金标法检测广州管圆线虫特异性IgG抗体的研究

实验研究CHINESE COMMUNITY DOCTORS 弓形虫是寄生于猫科动物肠道的一种寄生虫，同时，人体脑、心脏、眼、肺、淋巴结等组织也是弓形虫的寄生场所。

弓形虫是一种机会致病原虫，寄生宿主免疫功能低下时，便可能导致严重后果。

全世界范围内，弓形虫广泛分布，其中西方发达国家和地区弓形虫的感染率比较高，国外相关报道称，人群弓形虫平均感染率25%～50%。

近年来，我国人群感染弓形虫病原体的比例越来越大，弓形虫病原体感染会引起人畜共患病，因此，探究有效的检测方式是十分有必要的。

目前常用的检测方法有金标法、间接血凝法与酶联免疫法。

本次调查研究旨在探究这些方法检测弓形虫IgG 抗体的临床价值，为防治工作提供一定的参考，现报告如下。

资料与方法阳性血清(家兔血清呈阳性)：12只实验感染弓形虫病原体家兔血清(由上海市疾控中心提供)，并且要用染色方法对这已经确诊的12只感染家兔血清进行阳性标记。

阴性血清(家兔血清呈阴性)：12只正常健康家兔血清(由上海市疾控中心提供)，并且要用染色方法对这已经确诊的12只健康家兔血清进行阴性标记。

试剂的选用：本次调查研究所采用的所有试剂均由珠海海泰生物有限公司提供，其生产批号及主要成分为：①显色液A，720130867；②显色液B，730140847；③酶标记物，20131007；④样品稀释液，72014064；⑤终止液，740131215；⑥浓缩洗涤液，772540263；⑦阴性对照，20131108；阳性对照，20131108；临界对照，20131108。

仪器：恒温培养箱(Thermo815)、微型振荡器、酶标仪(SPECTRAmax340pc)、各种刻度的微量移液器有机玻璃板(12×8孔1100V)等。

检测方法：间接血凝法：①配置诊断液：严格按照标示的毫升数在试剂中添加无菌蒸馏水，并且稀释摇匀，离心10min，将清液弃除，加上等量的稀释液，放置在4℃下静置24h。

广州管圆线虫病早期优势诊断抗原的筛选与初步鉴定的开题报告一、研究背景管圆线虫病是一种由线虫感染引起的人兽共患传染病，广泛分布于我国及东南亚、南亚等地区，其病因为管圆线虫（Angiostrongylus cantonensis）感染人体而引起的。

病人主要表现为头痛、恶心、呕吐、肢体麻木、感觉减退等中枢神经系统症状。

自2009年开始，广州市持续流行管圆线虫病，成为研究病因、流行病学及治疗等方面的热点问题。

目前，管圆线虫病的诊断主要依靠临床症状、疫区居留史、实验室检测等多种综合手段，但早期诊断仍然存在一定的困难。

因此，开发高灵敏、高特异性的管圆线虫病早期优势诊断抗原，以提高病人的治疗效果和生存率，具有重要的临床意义。

二、研究内容及方法1、研究内容本研究旨在筛选并初步鉴定管圆线虫病早期优势诊断抗原，以提高管圆线虫病的早期诊断率和治疗效果。

2、研究方法（1）采集病人及其周围环境的血液、尿液、粪便、脑脊液等样本，进行实验室检测；（2）利用生物信息学和蛋白质组学的方法筛选潜在的抗原候选物；（3）利用质谱分析和免疫学检测等技术鉴定候选抗原的特异性和敏感性；（4）将鉴定出的抗原进行进一步的优化，制备高纯度的抗原；（5）进行抗原的生物学功能分析和临床应用研究，探索其在临床诊断及治疗中的应用前景。

三、预期结果及意义本研究的预期结果包括：（1）筛选出高灵敏、高特异性的管圆线虫病早期优势诊断抗原；（2）对管圆线虫病的发病机制和抗原抗体反应等方面有更深入的认识；（3）提高管圆线虫病的早期诊断率和治疗效果；（4）促进管圆线虫病的预防和控制。

本研究的意义在于，通过鉴定出高效、高敏感的管圆线虫病早期诊断抗原，提高管圆线虫病的早期诊断率和治疗效果，为管圆线虫病的控制和防治提供新的思路和科学依据。

２００７，２３（４）中国人兽共患病学报ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＺｏｏｎｏｓｅｓ３４５文章编号：１００２—２６９４（２００７）０４—０３４５—０３金标法检测广州管圆线虫特异性ＩｇＧ抗体的研究＊干小仙１，王越１，杨发柱２，张莉莉３，ＰｒａｐｈａｔｈｉｐＥａｍｓｏｂｈａｎａ４摘要：目的探索简易、快速的金标免疫渗滤法检测广州管圆线虫特异性抗体的诊断价值。

方法以广州管圆线虫成虫可溶性抗原点样于固相硝酸纤维素膜上，以胶体金一ｐｒｏｔｅｉｎＡ为标记物，采用自行设计的渗滤装置，检测病人血清中广州管圆线虫特异性ＩｇＧ抗体。

结果检测２１人份广州管圆线虫病人血清，检出阳性１９份，敏感性为９０．５％（１９／２１）；１００人份健康人群血清２份阳性，假阳性率为２％（２／ｌＯＯ）；与旋毛虫病人、血吸虫病人血清交叉反应率分别为２６．７％（８／３０）、３．３％（１／３０），未发现与肺吸虫、囊虫、华支睾吸虫、肺结核病人血清有交叉反应。

结论金标免疫渗滤法快速检测血清中广州管圆线虫特异性ＩｇＯ不仅操作简便、快速，结果判读容易，不需特殊仪器设备。

而且敏感性高，有较好的辅助诊断价值，与旋毛虫病人血清存在交叉反应。

关键词：广州管圆线虫；抗体；金标免疫渗滤法中图分类号：Ｒ３８２．５文献标识码：ＡＲａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃＩｇＧａｎｔｉｂｏｄｙｆｏｒＡｎｇＺＤｓｆｒｏｎｇｙＺ“ｓｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓｂｙｄｏｔｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄｆｉｌｔｒａｔｉｏｎａｓｓａｙＧＡＮＸｉａｏ－ｘｉａｎ，ＷＡＮＧＹｕｅ，ＹＡＮＧＦａ—ｚｈｕ，ＺＨＡＮＧＬｉ—ｌｉ，ＰｒａｐｈａｔｈｉｐＥａｍｓｏｂｈａｎａ（ＺｈｅｊｉａｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ．Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００１３，Ｃｈｉｎａ）ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ａｓｉｍｐｌｅａｎｄｒａｐｉｄｍｅｔｈｏｄｏｆｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄｆｉｌｔｒａｔｉｏｎａｓｓａｙ（ＤＩＧＦＡ）ｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔＯｄｅｔｅｃｔｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃＩｇＧａｎ—ｔｉｂｏｄｙｏｆＡｎｇｉｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓ，ｉｎｗｈｉｃｈｃｒｕｄｅｅｘｔｒａｃｔｓｏｆａｄｕｌｔｗｏｒｍｓｏｆＡ．ｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓｗａｓｕｓｅｄａｓａｎｔｉｇｅｎａｎｄｐｒｏｔｅｉｎＡｗａｓｃｏｎｇｕｇａｔｅｄｗｉｔｈｃｏｌｌｏｉｄｇｏｌｄａｓｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍａｒｋｅｒ．ＡｓｐｅｃｉａｌｐａｄｆｏｒＤＩＧＦＡｗａｓｄｅｓｉｇｎｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｒｅａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｄｕｒｅ．ＩｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｔｈｉｓｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃＩｇＧ－ａｎｔｉｂｏｄｙｏｆＡ．ｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓｗｅｒｅｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔＯｂｅ９０．５％（１９／２１）ａｎｄ９８．０％（９８／１００）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅ２６．７％（８／３０）ａｎｄ３．３％（１／３０）ｏｆｃａｓｅｓｓｈｏｗｉｎｇｃｒｏｓｓ—ｒｅａｃｔｉｏｎｓｗｉｔｈｓｅｒａｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＴｒｉｃｈｉｎｅｌｌａｓｐｉｒａｌｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄｓｃｈｉｓｔｏ—ｓｏｍｉａｓｉｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｎｏｃｒｏｓｓ—ｒｅａｃｔｉｏｎｔＯｓｅｒａｏｆｐａｔｉｎｅｎｔｓｗｉｔｈｏｔｈｅｒｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓｏｆｈｅｌｍｉｎｔｈｉａｓｉｓ，ｓｕｃｈａｓｃｙｓｔｉｃｅｒｃｏｓｉｓ，ｃｌｏｎｏｒｃｈｉａｓｉｓａｎｄｆａｓｉｏｌｏｐｓｉａｓｉｓａｓｗｅｌｌａｓｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，ｃｏｕｌｄｂｅｆｏｕｎｄ．Ｉｔｉｓａｐｐａｒｅｎｔｔｈａｔｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｏｆａｓｓａｙｉｓｎｏｔｏｎｌｙｒａｐｉｄａｎｄｓｉｍｐｌｅｗｉｔｈｏｕｔｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｏｆｓｐｅｃｉａｌｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ，ｂｕｔａｌｓｏｒａｔｈｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃＩｇＧ－ａｎｔｉｂｏｄｙｆｏｒＡ．ｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．ＫＥＹＷＯＲＤＳ：Ａ咒ｇｉｏ“ｒｏ押ｇｙＺ“ｓｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓ；ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ；ＤＩＧＦＡ广州管圆线虫病（ａｎｇｉｏｓｔｒｏｎｇｙｌｉａｓｉｓｃａｎｔｏｎｅｎ—ｓｉｓ）是一种人兽共患的食源性寄生虫病，其病原体广州管圆线虫［Ａｎｇｉｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓ（Ｃｈｅｎ，１９３５）Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ，１９４６３是由陈心陶氏首先在广东家鼠及褐家鼠肺血管中发现的。

广州管圆线虫病的检查项目有哪些？检查项目：脑脊液细胞分类计数、颅脑CT检查、脑电图检查、免疫学检测、脑脊液压力、酶联免疫吸附试验、CT检查、嗜酸性粒细胞数、颅脑MRI检查、血常规、脑脊液检查-化学检查-蛋白质检查外周血液及脑脊液中嗜酸性粒细胞明显增多是其特点。

1.非特异性检查(1)血液：白细胞总数可在正常范围，但以轻度升高为多，常超过10×109/L。

嗜酸性粒细胞增多，占0.08～0.37，常多于0.15。

(2)脑脊液：外观清亮或稍黄浊，白细胞数升高，达(50～1400)×106/L，多核细胞与单核细胞大致各半，嗜酸性粒细胞占0.10～0.62。

蛋白质正常或升高，0.27～1.09g/L，糖和氯化物多在正常范围。

2.特异性检查(1)镜检病原体：可在患者的脑脊液中发现广州管圆线虫的第四或第五期幼虫，检出率为10%～44%。

曾在1例2岁患儿的脑脊液中检出44条之多。

肉眼观察呈淡黄白色细棉线状，长1.3～4.5cm。

用显微镜观察可见雄虫外观黑白相间，尾端略向腹部弯曲，交合伞对称，呈肾形。

雌虫尾端呈斜锥形。

虫体角质表皮透明光滑，可见微细横纹，头端略圆，前端有口囊，可见较短食管，可见神经环、排泄孔。

虫体后端可见淡黄色肠支、生殖器、阴门及肛孔。

尾端较细长，略呈斜锥形。

有时，可在雌虫的子宫内看见单细胞虫卵。

(2)特异性抗原检测：以广州管圆线虫坳制成抗原，免疫小鼠，分离其脾细胞，用细胞融合、克隆技术制备单克隆IgG抗体。

用酶联免疫吸附试验(ELSA)检测患者脑脊液及血清中广州管圆线虫蝴的可溶性抗原。

阳性可作为明确诊断依据。

脑脊液中广州管圆线虫坳的可溶性抗原检出率高于血清中的检出率。

在台湾，Shth等将广州管圆线虫拗分子量为91×l03的可溶性抗原免疫小鼠，制备单克隆抗体，用于ELSA检测脑脊液和血清中广州管圆线虫蜘的抗原。

结果，在35例临床上诊断为广州管圆线虫性脑膜脑炎的患者中，脑脊液检测100%阳性，血清89%(31/35)阳性。