检测人：审核人：
检测原始记录、检测报告存根、检测申请及受理单等合并归档保存。
DCQJY/JLBG 127。
1．适用范围适用于沙门氏菌属的检验。
2.引用标准ＳＮ0170-92 食品卫生微生物学检验3．设备和材料温箱：36 ± 1 ︒C 42±1℃灭菌吸管：1ml 10ml 灭菌试管：12*100mm灭菌平皿电子天平酒精灯玻璃棒金属匙接种环接种针广口瓶：250ml 500ml 锥形瓶：100ml 500ml4．培养基和试剂的制作:(A) 缓冲蛋白胨水(BPW)准确称取4.5g(±0.1g)BPW，倒入500ml锥形瓶中并加入225ml蒸馏水搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解后注入500ml的广口瓶中，高压灭菌121℃、15min冷却后储存冰箱备用。
(B)亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)准确称取2.3g(±0.1g)SC,倒入250ml锥形瓶中加入100ml蒸馏水搅拌均匀静置约10min完全溶解后，注入250ml的广口瓶中储存冰箱备用。
（稍加热可加快溶解速度）(C)硫酸铋琼脂(BS)准确称取4.96g(±0.1g)BS，倒入250ml锥形瓶中并加入100ml蒸馏水浸泡15min后，加热煮沸至完全溶解冷却至50-60℃,迅速倾注5-8个灭菌平皿中储存冰箱内备用。
(D) 胆硫乳琼脂(DHL)准确称取6.43g(±0.1g)DHL ，倒入250ml 锥形瓶中并加入100ml 蒸馏水搅拌均匀,静置10min, 加热煮沸至完全溶解冷却至50-60℃, 迅速倾注5-8个灭菌平皿中储存冰箱 内备用。
(本培养基以当天配制,第二天使用为佳) (E) 三糖铁琼脂（TSI准确称取6.5g(±0.1g)TSI,倒入250ml 锥形瓶中加入100ml 蒸馏水浸泡15min,加热煮沸至完全溶解后分装于试管(12*100mm),每管约装2-4ml 高压灭菌115℃,15min 灭菌后置成高层斜面冷却后储存冰箱备用。
5． 沙门氏菌的检验程序如下：36±1℃ 24±2h6．操作步骤1）前增菌：准确称取25 g（±1g）检样(剪碎)，加入225 ml缓冲蛋白胨水，混匀制成混悬液置于36±1℃温箱中培养24±2h。
XXX中心
沙门氏菌鉴定原始记录
报告单号：共页第页样品名称: 样品数量：
生产厂家：样品性状及包装：
样品来源：检测地点：
采或送样单位：采或送样人：
检验依据：编号或批号：
收样日期：检验日期：
检验项目：分离鉴定致病菌
一、危险性评估：
二、样品前处理
共页第页
血清学凝集试验：
菌种处理：
终末消毒：
四、使用设备、标准菌株和主要试剂：
1、使用设备
恒温培养箱：
恒温培养箱：
显微镜：
高压蒸汽灭菌器：
生物安全柜：
2、标准菌种来源、菌号及代数
沙门氏菌标准菌株：
3、主要试剂、批号及配制记录
SC增菌液：
TTB增菌液：
BS琼脂平板：
科玛嘉沙门氏显色培养基：
三糖铁琼脂：
沙门氏菌诊断血清：
生化鉴定管：
五、检验结果
检毕时间年月日检测者：复核者：
XXX中心
沙门氏菌鉴定原始记录
报告单号：共页第页样品名称: 样品数量：
样品性状及包装：检测地点:
收样日期：检验日期：
检验依据： GB4789.4-2010
检验项目：分离鉴定沙门氏菌
一、样品前处理
用0.45um滤膜过滤500ml水样，将滤膜无菌手续剪碎，分别取适量滤膜进行如下操作。
共页第页
血清学凝集试验：
盐水对照：
沙门氏菌A-F多价O血清：
O4:
O5:
H多价2：
Hf：
三、检验结果
检毕时间年月日检测者：复核者：。
