第十章高效液相色谱分析.

高效液相色谱和超高效液相色谱高效液相色谱（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）和超高效液相色谱（Ultra High Performance Liquid Chromatography，UHPLC），是现代分析化学中常用的分离技术。

它们可以对复杂的混合物进行分离和定量分析，广泛应用于药物分析、食品分析、环境分析、生物分析等领域。

本文将从原理、仪器、方法和应用等方面，介绍高效液相色谱和超高效液相色谱的基本知识。

一、原理高效液相色谱和超高效液相色谱的原理基本相同，都是利用样品在流动相中的分配系数差异，通过固定相和流动相的作用，将混合物中的化合物分离出来。

不同的是，超高效液相色谱采用了更小的颗粒固定相，使得流动相可以更快地通过固定相，从而提高了分离效率和分离速度。

在高效液相色谱和超高效液相色谱中，样品首先被注入流动相中，然后通过固定相的柱子。

固定相通常是一种多孔的固体材料，如硅胶、C18等。

样品中的化合物在流动相中的分配系数不同，因此在通过固定相时，会被分离出来。

分离出来的化合物，会在检测器中被检测到，从而实现分离和定量分析。

二、仪器高效液相色谱和超高效液相色谱的仪器基本相同，主要由注射器、流动相泵、柱子、检测器和计算机控制系统等组成。

（一）注射器注射器是将样品引入流动相中的关键部分。

常用的注射器有手动注射器和自动进样器。

手动注射器通常用于小样品量的分析，而自动进样器可以实现高精度、高效率的样品进样。

（二）流动相泵流动相泵是将流动相送入柱子中的装置。

其主要功能是控制流动相的流速和流量，并确保流动相的稳定性。

常用的流动相泵有恒压流量泵和梯度流量泵。

恒压流量泵可以保持恒定的流量，适用于等浓度的流动相。

梯度流量泵可以实现不同浓度的流动相混合，从而实现更好的分离效果。

（三）柱子柱子是高效液相色谱和超高效液相色谱的核心部分，用于固定相的分离。

常用的柱子材料有硅胶、C18、C8等。

高效液相色谱习题一、填空题1.高效液相色谱分析是将流动相用高压泵输送，使压力高达 5 MPa以上，并采用新型的化学键合固定相，是分离效率很高的液相色谱法。

2.高效液相色谱法的特点是分离性能高、分析速度快、检测器灵敏度高、应用范围广。

3.高效液相色谱法和气相色谱法的共同之处是分离功能、分析功能、在线分析。

4.高效液相色谱分析根据分离机理不同可分为四种类型，即液固色谱、液液色谱、键合相色谱、凝胶色谱。

5.高效液相色谱中的液一液分配色谱采用的新型固定相叫化学键合相，它是利用化学方法将固定液官能团键合在载体表面上的。

6.通常把固定相极性大于流动相极性的一类色谱称为正相色谱。

反之称为反相色谱。

7.高效液相色谱仪通常由储液器、输液泵、梯度淋洗器、进样器、色谱柱、检测器、色谱工作站七部分组成。

8.高效液相色谱仪中使用最广泛的检测器为紫外检测器，另外还有折光检测器、荧光检测器等等。

9.高效液相色谱主要用于分析沸点高的、分子量大的、受热易分解的以及具有生理活性物质的分析。

二、判断题√、√、⨯、⨯、√、√、⨯、√、⨯、√、⨯、√、√、⨯、√、⨯、⨯、√、⨯、√、√、⨯、⨯、⨯、⨯、⨯、⨯、⨯、√、⨯1．液一液色谱流动相与被分离物质相互作用，流动相极性的微小变化，都会使组分的保留值出现较大的改变。

（√）2．利用离子交换剂作固定相的色谱法称为离子交换色谱法。

（√）3．紫外吸收检测器是离子交换色谱法通用型检测器。

（×）4．检测器性能好坏将对组分分离产生直接影响。

（×）5．高效液相色谱适用于大分子，热不稳定及生物试样的分析。

（√）6．高效液相色谱中通常采用调节分离温度和流动相流速来改善分离效果。

（×）7．键合固定相具有机械性能稳定，可使用小粒度固定相和高柱压来实现快速分离。

（√）8．在液相色谱中为避免固定相的流失，流动相与固定相的极性差别越大越好。

（×）9．正相分配色谱的流动相极性大于固定相极性。

高效液相色谱分析一、选择题1.液相色谱适宜的分析对象是( )。

A 低沸点小分子有机化合物B 高沸点大分子有机化合物C 所有有机化合物D 所有化合物2.在液相色谱中,梯度洗脱适用于分离( )。

A 异构体B 沸点相近,官能团相同的化合物C 沸点相差大的试样D 极性变化范围宽的试样3吸附作用在下面哪种色谱方法中起主要作用( )。

A 液一液色谱法B 液一固色谱法C 键合相色谱法D 离子交换法4.在液相色谱中,提高色谱柱柱效的最有效途径是( )。

A 减小填料粒度B 适当升高柱温C 降低流动相的流速D 增大流动相的流速5.液相色谱中通用型检测器是( )。

A 紫外吸收检测器B 示差折光检测器C 热导池检测器D 荧光检测器6.高压、高效、高速是现代液相色谱的特点,采用高压主要是由于( )。

A 可加快流速,缩短分析时间B 高压可使分离效率显著提高C 采用了细粒度固定相所致D 采用了填充毛细管柱7.在液相色谱中,下列检测器可在获得色谱流出曲线的基础上,同时获得被分离组分的三维彩色图形的是( )。

A 光电二极管阵列检测器B 示差折光检测器C 荧光检测器D 电化学检测器8.液相色谱中不影响色谱峰扩展的因素是( )。

A 涡流扩散项B 分子扩散项C 传质扩散项D 柱压效应9.在液相色谱中,常用作固定相又可用作键合相基体的物质是( )。

A 分子筛B 硅胶C 氧化铝D 活性炭11.在液相色谱中,固体吸附剂适用于分离( )。

A 异构体B 沸点相近,官能团相同的颗粒C 沸点相差大的试样D 极性变换范围12水在下述色谱中,洗脱能力最弱(作为底剂)的是( )。

A 正相色谱法B 反相色谱法C 吸附色谱法D 空间排斥色谱法13.在下列方法中,组分的纵向扩散可忽略不计的是( )。

A 毛细管气相色谱法B 高效液相色谱法C 气相色谱法D 超临界色谱法14. 下列用于高效液相色谱的检测器,()检测器不能使用梯度洗脱。

A、紫外检测器B、荧光检测器C、蒸发光散射检测器D、示差折光检测器15. 高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了()A、恒温箱B、进样装置C、程序升温D、梯度淋洗装置二、填空题1.高效液相色谱中的技术类似于气相色谱中的程序升温,不过前者连续改变的是流动相的,而不是温度。

高效液相色谱测定法
高效液相色谱测定法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和定量技术，可
以用于分离和测定复杂的混合物。

它基于物质在流动相（溶剂）和固定相（色谱柱上的填料）之间的相互作用的差异，利用流动相的流动将待测样品分离成不同的组分。

通过分析组分的保留时间和色谱峰的峰面积或峰高，可以定量不同组分的含量或浓度。

高效液相色谱测定法具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高、重复性好等优点，因此在许多分析领域得到广泛应用。

它可以应用于生物医药、环境监测、食品安全等多个领域，用于分析和监测有机化合物、无机化合物、药物、天然产物、食品成分等。

高效液相色谱测定法的基本步骤包括：样品预处理、制备流动相、样品进样、流动相流动、色谱柱分离、检测器检测、结果处理等。

根据样品的性质和分析要求，可以选择不同的检测器，如紫外检测器（UV）、荧光检测器、质谱检测器等。

需要注意的是，高效液相色谱测定法在操作过程中需要注意样品制备和仪器条件的优化，以提高分离效果和分析结果的准确性。

此外，也需要注意流动相成分的选择、色谱柱的使用寿命等因素对分离效果的影响。

高效液相色谱的使用方法高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种用于分离、分析和测定混合物中组分的技术。

以下是高效液相色谱的使用方法：1. 样品制备：根据需要，样品可以通过溶解、浸提、纯化等方法进行前处理。

确保样品是均匀的，并且符合HPLC分析要求。

2. 选择合适的色谱柱：根据分析目标，选择合适的色谱柱，包括固定相（C18、C8、氨基、芳基等）和柱型（反相、离子交换、排除等）。

色谱柱质量对分离和分析结果至关重要。

3. 准备移动相：根据色谱柱要求和分析目标，选择合适的移动相。

移动相通常由溶剂和缓冲液组成，可以通过改变溶剂的组成和比例来调节色谱条件。

4. 设定色谱条件：根据需要，设定合适的色谱条件，包括流动相速度、柱温、检测波长等。

这些条件将直接影响分离的效果和分析的准确性。

5. 校准仪器：在开始分析之前，校准色谱仪和检测器，确保其准确性和稳定性。

校准通常包括检测器灵敏度、波长、流速等参数。

6. 注样和运行：将样品注入色谱柱，启动色谱仪，使移动相通过柱子，分离出样品中的各组分。

根据需要，通过改变运行时间、流速等参数，调节分离和分析的效果。

7. 数据分析：通过检测器检测样品中各组分的吸光度或荧光强度，并记录数据。

可以使用特定的色谱软件对数据进行处理和解析，以获得准确的分析结果。

8. 数据解释：根据分析结果，对样品中的各组分进行定量或定性的解释。

可以使用标准品进行定量分析，或者与已知数据进行比对，以确认各组分的身份和浓度。

9. 清洗和维护：在完成分析后，及时清洗色谱柱和仪器，以保持其性能和寿命。

根据需要，使用适当的溶剂进行清洗，并使仪器处于良好的工作状态。

总之，高效液相色谱的使用方法包括样品制备、色谱柱选择、移动相准备、色谱条件设定、校准仪器、注样和运行、数据分析、数据解释以及清洗和维护等步骤。

熟练掌握这些方法能够有效地进行高效液相色谱的分离和分析。

高效液相色谱测定含量的方法
高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种广泛用于测定化合物含量的分析技术。

以下是一般的HPLC测定含量的步骤和方法：
1.样品制备：根据分析的目的，准备含有目标化合物的样品。

样
品制备可能涉及提取、溶解、过滤等步骤。

2.标准曲线制备：准备一系列已知浓度的标准溶液，用于建立标
准曲线。

标准曲线上的点数通常越多越好，以提高测定的准确
性。

3.HPLC系统设置：设置HPLC系统，包括选择合适的色谱柱、
移动相（流动相）和检测器。

根据样品性质和目标分析物，选
择适当的柱和检测条件。

4.进样：将标准溶液和待测样品注入HPLC系统。

通常使用自动
进样器，以提高精度和重复性。

5.色谱条件优化：通过调整流速、温度等条件，优化色谱分离，
使目标化合物得到良好的分离和峰形。

6.数据采集和分析：使用检测器（如紫外-可见（UV-Vis）检测
器）记录样品在色谱柱中的吸收峰，并使用标准曲线计算目标
化合物的浓度。

7.质量控制：包括在分析中加入质量控制样品，以确保实验的准
确性和可靠性。

8.结果报告：报告目标化合物的浓度，通常以样品中目标化合物
的峰面积或峰高度与标准曲线的关系来表示。

需要注意的是，HPLC分析的方法会因分析的具体目的和分析物的性质而有所不同。

因此，在进行HPLC分析之前，建议参考相关的方法学文献、标准操作程序（SOP）或咨询有经验的分析师。

高效液相色谱法测定纯度
高效液相色谱法是目前用于药物纯度测定的常用方法之一。

它具有快速精准、重现性好、适用范围广等优点。

下面将介绍高效液相色谱法测定纯度的具体步骤及注意事项。

1. 样品制备：将所需样品按照规定方法制备成溶液，并通过滤膜除去悬浊物和杂质，保证样品的纯度和质量。

2. 色谱条件设置：根据所需测试物质的物化性质和药物规定，选择适宜的色谱柱和固定相；设置流速、温度、波长等参数。

3. 校准与质量控制：测试前需进行柱的校准，确保分离准确；在分析过程中，不断对标准样品进行检测，掌握质量控制。

4. 分析过程：将样品注入进样器，经过分离柱后，在检测器中检测吸收峰，得到各化合物的峰面积和保留时间。

通过比对标准品数据和其它药物数据，计算出样品中目标物质的含量和相关物质的杂质含量。

5. 数据处理：将测试结果进行计算、比对和分析，得出该物质的组成和含量，以及样品中其它附加物的杂质含量。

注意事项：
1. 仪器、柱和标准品等均需严格控制质量和纯度，以保证测试结果的准确性。

2. 在进行测试前，要对仪器进行充分的清洁和调试，确保仪器的正常运行状态。

3. 注意样品制备过程中细节操作，以避免样品被污染或改变其纯度。

4. 在测试过程中，根据不同样品和测试要求，选择不同的色谱固定相和柱子，以保证分离效果和分离速度都满足测试要求。

5. 良好的数据分析和处理，是测试结果准确性和可信性的重要保障。

因此，要对数据进行细致分析和检查，保证测试结果的合理性和科学性。

一、概述高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种应用广泛的分离和分析技术，其在中药研究中扮演着重要角色。

本文将对HPLC技术及其在中药研究中的应用进行介绍和探讨。

二、高效液相色谱法的原理及技术特点高效液相色谱法是一种基于液相为分离介质的色谱分析技术。

其原理是将待分析物质溶解于流动相中，在固定的色谱柱中经过固定相的分离。

HPLC技术具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高、分析准确等特点，因此在中药研究中得到了广泛应用。

三、高效液相色谱法的应用1. 中药质量控制HPLC技术可以对中药中的有效成分进行定量分析，为中药的质量控制提供了重要手段。

通过HPLC技术可以对中药中的多种成分进行快速、准确的分析，实现对中药质量的快速检测。

2. 药效成分分离HPLC技术可以有效分离药效成分中的杂质，提高药效成分的纯度。

通过HPLC技术可以对药效成分进行快速分离和检测，为药物研发提供了有力支持。

3. 药物代谢动力学研究HPLC技术可以对药物在体内的代谢过程进行分析，为药物代谢动力学研究提供了重要手段。

通过HPLC技术可以对药物在体内的代谢产物进行快速分离和检测，为药物代谢过程的研究提供了有力支持。

四、当前HPLC技术在中药研究中的挑战与发展1. 检测方法的标准化当前HPLC技术在中药研究中仍面临着检测方法标准化的问题，各种方法的标准化程度有待提高。

2. 技术发展趋势随着科学技术的不断发展，HPLC技术在分辨率、分析速度、检测灵敏度等方面仍有进一步提升的空间。

未来HPLC技术有望在中药研究中发挥出更大的作用。

3. 多样性应用未来HPLC技术有望在中药研究中实现多种成分同时分析、高通量检测等多样化应用，为中药研究提供更全面的支持。

五、结论HPLC技术作为一种高效、准确、灵敏的分析技术，在中药研究中发挥着重要作用。

当前HPLC技术仍面临着标准化、技术发展等问题，但未来有望在中药研究中发挥更大的作用，为中药研究提供更全面的支持和保障。

高效液相色谱实验报告一、实验目的：1.学习并掌握高效液相色谱法的基本原理及操作方法；2.熟悉高效液相色谱分析仪的结构和性能；3.进行一些标准品的测定，验证高效液相色谱法的分析准确性和重复性。

二、实验原理：三、实验步骤：1.打开高效液相色谱仪的电源，启动设备，待仪器稳定后进行下一步操作。

2.准备待测样品溶液，并过滤以去除杂质。

3.打开进样器盖，将待测样品溶液通过注射器注入进样器。

4.设置流动相的组成和流速，并调节柱温箱温度，使样品能够顺利分离。

5.打开检测器并进行基线校正，确保仪器正常工作。

6.开始自动分析，记录输出数据。

7.报告结果并进行数据分析。

四、实验结果：本实验使用高效液相色谱法对其中一标准品进行分析测定，得到了一系列数据，具体如下：峰1：保留时间为10.345min，峰面积为1246.78mm^2；峰2：保留时间为12.789min，峰面积为1843.56mm^2；峰3：保留时间为15.367min，峰面积为2150.89mm^2；...五、实验讨论：通过高效液相色谱法的分析测定，我们可以得到样品中各组分的保留时间和相对峰面积。

根据实验结果，我们可以推测样品中可能存在着一些特定的化合物。

并且，我们还可以通过峰面积的大小来估计样品中各组分的含量，从而进行定量分析。

值得注意的是，在实验过程中，我们需要严格控制各个参数的稳定性，以确保结果的准确性和重复性。

同时，对于一些复杂样品的分析，可能需要进行柱后衍生化或其他特殊处理，以增强分离效果。

六、实验总结：通过本次实验，我们学习并掌握了高效液相色谱法的基本原理和操作方法，了解了高效液相色谱仪的结构和性能。

同时，通过对标准品的测定，验证了高效液相色谱法的分析准确性和重复性。

高效液相色谱法作为一种重要的分析方法，在科研和工业生产中有着广泛的应用前景。

[1]汪仲良，杨正葆，胡冬琴，杨建民.分析化学.高等教育出版社。

[2]高效液相色谱技术与应用.化学工业出版社。

第十章高效液相色谱分析法第三节高效液相色谱固定相与流动相高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种使用高压泵将样品溶液通过固定相柱进行分离和分析的方法。

在HPLC中，固定相和流动相是非常重要的组成部分，对于分离和分析的效果起着决定性的作用。

1.高效液相色谱固定相高效液相色谱固定相是指填充在色谱柱中的材料，它起到分离样品的作用。

常见的固定相有：（1）硅胶固定相：硅胶是一种多孔材料，具有较大的比表面积，能够有效地吸附样品分子，是一种通用的固定相材料。

（2）反相固定相：反相色谱是基于样品中非极性化合物与反相固定相之间的亲水作用力不强而进一步分离的一种方法。

常见的反相固定相有碳链固定相（如C18、C8等）和脂肪酸链固定相（如ODS、ODPS等）。

（3）离子交换固定相：离子交换色谱是通过固定相中的离子交换基团与样品中的离子之间的相互作用来实现分离的一种方法。

常见的离子交换固定相有阴离子交换基团和阳离子交换基团。

（4）亲和层析固定相：亲和层析是一种根据样品中分子与固定相中的特殊结构之间的亲和作用力来实现分离的方法。

常见的亲和层析固定相有金属离子螯合固定相、抗体亲和固定相等。

2.高效液相色谱流动相高效液相色谱流动相是指用于输送样品溶液的溶剂。

它在分离和分析过程中起到溶解和移动样品分子的作用。

根据溶剂的极性不同，可以分为非极性溶剂、极性溶剂和离子对溶剂。

（1）非极性溶剂：如正己烷、甲苯，主要用于非极性物质的分离。

（2）极性溶剂：如乙醇、乙酸乙酯，主要用于极性物质的分离。

（3）离子对溶剂：如甲酸和甲醇的混合物，主要用于离子性物质的分离。

离子对溶剂一般用于反相色谱中，可以增加色谱的选择性。

高效液相色谱固定相和流动相的选择主要根据被分离物的性质、分析的需求和设备的特点来确定。

对于样品中多种成分的分离，可以采用多种固定相和流动相的组合，以达到最佳的分离和分析效果。

华南师范大学实验报告学生姓名：杨秀琼学号：20082401129专业：化学年级班级：08化二课程名称：仪器分析实验实验项目：液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯实验类型：综合实验时间：2010/416一、[实验目的:]1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法2、了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术二、[实验原理:]高效液相色谱法：以液体作为流动相的色谱法。

它是在经典液相色谱实验基础上，引入气相色谱的理论，在技术上采用高压输液泵，高效固定相和高灵敏的检测器，而发展起来的快速分离分析技术。

具有分离效能高，检出限低，操作自动化和应用范围广的特点。

其基本原理：利用欲分配的诸组分在固定相和流动相间的分配有差异（即由不同的分配系数），当两相做相对运动时，这些组分在此两相中分配反复进行，从几千次到百万次，即使组分的分配系数只有微小差异，随着液体流动相却可以有明显的差异，最后使这些组分都得到分离，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。

三、[仪器和试剂:]1.主要仪器：岛津液相色谱仪(LC-10AT)[配有紫外检测PhenomenexO柱]；10μL微量注射器2、试剂：甲醇、水苯和甲苯混合待测溶液苯标准溶液：2.0μL/mL甲苯标准溶液：2.0μL/mL苯、甲苯混合标准溶液：1.0μL/mL、2.0μL/mL、5.0μL/mL、10.0μL/mL 四、[实验步骤]1、按操作规程开机。

2、.选择合适的流动相配比，优化色谱条件通过调节溶剂甲醇和水的混合比例，从而来优化色谱调剂。

调好最佳色谱条件，控制流速为1ml/min 。

柱温30℃，检测波长354nm 3、苯、甲苯定性分析在最佳条件下，待基线走稳后，用10μL 微量注射器分别进样10μL 苯和 甲 苯混合待测溶液，10μL 苯标准溶液（2.0μL/mL）和10μL 甲苯标准溶液（2.0μL/mL）(微量注射器用甲醇润洗3～5遍)，观察并记录色谱图上显示的保留时间，确定苯和甲苯的峰。