第三章 动植物细胞培养产酶
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植物细胞培养产酶的工艺流程植物细胞培养是一种重要的生物技术手段,可以通过在无菌条件下培养植物细胞,利用其代谢产物来生产各种有用的化合物,其中包括酶。
植物细胞培养产酶的工艺流程主要包括以下几个步骤。
1. 细胞选择和预处理需要选择适合培养的植物材料,一般来说,具有高产酶能力的植物细胞株应该被选择出来。
然后,将选定的植物材料进行消毒处理,以去除外源微生物的干扰。
消毒处理通常使用酒精或含有抗生素的培养基进行,以确保培养过程的无菌性。
2. 培养基的准备培养基是植物细胞培养的基础,可以提供细胞所需的营养物质和生长因子。
常用的培养基包括MS培养基、B5培养基等。
在准备培养基的过程中,需要根据细胞的特性和所需产酶的要求进行调整,例如,添加适量的糖类、氨基酸、维生素等,以满足细胞的生长和代谢需要。
3. 细胞的接种和培养将预处理过的细胞接种到含有适量培养基的培养皿中,然后放入恒温摇床或培养箱中进行培养。
培养条件的选择应根据细胞的特性和产酶的要求来进行,如温度、光照、培养皿的摆放方式等。
在培养过程中,需要定期观察和检测细胞的生长情况,以及产酶的水平。
4. 酶的提取和纯化当细胞生长到一定程度时,可以进行酶的提取和纯化。
一般来说,细胞培养液中的酶可以通过离心、过滤和浓缩等步骤进行分离和富集。
然后,可以使用各种分离技术,如柱层析、电泳等,进一步纯化酶。
在纯化过程中,需要注意保持酶的活性和稳定性,以确保最终产酶的质量和纯度。
5. 酶的活性检测和分析纯化后的酶可以进行活性检测和分析,以确定其酶活性和产酶能力。
常用的酶活性检测方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、比色法、荧光法等。
此外,还可以通过分析酶的底物转化率、产物生成量等指标来评估酶的产酶能力。
6. 酶的应用纯化和活性检测合格的酶可以进行进一步的应用。
根据具体需求,酶可以用于医药、食品、农业、环境等领域的生产和研究。
例如,一些酶可以用于生产药物、酿造啤酒、提取果汁等。
植物细胞培养产酶的工艺流程包括细胞选择和预处理、培养基的准备、细胞的接种和培养、酶的提取和纯化、酶的活性检测和分析以及酶的应用等步骤。
第一章绪论试题精选一、名词解释1、酶2、酶工程3、核酸类酶4、蛋白类酶5、酶的生产6、酶的改性7、酶的应用8、酶的专一性9、酶的转换数二、填空题1、根据分子中起催化作用的主要组分的不同,酶可以分为_蛋白类酶_和核酸类酶_两大类。
2、核酸类酶分子中起催化作用的主要组分是_核糖核酸,蛋白类酶分子中起催化作用的主要组分是_蛋白质_。
3、进行分子内催化作用的核酸类酶可以分为_自我剪切酶_,_自我剪接酶_。
4、酶活力是_酶量_的量度指标,酶的比活力是_酶纯度_的量度指标,酶的转换数的主要组分是_酶催化效率_的度量指标。
5、非竞争性抑制的特点是最大反应速度Vm_减小_,米氏常数Km__不变_。
三、选择题1、酶工程是(C)的技术过程。
A、利用酶的催化作用将底物转化为产物B、通过发酵生产和分离纯化获得所需酶C、酶的生产与应用D、酶在工业上大规模应用2、核酸类酶是(D)。
A、催化RNA进行水解反应的一类酶B、催化RNA进行剪接反应的一类酶C、由RNA组成的一类酶D、分子中起催化作用的主要组分为RNA的一类酶3、RNA剪切酶是(B)。
A、催化其他RNA分子进行反应的酶B、催化其他RNA分子进行剪切反应的R酶C、催化本身RNA分子进行剪切反应的R酶D、催化本身RNA分子进行剪接反应的R酶4、酶的改性是指通过各种方法(A)的技术过程。
A、改进酶的催化特性B、改变酶的催化特性C、提高酶的催化效率D、提高酶的稳定性5、酶的转换数是指(C)。
A、酶催化底物转化成产物的数量B、每个酶分子催化底物转化为产物的分子数C、每个酶分子每分钟催化底物转化为产物的分子数D、每摩尔酶催化底物转化为产物的摩尔数四、判断题(V)1、相同的酶在不同的pH条件下进行测定时,酶活力不同。
(V)2、竞争性抑制的特点是最大反应速度Vm不变,米氏常数Km 增大。
(X)3、催化两个化合物缩成一个化合物的酶称为合成酶。
(X )4、RNA剪切酶是催化RNA分子进行剪切反应的核酸类酶。
酶工程思考题第一章绪论1、酶工程的主要任务是什么?2、简述酶工程的主要内容。
3、简述影响酶催化作用的因素。
4、简述酶活力测定步骤。
5、为什么要对酶的特性进行改良?如何改良?6、两大类酶分类与命名的基础是什么?分类与命名的原则是否相同?7、酶的比活力、酶的转换数与催化周期、酶结合效率与活力回收率、相对酶活力这些概念分别有什么作用?第二章微生物发酵产酶1、简述用于酶的生产的细胞应具备的条件。
2、原核生物酶生物合成调节控制模式的实质分别是什么?在酶的发酵生产中如何运用?3、在DNA分子中,与酶的生物合成有密切关系的基因是什么?它们有什么特点和作用?4、在酶的发酵生产中,为什么应尽量控制溶氧速度等于或稍高于耗氧速度?5、在酶的发酵生产中,如何提高酶产量?6、在酶的发酵生产中,为什么延续合成型是最理想的合成模式?对于其它合成模式的酶,如何使它们接近延续合成型?7、什么是生长和产酶动力学?二者的基本动力学方程是什么?8、绘出微生物发酵产酶的一般工艺流程图。
9、在碳源的选择和使用上,如何注意酶生物合成的调节作用?第三章动植物细胞培养产酶1、简述植物细胞的特性。
2、简述植物细胞培养的特点。
3、简述动物细胞的特性。
4、简述动物细胞培养的特点。
第四章酶的提取与分离纯化1、为什么要对细胞进行破碎?如何破碎?2、简述影响酶提的主要因素。
3、简述沉淀分离的主要方法和原理。
4、简述影响离心分离的主要因素。
5、简述层析分离的主要方法和原理。
6、在离子交换层析中,为什么要对离子交换剂进行处理?如何处理?7、在电泳分离中,颗粒的泳动速度受到哪些因素的影响?第五章酶分子修饰1、在限定位点进行修饰的方法有()。
2、能探酶活性中心位置的方法有()。
3、既是修饰方法,又是固定化方法有()。
4、不改变酶的组成单位及其基团的修饰方法有()。
5、采用定点突变技术的修饰方法有()。
6、只适用于酶分子中含有金属离子的修饰方法有()。
7、目前应用最广泛的修饰方法有()。