2.1 体外培养细胞的分类

体外培养细胞的基本形态
体外培养细胞的基本形态通常可以分为以下几种：
1. 悬浮细胞：这种细胞没有任何附着物质，完全悬浮在培养基中。

悬浮细胞的形态通常呈现为圆形、椭圆形或不规则形状。

2. 基质附着细胞：这种细胞会附着在培养基的底部或其他附着物质上。

它们通常呈现为扁平的形状，并且会伸出像触角一样的细胞突起。

3. 单层附着细胞：这种细胞生长在平坦的基质上，形成一个单细胞层。

其形态通常呈现为扁平的形状，并且细胞之间呈现较为规则的排列。

4. 多层附着细胞：这种细胞会从单层细胞增殖而来，形成多层细胞堆叠的结构。

上层细胞通常会呈现较为扁平的形状，下层细胞则呈现更加立体的形态。

除了这些基本形态，不同类型的细胞在体外培养时还可展现出不同的特征形态。

需要注意的是，体外培养条件可能会对细胞形态产生影响，所以在实验过程中需要综合考虑培养条件对细胞形态的影响。

细胞名词解释1.愈伤组织：原意是指植物体的局部受创伤刺激后，在其伤⼝表⾯新⽣的⼀团薄壁细胞。

在组织培养中是指在⼈⼯培养基上由已经分化的外植体的细胞重新分裂⽣长⽽形成的⼀团⽆特定形状、⽆序⽣长的薄壁细胞。

在⼀定条件下离体状态的植物组织中已经分化并停⽌⽣长的细胞重新分裂⽣长所形成的⽆组织结构的细胞团。

2.外植体：指植物组织培养中作为培养材料的离体组织块离体器官或离体细胞。

3.胚状体：由外植体或愈伤组织产⽣的与正常受精卵发育成的胚相类似的胚胎状结构。

据来源分为体细胞胚与⽣殖细胞胚。

4.极性：⾼等植物均具⼀主轴，各器官沿此主轴有顺序的进⾏⽣长分化。

主轴的⾸尾两端在⽣理形态上都有着明显差异，通常⾸段⽣芽尾端长根（形态学上端下端）这种现象叫极性。

5.植株再⽣：指通过组织培养技术将植物的细胞、组织、器官等培养成完整植株的过程。

6.形态发⽣（形态建成）：指⽣物个体发育或再⽣过程中⽣物体及其器官的形态结构的形成过程。

7.试管苗：指在⽆菌离体条件下的⼈⼯培养基上对植物细胞、组织或器官进⾏培养所获得的再⽣植株。

8.玻璃苗：指外表呈玻璃状，幼茎、叶⽚呈现半透明⽔渍状态的畸形试管植物。

9.体细胞⽆性系：指由同⼀个外植体反复进⾏继代培养后得到的⼀系列后代。

在细胞培养中，由单细胞形成的后代叫但细胞⽆性系。

10.培养基：⽤于满⾜植物正常发育所需各种营养物质的总和。

11.初代培养：指从植物体上分离外植体进⾏的第⼀次培养。

12.继代培养：将初代培养的培养物（愈伤组织、芽等）重新切割转移到新的培养基上继续扩⼤培养的过程。

13.固体培养：指加⼊琼脂等固化剂使培养基呈固体状态所进⾏的培养。

14.液体培养：指不加Agar等固化剂使培养基呈液体状态所进⾏的培养。

U11、细胞⼯程：按照⼀定的设计⽅案，通过在细胞、亚细胞或组织⽔平上进⾏实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性⽣物⼯程。

2、摇床：常⽤来进⾏细胞悬浮培养，可根据震荡⽅式分为⽔平往复式和回旋式两种，震荡速度因培养材料和培养⽬的的不同⽽不同，常⽤的震荡速度为100r/min.3、培养瓶：⼀般的植物组织和细胞培养常⽤玻璃三⾓瓶、试管、各种⼤⼩的⼴⼝玻璃瓶时，有时甚⾄⽜奶瓶和罐头瓶也都可以利⽤，特别是在进⾏快速繁殖时更常⽤造价较低的培养器⽫。

体外培养：将活体细胞成分（活体组织、活体器官、活体细胞）甚至活的个体（病原微生物）从体内或寄生体内取出放在类似于体内生存环境的体外环境，让其生长发育的过程。

2、器官培养：将活体器官或器官原基放在体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的过程。

3.器官的体外培养：值整个器官、器官的一部分或器官原基放在体外环境中，让其生存和生长的过程。

4、组织培养：将活体组织放在体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的过程。

5、细胞培养：将活体细胞（分散的细胞）放在体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的过程。

6.体内培养：将活体结构成分，从生物体内或寄生虫体内取出放在另一种生物体内然后进行生长发育的过程。

7.细胞系：原代培养植物经首次培养后获得的种群。

8、细胞株：通过选择法或克隆法，从原代细胞器中或培养物中获得的具有特殊性质或标志的培养物称为细胞株。

9、原代培养：指第一次培养将培养物放置在体外培养环境中持续培养，中途不分割培养物的培养过程。

10、传代培养：指培养物长满培养空间，并发生相互接触性抑制现象，需要将培养物分割成小部分，重新将培养物放入另外的培养器皿内进行培养的过程。

11、生长基质：泛指培养物附着的各种介质。

狭义特指在塑料或玻璃表面涂布一层能够促进培养物吸附，帖壁与铺层的生物活性物质。

12、复苏：以一定的复温速率将冻存培养物恢复到常温的过程。

13、动物细胞大规模培养技术：人工条件下（设定PH值，温度溶氧，培养工艺等）在动物细胞生物反应器中高密度大量的培养有用动物细胞，以生产珍贵生物制品的技术。

14、悬浮培养：质细胞在生物反应器中自由悬浮培养的过程。

15、固定化培养：将动物细胞与水不溶性载体结合起来在进行培养的过程。

16、结缔组织：是动物体内主要的支持性组织，由结缔组织和大量间质构成。

17、寄生虫的体外培养：模拟宿主体内环境，对寄生虫某一生活史阶段的虫体或细胞进行离体培养过程。

间充质细胞：各种结缔组织细胞的干细胞。

1.体外培养的细胞按生长方式可分为哪二种? 按细胞在体外生长的形态特征,可分为哪几种常见类型?⑴按生长方式分为二型:粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。

悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面, 而在悬浮状态下即可生长的细胞。

（绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。

）⑵可分四型: (1)上皮型细胞 (2)成纤维型细胞 (3)游走型细胞 (4)多形型细胞2.简述体外培养细胞的整个生命活动过程的分期及每代贴附生长细胞的生长过程⑴通常, 体外培养细胞的全部生命期大致可被分为以下三个阶段:①原代培养期: 也称初代培养, 是指从机体中取出细胞接种培养到第一次传代之前的这一阶段。

此期的细胞呈现出活跃移动的特点, 可见细胞分裂, 但不旺盛。

处于原代培养阶段的细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上有很大的相似性。

细胞群具有明显的异质性, 细胞间的相互依存性强, 在软琼脂培养基培养时细胞集落形成率很低。

②. 传代期：通常是培养细胞全生命期中持续时间最长的时期, 原代培养的细胞经传代后常被称做细胞系。

一般情况下, 正常体细胞在传代10-50次左右后, 细胞分裂的能力就会逐渐减弱, 甚至完全丧失, 细胞便进入衰退期。

③衰退期：处于衰退期的培养细胞, 增殖速率已经变得很慢或不再增殖, 直至最后衰退死亡。

以上特点, 主要是针对体外培养的机体正常细胞, 对于体外发生转化的细胞和肿瘤细胞而言, 永生性或恶型性的获得使得这类细胞获得持久性的增殖能力, 这样的细胞群体常被称为无限细胞系或连续细胞系。

⑵每代贴附生长细胞的生长过程：①游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态, 也称悬浮期。

此时细胞质回缩, 胞体呈圆球形。

时间：10分钟一4小时②贴壁期：细胞附着于底物上, 游离期结束。

底物：玻璃、塑料、胶原、其它细胞等③潜伏期：此时细胞有生长活动, 而无细胞分裂。

细胞株潜伏期一般为6～24小时。

④对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长, 活力最佳, 最适合进行实验研究。

1、细胞生长方式及类型体外培养的细胞，按其生长方式可分为贴附型、悬浮型及半贴壁细胞。

（1）贴附生长型细胞：为附着于底物（支持物）表面生长的细胞。

①上皮细胞型：扁平的多角形，生长特点为细胞之间紧密相靠、相互衔接，呈铺路石状，具有连接成片的能力。

②成纤维细胞型：梭形，不规则三角形或扇形，生长特点为细胞一般并不紧靠相连成片，而是排列为旋涡状、放射状，或似栅栏状。

③游走型细胞：外形不规则且不断变化，生长特点为一般不形成群落，经常处于较活跃的变形及游走状态。

④多形型细胞：形态不规则。

（2）悬浮生长型细胞：在体外培养是不需要附着于底物，在悬浮状态下即可生长。

特点为生存空间大，只需稀释而不需消化处理，具有能够提供繁殖大量细胞、传代繁殖方便、易于收获细胞等优点，但是不如贴附生长型观察方便，而且并非所有的培养的细胞都能悬浮生长。

（3）半贴壁细胞：即可贴壁生长，也可以是悬浮培养，条件改变，细胞形态可有变化。

2.体外培养细胞的生存和增殖特点（1）贴附和伸展：使多数体外培养细胞的基本特点。

培养细胞在未贴附于底物之前一般均似球状体样；当与底物贴附后，细胞将逐渐伸展而形成一定的形态，呈纤维细胞样或上皮细胞样等。

其影响因素有①促细胞附着物质：如基膜素、纤维连接蛋白、层粘连蛋白、血清扩展因子②离子作用：如细胞的伸展需要有钙离子的存在，含低浓度钙的培养液不利于细胞的生长③物理以及机械因素：如底物的表面结构、温度、培养液流动过快等④生物因素（2）运动的接触抑制：正常的细胞存在不停顿的活动和移动，其外周的细胞膜呈现一些特征褶皱样活动。

但当俩个细胞移动而相互靠近时，其中之一或俩个将停止移动并向另一个方向离开，这保证了细胞将不会重叠，当一个细胞被其他细胞围绕至无处可去而保持接触时，细胞不再移动，在接触区域的细胞膜褶皱样活动将停止，此即接触抑制（3）增殖的密度抑制：当细胞增殖、汇合形成单层时。

细胞变得拥挤，与培养液接触的表面区域也相应减少，营养成分消耗，细胞分裂终止。

体外培养细胞的种类和命名体外培养细胞的名称，随培养细胞技术的发展和细胞种类的增多而演变。

最早采用的名称为细胞株（Cell strain），以后又出现细胞系（Cell Line）一词，两者曾一度混用致概念不明确，导致文献中也很混乱。

我国也曾有类似情况，在我国尚未制定出统一名词前，本书用的名词基本参考Schaeffer，W.I.（1979）和国内有关会议、以及国内外杂志常用名词为准。

（一）初代培养初代培养又称原代培养，即直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养物。

一旦已进行传代培养（Subculture）的细胞，便不再称为初代培养，而改称为细胞系。

（二）细胞系初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。

如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系（Finite Cell Line）；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系（Infinite Cell Line）。

无限细胞系大多已发生异倍化，具异倍体核型，有的可能已成为恶性细胞，因此本质上已是发生转化的细胞系。

无限细胞系有的只有永生性（或不死性），但仍保留接触抑制和无异体接种致癌性；有的不仅有永生性，异体接种也有致瘤性，说明已恶性化。

这两种不同性质的无限细胞系，在国内外文献中对这些名词的应用上也常不十分严格。

为概念上的明确，本书中对有恶性的无限细胞系采用“恶性转化细胞系”一词表示可能更妥。

而对那些只具永生性而无恶性的细胞系，则用无限细胞系或转化细胞系即可。

当前流传的NIH3T3、Rat-1、10T1/2等均属这类细胞系。

由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系不同的细胞系，称该细胞系的亚系（Subline）。

（三）克隆细胞株从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株。

再由原细胞株进一步分离培养出与原株性状不同的细胞群，亦可称之为亚株（Substrain）（四）二倍体细胞细胞群染色体数目具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相同（2n细胞占75％或80％以上）的细胞群，称二倍体细胞培养。

培养细胞形态分类体外培养细胞大多培养在瓶皿等容器中，根据它们是否能贴附在支持物上生长的特性．可分为贴附型和悬浮型两大类。

1 ．贴附型( 图 2 一 1)这类细胞在培养时，能贴附在支持物表面生长。

大多数培养细胞呈贴附型生长；只赖于贴附才能生长的细胞称贴附型细胞或锚着依存型细胞。

关于细胞的贴附过程和机制将另加叙述。

当单细胞贴附在支持物上后，易失去它们在体内时原有的特征，细胞分化现象常变得不显著。

在形态上常表现单一化的现象，并常反映其胚层起源，呈现类似前述返祖现象。

如来源于内、外胚层的细胞多呈上皮细胞型；来自中胚层的细胞则易呈成纤维细胞型( 这种现象又与供体的年龄有密切的关系，原供体越幼稚则“返祖”越明显 ) ；显然与细胞分化有关。

由于上述原因，体外培养细胞形态常表现有一般化的倾向。

因此在判定细胞形态时，很难再按体内细胞标准确定 ,仅能大致作如下分类。

(1)成纤维细胞型：本型细胞因形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名：细胞体呈梭形或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质向外伸出 2 — 3 个长短不同的突起。

细胞在生长时多呈放射状、火焰状或漩涡状走行：除真正的成纤维细胞外．凡由中胚层间充质起源的组织．如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本类形态。

另外在培养中的细胞凡形态与成纤维细胞类似时，皆可称为成纤维细胞。

因此组织培养中的成纤维细胞一词是一种习惯上的称法．此点与体内细胞不同。

(2)上皮细胞型：本型细胞具有扁平不规则多角形，中有圆形核．细胞紧密相连成单层膜：细胞增殖数量增多时，整块上皮膜随之移动；处于上皮膜边缘的细胞多与膜相连，很少脱离细胞群单独活动。

起源于内、外胚层细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝、胰和肺泡上皮等组织培养时，皆呈上皮型形态。

上皮型细胞生长时，尤其是外胚层起源的细胞．细胞之间常出现所谓拉网现象，即在构成上皮膜状生长的细胞群中一些细胞常相互分离卷曲，致使上皮细胞膜中形成网眼状空洞。

细胞培养分类“嘿，同学们，今天咱们来聊聊细胞培养分类这个事儿啊。

”细胞培养呢，主要有下面这几种分类。

首先就是原代细胞培养，这就好比是直接从生物体中获取的细胞进行培养。

比如说，咱们从一只小鼠身上取下它的肝细胞，然后在合适的条件下进行培养，这就是原代细胞培养啦。

这种培养的好处呢，就是能最大程度地保持细胞的原始特性，就像刚从生物体中出来一样，很“新鲜”。

再来说说传代细胞培养。

打个比方吧，原代细胞培养一段时间后，细胞数量增多了，我们把它们分成小份，再继续培养，这就是传代啦。

像一些细胞株，就是经过多次传代培养出来的。

比如著名的海拉细胞系，它就是从一位叫海瑞塔·拉克斯的患者身上提取出来的癌细胞，经过长期的传代培养，被广泛应用于各种研究中。

还有干细胞培养。

干细胞可是很神奇的哦，它们具有自我更新和分化的能力。

就像孙悟空一样，能变出很多不同的“模样”。

比如胚胎干细胞，可以分化成各种不同类型的细胞。

这在再生医学领域可是有着重要的应用前景呢。

另外呢，还有悬浮细胞培养和贴壁细胞培养。

悬浮细胞呢，就像是在培养液中“自由自在”地漂浮着，不需要依附在什么东西上。

像淋巴细胞很多就是悬浮培养的。

而贴壁细胞呢，它们需要附着在培养器皿的表面才能生长，比如成纤维细胞。

实际应用中呢，我们会根据不同的研究目的和需求来选择不同类型的细胞培养。

比如说，如果我们想研究一种药物对肝脏细胞的影响，那可能就会选择原代肝细胞培养。

要是想研究细胞的分化过程，那可能就会用到干细胞培养啦。

总之，细胞培养分类有很多种，每一种都有它独特的特点和用途。

大家在学习和研究过程中，要根据具体情况来选择合适的细胞培养方法哦。

体外培养动物细胞的类型前两天看到有同⾏问问题：为什么动物细胞会贴壁⽣长？⼀直⾃⼰对这个问题的解释其实很简单：就是因为植物细胞⼜细胞壁，不仅仅是保护，还有很重要的功能是⽀撑、提供给不定形的植物原⽣质体⼀个附着；⽽动物细胞没有细胞壁，还好多细胞动物往往⼜⾻骼（内或者外⾻骼），但是离体的动物细胞没有⾻骼附着怎么办？贴壁啊！但是⾃⼰也不是很⾃信，因为⾃⼰的推理，⼀家之⾔，且⼜不是⼤⽅之间。

好在刚刚看书，找到了权威⽀持，笔者的⾻骼！体外培养细胞的分型：根据离体细胞在体外⽣长时是否贴壁的性质,将其分为贴壁型与悬浮型两类。

1、贴壁型细胞(anchorage-dependent cell)贴附是有机体细胞在体内⽣存和⽣长发育的基本⽅式，包括细胞与细胞之间的相互接触和细胞与细胞外基质之间的相互接触两种⽅式。

正是基于细胞的这种贴附⽣长的特征，使得不同细胞之间接合⽽形成组织，也使细胞与周围环境之间保持联系。

因⽽有机体的绝⼤多数细胞必须贴附在某⼀固相⽀持物上才能长。

体外培养时多数细胞仍然保持了这种特性，即必须贴附在培养瓶壁等⽀持物上才能⽣长。

根据体外养细胞在⽀持物上贴附⽣长时的形态，⼤致分为四种类型：1)上⽪细胞型( epithelium) 细胞呈扁平不规则多⾓形，中间有胞核，彼此紧密相连，呈单层⽣长状态。

消化道上⽪、肝、胰和肺泡上⽪等起源于外胚层和内胚层的细胞在体外培养⽣长时多呈上⽪细胞型。

2)成纤维细胞型(fibroblast) 细胞贴壁后呈梭形或不规则三⾓形，胞质向外伸出2~3个长短不同的突起。

起源于中胚层的细胞，如⼼肌、平滑肌、⾎管内⽪细胞等体外培养时常呈成纤维细胞型。

3)游⾛细胞型(wandering) 细胞质常伸出伪⾜或突起，呈活跃的游⾛或变形运动，贴附于⽀持物上散在⽣长，⼀般不连接成⽚。

该类细胞形状很不稳定，有时与上⽪样细胞或成纤维细胞难以区别，单核细胞、巨噬细胞及某些肿瘤细胞在体外培养时4)多形型细胞( polymorphie) ⽣长时像神经细胞那样呈呈多⾓形，并伸出较长的神经纤维，很难确定它们的形状，因⽽我们将此类细胞称为多形型细胞。

培养细胞的细胞生物学（体内外细胞差异与体外培养细胞的分型、生一、体内、外细胞的差异和分化1、差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡的相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。

因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。

实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。

虽然体外细胞与机体细胞存有差异，但并未失去研究的意义。

且不论其有许多性状仍与体内相同（如体外培养的心肌细胞仍可博动），只从细胞遗传学（Cyto－genetics）的角度看，离体细胞仍带有全套的二倍体基因。

细胞在培养中的表现，只不过是相应基因关闭／开启引起的现象，这并非是绝对缺陷。

恰恰相反，在培养的细胞中某些特定功能的丧失，可为该基因的表达与调控提供线索。

2、分化；体外培养的细胞分化能力并未完全丧失，只是环境的政变，细胞分化的表现和在体内不同。

细胞是否表现分化关键在于是否存在使细胞分化的条件，如 Friend细胞（小鼠红白血病细胞）在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管内皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状结构，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为。

二、体外培养细胞的分型（一）贴附型：大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞，判断细胞形态时不能接体内组织学标推判定，仅大致分成以下四型：1、成纤维细胞型：胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。

除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。

另外，凡培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。

2、上皮型细胞：细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。

第一讲体外细胞培养的基本技术●体外细胞培养条件和基本技术●体外细胞培养●体外培养物的生长生物学●细胞系和细胞株●培养物的冷冻与复苏●培养物的污染、检测和排除●一、体外细胞培养条件和基本技术体外细胞培养的优缺点优点：简化细胞的生长环境，方便施加实验因素，便于观测实验结果，便于获得均一细胞群，能够进行大规模生物制品的生产。

体外细胞培养不足之处：培养对象脱离了机体的整体支配和调控，细胞间在一定程度上失去组织联系及相互作用。

体外培养条件下的生长发育情况与在体时的情况存在一定差异，分析实验结果时必须考虑这种差异。

一、体外细胞培养条件（一）、体外培养实验室1. 准备室2. 培养室：基本条件要求：清洁、无菌、干燥、不通风，并具有适宜的光线。

空气调节用中央空调或分体式空调机。

室顶安装紫外灯等消毒装置。

3. 缓冲室4. 其他实验室（二）、体外培养的设备和器具设备：1. 超静工作台，生物安全柜，净化室 2. 培养箱：温度，湿度，pH值3. 倒置显微镜4. 水净化装置：去离子水净化装置，石英玻璃蒸馏器，超纯水装置 5. 冰箱 6. 离心机7. 冷冻保存装置8. 高压蒸汽消毒装置：电热干燥箱，pH计，天平培养器具：1. 过滤除菌装置：Zeiss 滤器，抽滤式玻璃简易型滤器，针头式加压塑料小滤器2. 培养器皿：（1）溶液瓶（2）培养瓶（3）培养皿（4）多孔培养板（5）离心管3. 移液器4.筛网：金属筛网（不锈钢网、铜网），尼龙筛网（三）培养用液•水和平衡盐溶液（balanced salt solution, BSS)水：离子交换水，蒸馏水平衡盐溶液：主要成分：无机盐和葡萄糖常用BSS: PBS ，Ringer Earle ，D-Hanks，Hanks •培养液：1.天然培养液：1）血清：小牛血清,胎牛血清（fetal bovine serum, FBS）,马血清，2）水解乳蛋白，3）胚胎渗出液2.合成培养液：合成培养基的种类MEM，RPMI 1640，McCoy 5A，HAM F12等3.无血清培养基：干粉型培养基的配制：1）. 制备高质量的去离子水(玻璃三蒸馏水)或超纯水2）. 加温水至15-30℃之间3）. 加干粉入水中，搅拌令之溶解4）. 加NaHCO3 5）. 加水至最终量6）. 必要时用1N HCl或1N NaOH调节pH，因滤过时pH 可能受影响7）. 用0.22um或小于此微孔滤膜滤过消毒•其他用液：消化液等1.消化液：胰蛋白酶、EDTA溶液2.pH 调整液：NaHCO3溶液、HEPES溶液3.抗生素液：青链霉素常用的生长培养液：基本培养基80-90％血清(多用小牛血清) 10-20 ％抗生素(多用青霉素100单位／毫升和链霉素100微克／毫升一、细胞体外培养的其它条件一）、无污染的气、液相环境：1、O2 （5%CO2 + 95% 空气，O2: 21%）2、CO2- pH3、液相环境-渗透压二）、温度三）、生长基质1、多聚赖氨酸：0.05mg/ml 2、纤维连接蛋白：1mg/ml 3、胶原：1~3mg/ml 4、层粘连蛋白：5~10 g/ml一、清洗和消毒1.1玻璃器皿的清洗：浸泡→刷洗→酸浸→冲洗浸酸液：强液：63克重铬酸钾，1000毫升浓硫酸，200毫升蒸馏水。