中药色谱柱选取
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色谱柱参数
色谱柱的参数主要包括以下几个方面:
1. 尺寸:包括长度、内径和壁厚。
色谱柱的长度一般在10-30厘米之间,内径一般在1-5毫米之间,壁厚一般在0.1-0.5毫米之间。
尺寸的选择取决于分离物的性质和分析要求。
2. 粒径:色谱柱内填充物的粒径。
粒径越小,表面积越大,分离效果越好,但压力也会增大。
常见的填充物粒径有3、5、10和15微米等。
3. 填充物化学性质:填充物可以是无机物如硅胶、氧化铝等,也可以是有机物如聚苯乙烯、聚乙烯醇等。
填充物的选择取决于被分离物的性质。
4. 凝胶类型:色谱柱可以是非凝胶柱,也可以是凝胶柱。
凝胶柱多用于大小分离,凝胶类型一般为聚丙烯酰胺凝胶。
5. 柱包装密度:色谱柱内填充物的包装密度影响着柱内流体的扩散和分离效果。
一般来说,包装密度越大,分离效果越好,但压力和时间也会增加。
6. pH范围:色谱柱的填充物和柱壁材料需要具有一定的化学稳定性,以适应不同pH值的条件。
7. 温度范围:色谱柱的填充物和柱壁材料需要具有一定的热稳定性,以适应不同温度的条件。
以上是常见的色谱柱参数,根据具体的分析要求和分离物的性质,选择合适的色谱柱参数是非常重要的。
中谱红色谱柱是指由中谱科技(福州)有限公司开发和生产的液相色谱柱。
这类色谱柱在药品分析、食品检测、工商质检等领域有着广泛的应用。
其中,“中谱红”是中谱科技的一个品牌,他们生产多种类型的色谱柱,例如RD-C18、ODS-H等型号,这些色谱柱适用于不同类型的样品分析。
“中谱红RD-C18”是一种反相色谱柱,常用于磺胺类药物的分离与测定,采用5 μm颗粒大小、4.6×150 mm的尺寸规格,流动相为0.05%磷酸:乙腈梯度洗脱,波长为270 nm。
该色谱柱具有普适性和优异的稳定性。
“中谱红ODS-H”色谱柱采用了聚合型键合高密度C18,并经过特色封尾技术处理,对中药、食品中的复杂化合物及化学药中的杂质分离有较好的效果。
这种色谱柱在提高温度时选择性会更好,适合于大黄等中药材的液相分析。
要选择一根合适的商用毛细管柱,主要需要考虑以下几个因素:固定相、内径、柱长、膜厚。
下面分别就这些因素加以讨论。
1、固定相色谱理论上讲,选择固定相首选遵循相似性原则,即:用非极性固定相分析非极性物质,用极性固定相分析极性物质,用含芳香基团的固定相分析芳香族化合物。
在填充柱时代,这个想法是非常正确的,因为那个时候,分离度是首先需要把握的关键因素,分不开,就没办法想其它。
它的理由在于塔板理论的推论,即:组分在固定相中有越大的溶解度,同样的溶解度差异就会产生越大的分离度。
但是在毛细管色谱时代,分离度不再始终是分析的首选问题。
毛细管具有几十万块塔板,如此大的柱效率,以至于不再需要充分考虑分离问题了。
这个时候,样品兼容性、使用温度、稳定性、柱流失情况等,都可能成为选择的主要理由。
例如分析甲醇乙醇丙醇等低级醇类,正常应选择wax类高极性色谱柱。
但是在杂质较少的情况下,选择DB-1这样的非极性柱具有更高的灵活性和使用寿命。
具体选择主要依据以下规则:1)、因为非极性毛细管柱具有明显的稳定性、高使用温度、良好的色谱峰型等有利因素,因此易分离物质应首先选用极性小的色谱柱。
2)、分析氢键型物质用氢键型PEG柱更佳。
3)、轻烃或永久气体用Plot柱更佳。
4)、高苯基固定相对芳香族物质保留能力更强。
但是分析二甲苯等芳烃异构体,首选Wax类强极性色谱柱。
2、内径毛细管柱理论塔板高度与内径成正比。
因此相同长度的毛细管,内径越小柱效率越高。
但内径越小,通常意味着柱容量的减小,在分析低含量组分时,对检测器灵敏度和进样口分流能力的要求越高。
因此在选择内经的时候,首先考虑的是样品分析难点在于分离还是检测。
对于分离困难的样品,首选较小口径的色谱柱;对于含量过低检测困难的样品,首选较大口径的色谱柱。
在没有分析难点的情况下,选择小口径毛细管柱可以缩短柱长,减小分析时间。
下面一张谱图,可以看到不同口径毛细管柱的分离效果。
下面一张表格,是不同口径毛细管柱理论塔板数的参考数据。
中药制剂高效液相常见的色谱柱类型及其检测器类型中药制剂高效液相常见的色谱柱类型包括C18、C8、Phenyl、CN、NH2等。
其中C18属于常规的反相色谱柱,适用于大多数化合物的分离;C8柱的分离效果较C18柱略差,但可以用于分离易失活的化合物;Phenyl柱可以增加由于芳香环与反相胶体间的作用而引起的选择性;CN柱比C18柱对亲水性化合物更为灵敏,适合分离极性化合物;NH2柱与CN柱相似,适于极性化合物的分离。
常见的检测器类型包括UV检测器、荧光检测器、电化学检测器和质谱检测器。
UV检测器是常见的检测器类型,根据样品吸收UV光谱特征进行定量或者鉴定;荧光检测器则根据荧光光谱特征进行检测,其对于化合物的灵敏度一般高于UV 检测器;电化学检测器包括阳极和阴极两种类型,可用于检测电化学反应产生的电信号,最常用的电化学检测器是电化学荧光检测器;质谱检测器则可以对化合物的结构进行进一步的确认和鉴定,其灵敏度和选择性都比较高。
色谱柱选择的原则
选择色谱柱的原则主要根据以下几个方面进行考虑:
1. 样品性质:根据待分离的化合物类型、分子大小、极性、稳定性等特性,选择对应的固定相(如反相、离子交换、手性等)和色谱柱。
2. 分离目标:根据需要分离的化合物种类和数量,选择合适的分离效果(如理论分离度、分离速度)和分析灵敏度的色谱柱。
3. 样品溶剂:根据样品的物理化学性质和溶解度,选择合适的色谱柱,以及可能的流动相组成。
4. 色谱仪的要求:根据使用的色谱仪的性能和技术要求,选择与之相匹配的柱长、内径、填充物类型等。
5. 经济成本:根据实验预算和成本考虑,选择性价比较高的色谱柱。
综合考虑上述因素,选择适合的色谱柱能够提高分离效果,提高分析灵敏度,实现良好的分离分析结果。
色谱柱选择
参照标准
各种担体,名目繁多。
在常用硅藻土担体中:
红色担体(如6201、201),可用于非极性或弱极性物质的分离。
白色担体(如101)可用于极性物质或碱性物质。
釉化红色担体(如301)可用于中等极性物质。
硅烷化白色担体可用于强极性氢键型物质如废水测定。
分离酸性物质,如酚类,要用酸洗处理的担体。
分离碱性物质,如乙醇胺,要用碱洗处理的担体。
有些特殊的情况下要用特殊的担体,如氟担体分离异氰酸酯类。
但是在普通的常量分析中,对担体可以不必过份讲究,甚至如耐火砖粉粒,玻璃珠砂和海沙也可以使用。
中药及天然产物特色色谱柱及样品前处理推荐卡研究方向目标分析物推荐色谱柱UPLC 药典方法ACQUITY HSS T31.8 µm,2.1 x 100 mm注:有对应UHPLC和HPLC柱特色硅胶C18柱,极性范围跨度大,有效增加对极性组分的保留与分离,同时减少非极性组分的过强保留极性组分, 反相保留弱CORTECS T3: 1.6 µm, 2.7 µmHSS T3: 1.8 µm, 2.5/3.5/5 µmAtlantis T3: 3, 5, 10 µm特色硅胶对极性组分的保留与分离,同时减少非极性组分的过强保留其中:CORTECS T3的载量与保留最大高极性组分C18不能保留BEH Amide: 1.7 µm UPLCXBridge Amide: 2.5/3.5/5 µm杂化颗粒酰胺基柱,按耐用性极佳!(=+如需了解详情,敬请联系沃特世消耗品部或致电800(400) - 820 - 2676扫一扫关注沃特世微信研究方向目标分析物推荐色谱柱及SPE应用特色代谢研究DMPK 母药和代谢产物HSS T3: 1.8 µm,2.5/3.5/5 µmCORTECS T3: 1.6 µm, 2.7 µm 代谢产物极性大,羟基化或加葡萄糖或酸化,同时测原型药物和代谢产物,保留效果更好;对分离度要求极高,峰容量大,能给出最多的峰脂类分析及 脂质组学BEH HILIC: 1.7 µm UPLC XBridge HILIC: 2.5/3.5/5 µmOstro 去磷脂板Ostro 可除蛋白和磷脂;也可用于选择性收集磷脂进行分析或进一步进行磷脂组学的研究CSH C 18 (pH 1-11): 1.7 µm,2.5/3.5/5 µm甲酸条件或氨水条件下分析碱性化合物,获得优异的峰形,同时流动相质谱兼容;试100种以上磷脂类化合物内源性或大极性成分分析BEH Amide: 1.7 µm UPLC XBridge Amide: 2.5/3.5/5 µm 内源性成分极性大,对代谢产物分析有干扰,或者从事内源性成分及其代谢产物分析,一般无保留或分离不佳,样品前处理Oasis PRiME HLB中药及其代谢样品基质复杂,部分代谢产物含量低,需要考虑净化和富集;基质效应与便于代谢广谱检查Oasis MCX/MAX/根据化合物酸碱性针对性净化和富集,含有简单备注:所有色谱柱推荐使用配套保护柱。
何选择适合的色谱柱何选择适合的色谱柱选择色谱柱时需要首先考虑的是分离规模1、根据分离规模确定色谱柱大致的规格表1按分离规模分类的高效液相色谱柱微型柱毛细管柱纳米柱柱径/mm>105~102~50.8~2.00.05~0.52、从分析物的物理化学性质抓起,找到大致的色谱柱类型选柱前应当详尽掌控分析物的分子量(或分子量范围)、溶解性、与否离解等信息,然后根据这些性质找出最合适的色谱柱类型。
表2液相色谱分离模式的选择量溶解性拆分模式色谱柱附注溶于正己正相吸附色呋喃gpcsilica2000正相键合色氰基柱、氨基柱谱溶于甲醇/水c18、c8、ph或plrp(反填料孔径通反相色谱常为100å二者聚合物色谱柱)非离子型反相色谱c18、c8、ph或plrp水溶性离子遏制色c18、c8、ph或plrp五音离子型离子对色谱c18、c8、ph或plrp色谱法色ax、cx脂溶性gpcgfc反华相色谱c18、c8、c4或plrp填料孔径通在反相色谱c18、c8、c4或plrp常为300å色谱法ax、cx大于蛋白2000水溶性多肽、质离子型对于色谱柱类型的选择有一些特殊说明:1.反相柱是使用最广泛的色谱柱,而ods又是反相柱中使用最广泛的,据统计目前使用的色谱柱中超过一半是ods柱;由于ods柱的技术最成熟,所以具有高性能、长寿命等特点,所以选择时优先选择ods柱;2.对于反相柱,通常来讲,碳链越长,对化合物的保留越强,分离效果也越好,但选择短碳链的键合相可以节约分析时间;3.反华相色谱柱可以对非极性、强极性、中等极性以及部分弱极性化合物展开拆分,就是应用领域最广泛的色谱柱;反相色谱柱以“分配促进作用”留存分析物,主要以分析物在两看中的溶解性展开挑选,有时无法对同分异构体和结构类似物展开拆分;4.部分离解性较差的化合物,可以通过向流动二者重新加入酸、碱、盐的形式并使分子以某种平衡并且留存性弱的形式存有,然后用反相柱展开分析,这种分析方法包含“离子遏制色谱”和“离子对色谱”;5.plrp就是以聚苯乙烯-二乙烯基苯为填料的色谱柱,为反相柱,奏水性与c18相似,但不具备次级相互作用,分析碱性化合物时不能出现甩尾。
中药成分色谱条件中药成分色谱条件是指在色谱分析中,为了准确地测定中药中的有效成分,需要选择合适的色谱条件进行分析。
中药成分的复杂性和多样性使得色谱条件的选择非常重要,下面将介绍一些常用的中药成分色谱条件。
一、液相色谱条件液相色谱是一种常用的中药成分分析方法,其色谱条件包括流动相、柱温、检测波长等。
1. 流动相流动相是液相色谱中最重要的参数之一,常用的流动相包括甲醇、乙腈、水等。
在选择流动相时,需要考虑到中药成分的极性、溶解度等因素,以保证中药成分在色谱柱上的良好分离。
2. 柱温柱温是指液相色谱柱的温度,可以影响到中药成分的保留时间和分离度。
一般来说,较高的柱温可以提高中药成分的保留时间,但也可能导致峰形变宽或峰峰基线不稳定。
因此,在选择柱温时需要综合考虑中药成分的特性和分离效果。
3. 检测波长检测波长是指在液相色谱检测时所选择的波长。
常用的检测波长包括254nm、280nm等。
选择合适的检测波长可以提高中药成分的检测灵敏度和特异性。
二、气相色谱条件气相色谱是一种常用于挥发性成分分析的方法,其色谱条件包括进样方式、柱温、载气流速等。
1. 进样方式进样方式是指样品进入气相色谱柱的方式,常用的进样方式包括气相进样和液相进样。
在选择进样方式时,需要考虑到样品的性质和浓度,以保证中药成分能够充分挥发并进入气相色谱柱。
2. 柱温柱温是指气相色谱柱的温度,可以影响到中药成分的保留时间和分离度。
一般来说,较高的柱温可以提高中药成分的保留时间,但也可能导致峰形变宽或峰峰基线不稳定。
因此,在选择柱温时需要综合考虑中药成分的特性和分离效果。
3. 载气流速载气流速是指气相色谱柱中载气的流速,可以影响到中药成分的保留时间和分离度。
一般来说,较高的载气流速可以缩短中药成分的保留时间,但也可能导致峰形变宽或峰峰基线不稳定。
因此,在选择载气流速时需要综合考虑中药成分的特性和分离效果。
以上就是一些常用的中药成分色谱条件。
在实际应用中,根据具体的中药成分和分析要求,还需要对这些条件进行优化和调整,以获得最佳的分析结果。