2触酶试验标准操作规程

肠球菌属标准操作规程1.概述肠球菌属于1984年从链球菌属划出，单独成为一个菌属，包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、坚韧肠球菌、铅黄肠球菌、蒙氏肠球菌、海氏肠球菌、鹑鸡肠球菌和病臭肠球菌等18个种和1个变异株。

临床上常见的菌株为粪肠球菌。

2.标本类型血液、尿液、痰、穿刺液、脓液等标本。

3.鉴定3.1 形态与染色革兰阳性球菌，单个、成双或短链状排列。

3.2 培养特性在血琼脂平板上形成较小、灰白色，有a 溶血或β溶血环的菌落。

在麦康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。

3.3 生化反应触酶试验阴性，分解甘露醇、山梨醇、胆汁七叶苷试验阳性、在含6.5%氯化钠的肉汤中生长，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。

3.4 鉴别要点3.4.1 本菌特征革兰阳性球菌，触酶试验阴性，在65g/L 氯化钠中生长，胆汁、七叶苷试验阳性，45℃中生长。

3.4.2与屎肠球菌的鉴别：粪肠球菌不分解阿拉伯糖，而屎肠球菌能分解阿拉伯糖3.4.3 与链球菌属和乳球菌属的鉴别：见表5-353.4.4 粪肠球菌与其他各主要菌种间的鉴别：见表5-36操作步骤3.5.1 触酶试验阳性参见触酶试验标准操作规程3.5.2 鉴定从血平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。

4.药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件.5.质量控制参见《质量控制程序》6.检验结果解释与分析在β-内酰胺酶阴性球菌肠球菌中，氨苄西林药敏试验结果可预测阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等敏感性。

青霉素药敏试验可预测氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等药敏结果。

粪肠球菌中氨苄西林药敏结果可以预测亚胺培南的药敏结果。

对于血培养和脑脊液中分离到的肠球菌，需做β-内酰胺酶检测，β-内酰胺酶阳性，则对青霉素、羧基青霉素和脲基青霉素均耐药。

ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的实验方法，用于检测和定量分析特定抗原或者抗体的存在。

本操作规程旨在提供一套标准化的ELISA实验步骤，以确保实验的准确性和可重复性。

二、实验材料1. 96孔ELISA板2. 酶标仪3. 微量移液器和相应的可调移液器架4. 基质溶液（PBS等）5. 抗原或者抗体样品6. 酶标记的二抗7. 洗涤缓冲液8. 底物溶液9. 住手液三、实验步骤1. 准备工作a. 将96孔ELISA板放置在可调移液器架上。

b. 准备基质溶液，并将其加入ELISA板的每一个孔中，每孔100μL。

c. 将ELISA板放置在酶标仪中，孔底朝上，以避免溶液的蒸发。

2. 样品处理a. 将待测样品加入ELISA板的相应孔中，每孔100μL。

b. 将ELISA板盖好，轻轻摇动，使样品均匀分布。

c. 将ELISA板放置在酶标仪中，孔底朝上，孔盖向下。

3. 一抗孵育a. 将酶标记的一抗加入ELISA板的每一个孔中，每孔100μL。

b. 将ELISA板盖好，轻轻摇动，使一抗均匀覆盖样品。

c. 将ELISA板放置在酶标仪中，孔底朝上，孔盖向下。

4. 洗涤步骤a. 将洗涤缓冲液加入ELISA板的每一个孔中，每孔200μL。

b. 轻轻拍打ELISA板，使洗涤液充分覆盖孔底。

c. 倒掉洗涤液，重复以上步骤3次。

5. 二抗孵育a. 将酶标记的二抗加入ELISA板的每一个孔中，每孔100μL。

b. 将ELISA板盖好，轻轻摇动，使二抗均匀覆盖样品。

c. 将ELISA板放置在酶标仪中，孔底朝上，孔盖向下。

6. 洗涤步骤a. 重复步骤4中的洗涤步骤，以去除未结合的二抗。

7. 底物反应a. 将底物溶液加入ELISA板的每一个孔中，每孔100μL。

b. 将ELISA板盖好，轻轻摇动，使底物均匀覆盖样品。

c. 将ELISA板放置在酶标仪中，孔底朝上，孔盖向下。

8. 反应住手a. 在适当的反应时间后，将住手液加入ELISA板的每一个孔中，每孔100μL。

XXXX医院微生物室李斯特菌属检验操作规程1 目的2 标本类型3 鉴定检验3.1 形态染色3.2 培养特征3.3 生化反应3.4 鉴别要点3.5 操作步骤4 药敏试验5 质量控制6 检验结果解释与分析7 临床意义8 鉴定流程9 相关文件1 目的规范李斯特菌属检验操作规程，确保检验结果准确可靠。

李斯特菌属包括产单核细胞李斯特菌、伊氏李斯特菌、斯氏李斯特菌等菌种，其中只有产单核细胞李斯特菌对人和动物致病。

2 标本类型血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。

3 鉴定检验3.1 形态染色：革兰阳性小杆菌。

3.2 培养特征：在血琼脂平板上35℃培养18~24小时，形成较小、圆形、光滑而有狭窄β-溶血环的菌落。

3.3 生化反应：触酶试验阳性，分解葡萄糖，不分解蔗糖、木糖、甘露醇，甲基红、VP和CAMP试验阳性，吲哚、脲酶和硝酸盐还原试验阴性。

3.4 鉴别要点3.4.1 本菌属特征：革兰阳性短杆菌，菌落较小，有狭窄的β-溶血环，25℃时有动力，37℃时无动力，触酶、CAMP试验阳性，分解葡萄糖。

3.4.2 产单核细胞李斯特菌与粪肠球菌的鉴别：两者均具有耐盐、耐碱耐胆汁等特点，但可通过触酶试验加以鉴别。

3.4.3 产单核细胞李斯特菌与无乳链球菌的鉴别：两者CAMP试验均为阳性，但产单核细胞李斯特菌触酶试验阳性，无乳链球链触酶试验阴性。

3.5 操作步骤3.5.1 涂片染色：观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。

3.5.2 触酶试验：参见《触酶试验操作规程》。

3.5.3 鉴定：从血琼脂平板上挑取纯菌落，用细菌鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。

4 药敏试验参见《药敏试验标准操作规程》及CLSI M100-S19最新版本文件。

5 质量控制见《质量管理程序》。

6 检验结果解释与分析。

P2实验室操作规程1.目的加强P2实验室生物安全管理，规范实验人员仪器设备、实验操作行为，确保P2实验室工作安全运行。

2．适用范围适用于P2实验室的管理与操作。

3．职责3．1实验人员：严格执行P2实验室相关管理规定，规范操作行为。

3．2实验室负责人：监督执行P2实验室相关管理规定，及时纠正违规操作行为，发现不安全隐患及时上报。

3．3科室负责人：监督并定期抽查P2实验室管理规定执行情况，及时发现并解决P2实验室运行中出现的问题。

4．准入要求4．1只有经过授权的人员才允许进入P2实验室工作区。

4．2 16岁以下儿童禁止进入P2实验室工作区。

4．3 实验人员要接受相应预防性生物制品的免疫接种。

4．4禁止将无关动物带入实验区。

4．5外单位人员来访、参观、进修，必须经中心主管部门批准，未经批准不得进入P2实验室工作区。

4．6外来人员进入P2实验室，须由本室人员陪同，在严格遵守有关规定的条件下方可进入，同时填写《外来人员进出实验室特殊区域登记表》。

4．7限制免疫耐受者进入实验室。

4．8限制正在接受免疫抑制剂者进入实验室。

4．9严禁在实验室内吸烟、饮食、化妆等。

5．进入程序5．1进入P2实验室，伸手打开缓冲间内空调和生物安全柜按钮，使实验室和生物安全柜净化10分钟以上。

方可进入实验室进行实验。

5．2将实验所需材料和物品放入生物安全柜中。

5．3进入P2实验室缓冲区，关闭外门，在工作服外加穿P2实验室专用罩衣（紧口，后系带），戴一次性口罩、帽子和戴两层手套, 换穿P2实验室专用鞋。

需要时打开照明按钮。

5．4进入实验室工作区，首先打开照明按钮，打开前玻璃门，调节到要求的高度。

将实验所需物品一次性放入实验台内，摆放要有秩序且要相对区分清洁物与污染物，净化生物生物安全柜10分钟左右。

5．5观察实验区负压表指示数值是否在工作要求范围内，如不能满足要求则进行负压调节。

观察温湿度计，填写温湿度计使用记录。

5．6实验人员手臂放进生物安全柜内大约1分钟后，即可按无菌要求进行实验操作。

ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测特定抗原或者抗体的存在和浓度。

本文将介绍ELISA的操作规程，包括试剂准备、样品处理、板上反应、洗涤、检测和数据分析等步骤。

二、试剂准备1. 缓冲液的配制：根据实验需求，选择适当的缓冲液配方。

常用的缓冲液有PBS、TBST等。

按照配方将所需试剂溶解于适当的体积的去离子水中，并进行调节和混合。

确保所有试剂的pH值和浓度符合实验要求。

2. 标准曲线的制备：准备一系列已知浓度的标准样品，按照实验设计的需求进行稀释。

标准样品的浓度应该覆盖实验样品的范围，并且至少包含一个空白对照。

3. 酶标板的涂覆：根据实验需要，选择合适的酶标板（如96孔板），将需要检测的抗原或者抗体溶解在适当的缓冲液中，按照要求的浓度将其加入到酶标板的孔中。

尽量避免气泡的产生，并确保涂覆均匀。

三、样品处理1. 样品采集：根据实验目的，选择合适的样品类型（如血清、尿液、细胞上清等），并进行采集。

确保样品的采集过程符合规范，避免污染和损坏。

2. 样品稀释：根据实验要求，将样品进行适当的稀释。

通常，样品的初始浓度较高，需要进行多次稀释以使其浓度在标准曲线范围内。

3. 预处理：根据实验需求，对样品进行预处理，如去除杂质、离心沉淀等。

确保样品的处理过程不会影响到所需的分析结果。

四、板上反应1. 标准样品的加入：将标准样品按照实验设计的要求加入到酶标板的孔中。

每一个标准样品应该有至少两个孔进行重复测量，以提高结果的可靠性。

2. 样品的加入：将稀释后的样品加入到酶标板的孔中。

同样，每一个样品应该有至少两个孔进行重复测量。

3. 阳性和阴性对照的加入：为验证实验的准确性，加入阳性和阴性对照。

阳性对照顾该包含所需的抗原或者抗体，而阴性对照则不含。

4. 孔板的封闭：将酶标板封闭，避免样品的蒸发和污染。

可以使用密封膜或者盖板进行封闭。

五、洗涤1. 洗涤缓冲液的配制：根据实验要求，配制适当的洗涤缓冲液。

酶类测定操作规程血清丙氨酸氨基移换酶（ALT）测定血清门冬氨酸氨基移换酶（AST）测定这两个酶的测定在方法上、操作程序上以及试剂等的要求上基本一致。

赖氏（Reitman）法（比色法）【试剂】市售现成试剂，每批试剂的空白管吸光度应≤0.015A，如超出此范围则应检查试剂及仪器等方面的问题。

【操作】按试剂盒的说明书手工操作，比色测定，波长505nm；并从预先绘制好的标准曲线中查得该酶的活性。

酶偶联速率法（连续监测法）【试剂】市售成套试剂，有“单试剂法”及“双试剂法”二种市售试剂盒均可使用，目前推荐双试剂法，它是ALT、AST测定的首选法，市售的ALT、AST底物溶液其起始吸光度必须大於1.2A，空白测定值必须小於5u/L，否则提示此试剂已不合格，不能使用。

【操作】按试剂及仪器使用说明书设定程序，输入参数，用自动生化分析仪测定，波长340nm。

【标本】血清，忌溶血，血清应即时分离，室温可保存二天，4℃可保存一周，-25℃可保存一月，但不推荐冰冻保存，更不宜反复冻溶，遇有严重脂血或黄疸的血清样品，测定时应作血清标本对照管（赖氏法）。

血清碱性磷酸酶（ALP）测定连续监测法【试剂】市售现成试剂，其中的磷酸对硝基苯酚底物液要求：1．酶水解转换率（4-NPP → 4NP）必须大於98%。

2．4-NPP的摩尔吸光度：波长311nm介质10mmo1/L NaOH，温度25℃ε=9867±76 L.mol–1·cm–1。

3．游离4-NP＜0.3mmo1/ mo1 4-NPP；4．无机磷酸＜10mmo1/ mo1 4-NPP。

试剂应贮于棕色瓶中4~8℃保存。

【操作】按试剂盒及仪器说明书要求，设定程序，输入参数用自动或半自动生化分析仪测定，波长450nm。

比色法【试剂】市售或按正式出版的书刊文献自配。

【操作】按试剂盒或相应文献规程比色测定，波长510nm；标准曲线绘制，样品测定，查标准曲线求得ALP活力单位。

ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析抗原或抗体的存在和浓度。

本操作规程旨在提供一套标准化的ELISA实验操作步骤，确保实验结果的准确性和可重复性。

二、实验材料1. 微孔板：96孔或其他规格，耐酸碱性能好。

2. 酶标板洗涤缓冲液：含有洗涤液的缓冲液。

3. 标准品：已知浓度的抗原或抗体。

4. 待测样品：需要检测的抗原或抗体样品。

5. 酶标记的二抗：与待测样品中的抗体相应的二抗。

6. 酶标记底物：用于检测酶活性的底物。

7. 停止液：用于停止酶反应的液体。

三、实验步骤1. 准备工作a. 将微孔板标记编号，确保正确记录每个孔的样品信息。

b. 准备所需的试剂和材料，确保其完整性和质量。

c. 预热酶标仪至适当的温度。

2. 涂覆抗原或抗体a. 向微孔板的每个孔中加入适量的抗原或抗体溶液。

b. 将微孔板置于4℃的冰箱中，孵育一夜或适当时间。

3. 洗涤步骤a. 倒掉微孔板中的液体，用酶标板洗涤缓冲液洗涤孔板。

b. 重复上述步骤3次，确保洗涤干净。

4. 加入待测样品和标准品a. 向微孔板中的相应孔中加入待测样品和标准品，每个孔的体积相同。

b. 将微孔板覆盖，并在适当温度下孵育一段时间。

5. 洗涤步骤a. 倒掉微孔板中的液体，用酶标板洗涤缓冲液洗涤孔板。

b. 重复上述步骤3次，确保洗涤干净。

6. 加入酶标记的二抗a. 向微孔板中的每个孔中加入适量的酶标记的二抗溶液。

b. 将微孔板覆盖，并在适当温度下孵育一段时间。

7. 洗涤步骤a. 倒掉微孔板中的液体，用酶标板洗涤缓冲液洗涤孔板。

b. 重复上述步骤3次，确保洗涤干净。

8. 加入酶标记底物a. 向微孔板中的每个孔中加入适量的酶标记底物。

b. 将微孔板覆盖，并在适当温度下孵育一段时间。

9. 反应停止a. 向每个孔中加入适量的停止液，停止酶反应。

b. 使用酶标仪读取吸光度值。

四、数据分析1. 绘制标准曲线：根据已知浓度的标准品的吸光度值，绘制标准曲线。

ELISA操作规程一、实验目的本实验旨在通过酶联免疫吸附试验（ELISA）的操作，检测目标物质的存在与浓度，以实现对生物样本中特定抗原或抗体的定量分析。

二、实验材料1. 96孔ELISA板2. 目标抗原或抗体样本3. 特异性一抗和二抗4. 辅助试剂：洗涤缓冲液、稀释缓冲液、底物和停止液5. 高精度微量移液器和相应的移液器头6. 高精度电子天平7. 显微镜和酶标仪三、实验步骤1. 预处理：将96孔ELISA板放置在实验台上，加入稀释缓冲液，轻轻震荡混合，然后倒掉液体。

重复此步骤3次。

2. 样本添加：将待测样本加入96孔ELISA板中，每孔加入相同体积的样本。

3. 孵育：将ELISA板盖上密封膜，置于恒温箱中孵育一定时间，使样本中的抗原或抗体与固相特异性一抗结合。

4. 洗涤：将洗涤缓冲液加入96孔ELISA板中，轻轻震荡混合，然后倒掉液体。

重复此步骤3次，以洗去未结合的物质。

5. 二抗结合：将特异性二抗加入96孔ELISA板中，轻轻震荡混合，然后盖上密封膜，继续孵育一定时间，使二抗与固相特异性一抗结合。

6. 洗涤：重复步骤4。

7. 底物添加：将底物加入96孔ELISA板中，轻轻震荡混合，然后暗处孵育一定时间，使底物与二抗结合的酶发生反应。

8. 反应停止：加入停止液，终止底物与酶的反应。

9. 测量：将96孔ELISA板放入酶标仪中，根据实验要求选择相应波长进行测量。

记录各孔的吸光度值。

10. 数据分析：根据实验目的，利用标准曲线或其他方法，计算出目标物质的浓度。

四、实验注意事项1. 实验前需准备好所有试剂和材料，确保实验环境清洁和无尘。

2. 操作过程中需佩戴手套，避免污染样本和试剂。

3. 洗涤步骤中，确保洗涤缓冲液充分覆盖每个孔，且每次洗涤液倒掉后，孔内无残留液体。

4. 孵育和暗处孵育步骤中，需控制好时间和温度，以确保反应的充分进行。

5. 底物和停止液需按照说明书的要求配制和使用，避免使用过期或变质的试剂。

ELISA操作规程引言概述：ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析生物样本中的特定分子，如抗体、抗原、蛋白质等。

ELISA操作规程是进行ELISA 实验的关键，它确保实验的准确性和可重复性。

本文将详细介绍ELISA操作规程的内容。

正文内容：1. 准备实验材料1.1 准备试剂和标准品：根据实验需要，准备适当的试剂和标准品，如抗体、底物、酶标记物等。

确保试剂的保存条件符合要求，标准品的浓度准确。

1.2 准备样本：收集样本后，按照实验要求进行处理和储存。

确保样本的质量和数量满足实验需求。

2. 准备实验设备2.1 洗板机：清洗洗板机，确保洗板机的清洁度，避免交叉污染。

2.2 酶标仪：校准酶标仪，确保测量结果的准确性。

2.3 微量移液器：校准微量移液器，确保样品的准确加入。

2.4 96孔板：准备好96孔板，标记好每个孔的内容。

3. 进行实验步骤3.1 固定抗原：将待测抗原加入96孔板中，使其吸附在孔壁上。

3.2 阻断：加入阻断剂，阻断非特异性吸附位点。

3.3 添加抗体：加入特异性抗体，与抗原结合。

3.4 添加酶标记物：加入酶标记的二抗或底物，与抗体结合。

3.5 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤孔壁，去除未结合的物质。

3.6 反应底物：加入底物，使酶催化反应发生。

3.7 终止反应：加入终止液，停止酶催化反应。

4. 测量和数据处理4.1 使用酶标仪测量吸光度值，记录每个孔的读数。

4.2 绘制标准曲线：根据标准品的吸光度值，绘制标准曲线。

4.3 计算样本浓度：根据样本的吸光度值，通过标准曲线计算样本的浓度。

5. 实验注意事项5.1 严格按照操作规程进行操作，避免实验误差。

5.2 保持实验环境的清洁和无菌，避免污染。

5.3 注意实验材料的保存和使用期限，确保实验结果的准确性。

总结：ELISA操作规程是进行ELISA实验的重要指南。

准备实验材料和设备、按照规定的步骤进行实验、正确测量和处理数据以及注意实验细节是保证实验结果准确性和可重复性的关键。

触酶试验(1)原理：触酶又称过氧化氢酶，具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。

(2)方法：取洁净玻片1张，用接种环挑取细菌，加3％H2O2 1滴，立即观察结果。

(3)结果：若立即出现大量气泡为阳性。

无气泡为阴性。

(4)应用：大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶，但链球菌科阴性，故常用此试验来鉴定。

此外，金氏杆菌属的细菌也为阴性。

分枝杆菌的鉴别则用耐热触酶试验，结核分枝杆菌为阴性，戈氏分枝杆菌和地分枝杆菌为阳性。

注意事项：①3％H2O2溶液要新鲜配制。

②不宜用血琼脂平板上生长的菌落，因红细胞含有触酶，可致假阳性反应。

③取对数生长期的细菌。

氧化酶试验（1）原理：氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。

（2）试剂：1%盐酸四甲基对苯二胺或1%盐酸二甲基对苯二胺。

（3）方法：常用方法有三种；1）菌落法：直接滴加试剂于被检菌菌落上。

2）滤纸法：取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后加试剂。

3）试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌涂于试剂纸上。

（4）结果：细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色，为阳性。

为保证结果的准确性，分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希菌作为阳性和阴性对照。

（5）应用：主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别，前者为阴性，后者为阳性。

奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。

2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)2.3.1 石炭酸品红染色液碱性品红0.3g 95%乙醇 10mL5%酚水溶液 90mL将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。

2.3.2 3%盐酸－乙醇浓盐酸 3mL 95%乙醇 97mL2.3.3 复染液吕氏碱性美蓝染色液。

美蓝0.3g；95%乙醇 30mL；0.01%氢氧化钾溶液 100mL；将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。

2.3.4 染色法2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。

ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测和定量分析生物样本中的特定抗原或者抗体。

本操作规程旨在提供详细的步骤和指导，确保ELISA实验的准确性和可重复性。

二、实验材料准备1. 缓冲液：根据实验需求选择合适的缓冲液，如PBS（磷酸盐缓冲液）或者TBS（三氯甲烷缓冲液）。

2. 抗原或者抗体：根据实验目的选择合适的抗原或者抗体，并进行适当的稀释。

3. 酶标记的二抗：根据实验需求选择合适的酶标记的二抗，如HRP（辣根过氧化物酶）或者AP（碱性磷酸酶）。

4. 底物：选择合适的底物，如TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）或者ABTS（2,2'-联氨基二乙基三乙酸）。

5. 住手液：根据实验需求选择合适的住手液，如2M硫酸或者2M盐酸。

三、ELISA实验步骤1. 板涂覆a. 取ELISA板，将每一个孔加入适量的抗原或者抗体，通常为100-200ng/mL。

b. 将板封闭剂（如BSA或者牛血清白蛋白）加入每一个孔中，封闭非特异性结合位点。

c. 在4℃下孵育过夜，或者在室温下孵育2小时。

2. 样本处理a. 采集待测样本，如血清或者细胞上清。

b. 根据实验需求对样本进行适当的稀释。

c. 加入样本到孔中，每一个孔加入适量的样本，通常为50-100 μL。

d. 在室温下孵育1小时。

3. 二抗结合a. 弃去孔中的样本，并用洗涤缓冲液洗涤孔3次，每次洗涤时间为1-2分钟。

b. 加入酶标记的二抗到每一个孔中，每一个孔加入适量的二抗，通常为100-200 ng/mL。

c. 在室温下孵育1小时。

4. 底物反应a. 弃去孔中的二抗，并用洗涤缓冲液洗涤孔3次。

b. 加入适量的底物到每一个孔中，通常为100-200 μL。

c. 在室温下孵育适当的时间，观察颜色的发展。

5. 反应终止a. 加入适量的住手液到每一个孔中，通常为50-100 μL。

b. 轻轻摇晃板，确保住手液均匀混合。

ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测特定抗原或抗体的存在和浓度。

本文旨在提供一份详细的ELISA操作规程，以确保实验的准确性和可重复性。

二、材料与试剂1. 微孔板：96孔的高透明度微孔板。

2. 酶标仪：用于测量吸光度的仪器。

3. 酶标板洗涤缓冲液：用于洗涤微孔板。

4. 酶标板稀释液：用于稀释样品和标准品。

5. 酶标记的抗体或抗原：用于与待测样品中的目标分子发生特异性反应。

6. 酶标记的二抗：用于与酶标记的抗体或抗原结合。

7. 底物溶液：用于产生可测量的信号。

8. 停止液：用于停止底物反应。

三、实验步骤1. 准备样品和标准品a. 收集待测样品，并按照实验要求进行必要的处理和稀释。

b. 准备一系列浓度已知的标准品，用于绘制标准曲线。

2. 涂覆微孔板a. 将微孔板放在工作台上，标记孔位。

b. 向每个孔中加入适量的酶标记的抗体或抗原溶液。

c. 封闭孔板，放置在4℃的冰箱中过夜。

3. 洗涤微孔板a. 将微孔板倒扣在吸水纸上，轻轻拍打以去除残留液体。

b. 用酶标板洗涤缓冲液洗涤孔板，重复3次。

c. 倒扣孔板并拍打，以去除洗涤缓冲液。

4. 加入样品和标准品a. 向每个孔中加入适量的待测样品或标准品，注意分配好对照组。

b. 封闭孔板，放置在室温下孵育一定时间。

5. 洗涤微孔板a. 重复步骤3中的洗涤操作，确保去除未结合的物质。

6. 加入酶标记的二抗a. 向每个孔中加入适量的酶标记的二抗溶液。

b. 封闭孔板，放置在室温下孵育一定时间。

7. 洗涤微孔板a. 重复步骤3中的洗涤操作，确保去除未结合的物质。

8. 底物反应a. 向每个孔中加入适量的底物溶液。

b. 封闭孔板，放置在室温下孵育一定时间。

9. 反应终止a. 向每个孔中加入适量的停止液，停止底物反应。

b. 使用酶标仪测量吸光度。

10. 数据分析a. 使用酶标仪测量各孔的吸光度值。

b. 绘制标准曲线，根据吸光度值计算待测样品中目标分子的浓度。

elisa操作步骤及注意事项以elisa操作步骤及注意事项为题，本文将为大家介绍elisa（酶联免疫吸附测定法）的操作步骤和注意事项。

一、操作步骤1. 准备工作在进行elisa实验前，需要准备好实验所需的试剂和仪器设备，包括酶标板、试剂盒、洗涤缓冲液、底物溶液、阻断缓冲液等。

同时，需要对实验室台面和仪器进行消毒，并佩戴好实验手套和口罩，以确保实验的准确性和安全性。

2. 样品处理将待测样品（如血清、尿液、细胞培养上清液等）和对照样品放置在室温下静置，使其达到室温后，进行稀释处理。

通常情况下，待测样品需要按照一定比例进行稀释，以确保其浓度处于检测范围之内。

3. 酶标板涂覆将酶标板中的亲和素或抗体溶液加入到孔板中，然后将其在4℃下静置过夜，使亲和素或抗体能够均匀地吸附在酶标板上。

4. 标准曲线制备将标准品按照一定比例稀释，以制备出一系列浓度递增的标准品溶液。

然后将这些标准品溶液依次加入已涂覆的酶标板孔中，孔位之间要保持一定的距离。

5. 样品孔加样将样品溶液加入到酶标板的样品孔中，注意每个孔的加样量要保持一致。

为了保证实验的准确性，通常会设置阳性对照孔和阴性对照孔，以验证实验的可靠性。

6. 孔板洗涤使用洗涤缓冲液对酶标板进行洗涤，去除未结合的物质和杂质。

洗涤时要注意洗涤液的温度和洗涤次数，以确保洗涤的充分彻底。

7. 酶标记物加入将酶标记的二抗或酶标记的亲和素加入到酶标板的孔中，使其与靶分子结合。

然后，将酶标板置于恒温摇床上，进行孵育反应，使酶标记物与靶分子发生特异性结合。

8. 反应终止通过加入反应终止溶液，使酶标记物的酶活性停止，并终止酶标记物与靶分子的结合。

终止溶液的选择要根据实验所使用的底物和酶标记物来确定。

9. 读板测定使用酶标仪或多功能酶标仪对酶标板进行测量，测定底物的反应产物的吸光度。

根据吸光度值，可以计算出样品中靶分子的浓度。

二、注意事项1. 严格控制实验条件在进行elisa实验时，需要严格控制实验条件，包括温度、湿度、时间等。

ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析生物样品中的抗原或抗体。

本操作规程旨在提供一套标准化的ELISA操作步骤，以确保实验结果的准确性和可重复性。

二、材料与试剂1. 酶标板：96孔的多孔板。

2. 样品：待测试的生物样品，如血清、尿液等。

3. 标准品：已知浓度的抗原或抗体，用于绘制标准曲线。

4. 抗原或抗体：用于检测的目标物质。

5. 洗涤缓冲液：用于洗涤酶标板孔。

6. 反应缓冲液：用于稀释样品和标准品。

7. 酶标记的二抗：与待检测的抗体结合，用于检测目标物质。

8. 底物溶液：用于产生可测量的信号。

9. 停止溶液：用于终止底物反应。

三、实验步骤1. 酶标板的预处理1.1 将酶标板孔洗净，去除任何残留物。

1.2 加入适量的抗原或抗体到每个孔中。

1.3 将酶标板密封，并在4°C下孵育一夜。

2. 标准曲线的制备2.1 准备一系列已知浓度的标准品溶液。

2.2 将标准品溶液加入酶标板的相应孔中。

2.3 将酶标板密封，并在室温下孵育一段时间。

2.4 使用底物溶液测量各孔的信号强度。

2.5 绘制标准曲线，将信号强度与标准品浓度进行关联。

3. 样品的处理3.1 将待测样品稀释至适当浓度。

3.2 将稀释后的样品加入酶标板的相应孔中。

3.3 将酶标板密封，并在室温下孵育一段时间。

4. 反应的进行4.1 倒出酶标板中的样品或标准品。

4.2 加入酶标记的二抗到每个孔中。

4.3 将酶标板密封，并在室温下孵育一段时间。

5. 信号的测量5.1 倒出酶标板中的二抗溶液。

5.2 加入底物溶液到每个孔中。

5.3 在适当的时间内测量各孔的信号强度。

6. 结果的分析6.1 使用标准曲线将信号强度转换为抗原或抗体的浓度。

6.2 分析样品中目标物质的浓度。

6.3 记录和报告实验结果。

四、注意事项1. 所有操作应在洁净的实验室环境下进行，避免交叉污染。

2. 操作过程中要注意个人防护，使用手套和实验室外套。

ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测特定抗原或者抗体的存在。

本操作规程旨在提供一个详细的步骤指南，以确保ELISA实验的准确性和可重复性。

二、实验材料1. 微孔板：96孔的高吸附微孔板。

2. 缓冲液：含有适当浓度的PBS（磷酸缓冲盐溶液）和BSA（牛血清白蛋白）的缓冲液。

3. 标准品：包含已知浓度的抗原或者抗体的标准品。

4. 样品：待测的抗原或者抗体样品。

5. 探针：与待测物相对应的酶标记抗体。

6. 底物：适当的酶底物。

7. 住手液：住手底物反应的液体。

三、实验步骤1. 准备工作a. 将微孔板标记好，以便识别每一个孔。

b. 准备所需的缓冲液，并将其加热至适当的温度。

c. 将标准品和样品稀释至适当的浓度。

2. 涂覆抗原或者抗体a. 向微孔板中加入适量的抗原或者抗体溶液。

b. 将微孔板密封，并在4℃下孵育一夜。

c. 倒掉孵育液，用PBS洗涤孔板。

3. 阻断非特异性结合位点a. 向微孔板中加入适量的缓冲液。

b. 将微孔板密封，并在室温下孵育1小时。

c. 倒掉孵育液，用PBS洗涤孔板。

4. 加入探针a. 向微孔板中加入适量的探针溶液。

b. 将微孔板密封，并在室温下孵育1小时。

c. 倒掉孵育液，用PBS洗涤孔板。

5. 应用底物a. 向微孔板中加入适量的底物溶液。

b. 将微孔板密封，并在室温下孵育适当的时间。

c. 加入适量的住手液住手反应。

6. 测量吸光度a. 使用ELISA阅读器测量每一个孔的吸光度值。

b. 记录吸光度值，并进行数据分析。

四、数据分析1. 标准曲线绘制a. 使用已知浓度的标准品制作一系列稀释液。

b. 测量每一个稀释液的吸光度值。

c. 将吸光度值绘制成标准曲线。

2. 计算样品浓度a. 使用标准曲线确定样品的浓度。

b. 根据实验需求，可以使用线性回归或者其他适当的计算方法。

五、实验注意事项1. 所有操作应在洁净的实验室环境下进行，以避免污染。

文件页码：1/21．概述肠球菌属包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、类鸟肠球菌、棉子糖肠球菌等21个种。

2. 标本类型血液、尿液、痰、穿刺液、脓液等标本。

3. 鉴定3.1 形态与染色革兰阳性球菌，单个、成双或短链排列。

3.2 培养特性在血琼脂平板上35℃培养18～24小时，形成较小、灰白色，有α溶血或γ溶血环的菌落。

在康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。

3.3 生化反应触酶试验阴性，分解甘露醇，胆汁七叶苷试验阳性，在含6.5%NaCl肉汤中生长，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。

3.4 鉴别要点3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，触酶阴性，在含6.5%NaCl肉汤中生长，胆汁七叶苷和耐盐试验阳性，45℃生长。

3.4.2与链球菌属和乳球菌属的鉴别肠球菌属能在pH9.6肉汤和45℃生长，胆汁七叶甘和耐盐试验阳性，而链球菌属和乳球菌属则相反。

3.4.3 粪肠球菌与屎肠球菌、鸟肠球菌的鉴别粪肠球菌不分解L-阿拉伯糖，分解山梨醇。

屎肠球菌能分解L-阿拉伯糖，不分解山梨醇。

鸟肠球菌分解L-阿拉伯糖和山梨醇。

3.5 操作步骤3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。

3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。

3.5.3 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。

4. 药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S19最新版本文件。

5. 质量控制参见《质量管理程序》。

6. 检验结果解释与分析在β-内酰胺酶阴性肠球菌中，氨苄西林药敏试验结果可预测阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等敏感性。

青霉素药敏试验可预测氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等药敏结果。

粪肠球菌中氨苄西林药敏结果可以预测亚胺培南的药敏结果。

对于血培养和脑脊液培养分离出的肠球菌需做β-内酰胺酶检测，若β-内酰胺酶阳性，则对氨基青霉素、羧基青霉素和脲基青霉素均耐药。

ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验技术，用于检测和定量测定生物样品中的特定蛋白质、抗体或其他生物分子。

本操作规程旨在提供一套标准的ELISA实验操作流程，确保实验的准确性和可重复性。

二、实验材料和设备1. 96孔酶标板2. 微量移液器和相应的可调移液器架3. 高速离心机4. 酶标仪或多功能酶标仪5. 洗板机或多通道移液器6. ELISA试剂盒（包括底物、酶标记抗体、探针等）7. 样品（血清、细胞上清液等）8. PBS缓冲液（pH 7.4）9. 碳酸氢钠溶液（pH 9.6）10. 1% BSA溶液三、实验步骤1. 酶标板的处理a. 取出所需数量的酶标板，将其放入洗板机中，用PBS缓冲液洗涤3次。

b. 吸干洗板机中的液体，将酶标板放置在可调移液器架上。

2. 样品和标准品的制备a. 根据实验需求，准备不同浓度的标准品。

b. 将样品稀释至适当浓度。

3. 样品和标准品的加样a. 将标准品和样品分别加入酶标板的相应孔中，每孔加入适量的样品或标准品。

b. 每个标准品和样品应设置至少两个重复孔。

4. 孵育a. 盖上酶标板盖，将酶标板放入恒温孵育箱中，按照试剂盒说明书上的要求进行孵育。

b. 孵育结束后，将孵育箱恢复到室温。

5. 洗板a. 将酶标板取出，倒掉孔内液体。

b. 用洗板机或多通道移液器，用PBS缓冲液洗涤酶标板中的每个孔，至少洗涤3次。

c. 吸干洗板机中的液体。

6. 酶标抗体的加样a. 将酶标抗体加入每个孔中，按照试剂盒说明书上的要求加入适量的酶标抗体。

b. 盖上酶标板盖，将酶标板放入恒温孵育箱中，按照试剂盒说明书上的要求进行孵育。

7. 洗板a. 重复步骤5中的洗板步骤。

8. 底物的加样a. 将底物加入每个孔中，按照试剂盒说明书上的要求加入适量的底物。

b. 盖上酶标板盖，将酶标板放入恒温孵育箱中，按照试剂盒说明书上的要求进行孵育。

9. 反应终止a. 加入适量的碳酸氢钠溶液至每个孔中，按照试剂盒说明书上的要求进行终止反应。

触酶试验标准操作程序
1.检验目的
规范触酶试验操作
2. 实验原理
具有触酶（过氧化氢酶）的细菌，能催化过氧化氢,可将H2O2分解为无害的水和氧气，产生可见的气泡。

3. 样本要求：
3.1 纯的菌落。

3.2 细菌要求新鲜。

3.3 不宜用血琼脂平板上的菌落做触酶实验，若用血琼脂上的菌落，刮取菌苔时注意不要带有血培养基琼脂，因红细胞内含有触酶，可能出现假阳性。

4. 材料
3%-30％过氧化氢溶液。

5. 操作步骤
5.1 准备清洁玻片、接种环。

5.2 将接种环用酒精灯火焰灭菌，待冷却后刮取适量菌苔置于玻片上。

5.3 5～30% H2O2滴在菌苔上。

6. 结果观察：立即产生大量气泡者为阳性，少量气泡者为弱阳性，无气泡者为阴性。

7. 质控：
7.1 阳性对照：质控菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923。

7.2 阴性对照：质控菌株肺炎链球菌ATCC49619。

8. 支持文件
8.1 周庭银编著. 临床微生物学诊断与图解. 第二版. 上海：上海科学技术出版社，2007 8.2 王钦升，周正明，高屹主编. 使用医学培养基手册. 北京：人民军医出版社，1999。

ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开辟等领域。

本文旨在提供一份标准的ELISA操作规程，以确保实验的准确性和可重复性。

二、材料和试剂1. 96孔ELISA板：用于固相免疫反应。

2. 高纯度酶标仪：用于测定反应产物的光密度。

3. 微量移液器和相应的移液头：用于准确分配试剂。

4. 洗板缓冲液：用于洗涤孔板。

5. 样品：包括待测物质和阳性/阴性对照。

6. 酶标抗体：用于与待测物质结合。

7. 酶标底物：用于产生可测量的信号。

8. 住手液：用于住手酶反应。

三、操作步骤1. 准备工作a. 将96孔ELISA板放置在平整的工作台上。

b. 根据需要，标记板上的孔位编号。

c. 准备洗板缓冲液，并将其加入洗板器中。

2. 涂覆抗原a. 向每一个孔中加入适量的抗原溶液。

b. 将ELISA板盖好，放置在4°C的冰箱中过夜，或者在室温下静置2小时。

c. 倒掉孔中的抗原溶液，并用洗板缓冲液洗涤孔板3次。

3. 孔板预处理a. 向每一个孔中加入适量的阻断缓冲液。

b. 将ELISA板盖好，在37°C恒温箱中孵育1小时。

c. 倒掉孔中的阻断缓冲液，并用洗板缓冲液洗涤孔板3次。

4. 样品加入a. 向每一个孔中加入待测样品和阳性/阴性对照。

b. 将ELISA板盖好，在37°C恒温箱中孵育1小时。

c. 倒掉孔中的样品，用洗板缓冲液洗涤孔板3次。

5. 加入酶标抗体a. 向每一个孔中加入适量的酶标抗体。

b. 将ELISA板盖好，在37°C恒温箱中孵育1小时。

c. 倒掉孔中的酶标抗体，用洗板缓冲液洗涤孔板3次。

6. 酶反应a. 向每一个孔中加入适量的酶标底物。

b. 在室温下避光孵育适当的时间。

c. 加入适量的住手液住手酶反应。

7. 测量光密度a. 使用高纯度酶标仪测量每一个孔的光密度。

b. 记录测量结果，并进行数据分析。