液相色谱定量方法指导原则讲解

液相色谱仪检定规程一、通用技术要求1.1仪器外观仪器上应有仪器的名称、型号、制造厂名、产品系列号、出厂日期等内容的标牌，国产仪器应有制造计量器具许可证MC 标志。

1.2仪器电路系统仪器电源线、信号线等插接紧密，各开关、旋钮、按键等功能正常，指示灯灵敏，显示器清晰。

二、计量性能要求1.1输液系统1.1.1输液管路接口紧密牢固，在规定的压力范围内无泄漏。

1.1.2流量设定值误差S s和流量稳定性误差Sr应符合表1的要求。

1.1.3梯度误差Gc:不超过±3%。

1.2柱温箱1.2.1柱箱温度设定值误差△T s：不超过±2℃。

1.2.2柱温稳定性Tc：不超过1℃。

1.3检测器液相色谱仪检测器的主要技术指标见表2。

表1流量设定值误差S s和流量稳定性误差Sr的要求表2液相色谱仪检测器的主要技术1.4整机性能仪器的整机性能用定性定量测量重复性表示。

1.4.1定性测量重复性（6次测量）RSD6:不超过1.5%。

1.4.2定量测量重复性（6次测量）RSD6: 不超过3.0%。

三、检定方法1、通用技术要求的检查按第1.1、1.2条的要求，目视、手动检查。

2、输液系统的检定a)泵耐压检定将仪器各部分连接好，以100%甲醇为流动相，流量为1mL/min，按说明书启动仪器，压力平稳后保持10 min，用滤纸检查各管路接口处应无湿迹。

卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大允许值的90%，保持5 min无泄漏。

b)泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差Sr的检定按表1的要求设定流量，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集表1规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式（1）、式（2计算）S s和S r。

S s=（F-F s）/F s×100% （1）mSr=(F max-F min)/ Fm×100% （2）3、基线噪声和基线漂移的检定选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0Ml/min，紫外检测器的波长选在254nm，检测灵敏度调到最灵敏档，记录纸速调至5—10mm/min 。

液相色谱法定量分析与案例分享
定量分析是在定性分析的基础上，需要纯物质作为标准样品。

液相色谱的定量是相对的定量方法，即：由已知的标准样品推算出被测样品的量。

液相色谱法定量的依据
被测组分的量(W)与响应值(A)（峰高或峰面积）成正比,W=f×A。

定量校正因子(f)：是定量计算公式的比例常数，其物理意义时单位响应值（峰面积）所代表的被测组分的量。

由已知标准样品的量和其响应值可以求得定量校正因子。

测定未知组分的响应值，通过定量校正因子即可求得该组分的量。

定量分析常用术语：
样品（sample）：含有带测物，供色谱分析的溶液。

分为标样和未知样。

标样（standard）：浓度已知的纯品。

未知样（unknow）：浓度待测的混合物。

样品量（sampleweight）：待测样品的原始称样量。

稀释度（dilution）：未知样的稀释倍数。

组分（componance）：欲做定量分析的色谱峰，即含量未知的被测物。

组分的量（amount）：被测物质的含量（或浓度）。

积分（integerity）：由计算机对色谱峰进行的峰面积测量的计算过程。

校正曲线（calibrationcurve）：组分含量对响应值的线性曲线，由已知量的标准物建立，用于测定待测物的未知含量。

常用的定量方法
1外标法
标准曲线法，分为外标法和内标法。

外标法在液相色谱中用的最多。

内标法准确但是麻烦，在标准方法中用的最多。

液相色谱仪最小检测浓度和定量测量重复性的测量不确定度1 测量方法（依据JJG 705--2002）液相色谱仪依据国家计量检定规程JJG705—2002《液相色谱仪》进行检定，其中紫外-可见光检测器、二极管阵列检测器均需测量最小检测浓度，整机还需检定定性测量重复性及定量测量重复性。

紫外-可见光检测器和二极管阵列检测器浓度的测量方法：选用18C 色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min ，紫外检测器的波长选在254nm ，检测灵敏度调在最灵敏档，记录纸速调至5—10cm/min （使用工作站的设置好相关参数）。

开机预热，待仪器稳定后记录30min ，由检测器的衰减倍数和测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度，按公式d N =KB 计算基线噪声。

保持操作条件，用微量注射器从进样口注入10～20uL 1×10/g mL -7的萘/甲醇溶液，打印的色谱图及相关数据或记录色谱图并测量计算相关数据，由色谱峰高和基线噪声峰—峰高，计算最小检测浓度L c (按20μL 进样量计算)。

整机定性、定量重复性的测量方法：将仪器各部分连接好，选用18C 色谱柱，根据仪器配置的检测器，选择流动相和测量参数：紫外检测器和二极管阵列检测器用100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min,,检测波长为254nm ，灵敏度选择在0.04左右，基线稳定后由进样器注入5--10μL 的4110/g mL -×萘/甲醇标准溶液；连续测量6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，计算相对标准偏差6RSD 。

2 数学模型 2.1 最小检测浓度 2=20d L N cVc H（1） 2.2 定性、定量重复性6=RSD 1X%×100 3 方差和灵敏系数方差 222222222u ()=()()()()u ()()+()()c L d d C c N u N c c u c H u H c V u V （3）灵敏系数 d ()2/(20)C N cV H = ()=2/(20)d C c N V H （9） 4 最小检测浓度的不确定度分析与计算4.1 标准不确定度分量的分析和计算4.1.1 输入量标准溶液浓度定值c 的标准不确定度u(c)的分析和计算输入量c 的标准不确定度u(c)主要来源于标准溶液浓度定值的标准不确定度，采用B 类评定方法进行评定。

液相色谱定量方法指导原则液相色谱是一种广泛应用于化学、生物化学、环境科学等领域的重要分析技术。

在液相色谱中，准确的定量分析是确保实验结果可靠性和科学准确性的关键。

为了有效进行液相色谱定量分析，以下是一些引导原则：1.校准曲线的建立和验证：校准曲线用于将峰面积与待定物质的浓度建立关系。

在建立校准曲线时，应使用已知浓度的标准溶液进行多点标定。

在校准曲线的范围内，应验证标准曲线的线性、精密度和准确度。

2.样品制备和处理：样品制备对液相色谱定量分析非常关键。

样品应选择适当的溶剂进行溶解或稀释。

对于复杂的样品基质，可能需要进行样品预处理，如固相萃取、液液萃取等。

3.选择适当的色谱柱：液相色谱柱是液相色谱分析的核心。

对于不同的待测物质，应选择适当的色谱柱类型和分离机理。

关键是考虑分析目标，有机分子、生物分子或无机分子等。

同时，还需要考虑样品基质的性质。

4.优化色谱条件：通过优化色谱条件，可以提高分离和检测的灵敏度，并减少分析时间。

例如，可以调整流速、温度和流动相成分等参数。

优化色谱条件可以使得峰形状尖峰对称，峰分离度好，并提高信号强度。

5.熟悉检测器特性：不同的液相色谱检测器具有不同的特点和适用范围。

常用的检测器包括紫外-可见检测器、荧光检测器和电化学检测器等。

熟悉检测器的特点可以帮助选择合适的检测器，并优化检测条件。

6.质量控制和质量保证：质量控制是确保液相色谱分析结果可靠性和准确性的关键环节。

应使用合适的质量控制标准和方法。

同时要进行合理的质量保证程序，如重复实验、平行实验等。

7.数据处理和结果解释：液相色谱定量分析通常产生大量的数据。

数据处理和结果解释是确保数据准确性和可靠性的重要步骤。

其中包括峰面积的计算、数据标准化、统计分析和结果解释等。

总之，液相色谱定量方法的指导原则是建立可靠的校准曲线，正确进行样品制备和处理，选择适当的色谱柱和优化色谱条件，熟悉检测器特点，进行质量控制和质量保证，并进行准确的数据处理和结果解释。

液相定量方法液相定量分析是指在液体状态下进行的化学分析方法，用以确定溶液中特定组分的浓度或含量。

这种方法在化学分析、临床诊断、环境监测、药物分析等领域都有广泛应用。

以下是一些常见的液相定量方法：1. 紫外-可见光谱法（UV-Vis Spectroscopy）：利用物质在紫外和可见光区域对光的吸收特性来进行定量分析。

每种物质都有特定的吸收光谱，通过测量溶液的吸光度，可以依据朗伯-比尔定律（Lambert-Beer Law）计算出溶液中组分的浓度。

2. 红外光谱法（IR Spectroscopy）：通过分析物质在红外光区域的光谱来识别和定量分子中的特定基团。

红外光谱可以提供有关分子结构和化学环境的信息。

3. 原子吸收光谱法（Atomic Absorption Spectroscopy, AAS）：利用原子在特定波长处对光的吸收来定量分析元素。

当样品中的元素原子化后，它们会吸收特定波长的光，吸收的强度与原子的浓度成正比。

4. 原子荧光光谱法（Atomic Fluorescence Spectroscopy, AFS）：类似于AAS，但是检测的是被原子化的物质在特定波长处发射的光。

AFS通常具有更高的灵敏度。

5. 质谱法（Mass Spectrometry, MS）：通过分析物质的质谱图来确定其分子质量和结构。

质谱法可以用于定性和定量分析，但在液相分析中，通常用于检测和鉴定分析物。

6. 高效液相色谱法（High-Performance Liquid Chromatography, HPLC）：HPLC是一种常用的液相分离和定量技术。

它通过色谱柱分离混合物中的组分，然后使用检测器（如紫外检测器、二极管阵列检测器、电化学检测器等）来监测分离后的组分的浓度。

7. 液相色谱-质谱联用（LC-MS）：将液相色谱的分离能力与质谱的检测灵敏性和特异性结合起来，用于复杂样品中微量组分的定性和定量分析。

8. 电化学方法（Electrochemical Methods）：如伏安法、电位滴定法等，通过测量电化学反应的电流或电位变化来定量分析溶液中的物质。