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酶联免疫反应加速仪在HIV抗体筛查试验ELISA法中的应用与探讨

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·检验与临床·酶联免疫反应加速仪在ＨＩＶ抗体筛查试验ＥＬＩＳＡ法中的应用与探讨肖中华，张爱华，王小芳(乐安县人民医院检验科，江西乐安344300)中图分类号R446.61,R512.91文献标识码B文章编号1674-1129(2012)06-0607-02doi:10.3969/j.issn.1674-1129.2012.06.033关键词：酶联免疫反应加速仪；HIV抗体筛查；ELISA 随着HIV感染人数的逐年上升，HIV抗体初筛实验室在各县级医院的逐步建立，使得HIV抗体筛查已在县级以上医院作为产前检查和输血前检查的必检项目，而HIV抗体初筛实验室则承担这项繁重而艰巨的任务。

ELISA法目前以其在HIV 抗体筛查方法中较为敏感的优势成为各HIV抗体初筛实验室首选使用的初筛方法[1]，但因其多为两步法，检测时间较长，明显影响工作效率。

为提高工作效率，我科引进一台酶联免疫反应加速仪(加速仪)，笔者将其应用到HIV抗体初筛实验的ELISA法中，并将其在使用过程中对检测结果的影响进行分析，结果如下。

１材料与方法1.1试剂英科新创(厦门)HIV(1+2)型抗体筛查试剂盒，批号：2012026604。

1.2仪器NY/MMJ型酶联免疫反应加速仪(四川诺亚医疗科技有限责任公司)；SHHW1恒温水浴箱(上海东星)；DNX-9620A洗板机(北京普朗)；ELX800型双波长酶标仪(美国宝特)。

1.3样本(1)质控品A(批号201111，1NCU/ml)和质控品B(090520，2NCU/ml)，由潍坊三维生物工程集团有限公司提供。

(2)89份血清样品：3份江西省疾控盲样考核的HIV抗体阳性样本；5份经确诊为HIV感染来本院就诊患者的血清样本；81份为本院HIV抗体筛查患者血清库中随机抽取的样本。

1.4方法1.4.1水浴法严格按试剂盒说明书操作:(1)加样本37℃水浴箱反应60min；(2)加酶标抗原37℃水浴箱反应30min；(3)37℃水浴箱显色30min)。

1.4.2酶联免疫反应加速仪方法(加速仪法)用酶联免疫反应加速仪取代水浴法中的37℃水浴箱，并每步设不同反应时间，具体见表1。

1.4.3将质控品A用生理盐水作倍比稀释，再用上述两种方法检测作敏感度比较。

1.4.4统计学处理(1)定量数据结果用平均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS16.0统计软件，同一标本不同方法两组间的比较采用配对样本t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

(2)阴阳性检出符合率用直接概率计算法(χ2检验的特殊形式)。

２结果2.1不同方法对质控品和89份血清样本的检测结果分别见表2、表3、表4。

2.2结果分析：(1)表2的检测结果显示酶免反应加速仪法第一步反应30min、第二步反应20min和显色30min与操作说明书的水浴法比较，无明显差异(P>0.05)，而其余的各步反应时间均存在差异有统计学意义(P<0.05)。

(2)表3的检测结果显示加速仪法的灵敏度比水浴法高。

(3)表4统计结果显示加速仪法与水浴法的检出率完全一致(P>0.05)。

３讨论酶联免疫反应加速仪是利用免疫结合反应中第30卷第6期实验与检验医学Vol.30No.6 2012年12月EXPERIMENTAL AND LABORATORY MEDICINE Dec.2012表2水浴法和加速仪法不同反应时间质控品检测的结果(x±s)方法OD值S/CO OD值S/CO水浴法加速仪法1第一步15min 加速仪法1第一步30min 加速仪法1第一步45min 加速仪法2第二步10min 加速仪法2第二步15min 加速仪法2第二步20min 加速仪法3第三步15min 加速仪法3第三步30min 加速仪法40.692±0.0210.472±0.0100.692±0.0170.624±0.0410.333±0.0210.330±0.0200.697±0.0260.337±0.0110.673±0.0150.691±0.0224.613±0.0743.147±0.0304.607±0.0614.160±0.1412.220±0.0732.200±0.0714.647±0.0922.247±0.0374.487±0.0504.613±0.0420.820±0.0330.680±0.0110.825±0.0350.772±0.0180.474±0.0560.601±0.0350.809±0.0400.380±0.0110.861±0.0110.843±0.0145.467±0.1154.533±0.0415.502±0.1225.147±0.0623.161±0.1954.007±0.1215.393±0.1392.533±0.0385.741±0.0375.622±0.062质控品A质控品B注：OD值为吸光度；S/CO为样本吸光度/临界值；S/CO≥1为阳性，S/CO＜1为阴性。

表3质控品A倍比稀释后两种方法的检测结果稀释比例OD值S/CO定性结果b OD值S/CO定性结果b未稀释1:2 1:4 1:8 1:16 1:320.6360.2230.1150.0590.0240.0054.2401.4870.7670.3930.1600.033++----0.6510.2180.1530.0620.0210.0084.3401.4531.0200.4130.1400.053+++---水浴法加速仪法a注：a：表中加速仪法为表1中的加速仪法4；b：+为阳性，-为阴性。

表4加速仪法和水浴法对89份血清样本检测结果的统计分析抗HIV(+)抗HIV(-)合计加速仪法抗HIV(+)抗HIV(-)合计88818188189水浴法注：表中加速仪法为表1中的加速仪法4。

抗原抗体结合部分形成互补，凹腔内氨基酸侧键位置有利于产生各种次级键，同时有序施加高频电磁波能促使离子迁移和偶极子转动起免疫分子振转的原理，增加抗原抗体分子的碰撞和结合机会，提高反应体系内抗原抗体分子的相对浓度，解除静态条件下的扩散受限因素，使酶联免疫反应时间大幅度缩短；同时因振动可使形成的热气流均匀受热于整个板孔，提高检测结果的稳定性[2,3]。

本文的实验结果显示酶联免疫反应加速仪法在HIV抗体初筛试验的最佳反应时间为第一步反应为30min，第二步为20min，显色反应时间不可缩短(仍为30min)。

这可能因显色反应不存在抗原抗体相结合，只有酶分解底物反应的原因。

与常规水浴法相比，两者在HIV抗体初筛实验中的检测效果完全一致，且酶联免疫反应加速仪法的灵敏度更好，这与相关文献[4,7]报道酶联免疫反应加速仪应方法37o C水浴加速仪38o C水浴加速仪39o C水浴加速仪加速仪法1加速仪法2加速仪法3加速仪法4-6060-15、30、45--3030-30--10、15、20-203030----15、3030表1酶联免疫反应加速仪方法的反应时间条件反应孵育时间(min)第一步第二步第三步６０８··第30卷第6期实验与检验医学Vol.30No.62012年12月EXPERIMENTAL AND LABORATORY MEDICINEDec.2012用于其它酶联免疫反应实验中可大幅缩短反应时间但不影响检测结果的结论相一致。

综上所述，酶联免疫反应加速仪在确定各步反应最佳时间的条件下，代替常规水浴法应用于HIV 抗体筛查试验ELISA 法中，具有加速抗原抗体反应，大幅缩短检测时间，提高检测灵敏度利于结果判读的作用，同时提高工作效率，值得推广。

参考文献[1]杨秀令,梁琳.四种方法进行HIV 抗体筛查的结果分析[J].实用医技杂志,2008,15(13):1676－1677.[2]李跃进.酶联免疫反应加速仪在检测丙肝抗体中的应用[J].中南医学科学杂志,2011,39(5)：579-581.[3]陆奎英,包广宇,姚颖,等.酶联免疫反应加速仪在酶联免疫反应的实验评价[J].现代检验医学杂志,2011，26(3):5-6.[4]杨曙梅,俞娟,王惠民.酶联免疫反应加速仪在检测乙肝表面抗原中的作用[J].中国实验诊断学,2009,13(12)：1785-1786.[5]瞿良,夏正武,罗成富,等.NY/MMJ 型酶联免疫反应加速仪的性能介绍及临床应用[J].国际检验医学杂志，2010,31(10):1186-187.[6]陈永红,邵永生,马淑慧.酶联免疫反应加速仪在化学发光法检测乙肝病毒的研究[J]．实验与检验医学，2011,29(1):96.[7]余晓慧.酶联免疫反应加速仪在二步法乙肝病毒表面抗原检测中的应用[J].实验与检验医学,2011,29(1)：97-98.·检验与临床·６例细针穿刺细胞学检查误诊分析探讨崔红梅(利川民族中医院检验科，湖北利川445400)摘要：目的分析6例细针穿刺细胞学(FNAC)中误诊为恶性肿瘤的病例，以总结经验吸取教训，避免同样错误的发生，提高诊疗水平。

方法回顾2008年-2011年我科诊断的假阳性病例，分析误诊原因。

结果颈动脉体瘤误诊为转移癌，梭形细胞脂肪瘤误诊为肉瘤，毛母质瘤误诊为基底细胞癌，肉芽肿性乳腺炎误诊为乳腺癌，增生性淋巴结炎误诊为淋巴瘤，淋巴结结核误诊为淋巴结转移癌，结论正确掌握穿刺技术，熟悉各种肿瘤的形态学特征，结合临床，全面分析减少误诊。

关键词：细针穿刺细胞学；误诊；病理学诊断中图分类号R446.8文献标识码B 文章编号1674-1129(2012)06-0609-02doi:10.3969/j.issn.1674-1129.2012.06.034１材料与方法1.1材料2008-2011年6例经我院检验科细胞室诊断为恶性肿瘤，经病理确诊为良性病例。

1.2方法将6例误诊病例的FNAC 结果与临床病理诊断作回顾性分析。

２结果见表1及图1~图6。

病例性别年龄临床体征FNAC 病理学诊断123456男男男女女男455060524535左颈中部，直径约2.5cm 软有搏动感左腹部，直径4cm 边界清楚质地中度，无疼痛，固定左耳廓前直径约2cm 边界清楚质地较硬，无疼痛，表皮破溃左乳外上相限，直径约3cm 质地较硬，固定，无痛感左会阴旁，直径约2cm 固定质地中度，无痛感右颈，直径约2cm 固定质地中度，无痛感转移癌肉瘤基地细胞癌乳腺癌非霍奇金氏淋巴瘤可能性大淋巴结转移癌颈动脉体瘤梭形细胞脂肪瘤毛母质瘤肉芽肿性乳腺炎增生性淋巴结炎淋巴结结核伴坏死表16例患者临床资料及FNAC 与病理诊断对比结果图1颈动脉体瘤(瑞氏染色×40)图2梭形细胞脂肪瘤(瑞氏染色×40)图3毛母质瘤(瑞氏染色×40)６０９··。

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酶联免疫法及胶体金法在HIV筛查实验中的应用

酶联免疫法及胶体金法在HIV筛查实验中的应用

・395牛Mod Diagn Treat现代诊断与治疗2020Dec31(24)酶联免疫法及胶体金法在HIV筛查实验中的应用李琦-徐璐"1.新乡市第二人民医院检验科；2.新乡市疾病预防控制中心艾滋病确证实验室，河南新乡453000）摘要：目的研究酶联免疫法及胶体金法在艾滋病病毒（HIV）抗体检测中的应用，方法选取2019年1月~2020年1月新乡市第二人民医院与新乡市疾控中心进行HIV筛査的1208例疑似感染病例，所有病例均接受酶联免疫法及胶体金法检测，最终抗体诊断以免疫印迹分析结果作为金标准，比较两种方法对HIV抗体检测的灵敏度、特异性、准确度及阳性预测值，对比两种方法的筛查时间及成本花费”结果经免疫印迹分析检测后结果显示，1208例病例中有325例HIV抗体阳性,883例HIV抗体阴性，酶联免疫法、胶体金法检测结果与免疫分析结果比较Kappa值分别为0.975.0.942,均具有较好的一致性;酶联免疫法检测的灵敏度、特异性、阳性预测值、准确度均高于胶体金法，比较差异有统计学意义（P<0.05）；酶联免疫法检测时间久于胶体金法，费用成本低于胶体金法，比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。

结论酶联免疫法与胶体金法在HIV抗体检测中应用效果均较好，酶联免疫法检测准确度更高，但胶体金法筛查所花费时间更少，检测速度更快,费用成本较高，患者可根据自身需求选择合适的检测方法。

关键词：酶联免疫法；HIV抗体;一致性;胶体金法中图分类号:R446.61文献标识码：B文章编号：1011-8174（2020）24-3954-02艾滋病是一类由艾滋病病毒（HIV）感染引起的获得性免疫缺陷综合征，病例免疫系统受到病毒攻击,使免疫功能低下，难以应对外界病菌侵犯，使人体易患各类感染性疾病或恶性肿瘤。

HIV抗体检测项目是临床诊断病例是否感染HIV的重要参考标准"，目前临床医学常用的初筛检测方法包括酶联免疫法和胶体金法两种，酶联免疫法具有试剂稳定、操作简便、结果可靠等优点，广泛应用于筛查试验中⑵；胶体金法可快速获取HIV检测结果，但可能存在假阳性或假阴性干扰⑶。

快速法用于HIV抗体检测的探讨

快速法用于HIV抗体检测的探讨

快速法用于HIV抗体检测的探讨摘要】目的在HIV抗体检测中比较快速法与酶标法的敏感性，观察快速法能否用于HIV抗体的初筛。

方法用酶联免疫法（ELISA）、明胶颗粒凝集试验（PA）和胶体硒法（ICA）对同一阳性标本的不同稀释度作检测，比较这三种方法的敏感性。

结果三种方法的敏感性不同， ELISA敏感性最高，PA次之。

结论快速法不适于HIV抗体的初筛，即使要使用，应以ELISA的结果作为最终报告。

【关键词】快速法 ELISA HIV相关规范明确提出可以用快速检测方法对应急、门诊急诊的HIV抗体作检测，主要有明胶颗粒凝集试验（PA），免疫渗滤试验，免疫层析试验等[1]。

但规范中未明确经快速法检测的阴性结果能否直接发出阴性报告，甚至有某些检测机构用快速法检测的阴性结果直接发出了阴性报告，笔者认为存在较大的漏检可能。

据此，笔者选取日常工作中检测出的一份阳性标本，用酶联免疫法（ELISA）、明胶颗粒凝集试验（PA）和胶体硒法（ICA）对该标本的不同稀释度作检测，比较这三种方法的敏感性，报告如下。

1 材料与方法1.1 标本来源：本实验室日常工作中用ELISA检出的HIV抗体呈阳性反应的血清，经上级单位用免疫印迹试验（WB）确认为阳性；收集经检测为HIV抗体阴性的血清，混合，灭活，经二种以上ELISA试剂确认为阴性。

1.2 试剂：ELISA试剂采用珠海丽珠试剂股份有限公司生产的人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法），批号2011051112；PA试剂采用艾康生物技术（杭州）有限公司生产的人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（乳胶层析法），批号200909129；ICA试剂采用Abbott Japan Co.,Ltd.生产的人类免疫缺陷病毒（HIV）1+2型抗体诊断试剂盒（胶体硒法），批号10303K100。

所有试剂均在有效期内使用。

1.3 主要仪器设备：Anthos 2010酶标仪，Finnpipette（20-200μL）加样器，均在检定/校准有效期内使用。

酶联免疫法筛查HIV抗体在艾滋病诊断中的应用价值评价

酶联免疫法筛查HIV抗体在艾滋病诊断中的应用价值评价

酶联免疫法筛查 HIV抗体在艾滋病诊断中的应用价值评价[摘要]目的针对艾滋病病毒感染者和患者采用酶联免疫法对其HIV抗体进行筛查，探究分析该筛查方式对其艾滋病诊断的应用价值。

方法选择2018年3月~2020年11月在疾控中心接受筛查的70例HIV抗体阳性者患者作为本次实验研究对象，根据随机数字法将70例艾滋病患者平均分成两个实验小组，分别是对照组35例，接受胶体金法；研究组35例，接受酶联免疫法，对比并分析两组患者的诊断结果。

结果对照组诊断准确率是74.29%，研究组仅1例（2.86%）患者检测结果不准确，诊断准确率高达97.14%，比对照组高（P<0.05）。

结论相比胶体金法，酶联免疫法筛查HIV抗体更具有临床应用价值，可提高诊断准确率，减少出现误诊和漏诊的情况，让患者尽早接受治疗，对其病情治疗有极大的促进作用，值得临床推广与借鉴。

[关键词]酶联免疫法；胶体金法法；HIV抗体筛查；艾滋病诊断[Abstract] Objective To explore and analyze the application valueof enzyme-linked immunoassay (ELISA) for HIV antibody screening inHIV-infected patients and patients. Methods 70 HIV-positive patients who were screened in CDC from March 2018 to November 2020 wereselected as the subjects of this study. According to random number method, 70 AIDS patients were pided into two experimental groups, namely control group (35 cases), which received colloidal gold method. In the study group, 35 patients received enzyme-linked immunoassay,and the diagnostic results of the two groups were compared and analyzed. Results The diagnostic accuracy of the control group was74.29%, and that of the study group was 97.14%, which was higher than that of the control group (P<0.05). Conclusion Compared with colloidalgold method, ENZYme-linked immunoassay screening HIV antibody has more clinical application value, can improve diagnostic accuracy, reduce misdiagnosis and missed diagnosis, let patients receive treatment as soon as possible, has a great promotion effect on the treatment oftheir disease, worthy of clinical promotion and reference.Key words: ELISA; Colloidal gold method; HIV antibody screening; AIDS diagnosis艾滋病属于临床重大疾病，其又被称为AIDS，由人类免疫缺陷病毒（HIV）感染所引起，患者临床症状表现为盗汗、呕吐、腹泻、皮疹和持续高热等，因患者的病情发展情况不同，其临床症状也有较大差异。

关于HIV抗体检验中酶联免疫吸附法和快速法的比较

关于HIV抗体检验中酶联免疫吸附法和快速法的比较

关于HIV抗体检验中酶联免疫吸附法和快速法的比较艾滋病是当前严重威胁人类健康和生命的一种传染病,由早期的静脉吸毒者共用注射器传播,发展到当今性传播和母婴垂直传播,即向普通人群的传播, 艾滋病的流行给人类的健康、生命安全以及经济社会发展带来了严重影响。

最常用的艾滋病诊断方式是进行抗体检测，要了解和掌握HIV的感染情况，关键就是实验室的检测技术，下文就关于在HIV抗体检测中酶联免疫吸附法和快速法的比较分析及其注意事项的总结。

标签：酶联免疫吸附法;胶体金快速法;HIV抗体;检测一、引言进入20世纪90年代，HIV在我国迅速传播，感染人数成倍增长，艾滋病的防治已经成为全世界面临的重要课题。

HIV感染的诊断以HIV抗体的检测为金标准，为了达到早诊断、早治疗、早管理的目的，全国先后建立了大量的HIV抗体初筛实验室，对HIV抗体检测的准确性要求也越来越高。

现简述关于我站用酶联免疫吸附法及胶体金快速法检测HIV抗体的思考。

二、酶联免疫吸附法对HIV抗体的检测HIV抗体检测是发现HIV感染的有效途径，酶联免疫吸附法（ELISA）是一种敏感性高、特异性强、重复性好的试验诊断方法，由于其试剂具有稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素，以及既适用于规模筛查试验，又可以使用于少量标本的检测等优点，一直以来，成为艾滋病初筛试验室检测HIV抗体普遍使用的方法之一1、试剂的选择:试剂盒的质量直接影响到结果的准确性，因此，要选择灵敏度和准确度较高，而且特异性较强的试剂盒。

选择试剂盒的原则是，必须是经国家食品药品监督管理局注册批准，批检合格，临床评估质量优良，在有效期内的试剂，并经常了解同行对试剂盒使用的反馈情况一级卫生部临床检验中心对参加室间质评实验室试剂盒的综合评价。

本站检测HIV抗体主要采用北京万泰生物药业有限公司试剂盒。

另外，也应该注意试剂的保存，试剂从冰箱中取出后，应先平衡到室温后再使用，用多少取多少，防治反复冻融。