凤尾草提取工艺研究_吕津京

凤尾草化学成分研究(Ⅰ)徐宏懿;李凤亚;杨明明;张敏敏;陈菲;尚文斌;杨靖华;汪云松【摘要】对采自云南省昆明市的凤尾草进行了系统的化学成分研究.采用柱层析、Sephadex LH-20、薄层层析等色谱方法,从凤尾草(Pteris multifida poir)全草95％工业乙醇提取物中分离得到一系列化合物,通过MS、NMR、2D-NMR等波谱分析手段鉴定了其中的6个化合物,分别为(2R,3S)-pterosin C(1)、Syringic acid (2)、ferulic acid (3)、isovanillic acid (4)、β-sitosterol (5)、daucosterol (6).化合物1为该属植物特征倍半萜美化合物蕨素,化合物2为首次从该植物中分得.【期刊名称】《云南民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(022)005【总页数】3页(P317-319)【关键词】凤尾蕨属;凤尾草;化学成分【作者】徐宏懿;李凤亚;杨明明;张敏敏;陈菲;尚文斌;杨靖华;汪云松【作者单位】云南省公安厅禁毒局,云南昆明650028;云南大学化学科学与工程学院自然资源药物化学教育部重点实验室,云南昆明650091;云南大学化学科学与工程学院自然资源药物化学教育部重点实验室,云南昆明650091;云南大学化学科学与工程学院自然资源药物化学教育部重点实验室,云南昆明650091;云南大学化学科学与工程学院自然资源药物化学教育部重点实验室,云南昆明650091;云南大学化学科学与工程学院自然资源药物化学教育部重点实验室,云南昆明650091;云南大学化学科学与工程学院自然资源药物化学教育部重点实验室,云南昆明650091;云南大学化学科学与工程学院自然资源药物化学教育部重点实验室,云南昆明650091【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R927凤尾草(Pteris multifida poir)，又名井栏边草、小叶凤尾草、蜈蚣蕨，是凤尾蕨科(pteridaceae)凤尾蕨属(Pteris)植物.在我国主要分布于西南地区，资源丰富.民间及临床用全草清热利湿、抗菌消炎，消肿止痛，凉血止血，治疗痢疾、扁桃体炎、肝炎，其根茎用于治疗糖尿病、抗肿瘤效佳［1－2］.研究发现，凤尾草含倍半萜、二萜类、植物甾醇类、黄酮类、挥发油、苯丙素类等成分［3］.国内外报道凤尾草同属植物普遍含有贝壳杉烷(烯)化合物，具一定的抗肿瘤活性，但目前对滇产凤尾草化学成分的系统研究尚未见报道.本文利用现代色谱和波谱分析鉴定手段，对凤尾草的化学成分进行系统研究，为临床用药提供科学依据.对采自云南省昆明市的凤尾草进行了化学成分研究.通过硅胶柱色谱、薄层色谱、Sephadex LH－20凝胶色谱以及重结晶等手段，从凤尾草全草95%乙醇提取物中分离得到一系列化合物，并利用质谱、核磁共振等现代波谱技术解析化合物结构，鉴定了其中的6个化合物，分别为(2R，3S)－pterosin C(1)、Syringic acid(2)、ferulic acid(3)、isovanillic acid(4)、β －sitosterol(5)、daucosterol(6).1 实验材料与方法1.1 实验材料凤尾草(Pteris multifida poir)于2009年8月采于云南省昆明市，经云南大学生命科学院王跃华教授鉴定，现存放于云南大学教育部植物资源药物化学重点实验室天然药物化学课题组.柱层析硅胶200～300和300～400目，青岛海洋化工厂生产，薄层层析为青岛海洋化工厂生产的GF254高效层析板.1.2 仪器质谱(FABMS)在VG Auto－Spec 3000质谱仪上测定，核磁共振由Bruker AM－300和Bruker DRX－500型核磁共振仪测定(TMS为内标).1.3 提取和分离11.2 kg凤尾草(Pteris multifida poir)全草粉碎后，采用95%的工业乙醇冷提4次(每次7天)，收集提取液，减压浓缩得到粗提浸膏.分别以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得石油醚部分93 g，乙酸乙酯部分124 g，正丁醇部分208 g.采用石油醚－乙酸乙酯、石油醚－丙酮、氯仿－甲醇等溶剂体系对各部分进行梯度洗脱，反复柱层析，最终分离得到化合物1～6.1.4 结构鉴定(2R，3S)－pterosin C(1):C14H18O3，白色无定形粉末，m.p.270～275℃.EI－MS m/z 318［M］+.1H NMR(300 MHz Acetone－d3)δ:1.26(3H，d，J=7.2 Hz，14－CH3)，2.4－2.5(1H，m，H －2)，5.2(1H，d，J=7.2 Hz，H －3)，7.34(1H，s，H －4)，2.45(3H，s，10－CH3)，2.61(3H，s，H －11)，2.94(2H，t，J=2.3 Hz，12 －H)，3.57(2H，t，J=2.5 Hz，13 －H);13CNMR(75 MHz，Acetone－d3)δ:208.3(s，C －1)，154.9(s，C －9)，145.1(s，C －5)，138.4(s，C －6)，138.0(s，C －7)，132.4(s，C－8)，125.3(d，C －4)，75.5(t，C －3)，61.5(t，C －13)，54.4(d，C －2)，33.1(t，C －12)，21.4(q，C－10)，13.9(q，C－14)，13.1(q，C－11).以上波谱数据与文献［4］报道一致，推断其为 indanone型倍半萜类化合物，鉴定化合物1为(2R，3S)－pterosin C. 丁香酸(2):C9H10O5，白色固体，m.p.213～215℃.EI－MS m/z:168(［M］+，100)，153(85)，136(17)，125(45)，108(32)，97(56);1H NMR(300 MHz，pyridine－d5)δ:3.79(3H，s，OCH3)，6.83(1H，d，J=8.0 Hz，H －5)，7.44(1H，s，H －2)，7.45(1H，d，J=8.0 Hz，H －6)，9.80(1H，s，—COOH)，12.44(1H，br.s，－OH);13C NMR(75 MHz，pyridine－d5)δ:121.6(C－1)，115.0(C －2)，147.2(C －3)，151.1(C－4)，113.0(C－5)，123.5(C－6)，167.0(COOH)，55.6(OCH3).以上波谱数据与文献［5］报道一致，可以确定化合物2为丁香酸(Syringic acid).阿魏酸(3):C10H10O4，无色针晶，m.p.167～170℃.EI－MS m/z:194［M］+;1H NMR(300 MHz，DMSO－d6)δ:12.05(1H，s，9－COOH)，9.48(1H，s，4－OH)，7.25(1H，d，J=1.6 Hz，H －2)，6.77(1H，d，J=8.0 Hz，H －5)，7.05(1H，dd，J=1.6 Hz，8.0 Hz，H －6)，7.43(1H，d，J=15.9 Hz，H －7)，6.33(1H，d，J=15.9 Hz，H－8)，3.81(3H，s，—OCH3);13C NMR(75 MHz，DMSO －d6)δ:125.6(C －1)，115.3(C －2)，148.8(C－3)，147.6(C－4)，115.4(C－5)，122.5(C－6)，147.6(C－7)，111.0(C－8)，167.6(C －9)，55.5(OCH3).以上波谱数据与文献［6］报道基本一致，化合物3鉴定为阿魏酸(ferulic acid).异香草酸(4):C8H8O4，白色晶体，m.p.212 ～213 ℃.EI－ MS m/z［M］+168.1H NMR(300 MHz，DMSO－d6)δ:7.41－7.43(2H，m，H －2，6)，6.82(1H，d，J=8.5 Hz，H －5)，3.82(3H，s，OCH3).13C NMR(75 MHz，DMSO －d6)，δ:122.3(C－1)，115.2(C －2)，146.1(C－3)，151.3(C －4)，1113.2(C －5)，123.4(C－6)，167.2(C－7)，55.7(C－8).以上波谱数据与文献［7］报道基本一致，鉴定化合物4为异香草酸(isovanillic acid).β －谷甾醇(5):C29H50O，白色鳞片晶体(丙酮).EIMS(70 ev，m/z，%):414(M+，100)，396(75)，381(43)，367(19)，351(21)，341(7)，329(48)，315(23)，303(65)，289(32)，273(58)，255(86)，241(18)，231(48)，199(44)，187(38)，173(57)，159(89).与标准品进行薄层层析对照，TLC的Rf值和显色一致，化合物5确定为β－谷甾醇(β－sitosterol).胡萝卜甙(6):C35H60O6，白色粉末，FAB+－MS(m/z，%):575(M+－1，65)，EIMS(70 ev，m/z):576(M+，1)，414(23)，396(M+－Glu，100)，382(47)，255(26)，213(17)，173(10)，159(23)，145(35).在TCL上用多种溶剂系统展开时化合物与胡萝卜苷标准品Rf值一致，混合熔点不下降，因此确定为胡萝卜甙(daucosterol).2 结果与讨论为了研究中药凤尾草的化学物质基础，本文对采自云南省昆明地区的凤尾草进行了系统的化学成分研究.运用常规硅胶柱色谱、Sephadex LH－20凝胶柱色谱的方法，从凤尾草(Pteris multifida poir)全草95%工业乙醇提取浸膏中分离纯化了6个化合物，其中1个为indanone型倍半萜.利用质谱、核磁共振等现代波谱数据确定了化合物结构，分别为(2R，3S)－pterosin C(1)、Syringic acid(2)、ferulicacid(3)、isovanillic acid(4)、β－sitosterol(5)、daucosterol(6).化合物1为该属植物特征倍半萜类化合物蕨素，化合物2为首次从该植物中分得.参考文献:［1］刘清飞，秦明珠.凤尾草的形态组织学研究［J］.中药材，2002(10):704－706.［2］江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海:上海科学技术出版社，1985:487－489.［3］孙海燕，薛飞群，张可煜，等.中药凤尾草研究进展［J］.兽医寄生虫病.2007，15(3):42－46.［4］CASTILLO U F，WILKINS A L，LAUREN D R，et al.Isoptaquiloside and caudatoside，illudane－type sesquiterpene glucosides from Pteridiumaquilinum var.caudatum［J］.Phytochemistry，1997，44(5):901 －906. ［5］邹建华，杨峻山.天葵的化学成分研究［J］.中国药学杂志，2004，39(4):256－257.［6］赵云雪，丁杏苞，唐文照，等.猪毛菜化学成分的研究［J］.中国中药杂志，2005，30(10):792－795.［7］尚小雅，李帅，王映红，等.红绒毛羊蹄甲的化学成分研究［J］.中国中药杂志，2006，31(23):1953－1955.。

鳳尾草安全性、抗氧化特性與降血脂作用之研究Studies of Safety, Antioxidant Characteristic andHypolipidemic Effect of Pteris multifida Poiret研究生：王子慶 Tzu-Ching Wang指導教授：楊季清 Chih-Ching Yang林俊清 Chun-Ching Lin【摘要】本研究目的是評估鳳尾草(Pteris multifida Poiret)的安全性、調查其抗氧化性和降血脂功效。

實驗結果顯示在鳳尾草水萃取物AEPM (aqueous extracts of P. multifida Poiret)在濃度0.312-5 mg/mL時，不論有無添加S-9，均不會對測試的五株沙門氏菌(Salmonella typhimurium TA97, TA 98, TA 100, TA 102 and TA 1535)造成毒性或致突變性。

當以在100、500與1000 mg/kg b.w. 28天管餵大白鼠，僅最高劑量下之雄鼠嗜中性白血球與雌鼠淋巴球有輕微減少的現象，但仍在正常值範圍之內，大體解剖與病理學檢驗均未發現有與處理相關之變化，對其一般生長狀態、發育、飲食、飲水、飼料轉換率、紅血球細胞、凝血參數、血液生化值和器官重量等均無影響，此結果顯示在正常服用狀態下，並無安全上之風險。

在抗氧化的評估方面，AEPM 有相當多抗氧化特性，包括可抑制亞麻油酸自氧化，高抗氧化活性，清除1，1-dipheny-2-picryhydrazyl (DPPH)、羥自由基與超氧陰離子，螯合亞鐵離子和銅離子，以及強還原力，在脂質催化系統中(FeCl2/H2O2, FeCl3/ H2O2/ascorbic acid, Fe+2, and Fe+3) AEPM亦具有甚高的抑制亞麻油酸過氧化的效果，AEPM中含有多種抗氧化成分，如總酚、類黃酮類化合物、抗壞血酸和tocopherols，高量的總酚可能與抗氧化的能力有關。