微生物检验实验室李斯特菌属标准操作规程

微生物学实验室操作规程微生物学实验室操作规程第一章总则第一条为了保证实验室工作的顺利进行，确保实验室安全和实验结果的准确性与可靠性，特制定本规程。

第二条本规程适用于所有进入微生物学实验室的人员，包括实验室工作人员、研究生、本科生以及其他访问者。

第三条实验室的工作时间为每天的8:00-17:00，非工作时间需要特殊申请，并由主管人员审批。

第四条实验室工作人员应遵守实验室工作时间，不得在未经批准的情况下擅自离开实验室。

第五条进入实验室的人员必须佩戴实验室指定的防护设备，包括实验服、手套、护目镜等。

第二章实验室工作流程第六条实验室的工作流程包括实验前准备、实验操作、实验后处理等环节。

实验室成员应按照规定的流程进行工作。

第七条实验前准备包括准备实验所需的试剂、培养基、设备等，并做好相应的记录和标记。

第八条实验操作应遵循实验操作规程，按照实验计划进行操作，并根据实验结果进行记录。

第九条实验后处理包括处理实验产生的废液、废弃物等，保持实验室清洁和卫生。

第三章实验室安全第十条实验室工作人员必须了解实验室安全操作规程，严禁违反安全操作规定，确保实验室的安全。

第十一条实验室工作人员应定期参加安全培训，并按照培训要求执行。

第十二条实验室工作人员在操作过程中应注意个人防护，不得穿戴开裆裤、露指露脚等不符合实验室要求的服装。

第十三条实验室工作人员在操作前应对实验环境进行检查，排除存在的安全隐患。

第十四条实验室工作人员离开实验室时应关闭实验室的主要设备，保持实验室的安全。

第十五条出现实验室安全事故时，实验室工作人员应立即采取紧急措施，保护自己和他人的安全，并及时报告主管人员。

第四章实验室卫生第十六条实验室工作人员应保持实验室的整洁和卫生，严禁在实验室内吃东西、随意扔弃垃圾。

第十七条实验室工作人员应按照规定的要求进行实验室的日常清洁工作，并保持实验室的通风状况良好。

第十八条实验室工作人员应定期清理实验室的培养基、试剂等过期物品，并做好相应的记录。

正文内容：1. 培养基和试剂的制备和保存1.1 培养基的制备- 确保实验室用水质量符合要求，执行水质监测。

- 配制培养基时，按照配方的比例准确称量和混合各种成分。

- 制备后的培养基要经过高温高压灭菌处理，并记录相关信息。

1.2 试剂的准备与保存- 确保试剂的纯度和质量。

- 试剂的保存应遵循相应的储存条件，如低温、干燥、避光等。

2. 微生物实验室的清洁和消毒2.1 实验台面和设备的清洁- 实验结束后，及时清洁实验台面和设备，移除残余的微生物和污渍。

- 使用合适的清洁剂和消毒剂，遵循正确的清洁和消毒程序。

2.2 垃圾处理和废弃物管理- 将实验室生活垃圾与实验废弃物分类投放，遵循垃圾分类和废物管理的要求。

- 在实验室内配备明显的废弃物容器，并定期清理和更换。

3. 生物安全操作和防护3.1 实验室内的个人防护- 实验室工作人员应穿戴实验室指定的个人防护装备，包括实验服、手套、口罩等。

- 定期检查和更换个人防护装备，确保其完好无损。

3.2 操作台上的生物安全柜使用- 使用生物安全柜操作时，按照正确的使用方法进行操作。

- 养生物安全柜使用后，要及时清洁和消毒。

4. 微生物实验的准备和操作4.1 实验准备- 在进行微生物实验前，要仔细阅读实验方案和相关文献，了解实验目的和操作步骤。

- 准备所需的培养基、试剂、设备等，并确认其完整性和有效期。

4.2 微生物实验操作- 操作前要洗手并戴好手套，保持操作台面的清洁。

- 严格按照实验方案的指导进行操作，确保实验过程的准确性和可重复性。

- 实验过程中注意观察实验样品的变化，并记录相关数据和观察结果。

5. 实验数据记录和结果分析5.1 数据记录- 在实验过程中，实验人员要及时、准确地记录实验数据和观察结果。

- 记录的数据要清晰可辨，并加以正确的标注和注释，以便后续的数据分析和结果验证。

5.2 结果分析与总结- 在实验完成后，仔细整理和分析实验数据，得出结论并进行结果的可靠性评估。

微生物限度检查操作规程《微生物限度检查操作规程》一、目的微生物限度检查是用于确认产品是否符合微生物水平要求的一种分析方法。

本操作规程的目的是制定微生物限度检查的操作步骤，确保检查结果的准确性和可靠性。

二、适用范围本操作规程适用于所有需要进行微生物限度检查的产品，包括食品、医药和化妆品等。

三、操作步骤1. 准备工作：清洁实验室工作台面和仪器设备，准备所需的培养基和试剂，并确保仪器设备的正常运转。

2. 取样：按照产品的取样标准，从不同批次或不同位置进行取样，并确保取样的代表性。

3. 样品制备：将取样的产品进行样品制备，包括稀释、搅拌和过滤等步骤，以便于后续的微生物检查。

4. 培养：将样品接种在适当的培养基上，根据不同的微生物种类和要求进行培养，并进行恒温培养一定时间。

5. 计数：在培养一定时间后，对培养基上的菌落进行计数，并按照标准方法进行结果的记录和确认。

6. 结果判定：将检查结果与产品的微生物限度标准进行比对，根据结果作出是否合格的判定。

7. 结果记录：将微生物限度检查的结果进行记录，包括样品信息、操作步骤、检查结果和判定等信息，并将结果报告给相关部门或供应商。

四、注意事项1. 操作人员应具备一定的微生物检测知识和操作技能，严格按照操作规程执行。

2. 实验室应保持清洁、卫生，并进行定期消毒和验证。

3. 实验室设备应定期维护和校准，确保设备的准确性和可靠性。

4. 所使用的培养基和试剂应符合相关标准，存放在干燥、阴凉、避光的环境中。

5. 检查结果应及时报告，并根据结果采取相应的控制措施。

以上就是《微生物限度检查操作规程》的主要内容，希望能够帮助大家更好地进行微生物限度检查，确保产品质量和安全。

微生物操作规程
《微生物操作规程》
微生物操作是实验室中常见的操作，但由于微生物具有一定的危害性，因此对微生物操作有严格的规程。

以下是对微生物操作规程的一些要点：
1. 穿着适当的防护装备：在进行微生物操作时，实验人员应该穿着适当的防护装备，包括实验服、手套、口罩和护目镜等。

这可以有效预防微生物和其代谢产物对皮肤和呼吸系统造成危害。

2. 操作实验室的卫生消毒：在进行微生物操作前，需要对实验室进行必要的卫生消毒，确保操作环境的清洁与无菌环境。

3. 严格的操作流程：在进行微生物操作时，需要严格按照规程进行操作，避免出现操作失误导致微生物泄漏或污染的情况发生。

4. 正确处理微生物废弃物：在微生物操作结束后，实验人员需要将微生物废弃物进行正确处理，避免对环境和人体造成危害。

5. 定期进行培训和检查：对从事微生物操作的实验人员需要进行定期的培训和检查，以提高其微生物操作的安全性和准确性。

总之，微生物操作规程是保证微生物操作安全的基础，严格遵
守微生物操作规程可以有效预防微生物的危害，并保障实验人员和环境的安全。

微生物检验操作规程《微生物检验操作规程》一、检验前准备1. 确保实验室环境清洁整洁，无菌操作台面及仪器设备；2. 熟悉操作规程，准备好所需的培养基、试剂和消毒液；3. 检查培养基和试剂的有效期，确保使用的培养基和试剂符合要求。

二、样本处理1. 将样本送检单与样本一同接收，并核对相关信息；2. 对样本进行消毒处理，避免污染实验室环境；3. 定量取样，确保取样的准确性和可靠性。

三、培养基制备1. 按照培养基说明书的要求，准备培养基，注意培养基的稀释和灭菌；2. 根据需要，将培养基注入培养皿中，准备好后放置在无菌条件下。

四、微生物接种1. 根据样本的来源，选择合适的培养基进行接种；2. 采用无菌技术，进行微生物接种，避免外部污染；3. 对接种的培养皿进行标记，清晰记录接种的菌种和数量。

五、培养条件1. 根据不同微生物的生长要求，设置适当的培养条件，包括温度、湿度、气体组成等；2. 定期观察培养皿的生长情况，记录菌落形态、数量和颜色等信息。

六、鉴定和鉴定1. 根据菌落形态、生理生化特性等进行初步鉴定；2. 利用鉴定试剂或生化指标进行进一步鉴定；3. 如有需要，可进行分子生物学方法进行鉴定。

七、结果记录和报告1. 将鉴定结果详细记录在报告中，包括鉴定的微生物种类、数量、鉴定方法和结果等；2. 及时向送检单位提交检验报告，确保检验结果准确无误。

八、实验后清洁1. 将使用过的培养皿和试剂进行正确的处理和清洁；2. 对实验室操作台面和设备进行消毒，保持实验室环境整洁。

以上是《微生物检验操作规程》的基本操作流程，每一步的操作都应严格遵守操作规范，保证微生物检验结果的准确性和可靠性。

3M环境李斯特菌测试片操作以及判读3M 环境李斯特菌测试片操作以及判读一、测试环境李斯特菌数操作方法1.将未开封的测试片贮藏在<=8o C (46oF)的环境下，并在包装上标示的有效期内使用。

在高湿度的地方，最好在使用前将测试片回复到室温。

2.已开封的测试片，将开口反折，用胶带封好。

3.为防止暴露于潮湿的环境中，请不要冷藏已开封的测试片。

将胶带封好的测试片贮藏在低温干燥的地方，保持时间不超过1个月。

请勿将测试片放在温度>25oC (77oF)和(或)相对湿度>50%的环境中。

4.用涂抹棒、海棉或其它采样设备收集环境样本。

湿润采样设备的液体应<=10mL。

湿润剂可以是无菌水、缓冲蛋白胨水(Buffered Peptone Water,BPW)，或中和缓冲液，如Letheen 肉汤或Dey/Engley (DE)中和肉汤。

5.在无菌环境下在收集的样品中添加5mL，20-30oC，灭过菌的缓冲蛋白胨水(BPW)溶液。

不要将Petrifilm EL 测试片与Vermont 培养基(UVM)、Fraser 肉汤、李斯特菌增菌培养基(LE B)或缓冲李斯特菌增菌培养基(BLEB)共用。

6.混合，蠕动或旋转样品与BPW 的混合液将近一分钟。

将样品置于室温(20-30oC)1h，最久不超过1.5h，以修复损伤的李斯特菌。

7.将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。

8.用3M TM电子移液枪或其它移液器垂直滴加3mL 样品到下层膜的中央。

9.将上层膜缓慢盖下，以免产生气泡。

10.轻轻地将塑料压板放在位于接种区上层膜上。

不要压，扭转或滑动压板。

提起压板。

等至少10分钟，以使胶体凝固。

11.将测试片透明面朝上，可叠放至10片，在35o C±1o C或37o C±1o C下培养28h±2h。

12.Petrifilm EL测试片能够用标准的菌落计数器或其它光学放大器计数或判读。

微生物检验操作规程1.0目的建立微生物检验标准操作规程，保证检验操作规范化。

2.0适用范围适用于本公司相关的微生物检验活动的全过程。

3.0职责3.1 微生物检验员负责微生物检验的全过程；3.2 QC主管负责监督检查本规程的有效实施。

4.0作业内容4.1无菌操作要求4.1.1 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。

4.1.2专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。

4.1.3 接种样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。

4.1.4 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。

4.1.5 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。

4.1.6 接种样品、转种细菌必须在酒精灯旁操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞（即硅氟胶塞）都要通过火焰消毒。

4.1.7 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处。

4.1.8 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。

4.2无菌间使用要求4.2.1 无菌间内应保持清洁，工作后用消毒溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。

4.2.2无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。

4.2.3处理和接种样品时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。

4.3消毒灭菌要求4.3.1灭菌前准备（1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。

（2）装培养基的三角瓶，内容物不应超过总体积的2/3（例如500mL的三角瓶最好装300～350mL培养基，以防再次加热融化时爆沸）。

国标标准 ISO11290-1 1996（E）食品和动物饮料微生物学----单核增生李斯特氏菌的检测和计数方法------第一部分检测方法1.范围2.参考标准3.定义4.原理5.培养基和试剂6.设备和玻璃器皿7.取样8.待检样品前处理9.程序10.结果表达11.检测报告附录：A.检测程序图B.培养基和试剂的组成和配制C.亨氏斜射光镜检食品和动物饮料微生物学----单核增生李斯特氏菌的检测和计数方法------第一部分检测方法警告：为了保障实验室人员的健康，强烈推荐在适当装备、由有经验的微生物专家控制以及检测中的所有培养物得以谨慎处理的实验室进行单核增生李斯特氏菌检测；尤其是强烈建议孕妇不要从事单核增生李斯特氏菌的培养工作。

1.范围本ISO11290详细说明了单核增生李斯特氏菌检测和计数方法。

在绪论中受讲座的局限性，本ISO11290适用于供给人类消费或作为动物饲料的产品。

2.参考标准下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

IEC和ISO成员保留目前有效的国际标准的注册。

ISO6887：1983微生物学—微生物检测中稀释液制备的一般导则ISO：1996，食品及动物饲料微生物学—微生物检测通则3.定义本部分ISO11290提供以下定义：3.1单核增生李斯特氏菌：在因体选择性培养基上形成典型菌落，并且当进行鉴定和确认其形态的、生理的和生化特征与本部分ISO11290的描述一致的微生物。

3.2单核增生李斯特氏菌的检测：依据本部分ISO11290实施细则确定单核增生李斯特氏菌在给定单位质量或体积的样品中存在与否。

4.原理在本部分ISO11290的限定范围内，检测单核增生李斯特氏菌需要四个连续的阶段（见附录A检测程序图）。

1 目的规范微生物限度检验操作，确保检验结果准确、可靠。

2 依据《中国药典》2010版。

3 范围本标准适用于微生物限度检验。

4 责任中心化验室负责人：对本规程的实施负责。

中心化验室检验人员：严格按照本规程执行检验操作。

5 程序5.1 执行标准：《中国药典》2010版。

5.2 抽样：照《取样标准操作规程》进行。

6 细菌、霉菌及酵母菌计数计数方法包括平皿法和薄膜过滤法。

检查时，按已验证的计数方法进行供试品的细菌、霉菌及酵母菌菌数的测定。

6.1 设备、仪器及用具6.1.1 设备微生物限度检测室室、净化工作台、生化培养箱（30-350C）、生化培养箱（23-280C）、电热恒温水浴锅、烘箱、电冰箱、灭菌柜、紫外灯等。

6.1.2 仪器及器皿显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、吸管、薄膜过滤器等。

6.1.3 用具大、小橡皮乳头，洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等。

6.2 试液6.2.1 消毒液A．0.1% 新洁尔灭溶液：供手消毒、擦拭操作台面用。

B．75%乙醇溶液6.2.2 稀释液、试剂及配制A．PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.3g、蛋白胨1.0g，加纯化水1000ml，微温溶解，滤清，分装，1210C灭菌15分钟。

B．聚山梨酯80C．吐温80D．单硬脂酸甘油酯6.3 培养基营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基6.4 操作方法6.4.1 试验前准备6.4.1.1 将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、试管、吸管（1ml、10ml）、量筒、稀释剂等移至传递窗内。

每次试验所用物品必须事先计划，准备足够用量，避免操作中出入操作间。

6.4.1.2 开启微生物检测室紫外灯和空调净化系统，并使其工作不低于30min。

6.4.1.3 操作人员进入一更，用洗手液或肥皂洗手，烘干。

微生物检验操作规程微生物检验操作规程一、实验室的准备工作1.确保实验室环境整洁卫生，空气流通。

2.检查实验室设备及试剂的完好性，如有损坏或过期的试剂应予以更换。

3.准备所需的培养基、试剂和培养器具，并确保其质量符合要求。

4.准备好必要的个人防护用品，如实验手套、口罩、护目镜、实验服等。

二、标本采集和处理1.标本的采集应遵循无菌操作的原则，采集器具需经过高温高压消毒处理。

2.将采集的标本迅速送至实验室，避免暴露于空气中。

3.对于液体标本，如尿液、血液等，应进行无菌操作并进行适当的稀释。

4.对于固体标本，如组织、分泌物等，应进行无菌取样，并进行适当的处理。

三、培养基的准备和使用1.根据需要，准备所需的培养基，并按照说明书进行正确的配制。

2.确保培养基的无菌性，防止细菌、真菌等污染。

3.使用培养基前应进行质控试验，确保培养基的质量符合要求。

4.在使用培养基前，要检查培养基是否出现变质、褪色等异常情况，若有发现，应立即更换。

四、微生物的分离和培养1.将标本取适量，在无菌条件下均匀涂抹于培养基表面，避免重叠。

2.将涂抹好的培养基置于细菌培养箱中，设置适当的温度和湿度，促使微生物的生长。

3.培养箱内不宜存放过多的培养基，以免影响空气流通和温度控制。

4.定期观察培养基的生长情况，并进行记录，一般培养时间为24小时至48小时。

五、微生物的鉴定和鉴定1.根据菌落的形态、大小、颜色等特征，初步判断微生物的种类。

2.利用显微镜观察菌液或菌落的形态、数量、运动性等特征，进一步鉴定微生物。

3.对于不易鉴定的微生物，可使用生化试剂或分子生物学方法进行鉴定。

4.鉴定微生物的结果应进行记录，并与对应的标准对照互相核对。

六、微生物的灭活和处理1.工作台和实验器具在使用前后应进行消毒，以防止微生物的传播。

2.将已鉴定的微生物进行灭活处理，可使用高温高压或化学消毒剂。

3.遵循规定将已处理的微生物进行妥善的处置，防止对环境和人员造成污染和危害。

微生物实验室操作规程完整专业资料分享.微生物实验室操作规程【SOP】细菌室工作守则（微生物室SOP之一）细菌室消毒隔离措施（微生物室SOP之二）微生物实验室安全与防护（微生物室SOP之三）细菌室内质控制度（微生物室SOP之四）细菌室操作技术规范（微生物室SOP之五）无菌间规章制度（微生物室SOP之六）菌（毒种）管理办法（微生物室SOP之七）细菌室仪器维护保养及质控措施（微生物室SOP之八）•标准菌株保存及使用（微生物室SOP之九）细菌室内务管理规定（微生物室SOP之十）标本采集及保存要求（微生物室SOP之十一）室内质控失控处理程序（微生物室SOP之十二）标本拒收标准（微生物室SOP之十三）温度失控处理措施（微生物室SOP之十四）超净工作台作业指导（微生物室SOP之十五）标本的接种和移种法（微生物室SOP之十六）WORD完美格式.专业资料分享.细菌室工作守则微生物室SOP之一）1.每日工作前用紫外线映照实验室半小时以上。

2.入室前应穿工作服，并做好实验前的各项准备工作。

3.实验室内应保持肃静，不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。

尽量减少室内活动，以免引起风动，无关人员禁入。

4.非必要物品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。

5.做好标本的登记、编号及实验记录。

未发出报告前，请勿丢弃标本。

6.标本处理及各项实验应在操纵间进行，接种环用完后应立即火焰灭菌，沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。

7.实验时手部污染，应立即用过氧乙酸消毒或浸于3%来XXX溶液中5-10分，再用肥皂洗手并冲洗干净；如误入口内，应立即吐出，并用1:1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口，根据实际情况服用有关药物。

8.实验过程中，如污染了实验台或地面，使用3%来XXX 覆盖其上半小时，然后清洗；如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。

9.若出现着火情况，应沉着处理，切勿XXX，立即关闭电闸，积极灭火。

易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必需远离火源，妥善保存。

食品卫生微生物检验实验室操作技术要求第一节实验室管理制度一、实验室管理制度1．实验室应制定仪器配备管理、使用制度，药品管理、使用制度，玻璃器皿管理、使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。

2．进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。

3．实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、检修，严禁在冰箱内存放和加工私人食品。

4．各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告；药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出，应严格执行《菌种保管制度》。

5．禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开实验室前认真检查水、电、暖气、门窗，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。

6．科、室负责人督促本制度严格执行，根据情况给予奖惩，出现问题立即报告，造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。

二、仪器配备、管理使用制度1．食品微生物实验室应具备下列仪器：培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、普通天平、千分之一天平、烘箱、冷冻干燥设备、均质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱，电位PH计、高速离心机。

2. 实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经计量部门检定合格方能使用。

3．实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动，应写出报告，通知管理人员，经科室负责人同意填报修理申请，送仪器维修部门。

4. 各种仪器（冰箱、温箱除外），使用完毕后要立即切断电源，旋钮复原归位，待仔细检查后，方可离去。

DBS22 DBS22/019—2012 吉林省食品安全地方标准食品中单核细胞增生李斯特菌的定量检测2013年发布 2013年实施吉林省卫生厅发布前言本标准根据GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》的要求编写.本标准分为两种检测方法：第一法：单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法;第二法：MPN计数法。

其中第一法适用于污染较严重的食品，第二法适用于单核细胞增生李斯特氏菌含量较低而杂菌含量较高的食品.本标准负责起草单位：吉林省疾病预防控制中心、长春市疾病预防控制中心。

本标准负责起草人:刘桂华、龚云伟、李月婷、赵薇吉林省食品安全地方标准食品中单核细胞增生李斯特菌的定量检测1 范围本操作程序规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）的定量检验方法。

本操作程序适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量检验。

2 设备和材料除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设备和材料如下:2。

1 冰箱：2℃～5℃和—18℃。

2.2 恒温培养箱:30℃±1℃、36℃±1℃。

2。

3 均质器。

2。

4 显微镜：10×～100×.2.5 电子天平：感量0。

1 g.2.6 锥形瓶：100 mL、500 mL。

2.7 无菌吸管：1 mL(具0。

01 mL刻度）、10 mL（具0。

1 mL刻度)。

2。

8 无菌平皿:直径90 mm。

2。

9 无菌试管：16 mm×160 mm.。

2.10 离心管:30 mm×100 mm。

2.11 无菌注射器：1 mL.2。

12 金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）。

2。

13 马红球菌（Rhodococcus equi）。

2.14 全自动微生物生化鉴定系统。

3 培养基和试剂3。

1 含0。

6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤（TSB—YE）：见附录A中A.1。

3。

2 含0。

6％酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（TSA—YE）：见附录A中A。

李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种常见的食品中毒致病菌，因此针对食品中的李斯特菌进行检测具有重要意义。

以下是常见的李斯特菌国际标准检测方法：
1.ISO 11290-1和ISO 11290-2标准：这是国际上普遍采用的李斯特菌检测方法标准。

ISO
11290-1标准适用于从食品中检测李斯特菌，而ISO 11290-2标准适用于从环境样品中检测李斯特菌。

这两个标准包括了样品的处理、富集培养、筛选培养和鉴定等多个步骤，具有较高的检测灵敏度和准确性。

2.FDA-BAM方法：美国食品药品监督管理局（FDA）发布了一系列的BAM（Bacteriological
Analytical Manual）方法，其中包括了用于李斯特菌检测的方法。

这些方法通常与ISO 标准方法类似，但在一些具体操作步骤上可能会略有不同。

3.PCR法：聚合酶链式反应（PCR）是一种快速、灵敏的李斯特菌检测方法，可以在较短
的时间内得出检测结果。

PCR方法已被广泛用于食品和环境样品中的李斯特菌检测。

4.基于质谱技术的检测方法：质谱技术如MALDI-TOF质谱法也被用于李斯特菌的快速鉴
定和检测。

需要注意的是，针对不同的样品类型和具体要求，可能会选择不同的检测方法和标准。

在进行李斯特菌的检测时，建议按照相关的国际标准或当地法规要求进行操作，并严格遵循相应的实验室操作规程。

微生物实验操作规程
1. 实验目的
本操作规程旨在确保微生物实验的安全进行，并保证实验结果的准确性和可靠性。

2. 实验器材准备
- 高温灭菌器
- 密封培养皿
- 不锈钢接种环
- 培养基
- 显微镜
- 实验台
3. 实验步骤
3.1. 准备工作
1. 确保实验台面干净整洁，并消毒实验器材。

2. 检查培养基是否符合要求，如有需要，根据实验要求进行调配。

3.2. 培养菌种
1. 使用无菌的不锈钢接种环在培养基表面划线，接种菌种。

避
免污染其他区域。

2. 密封培养皿，标记上菌种信息和日期，放入高温灭菌器中进
行培养。

3.3. 现场观察
1. 从高温灭菌器取出培养皿，置于实验台上。

2. 使用显微镜观察菌落的形态和生长情况。

记录实验结果。

3.4. 数据处理
1. 将观察到的数据整理成表格或图表。

2. 分析数据并得出结论。

4. 实验注意事项
- 操作过程中要佩戴实验手套，避免污染。

- 实验器材要经过高温灭菌处理，确保无菌状态。

- 实验完毕后及时清理实验台面和器材，保持实验环境的卫生。

- 严格遵守实验操作规程，避免操作失误和意外发生。

5. 实验结果分析
根据实验结果分析，我们可以得出结论并进一步探索微生物的特性和应用领域。

以上为微生物实验操作规程，详细描述了实验的步骤和注意事项，希望能对实验操作提供指导和帮助。

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> 注：以上内容仅供参考，实际操作请根据实验要求和实验室安全规定进行。

病原微生物实验室操作规程病原微生物实验室是进行病原微生物研究、检测和诊断的重要场所。

为了确保实验室工作的安全、准确和有效，特制定以下操作规程。

一、实验室准入制度1、只有经过专门培训并获得授权的人员才能进入病原微生物实验室。

2、进入实验室前，人员必须了解实验室的安全规定和操作流程，并签署相关的知情同意书。

3、穿着符合要求的个人防护装备，包括实验服、手套、口罩、护目镜等。

二、实验前准备1、制定详细的实验计划，包括实验目的、方法、步骤和预期结果。

2、对所需的仪器设备进行检查和校准，确保其正常运行。

3、准备好所需的试剂和材料，并检查其有效期和质量。

三、样本采集与处理1、样本采集应遵循相关的标准操作程序，确保样本的代表性和质量。

2、采集后的样本应尽快运输到实验室，并在规定的条件下保存。

3、处理样本时应在生物安全柜内进行，防止样本的泄漏和污染。

四、实验操作1、在生物安全柜内进行病原微生物的接种、培养和分离等操作。

2、严格遵守无菌操作原则，避免交叉污染。

3、操作过程中要小心谨慎，防止样本溅出或气溶胶的产生。

五、仪器设备使用1、熟悉各种仪器设备的操作规程，按照说明书正确使用。

2、定期对仪器设备进行维护和保养，记录维护情况。

3、仪器设备出现故障时，应及时停止使用，并报告相关负责人进行维修。

六、废弃物处理1、实验过程中产生的废弃物应分类收集，包括感染性废弃物、化学废弃物和一般废弃物等。

2、感染性废弃物应进行高压灭菌或化学消毒处理后，再按照相关规定进行处置。

3、化学废弃物应按照其性质进行相应的处理，防止对环境造成污染。

七、个人防护1、进入实验室必须穿戴适当的个人防护装备，如手套、口罩、护目镜、实验服等。

2、手套应定期更换，如有破损应立即更换。

3、离开实验室前，应脱下个人防护装备，并进行消毒处理。

八、意外事故处理1、若发生样本泄漏、人员受伤或感染等意外事故，应立即启动应急预案。

2、受伤人员应及时进行处理和治疗，并报告相关部门。

ISO李斯特菌1、国标标准ISO11290-11996〔E〕食品和动物饮料微生物学----单核增生李斯特氏菌的检测和计数方法------第一部分检测方法1.范围2.参考标准3.定义4.原理5.培育基和试剂6.设备和玻璃器皿7.取样8.待检样品前处理9.程序10.结果表达11.检测报告附录：A.检测程序图B.培育基和试剂的组成和配制C.亨氏斜射光镜检食品和动物饮料微生物学----单核增生李斯特氏菌的检测和计数方法------第一部分检测方法警告：为了保障试验室人员的健康，剧烈推举在适当装备、由有阅历的微生物专家掌握以及检测中的全部培育物得以谨慎处理的试验室进行单核增生李斯特氏菌检测；尤其是剧烈建议孕妇不要从事单核增生李斯特氏菌的2、培育工作。

1.范围本ISO11290具体说明了单核增生李斯特氏菌检测和计数方法。

在绪论中受讲座的局限性，本ISO11290适用于供给人类消费或作为动物饲料的产品。

2.参考标准以下文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后全部的修改单〔不包括勘误内容〕或修订版均不适用于本标准，然而，鼓舞依据本标准达成协议的各方讨论是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

IEC 和ISO成员保存目前有效的国际标准的注册。

ISO6887：1983微生物学—微生物检测中稀释液制备的一般导则ISO：1996，食品及动物饲料微生物学—微生物检测通则3.定义本部分ISO3、11290提供以下定义：3.1单核增生李斯特氏菌：在因体选择性培育基上形成典型菌落，并且当进行鉴定和确认其形态的、生理的和生化特征与本部分ISO11290的描述一致的微生物。

3.2单核增生李斯特氏菌的检测：根据本部分ISO11290实施细则确定单核增生李斯特氏菌在给定单位质量或体积的样品中存在与否。

4.原理在本部分ISO11290的限定范围内，检测单核增生李斯特氏菌需要四个连续的阶段〔见附录A检测程序图〕。

李斯特实验流程
李斯特实验主要包括以下几个步骤：
1. 增菌培养：取25mL液体或25g半固体或固体样品放入含有225mL无
选择性试剂增菌肉汤（EB）的均质杯中进行均质，然后转入三角瓶中，30℃培养4h，加入选择性试剂吖啶黄素、萘啶酮酸和放线菌酮，继续培养20h
和44h。

2. 样本处理：可能包括离心、过滤等步骤，以获取纯净的李斯特菌样本。

确保处理过程在无菌条件下进行。

3. 显色培养基涂布：使用无菌的移液器或吸管，在李斯特菌显色培养基表面均匀涂布样本。

确保样本均匀分布在培养基上。

4. 培养条件：将培养基培养皿放入恒温培养箱，通常在35-37摄氏度下培养。

设定观察时间点，通常在培养开始后的24小时和48小时后。

5. 观察：在设定的时间点观察实验结果，如果发现有李斯特菌存在，可以进行进一步的鉴定和计数。

请注意，以上步骤仅为一般流程，具体操作可能因实验需求和样品类型而有所不同。

进行实验时，请遵循相关安全规定和操作规范，以确保实验结果准确可靠。

微生物实验室生物安全操作规程一、目的制订本规则，保证实验室工作人员的健康安全、实验设备安全卫生以及防止对外界环境造成污染。

二、适用范围适用于所有进入微生物实验室人员。

实验室工作人员必需严格遵守安全操作规程。

三、安全操作规程：1.员工安全操作规程1.1实验室入口处须贴上生物危险标志，注明危险因子、生物安全级别、负责人姓名和电话、进入实验室的特殊要求及离开实验室的程序。

1.2禁止非工作人员进入实验室。

参观实验室等特殊情况须经实验室负责人批准后方可进入，做好卫生防护，并在有关人员陪同下方可进入，同时注意做好环境维护及保密工作。

1.3进行感染性实验时，禁止他人进入实验室，或必须经实验室负责人同意后方可进入。

免疫耐受或正在使用免疫抑制剂的工作人员必须经实验室负责人同意方可在实验室工作。

1.4接触微生物或含有微生物的物品后，脱掉手套后和离开实验室前要洗手。

1.5禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及储存食物。

1.6尽量以移液器吸取液体，禁止口吸。

1.7实验过程中，严格按有关操作规程操作，降低溅出和气溶胶的产生。

1.8每天至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要随时用75%乙醇或巴氏消毒液消毒。

1.9实验人员在配制培养基过程中，需尽量避免接触性或吸入性危害，特别是配制TTB和碘液等对人体有害的培养基或试剂时，要穿戴工作服、口罩和手套，并在通风橱中进行。

1.10工作人员应接受必要的免疫接种和检测(如乙型肝炎疫苗、卡介苗等)。

工作人员要接受有关的潜在危险知识的培训，掌握预防暴露以及暴露后的处理程序。

每年要接受一次最新的培训。

人员暴露于感染性物质时，及时向实验室负责人汇报，并记录事故经过和处理方案。

1.11禁止将无关动物带入实验室。

2.无菌室安全操作规程2.1无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面一次(拖布专用)，紫外线照射消毒30min以上，超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。

然后紫外线消毒30min。