实验三

实验三邻二氮菲分光光度法测定铁的含量一、实验目的 1. 2. 3.学会722S型分光光度计的正确使用了解其工作原理。

4.学会数据处理的基本方法。

5. 二、实验原理根据朗伯—比耳定律Aεbc当入射光波长λ及光程b一定时在一定浓度范围内有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。

只要绘出以吸光度A为纵坐标浓度c为横坐标的标准曲线测出试液的吸光度就可以由标准曲线查得对应的浓度值即未知样的含用分光光度法测定试样中的微量铁可选用的显色剂有邻二氮菲又称邻菲罗啉及其衍生物、磺基水杨酸、硫氰酸盐等。

而目前一般采用邻二氮菲法该法具有高灵敏度、高选择在pH29的溶液中Fe2与邻二氮菲phen生成稳定的桔红色配合物Fephen32 此配合物的lgK稳21.3摩尔吸光系数ε510 1.1×104 L·mol-1·cm-1而Fe3能与邻二氮菲生成3∶1配合物呈淡蓝色lgK稳14.1。

所以在加入显色剂之前应用盐酸羟胺NH2OH·HCl 将Fe3还原为Fe2 2Fe3 2NH2OH·HCl → 2Fe2 N2 H2O 4H 2Cl- 测定时控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜。

三、仪器与试剂722S型或721型分光光度计、容量瓶100mL50mL 、铁标准溶液含铁0.1mg/ml。

准确称取0.8634g的NH4FeSO42·12H2O 置于烧杯中加入20ml1:1HCl和少量水溶解后定量地转移至升容量瓶中以水稀释之刻度摇匀。

、邻二氮菲0.1510-3mol/L新配制的水溶液。

、盐酸羟胺10水溶液临用时配制、醋酸钠溶液1mol/L 2NN3Fe2NNNNNNFe 四、实验步骤 1. 1 10μg·mL-1铁标准溶液配制准确称取0.8634g硫酸铁铵NH4FeSO42·12H2O于100mL烧杯中加60mL 3mol·L-1 H2SO4溶液溶解后定容至1L摇匀得100μg·mL-1储备液可由实验室提供。

实验三 金属材料的压缩实验一、实验目的1．测定低碳钢（Q235 钢）的压缩屈服点sc σ和铸铁的抗压强度bc σ。

2．观察、分析、比较两种材料在压缩过程中的各种现象。

二、设备和仪器1．WES-600S 型电液式万能试验机。

2．游标卡尺。

三、试样采用1525ϕ⨯（名义尺寸）的圆柱形试样。

四、实验原理低碳钢（Q235 钢）试样压缩图如图3-1b 所示。

试样开始变形时，服从胡克定律，呈直线上升，此后变形增长很快，材料屈服。

此时载荷暂时保持恒定或稍有减小，这暂时的恒定值或减小的最小值即为压缩屈服载荷F SC 。

有时屈服阶段出现多个波峰波谷，则取第一个波谷之后的最低载荷为压缩屈服载荷F SC 。

尔后图形呈曲线上升，随着塑性变形的增长，试样横截面相应增大，增大了的截面又能承受更大的载荷。

试样愈压愈扁，甚至可以压成薄饼形状（如图3-1a 所示）而不破裂，因此测不出抗压强度。

铸铁试样压缩图如图3-2a 所示。

载荷达最大值F bc 后稍有下降，然后破裂，能听到沉闷的破裂声。

铸铁试样破裂后呈鼓形，破裂面与轴线大约成45o，这主要是由切应力造成的。

图3-1 低碳钢试样压缩图 图3-2 铸铁试样压缩图五、实验步骤1．测量试样尺寸用游标卡尺在试样高度重点处两个相互垂直的方向上测量直径，取其平均值，记录数据。

2．开机打开试验机及计算机系统电源。

3．实验参数设置按实验要术，通过试验机操作软件设量试样尺寸等实验参数。

4．测试通过试验机操作软件控制横梁移动对试样进行加载，开始实验。

实验过程中注意曲线及数字显示窗口的变化。

实验结束后，应及时记求并保存实验数据。

5．实验数据分析及输出根据实验要求，对实验数据进行分析，通过打印机输出实验结果及曲线。

6．断后试样观察及测量取下试样，注意观察试样的断口。

根据实验要求测量试样的延伸率及断面收缩率 7．关机关闭试验机和计算机系统电源。

清理实验现场．将相关仪器还原。

六、实验结果处理1. 参考表3-1记录实验原始数据。

实验三、酶切与连接一、实验目的与原理简介限制性内切酶在基因工程中主要应用地以下两个方面：制作基因酶切图谱和进行基因克隆。

制作基因图谱，就是利用特定的酶切出特定的条带；而利用基因克隆时选择酶应注意以下几个方面：1）克隆片段的长度；2）克隆片段中切点的情况3）载体上切点的情况；4）切割与连接方式；5）接头状态。

酶切方式可分为部分酶切和完全酶切两种：1）部分酶是指同一DNA 片段上有些被切开而另一些未被切开，此法主要应用于基因 的克隆 。

用部分酶切法是基于基因内部可能有此酶的位点。

进行部分酶切可通过两个方式：一是不同的时间内在同一酶反应管中取样终止反应，利用时间来控制酶切的程度。

另一种是在其余条件相同时控制 酶的稀释度，利用不同酶浓度控制酶切程度，这种方法因易于控制反应而被广泛应用。

2）完全酶切法适用于如载体切割、酶切图谱的制作、基因的鉴定与DNA 片段的分离工作。

完全酶切又可分为单酶切、多酶切两种。

在多酶切反应中当2种或2种以上的酶有相同 的反应条件时，可同时进行酶切，不然须在前一种酶作用完成后将其失活，而后进行第二种酶切反应，这样可以避免片段混乱现象的出现。

二、材料和试剂限制性内切酶NotI 、EcoRI ；10×Buffer ， PCR 产物、pPIC9K 质粒、10×T4连接Buffer 、T4 Ligase 、DDW 、琼脂糖、电泳缓冲液 、Goldview 染液、胶回收试剂盒；电泳仪、恒温水浴锅、EP 管、移液枪、灭菌枪头、紫外检测仪三、实验步骤1）PCR 产物双酶切（NotI ，EcoRI ），pPI9K 质粒双酶切(NotI ，EcoRI )；PCR 体系如下：2）然后电泳检测后在紫外检测仪下观察（UV ，260nm ）。

3）切胶回收（尽量不要切到不含目的片段的胶），按照胶回收试剂盒标准操作。

4）回收产物电泳检测后进行连接：连接体系： 10×T4连接Buffer 1μl目的基因 6μl质粒载体 2μl产物酶切体系pPI9K 质粒酶切体系 DDW4.6μl DDW 7μl 10×HBuffer1μl 10×H Buffer 1μl 目的片段4μl pPI9K 质粒 1.6μl NotI quickcut 0.2μl NotI quickcut 0.2μlEcoRI quickcut 0.2μl(37℃15min) EcoRI quickcut0.2μl(37℃15min)T4 Ligase 1μl混合后16℃，过夜连接。

实验三环境微生物的检测一、实验目的1.了解周围环境中微生物的分布情况。

2.懂得无菌操作在微生物实验中的重要性。

3.了解四大类微生物的菌落特征。

二、实验原理在我们周围的环境中存在着种类繁多的、数量庞大的微生物。

土壤、江河湖海、尘埃、空气、各种物体的表面以及人和动物体的口腔、呼吸道、消化道等都存在着各种微生物。

由于它们体积微小，人们用肉眼无法观察到它们个体的存在。

但是只要稍加留意，我们就可以在发霉的面包、朽木上看到某些微生物群体。

这些现象表明，自然界只要有微生物可以利用的物质和环境条件，微生物就可以在其上生长繁殖。

据此，我们在实验室里就可以用培养基来培养微生物。

培养基是用人工配制的、适合微生物生长繁殖和产生代谢产物用的混合养料。

其中含有微生物所需要的六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、生长因子、气体和水分。

此外，根据不同的微生物的要求，在配制培养基时还需用酸液或碱液调节至适宜的pH。

配制好的培养基必须进行灭菌。

所谓灭菌是指采用各类的物理或化学因素，使物体内外的所有微生物丧失其生长繁殖能力的措施。

经过灭菌后的物体是无菌的。

消毒是与灭菌完全不同的概念，它是指用较温和的物理因素杀死物体表面和内部病原微生物的一种常用的卫生措施。

灭菌的方法较多，广泛使用的是高温灭菌，其中最常用的是高压蒸汽灭菌法。

此法是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的。

在1.05kg/cm2的蒸汽压力下，温度可达121℃。

一般只要维持15~20min，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。

微生物的接种技术是生物科学研究中的一项最基本操作技术。

为了确保纯种不被杂菌污染，在整个接种过程中，必须进行严格的无菌操作。

在实验过程中必须牢固树立无菌概念，经常保持实验台及周围环境的清洁，严格无菌操作，避免杂菌的污染，这是保证实验成功的必要条件。

如将微生物接种到适合其生长的固体培养基表面，在适宜的温度下(一般细菌37℃：霉菌等28℃)，培养一段时间(一般24~48h)后，少量分散的菌体或孢子就可生长繁殖成肉眼可见的细胞群体，此即菌落。