实验土壤中细菌的分离与纯化

一 实验目的

1 学习掌握倒平板的方法和几种分离纯化微生物的基本操作技术

2 了解不同微生物在液体,半固体,固体培养基上的培养特征

3 学习并掌握各种无菌操作接种技术

二 实验原理

1 微生物的分离纯化原理

自然条件下的微生物往往是不同种类微生物的混合体。为了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。

在自然界中，上壤是微生物生活的良好环境，其中生活的微生物数量和种类都是极其丰富的。土壤中的微生物数量与种类非常多,在通气良好的花园土中，好气性微生物占有绝对优势。本实验以花园土为材料分离土壤中的好气性细菌.

分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法，根据不同的材料，可以采用不同方法，其最终目的是要在培养基上出现欲分离微生物的单个菌落，必要时再对单菌落进一步分离纯化。在用稀释平板法分离微生物时，还可以同时测定待分离的微生物的数量。

2 微生物的培养特征原理

1) 微生物的菌落特征

在固体平板培养基上，单个微生物细胞或孢子生长繁殖可以形成一个具有特定形状的菌落。在一定的培养基上和一定培养条件下，微生物的菌落特征是稳定的，因此通过菌落的观察可以识别细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等几大类微生物。菌落的基本特征包括菌落形状、大小、边缘、隆起度和颜色等。

2) 微生物的培养特征是指微生物培养在培养基上所表现出来的群体形态和生长情况. 一般可用斜面,液体,和半固体培养基来检验不同微生物的培养特征.它们培养在斜面培养基上,可以呈丝线状,

刺毛状, 串珠状,舒展状,树枝状或假根状. 生长在液体培养基内,可以呈浑浊,絮状,黏液状, 形成菌膜, 上层清晰而底部显沉淀状.

穿刺接种在半固体培养基中,可以沿穿刺线向四周蔓延, 或仅沿穿刺线生长, 也可上层生长得好,甚至连成一片,底部很少生长; 或底部长的好,上层甚至不生长.

实验五 土壤中的四类微生物的分离与纯化

（一）实验目的

1.明确培养基的配制原理，并通过对微生物培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤

2.掌握按照研究需要选取不同的环境以找到自己需要的目标菌株的基本方法，学习分离纯化微生物的基本操作技术。进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物培养方法以及接种技术。

3. 学习并掌握放线菌、霉菌、酵母菌形态结构的方法。

4．加深理解放线菌、霉菌、酵母菌形态结构特征

（二）实验原理

1.土壤中存在微生物

土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物无论是数量和种类都是极其多样的，因此，土壤是我们开发利用微生物资源的重要基地，可以从其中分离，纯化到许多有用的菌株。

土壤中含有多种多样的有机和无机营养物，所以被称为微生物生长和繁殖的天然培养基。土壤的环境条件十分复杂多变，其中的微生物种类也极其丰富，1g干的农田土壤中含有几百万个细菌，数十万真菌孢子和数万个原生动物和藻类。

2.富集培养

指从微生物混合群开始，对特定种的数量比例不断增高而引向纯培养的一种培养方法。在适于目标微生物而不适于其他微生物生长的条件下继续培养，则目标微生物将成为优势种而得到纯培养。

3.微生物对营养物质的需求不同

微生物需要各种各样的营养物质，其功能主要有：提供能量，提供合成原料，调节代谢活动进行，提供适宜代谢环境。虽然微生物对各种营养物质需求不同，但是都离不开碳源，氮源，能源，生长因子，无机盐，水。除水外，碳源所需的量最大，其次是氮源。在自养微生物中，能源是日光能或还原态无机物，在异养微生物中，能源就是碳源。在无机盐中，磷，硫需量稍大，钾，镁次之。其他元素和生长因子的需要量一般很少。

4.微生物的生长速度不同

一个微生物细胞在合适的外界环境条件下，会不断地吸收营养物质，并按其自身的代谢方式不断进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过异化作用，则其原生质的总量就不断增加，于是出现了个体细胞的生长。在微生物的研究和应用中，只有群体的生长才有意义。影响微生物生长的主要因素：温度，Ph和氧气。

土壤中微生物分离纯化(电子版实验报告)土壤微生物实验

微生物实验报告

土壤中微生物的分离与纯化

指导教师：李海花

周四晚第四组

实验成员 : 杜玉琪 __9 董天涵 __8 蒋怡菲 __8 逄颖 __5

利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离和

纯化，通过观察微生物的菌落形态特征判断菌的类型并通过平板划线进行分离纯化

【关键词】 土壤 、微生物、菌落观察、分离纯化

1.实验目的1）通过对几种培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。（2）掌握倒平板的方法、接种和无菌操作技术。

（3）初步观察来自土壤中的几类微生物的菌落形态特征， 并能判断菌的类型。（4）学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌握其基本技能。

2.实验原理

（ 1）培养基的配制与灭菌

培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分

离、鉴别、保存各种微生物或积累代谢产物。一般的培养基应包含适合微生物生长的 6 大

营养素即水分、碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子。不同微生物对 pH 要求不一样，霉

菌和酵母菌的培养基的 pH 一般是偏酸的，而细菌和放线菌培养基的 pH 一般为中性或微碱

性。所以配制培养基时还要根据不同微生物的要求将培养基的 pH

调到合适的范围。已配制

好的培养基必须立即灭菌， 如来不及灭菌， 应暂存冰箱， 以防止其中微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基酸碱度所带来不利影响。

（ 2）微生物的培养及鉴定

接种：将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。

接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。

接种的关键是要严格的进行无菌操作。

鉴定：常见与常用的微生物中 ,根据它们的主要形态可分为细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类。细菌菌落光滑，易于基质脱离；放线菌菌落质地致密，菌落较小，广泛延伸；酵母菌菌落较细菌菌落大而厚；霉菌形成的菌落较稀松，多成绒毛状，絮状。

实验六 土壤中微生物的分离和纯化, 微生物的培养特征观察,环境中的微生物

日期11月24号 星期三90

一 实验目的

1 学习掌握倒平板的方法和几种分离纯化微生物的基本操作技术

2 了解不同微生物在液体,半固体,固体培养基上的培养特征

3 学习并掌握各种无菌操作接种技术

二 实验原理

1 微生物的分离纯化原理

自然条件下的微生物往往是不同种类微生物的混合体。为了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。

在自然界中，上壤是微生物生活的良好环境，其中生活的微生物数量和种类都是极其丰富的。土壤中的微生物数量与种类非常多,在通气良好的花园土中，好气性微生物占有绝对优势。本实验以花园土为材料分离土壤中的好气性细菌.

分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法，根据不同的材料，可以采用不同方法，其最终目的是要在培养基上出现欲分离微生物的单个菌落，必要时再对单菌落进一步分离纯化。在用稀释平板法分离微生物时，还可以同时测定待分离的微生物的数量。

2 微生物的培养特征原理

1) 微生物的菌落特征

在固体平板培养基上，单个微生物细胞或孢子生长繁殖可以形成一个具有特定形状的菌落。在一定的培养基上和一定培养条件下，微生物的菌落特征是稳定的，因此通过菌落的观察可以识别细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等几大类微生物。菌落的基本特征包括菌落形状、大小、边缘、隆起度和颜色等。

2) 微生物的培养特征是指微生物培养在培养基上所表现出来的群体形态和生长情况. 一般可用斜面,液体,和半固体培养基来检验不同微生物的培养特征.它们培养在斜面培养基上,可以呈丝线状, 刺毛状, 串珠状,舒展状,树枝状或假根状. 生长在液体培养基内,可以呈浑浊,絮状,黏液状, 形成菌膜, 上层清晰而底部显沉淀状. 穿刺接种在半固体培养基中,可以沿穿刺线向四周蔓延, 或仅沿穿刺线生长, 也可上层生长得好,甚至连成一片,底部很少生长; 或底部长的好,上层甚至不生长.