蚌埠医学院(生化)

不同生化分析仪测定项目结果的比对试验【摘要】目的通过对日立7600全自动生化仪和ROCHE P800自动生化分析仪进行方法比对，探讨不同仪器间天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(BUN)、血清总蛋白(TP)和血糖(GLU)四种检测结果是否具有可比性。

方法以日立7600作参考仪器，ROCHE P800作为比对仪器方法以日立7600作参考仪器，ROCHE P800作为比对仪器，每天选取新鲜血清，分别在2台仪器上测定该四个项目，并记录结果。

用SPSS 10.0软件对两台仪器的结果采用回归和相关分析，求其相关系数r及回归方程Y=bX+a。

结果2台仪器4个项目的检测结果差异无显著性(r>0.975)。

结论2台仪器的检测结果具有较好的可比性。

【关键词】生化分析仪; 比对试验; 血清; 可比性我院先后购买了日立7600和ROCHEP800 2台全自动全化分析仪，同一标本在不同仪器上测定其结果可能存在一定的差异，进行比对试验是检验人员需要重视的一项工作。

本文参考美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的EP9 A文件[1]，使用上述2台生化分析仪对AST、BUN、TP和GLU4个项目进行了检测对比，现将结果报告如下。

1 材料与方法1.1 材料为采自蚌埠医学院第一附属医院患者的高、中、低三个浓度的血清(与试剂参考范围比较)标准。

1.2 方法(1)仪器标本：①仪器：7600全自动生化分析仪(日本日立公司);ROCHE P800自动生化分析仪(瑞士罗氏公司)。

②试剂：日立7600使用的试剂：其配套试剂(浙江东瓯);ROCHE P800及其配套试剂(ROCHE)。

③定标物及质控品：ROCHE公司C.f.a.S定标物及高、低值质控品。

④标本：临床患者新鲜血清40份。

⑤参数：原厂提供的检测参数。

(2)试验数据收集：本院住院及门诊患者当天血清，至少选取8个高、中、低浓度的标本，随机与当天待检标本同等条件下进行检测。

原花青素上调let-7a抑制胰腺癌AsPC-1细胞生长及迁移马佳;方斌斌;马聪;庞海杰;曾凡鹏;夏俊【摘要】Objective To ascertain whether proanthocyanidins inhibit cell growth and migration by increasing let-7a expression in pancreatic cancer AsPC-1 cells. Methods The proliferation rate, cell apoptosis rate and cell migration ability of AsPC-1 cells treated with proanthocyanidins were measured by MTT assay, Annexin V-FITC/PI staining, and Transwell migration assay, respectively. The expression of let-7a AsPC cells was detected by miRNA real-time RT-PCR after proanthocyanidins treatment. The changes in the biological behaviors of AsPC-1 cells were evaluated after transfection with let-7a mimics. Results Compared with the control group, proanthocyanidins treatment caused dose-dependent decrements of the proliferation rate and migration ability and increased the apoptosis rate in AsPC-1 cells. AsPC-1 cells with proanthocyanidins treatment showed increased expression of let-7a. Transfection with let-7a mimics resulted in obvious decreases in the cell growth rate and migration ability, and proanthocyanidins treatment significantly enhanced the inhibitory effect of let-7a mimics. Conclusions Proanthocyanidins-induced cell growth and migration inhibition are partially mediated by up-regulation of let-7a expression in AsPC-1 cells.%目的探讨原花青素是否通过上调let-7a表达而抑制胰腺癌细胞生长及迁移.方法体外培养人胰腺癌AsPC-1细胞,原花青素处理细胞后,分别用MTT法、Annexin V-FITC/PI双染及Transwell迁移等实验检测细胞增殖率、细胞凋亡率及细胞迁移能力的改变;利用miRNA实时逆转录PCR检测细胞内let-7a表达变化.AsPC-1细胞转染let-7a mimics后,MTT法、Transwell迁移实验分别检测细胞增殖率及细胞迁移能力的改变.结果与对照组相比,原花青素处理AsPC-1细胞后,细胞增殖率、细胞迁移能力随着原花青素浓度升高而下降,而细胞凋亡率随着药物浓度升高而逐渐升高.与对照组相比,原花青素处理细胞后, let-7a的表达升高.通过脂质体转染let-7a mimics后,细胞的增殖率及迁移能力均低于对照组,且let-7a mimics与原花青素共同作用后,细胞增殖及迁移明显低于let-7a mimics和原花青素单独作用组.结论原花青素具有抑制胰腺癌细胞生长、迁移,及诱导细胞凋亡的作用.原花青素可能是通过上调let-7a表达,从而抑制胰腺癌细胞的生长及迁移.【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2015(035)008【总页数】6页(P1110-1115)【关键词】原花青素;let-7a;胰腺癌细胞【作者】马佳;方斌斌;马聪;庞海杰;曾凡鹏;夏俊【作者单位】蚌埠医学院1生化与分子生物学教研室,安徽蚌埠 233030;临床检验诊断学实验中心,安徽蚌埠 233030;临床检验诊断学实验中心,安徽蚌埠 233030;临床检验诊断学实验中心,安徽蚌埠 233030;临床检验诊断学实验中心,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院1生化与分子生物学教研室,安徽蚌埠 233030【正文语种】中文原花青素是一类由儿茶素和表儿茶素聚合而成的多酚类化合物，葡萄的籽和皮中富含原花青素。

3-溴丙酮酸增强肝癌细胞对顺铂敏感性的作用赵素容;张媛媛;吴成柱;李红梅;蒋琛琛;蒋志文;刘浩【摘要】目的：探讨3-溴丙酮酸（3-BP）增强肝癌细胞对顺铂敏感性的作用及其可能机制。

方法MTT法检测3-BP、顺铂对HepG2、SMMC7721细胞的增殖抑制作用。

选择低于半数抑制浓度（IC50）的100μmol/L的3-BP和8μmol/L的顺铂单独或联合处理细胞，PI单染流式细胞术检测细胞凋亡，caspase 3活性检测试剂盒测定caspase-3的活性变化，ATP检测试剂盒测定细胞内ATP水平，Western blot检测XIAP、PARP蛋白的表达。

结果3-BP在50~400μmol/L浓度范围内对HepG2、SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用（P<0.01），作用48 h的IC50分别为238.9±13.9μmol/L、278.7±11.7μmol/L；顺铂在2~32μmol/L浓度范围内对HepG2、SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用（P<0.01），作用48 h的IC50分别为16.4±0.9μmol/L、20.9±1.8μmol/L。

100μmol/L 3-BP与8μmol/L顺铂联合作用于HepG2、SMMC7721细胞48 h 的增殖抑制率分别为（60.6±2.2）%、（56.8±2.3）%，明显高于对照组和单独用药组（P<0.01）。

100μmol/L 3-BP与8μmol/L顺铂联合作用于HepG2、SMMC7721细胞48 h的凋亡率分别为（51.1±4.3）%、（46.5±3.9）%，较单用3-BP、顺铂的凋亡率明显提高（P<0.01）。

结论3-BP能增强肝癌细胞HepG2、SMMC7721对顺铂诱导的凋亡的敏感性，其机制可能是通过引起细胞内ATP缺乏、下调XIAP蛋白的表达以及增加caspase-3的活性。

收稿日期]2012-03-14作者单位]蚌埠医学院1.生化与分子生物学教研室,临床检验诊断学实验中心 省级实验实训示范中心),安徽蚌埠233030;2.蚌埠医学院第一附属医院核医学科,安徽蚌埠233004作者简介]杨 畸 1976-),女,实验师. 文章编号 1000-2200 2013)05-0640-04综 述降钙素原的临床应用进展杨 琉1 孙伟莉1 综述,李卫鹏2审校关键词 降钙素原;脓毒症;炎症;综述中国图书资料分类法分类号 R37 文献标志码 A 降钙素原 pro c a i c i t o ni n ,P C T )是近年研究较多的感染相关性生物标志物0大量研究1-4]表明,PC T 与感染所致的全身炎症反应综合征 SIR S )~脓毒症~脓毒性休克等全身感染情况严重程度和预后具有明确相关性0目前,PC T 作为常规临床检测指标已被广泛应用,本文就近年来关于P C T 的生成~代谢~临床意义以及P C T 测定方法的研究进展作一综述01 P C T 的生成及其诱导因素P C T 是一种相对分子质量为13000的糖蛋白,为降钙素 c a i c i t o ni n ,C T )的前体物质,不具有激素活性,是11号染色体上的C a i c i 基因的编码产物0在正常情况下,人体甲状腺滤泡旁细胞 C 细胞)内转录生成Ca i c i m R N A 后,翻译成P C T 前体,经糖基化和特异性酶切除后生成P C T ,再经过不同蛋白水解酶酶解,形成成熟的CT 和抗钙素 ka t a c a i c i n ,K C ),成熟的C T 的C 末端酚胺化才会形成有活性的C T 0除生理情况下,C 细胞内的合成分泌,PC T 还存在异位分泌现象0甲状腺切除术后合并严重感染患者血浆PC T 仍然升高0甲状腺髓样细胞癌和小细胞肺癌可同时合成C T 和P C T ,使血浆CT 和P C T 升高0L i ns c he i d 等 1]研究发现,血浆PC T 显著升高的脓毒症患者外周血白细胞并无PC Tm R N A 表达增加,离体全血以脂多糖 ii po po i y s a c c ha r i de ,L P S )诱导,未能产生可检测到的PC T 变化;且化疗后白细胞严重缺乏患者脓毒症时血浆PC T 仍显著升高,提示脓毒症时外周血白细胞并非P C T 的主要来源,机体组织细胞 肝~肺~肾~脂肪以及肌肉等)可能是全身炎症反应时PC T 的主要产生来源0L P S ~白介素 I L )-1~I L -2~I L -6和肿瘤坏死因子- T N F - )对P C T m R N A 表达呈正刺激效应,可以在短时间内诱导P C T 的大量生成0严重细菌感染或者脓毒症时,血浆PC T 显著升高,其升高的程度与感染的严重程度呈显著的正相关;而C T 并无显著变化,提示在炎症条件下P C T 和C T 的产生是两个相对独立的过程0P C T 是一种次级炎症因子,其本身不能启动脓毒症反应,但是PC T 可放大并加重脓毒症病理过程0脓毒症时血浆P C T 水平异常升高,提示P C T 在急性免疫反应方面具有某些病理生理功能,但目前尚未完全明了0将人PC T 注入脓毒症的仓鼠体内可增加其死亡率,对正常仓鼠则无此作用0脓毒症的仓鼠在使用CT 抗原血清后能够明显改善其存活率,而且在脓毒症猪的研究中也出现类似的研究结果2]0P C T 产物仅在轴附的单核细胞以及脂肪细胞中出现,在循环粒细胞中并没有发现0轴附的单核细胞仅在和组织细胞开始接触串连时产生PC T ,初期作为趋化因子,单核细胞合成和分泌的PC T 和P C T 产物所产生的化学诱导效应仅仅持续几个小时;在感染情况下,单核细胞所衍生的巨噬细胞很可能是通过招募感染组织内的实质细胞,引起PC T 的大量释放0系统性炎症会影响组织和单核细胞的轴附,影响其PC T 的产生,P C T 升高的程度取决于机体发生炎症的范围以及其严重程度,而病毒感染以及自身免疫性疾病则不能诱导P C T 的产生0P C T 在体内被特异的蛋白水解酶所降解,其半衰期约为25~30h 0P C T 很少经肾排出,血浆P C T 的肾脏清除率小于1m i /m i n ,对于肾衰竭患者,其血浆P C T 水平并无明显升高0血浆PC T 水平与尿液P C T 水平比例约为4i 1,该比例保持相对恒定0持续静脉血液滤过或者血液透析虽然可以清除部分PC T ,但血浆P C T 水平并无显著的变化0因此,血浆P C T 的检测也适用于肾衰竭或接受人工肾治疗的患者02 P C T 的临床应用2.1 作为细菌性脓毒症诊断及判断预后的标准 脓毒症是由于感染而引起的SIR S ,一般见于细菌性感染,也可见于真菌~病毒以及寄生虫等的感染0脓毒症以及并发的多器官功能衰竭 mui t i o r g a n dy s f unc t i o n s y ndr o m e ,M O D S )是危重患者的重要死亡因素之一0大量研究证实,PC T 是细菌性脓毒症诊断以及鉴别诊断的重要指标之一0PC T 可用于区别病毒性脑膜炎~化脓性以及结核性脑膜炎,临床上用来指导中枢感染性疾病的诊治0革兰阴性菌血症时,血浆PC T 水平显著高于革兰阳性菌血症时的血浆PC T 水平 3]0真菌感染所致的脓毒症P C T 可有一定程度的升高,但是明显低于细菌感染性脓毒症 4]0伤寒以及恶性疟疾患者血浆P C T 也可升高5];感染钩端螺旋体的患者,血浆P C T 水平也上升 6]0C a s t e i i i 等 7]研究发现,PC T 水平与感染及脓毒症严重度相关,并且随着感染病情的严重程度增加,血浆P C T 水平也会不断增高,以脓毒性休克组患者的PC T 水平最高0P C T 与呼吸机相关性肺炎 v e nt i i a t o r -a s s o c i a t e d pne um o ni a ,V A P )也有一定的相关性,长期机械通气发生46J b e ng bu M e d C o i iM a y 2013 V o i .38 N o .5万方数据V A P患者血浆P C T水平显著升高O R a m i r e z等8]认为P C T 诊断V A P的敏感性为90.6%特异性为84.6%诊断正确率为87.9%P C T在诊断V A P中优于传统的炎症指标;当P C T ＞2.99ng/m i时而且肺部感染评分＞6V A P诊断的特异性达100%O而L uy t等9]则认为P C T对V A P的诊断价值并不高:P C T诊断V A P的敏感性为41%诊断正确率为68%特异性为65%O之所以出现不同的研究报道可能与选择的研究人群有一定关系因而P C T在V A P中的作用有待于进一步研究证实OP C T水平与严重感染者的病死率呈现一定的相关性社区获得性肺炎所致的急性呼吸窘迫综合征患者中死亡组在发病72h内的血浆P C T值明显高于存活组10]O T s e ng等11]也发现¡伤后脓毒症患者的血浆P C T水平在¢存组明显低于死亡组;而白细胞~C反应蛋白以及红细胞沉降率等指标则无差异O由此可见P C T可以早期判断重症感染性疾病患者的预后O检测血清的P C T水平可以帮助临床医生早期诊断¡伤患者是否感染脓毒症并对脓毒症的严重程度进行评判O监测P C T有助于临床医生判断急性胰腺炎的预后:胰腺感染不伴有M O D S患者血浆P C T轻度升高对于此类患者不需要手术治疗且不影响其生存O然而连续2d P C T＞3.5ng/m i的患者提示存在感染坏死或伴有M O D S影响患者的预后;P C T以此作为临界值其诊断灵敏度和特异性分别为93%和88%12]O2.2 作为严重创伤 手术患者并发症的监测指标多发创伤患者其血浆P C T水平明显升高1~3d内达到最高值P C T升高程度与创伤的严重程度密切相关并在3周内逐渐恢复至正常水平O C a s t e i i i等13]研究发现严重创伤患者在治疗期间血浆P C T的再次升高预示着并发脓毒症的可能入院时P C T水平高的患者并发脓毒症的危险性会增高O术后患者血浆P C T水平一般不升高或者仅仅轻度升高无细菌污染或者内毒素释放的轻度创伤小手术后血浆P C T值在正常范围内;大手术如胃~食管切除术后2~3d血浆P C T水平可暂时升高通常在2~3ng/m i但有时会上升到10ng/m i;然而在系统性炎症或者脓毒症时血浆P C T升高很明显并持续升高在术后第1天或第2天其P C T值大于1.5ng/m i表明有继发并发症的可能性O P r i e t o等14]发现原位肝移植患者在术后12h血浆P C T开始升高在24h达到峰值;合并感染者P C T则会出现第2个峰值出现并发症的患者在术后5 d P C T依然保持较高水平排£反应时未出现P C T的升高;在移植术后24h若P C T水平高于1.92ng/m i则出现并发症的可能性增加9.1借O H a a s pe r等15]认为多发伤以及大手术可以引起血浆P C T和/或I L-6水平的升高P C T和/或I L-6升高的程度与机体损伤的严重程度~是否并发脓毒症以及M O D S有关系P C T检测有助于临床早期发现感染以及预警外伤所致M O D S的发生O2.3 新生儿状况评估 K o py r a等16]通过对48例胎膜早破的孕妇研究发现以5ng/m i作为孕妇血清P C T水平的临近值(R O C:0.647> 在判断新生儿是否存在严重的感染方面具有重要价值O孕妇P C T水平越高新生儿出现重度感染的可能性越大O血清P C T优于C反应蛋白等其他指标O2.4 指导抗生素应用 P C T逐渐被用于指导抗生素的应用17]O检测P C T可用于判断是否存在细菌感染以及是否需要抗生素治疗18]O C hr i s t-C r a i n19]评价了P C T测定对需要抗生素治疗的社区获得性肺炎的价值:302例社区获得性肺炎患者随机分为常规抗生素治疗组(l=151>和P C T指导抗生素治疗组(l=151> 后者根据血清P C T的水平决定抗生素的使用;当P C T<0.10ng/m i时提示无细菌感染避免应用抗生素;当P C T水平介于0.10~0.25ng/m i时表示可能无细菌感染存在不建议使用抗生素;P C T＞0.25ng/m i时为可能有细菌感染存在建议抗生素的临床应用;当P C T水平＞0.50ng/m i时提示肯定有细菌感染强烈建议使用抗生素;与常规抗生素治疗组相比在P C T指导抗生素治疗组平均每个患者的抗生素花费减少了47%O利用血浆P C T水平指导抗生素的临床使用使抗生素使用的中位时间由12d减少至5d O由此可见将P C T作为指导抗生素治疗的指标可以杜绝抗生素的临床¤用缩短治疗时间减少耐药菌群的产生降低患者的治疗费用20]O2.5 治疗效果评价 P r e a s等21]研究发现给健康受试者静脉注射内毒素产生脓毒症模型血浆P C T水平在3h开始升高24h内达到高峰7d之内其水平依然在正常值之上;后给予受试者低剂量的可溶性T N F二聚体受体治疗结果使脓毒症症状减轻血浆P C T水平下降至原来的1/2~1/3而对照组P C T水平没有明显变化O由此可见内毒素诱导的血浆P C T升高可用低剂量T N F二聚体受体消除P C T可作为评价抗炎因子临床疗效的参考指标O3 P C T测Y方法及临床参考范ZP C T的检测方法有放射免疫分析法~双抗体夹心免疫发光法等O目前多采用双抗体夹心免疫发光法该法应用了2株针对P C T上不同抗原决定¥的单克隆抗体分别结合P C T分子上的2个部位(C T和K C部位> 一株为单克隆抗C T抗体另一株为单克隆抗K C抗体该检测方法可排除交叉反应其测定的低值为0.1ng/m i:该法敏感性高~特异性强操作较为简单且用时较短O另外也可采用半定量快速检测盒进行分析检测:将采集的血样经离心后取血浆或血清20-i滴入试剂盒中在室温下静置30m i n后观察试验结果;根据出现色带颜色的深浅判读出P C T值该法的检测低值为0.5ng/m i其操作快速~方便结果容易观察;但其检测限受限:检测不到正常人血清中的P C T水平O采用血清或血浆进行P C T测定时动脉血中的P C T水平比静脉血要略微高一些O P C T在体内~体外都比较稳定标本¯藏不需要特殊条件冷冻样本对P C T检测结果影响较小O血浆P C T水平在健康成人~慢性炎症反应~自身免疫性疾病~病毒感染或轻微至中度局部细菌感染者均低于0.5ng/m i SI R S~¡伤~多发伤患者介于0.5~2.0ng/m i;严146蚌埠医学院学报2013牟5月第38卷第5期万方数据重的细菌感染~脓毒血症~多器官功能不全综合征患者P C T >2ng/m i,通常在10~100ng/m i22]0新生儿在生后2d内血浆P C T水平会出现生理性升高,最高可达21ng/m i,在3d 后下降至正常成人水平0有44%的长期血液透析患者中出现血浆P C T水平轻度上升,但无感染体征,因而在临床应用中,建_对长期血液透析患者,血浆P C T界定值应为< 1.5ng/m i0Sc hw e ng e r等23]对81例抗中性粒细胞胞浆抗体阳性结节性脉管炎(其中25例伴有系统性红斑狼疮,27例伴有类风湿性关节炎>患者血浆P C T检测发现,95%伴有系统性红斑狼疮~类风湿性关节炎患者血浆P C T水平<0.5ng/ m i095%抗中性粒细胞胞浆抗体相关性结节性脉管炎患者血浆P C T水平<0.89ng/m i,推荐将1ng/m i作为自身免疫性疾病患者细菌感染的界值0建_对于自身免疫性疾病患者接受免疫抑制剂治疗时,应该检测P C T水平,以监测是否有细菌性炎症的发生0在临床上,应建立特殊人群或特种疾病患者相对应的参考值范围,使得检测结果对临床评估更具有意义24]04 结þP C T作为新的炎症标志物,相对于传统的炎症标志物而言,具有早期诊断~特异性高~敏感性强~快速~准确等特点,可用于细菌感染性脓毒症的诊断~鉴别诊断~病情严重程度判断和预后评估,显示出了较为理3的应用前景0但是,P C T 必须结合其他实验指标~临床检查以及既往治疗史对患者病情进行综合分析评价0到目前为止,P C T产生的确切机制以及P C T在脓毒症时的来源~具体作用机制尚不完全清楚,有待于进一步的临床研究0对于不同年龄以及基础疾病脓毒症患者的P C T参考值范围,需要进一步的明确0检测P C T 对抗生素治疗在临床上的合理应用具有重要的指导意义0参考文献1] L i ns c he i d P,Se bo e k D,N y i e n E S,e t al.I l U i t r o a nd i l U i U oc a i c i t o ni n I g e ne e X pr e s s i o n i n pa r e nc hy m a i c e i i s:a no v e i pr o duc to f hum a n a di po s et i s s ue J].E ndo c r i no i o g y,2003,144(12>:5578-5584.2]T a v a r e s E,M i a no F J.I m m uno ne ut r a i i z a t i o n o f t hea m i no pr o c a i c i t o ni n pe pt i deo f pr o c a i c i t o ni n pr o t e c t sr a t sf r o mi e t ha i e ndo t o X a e m i a:ne ur o e ndo c r i nea nd s y s t e m i cs t udi e s J].C i i n Sc i,2010,119(12>:519-534.3] F e ndi e r W M,P i o t r o w s ki A J.P r o c a i c i t o ni n i n t he e a r i y di a g no s i s o f no s o c o m i a i s e ps i si n pr e t e r m ne o na t e s J].JP a e di a t rC hi i dH e a i t h,2008,44(3>:114-118.4]C ha r i e s P E,D a i i e F,A ho S,e t 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P 家族已发现有8个成员:N A I P ~X I A P I L P -1/M I H A )~c I A P -1 H I A P -2/M I H b )~c I A P -2 H I A P -1/M I H C )~s ur v i v i n T I A P )~a po i i o n b r uc e )~I L P -2 T s -I A P )和L i v i n M L -I A P /K I A P ) 1] L i v i n 在2000年由4个不同实验小组所发现,L i n 等2]在人的胎肾cD N A 库中发现该基因,将其命名为肾脏凋亡抑制蛋白 K I A P );V uc i c 等 3]发现该基因在人黑素瘤细胞中高表达,故命名为黑素瘤凋亡抑制蛋白 ML -I A P );K a s o f 等4]将该基因命名为Li v i n ,这一命名被多数人接受并沿用至今 Li v i n 是I A P 家族的新成员,可以通过多种途径发挥很强的凋亡抑制作用,在消化系统恶性肿瘤组织中高表达,且与癌细胞的分化程度密切相关 Li v i n 作为目前研究最新的抑癌基因,已成为当今研究的热点 本文就L i v i n 基因与消化道肿瘤的研究进展作一综述 1 L i v i n 的生物学特性1.1 L i v i n 的结构及功能 L i v i n 基因位于人染色体20g13.3,全长4.6kb ,包括7个外显子和6个内含子 基因转录产物mR N A 长1.4kb ,这与L i v i n 全长c D N A 大小相一致 Li v i n 蛋白N 端包含一个b I R 结构,C 端含有一个R I N G 环指结构 其中bI R 是L i v i n 与半肌氨酸蛋白酶 C a s pa s e )互相作用并抑制其活性的必要成分 Li v i nb I R 包含4个 螺旋,1个三股的反平行B 片层,与相应的氨基酸残基共同构成疏水核心 Li v i n 的抗凋亡活性就主要依赖于其b I R 结构域,这三者结构上突变均可导致Li v i n 生物学作用发生变化,主要是影响其抗凋亡活性 As hha b 等 5]明确了该基因有2个不同剪切异构体,即L i v i n 和L i v i n B 前者c D N A 全长897bp ,编码298个氨基酸;后者c D N A 全长843bp ,编码280个氨基酸 二者相差的18个氨基酸由介于b I R 和R I N G 结构之间的第6外显子5 端54bp 的基因序列编码 1.2 L i v i n 的分布 L i v i n 高表达于多种恶性肿瘤组织中,在正常成人的大多数终末分化组织中则低表达或不表达,并且L i v i n 和L i v i n B 在不同的组织表达有差异 A s hha b 等 5]用R T -P C R 方法检测发现在正常成人心脏~胎盘~脾~肺~卵巢中L i v i n 和L i v i n B 均有表达,但含量极低,在脑~骨骼肌及外周血淋巴组织中仅有Li v i n 低表达,成人肾中有L i v i n B 低表达;在人的胚胎组织中无Li v i n 表达,但胎儿肾脏中L i v i n B 呈高表达,在胎儿的心~脾中低表达 由此推测,Li v i n B 对正常生长发育的组织可能具有重要作用 K a 等 6]报道在妊娠中晚期的胎盘中Li v i n 和其他几种凋亡抑制蛋白表达均显著增高,能够防止胎盘滋养层细胞死亡,对胎儿的发育有利 L i v i n 的亚细胞定位决定了其抗凋亡和促凋亡之间精细平衡的调节 7],然而关于L i v i n 在细胞内的定位尚有争议,最近研究8-9]表明,Li v i n 蛋白主要表达于恶性肿瘤细胞的细胞质中2 L i v i n 的作用机制2.1 抑制C a s pa s e 机制 C a s pa s e 家族是介导细胞凋亡的重要蛋白家族,大多数刺激物是通过C a s pa s e 级联激活反应引起细胞凋亡 C a s pa s e 有10多个家族成员,L i v i n 通过其b I R 结构域能与其中的多个成员直接相互作用,阻止C a s pa s e 在细胞凋亡时执行蛋白切除功能,抑制细胞凋亡 Li v i n 可直接346蚌埠医学院学报2013牟5月第38卷第5期万方数据。

乙酰肝素酶基因靶向特异性RNA干扰重组表达载体的构建及筛选刘阳;霍强;许立薇;蒋志文【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2010(030)010【摘要】目的构建对人乙酰肝素酶(HPA)基因有特异性抑制作用的短发夹状RNA 表达载体.方法根据GenBank数据库提供的人HPA基因核苷酸序列,按照shRNA 设计原则设计5对特异性的寡核苷酸序列及阴性对照,分别克隆到pGPU6/GFP/Neo载体中,酶切鉴定和测序验证阳性克隆.用脂质体转染人MDA-MB-231细胞,分别以荧光定量PCR、Western blot分析其对HPA在mRNA水平和蛋白质水平上表达的影响.结果经酶切、测序鉴定均证实重组质粒构建成功.在构建的5个载体中,HPSE-1组及HPSE-5组中MDA-MB-231细胞HPA基因mRNA和蛋白质表达水平明显下降,而对照组未发生明显改变.结论成功构建了2个靶向人HPA的shRNA表达载体,转染MDA-MB-231细胞后可高效抑制HPA 基因表达,为进一步研究HPA的表达与乳腺癌迁移和侵袭的机制奠定了基础.【总页数】4页(P2340-2342,2346)【作者】刘阳;霍强;许立薇;蒋志文【作者单位】蚌埠医学院药学系,安徽省生化药物工程技术研究中心,安徽,蚌埠,233030;蚌埠医学院药学系,安徽省生化药物工程技术研究中心,安徽,蚌埠,233030;蚌埠医学院药学系,安徽省生化药物工程技术研究中心,安徽,蚌埠,233030;蚌埠医学院药学系,安徽省生化药物工程技术研究中心,安徽,蚌埠,233030【正文语种】中文【中图分类】R915【相关文献】1.Survivin基因靶向RNA干扰重组表达载体的构建和测序 [J], 石丛艳;郭德玉2.靶向Akt2基因RNA干扰重组表达载体的构建和测序 [J], 曹婷婷;张茂林;赵国强;卢滨;王静3.VEGF-C基因靶向RNA干扰重组表达载体的构建和表达 [J], 周慧聪;亢春彦;张艳;李继昌4.HER-2基因靶向RNA干扰重组表达载体的构建及序列分析 [J], 韩明阳;吴爱国;郭爱林;李鹏;纪术峰;刘铮5.Rictor基因特异性RNA干扰表达载体的构建和筛选 [J], 邹根贵;何春锋;刘永因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

MicroRNA在肿瘤EMT调控中的作用黄静;蔡颖;朱丽华;卢晓辉;夏春磊;许涛;杨清玲;陈昌杰【摘要】MicroRNA（miRNA）是一类长度约19～25个核苷酸的小分子非编码RNA，通过翻译抑制或MRNA降解发挥转录后水平调控基因表达。

研究表明，miRNA在上皮细胞-间充质转化（EMT）调控中发挥关键的角色。

EMT是上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程，上皮细胞黏附分子如E-钙粘素等表达减少或缺失，细胞失去极性；细胞具有间充质特征，获得了较高的迁移与侵袭能力，间质特征性分子，如Twist、Snail、Slug和Vimentin 等表达增高。

近年来发现，miRNA 参与调控肿瘤细胞发生EMT改变。

本文着重对EMT形成过程中miRNA的作用进行扼要综述。

此外，回顾分析各种肿瘤中MiRNA的角色，靶向miRNA可能会成为癌症治疗的新型策略。

%MicroRNA (miRNA) are kinds of small noncoding RNA molecules with about 19-25 nucleotides which regulate the post-transcriptionally gene expression via translational inhibition or mRNA degradation. Emerging evidence has demonstrated that miRNAs play a pivotal role in regulation of epithelial to mesenchymal transition (EMT). EMT is the biological process that epithelial cells transform to mesenchymal cells through specific procedure. During EMT, epithelial cells lose epithelial characteristics such as loss of E-cadherin, whereas cells gain mesenchymal features including enhance cell migration and invasion, and increase expression of mesenchymal markers such as Twist, Snail, Slug, and Vimentin. Since MiRNAs were critically involved in regulating EMT, this review briefly describes the role of MiRNAs in the processes of EMT. Moreover, here we provide an overview of miRNAs in avariety of human cancers. Furthermore, targeting miRNAs may be a novel strategy for the treatment of human cancers.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】4页(P420-423)【关键词】MiRNA;EMT;肿瘤【作者】黄静;蔡颖;朱丽华;卢晓辉;夏春磊;许涛;杨清玲;陈昌杰【作者单位】蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心，安徽，蚌埠 233000;蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心，安徽，蚌埠 233000;蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心，安徽，蚌埠 233000;蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心，安徽，蚌埠233000;蚌埠医学院生物科学系，安徽，蚌埠233000;蚌埠医学院生物科学系，安徽，蚌埠 233000;蚌埠医学院生化与分子生物学教研室，安徽，蚌埠 233000;蚌埠医学院生化与分子生物学教研室，安徽，蚌埠 233000【正文语种】中文MicroRNA（miRNA）是由基因组DNA编码的一类非编码RNA，在RNA聚合酶Ⅱ的作用下转录生成初始的miRNA，即pri-miRNA。