紫杉醇提取及纯化
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从细胞中提取紫杉醇的方法
从细胞中提取紫杉醇的方法主要包括以下几个步骤:
1. 细胞培养:首先,需要将含有紫杉醇的细胞接种到培养基中进行培养。
常用的培养基有MB培养基和1/2MB培养基,其中可以添加生长因子等物质来促进细胞的生长和代谢。
2. 细胞破碎:当细胞生长到一定阶段后,可以通过物理或化学方法将细胞破碎,释放出细胞内的紫杉醇。
常用的物理方法有超声波破碎和冷冻破碎等,化学方法则包括使用表面活性剂或酸碱溶液等。
3. 分离纯化:破碎后的细胞中,除了紫杉醇外还含有其他杂质,因此需要通过分离纯化技术将紫杉醇分离出来。
常用的分离纯化方法有离心、过滤、萃取、色谱分离等。
4. 浓缩干燥:经过分离纯化后的紫杉醇溶液可能还含有一些水分和杂质,需要进行浓缩和干燥处理。
常用的浓缩方法有真空蒸发和冷冻干燥等,干燥后的紫杉醇粉末可以用于进一步的分析和制备。
需要注意的是,以上方法仅供参考,实际操作中可能需要根据具体情况进行调整和改进。
同时,由于紫杉醇的提取涉及到多个技术领域,如细胞生物学、化学、药学等,因此需要综合考虑各方面的因素,确保提取过程的顺利进行。
紫杉醇提取纯化工艺的研究进展摘要:紫杉醇以其独特的抗癌作用机制及显著的疗效,被认为是近十几年来天然抗癌药物研究领域最重大的发现。
由于紫杉醇在红豆杉树皮中含量极低,提取精制困难等原因,导致紫杉醇纯品价格昂贵。
因此完善紫杉醇的提取纯化工艺,降低生产成本,对保障人类健康都具有重要的意义。
本文对紫杉醇提取纯化工艺的研究进展进行了探讨。
关键词:紫杉醇;提取;纯化;工艺;研究紫杉醇(Paclitaxel,商品名Taxo1)是红豆杉属植物中独有的一种抗肿瘤天然药物,由于其独特的抗癌作用机制及显著的疗效,而被认为是近十几年来天然抗癌药物研究领域最重大的发现。
目前,国内外紫杉醇的商业化规模生产多以红豆杉植物为原料,通过一系列的分离纯化获得。
一、紫杉醇提取纯化工艺概述由于紫杉醇在红豆杉树皮中含量极低(<0.06%),提取精制困难等原因,导致紫杉醇纯品价格昂贵。
因此,完善紫杉醇的提取纯化工艺,降低生产成本,得到更加便宜的原料对保障人类健康都具有重要的意义。
表1 .紫杉醇提取纯化工艺中各个步骤所得纯度和回收率目前,工业生产中制备紫杉醇还局限于植物提取法。
因此研制出一套操作简单、提纯高、提取率高的紫杉醇规模制备技术无疑对改善紫杉醇原料药产业现状发挥积极作用。
一般来说,从红豆杉中提取紫杉醇的分离工艺,可以分为粗提和纯化两个阶段。
紫杉醇粗提阶段的目的,在于从原料液中尽可能多的提取目标化合物,所得物料再进行后续提纯直至获得纯品。
粗提过程可分为初级萃取和次级萃取,两种过程因所用溶剂不同而除去不同的杂质。
将粗提物进一步纯化是获得纯品紫杉醇的关键步骤,通常用色谱法完成。
在最后获得医用级纯品之前,色谱过程也必不可少。
用色谱法分离纯化紫杉醇时,柱色谱被用于紫杉醇的预分离和最终分离,而薄层色谱则被用于紫杉醇的检测和纯化。
目前,随着分离工艺的不断完善,除了柱色谱法以外,还有高效液相色谱、高速逆流色谱等。
不同工艺中各个步骤的纯度、回收率见表1。
紫杉醇提取技术
紫杉醇提取技术是一种从红豆杉树(Taxus brevifolia)中提取的一种抗肿瘤药物。
以下是简要的提取步骤:
1. 切片:将红豆杉树干切成薄片。
2. 干燥:将切好的树干片放入干燥设备中,保持适当的温度和湿度,以减少水分。
3. 粉碎:将干燥后的树干片研磨成粉末。
4. 提取:将粉末与有机溶剂(如甲醇或乙醇)混合,进行超声波辅助提取。
提取次数和时间根据实验条件而异。
5. 过滤:将提取液与固体废物分离,使用滤纸或其他过滤设备。
6. 浓缩:将过滤后的提取液进行旋转蒸发或减压浓缩,去除大部分有机溶剂。
7. 回收:利用柱层析或其他分离技术,从浓缩液中分离出紫杉醇。
8. 纯化:通过结晶、重结晶等方法对紫杉醇进行纯化,得到高纯度的紫杉醇。
需要注意的是,实际操作过程中可能涉及到的设备和条件会根据不同实验室和研究者的方法而有所不同。
此外,提取紫杉醇的过程中要严格遵守实验安全规程,因为紫杉醇和其代谢产物具有毒性。
红豆杉里紫杉醇的提取分离及分析1.实验材料与仪器1.1 实验材料新鲜红豆杉枝叶(树枝、树叶和树皮)。
1.2 实验试剂主要试剂:试剂名称厂家乙酸乙酯(分析纯)北京化工厂丙酮(分析纯)北京化工厂甲醇(分析纯)北京化工厂石油醚(分析纯)北京化工厂三氯甲烷(分析纯)北京化工厂二氯甲烷(分析纯)北京化工厂乙酸铵缓冲液(分析纯)北京化工厂乙腈(分析纯)北京化工厂去离子水(自制)北京化工厂紫杉醇标准品(纯度≧97%)中国生物药监所1.3 实验仪器主要仪器:仪器名称厂家XZ-6A 旋转蒸发器北京科龙仪器公司CFSJ-8A粉碎机江苏瑰宝JA 3003A电子天平上海精天电子仪器有限公司岛津LC-6A高效液相色谱仪CQ-500超声波振荡器常压层析系统Pharmacia公司2.实验试液制备2.1 标准品溶液制备准确称取紫杉醇(Taxol)标准品(纯度≧97%)5.00mg于50mL 容量瓶,加入甲醇定容摇匀,配制成0.10mg/mL的标准溶液。
用HPLC 检测。
2.2 样品试液制备采集新鲜红豆杉枝叶,清水洗净,于60℃烘箱内干燥至恒重,用粉碎机粉碎,过14目筛。
准确称取过筛后的样品5.00g于50mL广口具塞三角瓶内,加入50mL乙酸乙酯-丙酮混合液(体积比1:1,下同),超声萃取30min,取上清液。
沉淀再加50mL乙酸乙酯-丙酮混合液超声萃取30min,取上清液,合并两次上清液,将提取液离心15min,转速4000r/min。
离心后取上清液加入5%活性炭粉,充分搅拌,待色素吸附完后进行真空抽滤,滤液用旋转蒸发器在40℃下蒸发至剩余少量液体。
加入石油醚(体积比1:1)充分振荡30min,静置5min,脱脂。
萃取余液用三氯甲烷(体积比2:1)充分振荡30min,萃取滤液在30℃下减压浓缩蒸干,然后用15mL甲醇溶解,制备液经0.45μm过滤器过滤,得浸膏滤液,HPLC外标法测定紫杉醇含量,均分5等份,作好标识,备用。
3.实验方法3.1 分离方法3.1.1 液-液萃取取浸膏滤液,加入二氯甲烷(浸膏/二氯甲烷的重量比为1:50),充分溶解,再加入与二氯甲烷等量的水。
抗癌药物紫杉醇的全合成Holton合成紫杉醇路线的剖析一、本文概述本文旨在全面剖析紫杉醇全合成的Holton合成路线,这是一种被广泛研究和应用于抗癌药物紫杉醇生产的重要方法。
紫杉醇,作为一种具有显著疗效的天然抗癌药物,自被发现以来,其合成路线的研究一直备受关注。
Holton合成路线,作为其中的一种,凭借其高效、稳定和可持续的特点,在紫杉醇的工业生产中占据了重要地位。
本文将从紫杉醇的化学结构出发,详细阐述Holton合成路线的原理、步骤和关键反应。
我们将分析该路线的化学选择性、反应条件和反应机理,以揭示其高效合成紫杉醇的科学依据。
我们还将对Holton合成路线的优缺点进行评估,探讨其在实际工业生产中的应用前景和改进方向。
通过本文的剖析,我们期望能为读者提供一个清晰、全面的紫杉醇全合成Holton合成路线的理解,为相关领域的研究和开发提供有益的参考。
我们也希望借此机会推动紫杉醇合成路线的不断创新和优化,以更好地服务于抗癌药物的研发和生产。
二、Holton合成紫杉醇路线概述Holton合成路线是一种全合成紫杉醇的方法,由Robert A. Holton等人在1994年首次报道。
该路线从易得的原料出发,通过多步骤的化学转化,最终得到紫杉醇。
这一路线的成功,不仅为紫杉醇的大规模生产提供了可能,而且也为其他复杂天然产物的全合成提供了新的思路和方法。
Holton合成路线主要包括以下几个关键步骤:从简单易得的起始原料出发,通过一系列的化学反应,构建紫杉醇的基本骨架。
这些反应包括加成、消去、取代、氧化等,每一步都需要精确控制反应条件和选择适当的催化剂。
接下来,通过引入关键的侧链和官能团,进一步修饰紫杉醇的基本骨架。
这些侧链和官能团是紫杉醇具有抗癌活性的关键所在,因此它们的引入是整个合成路线的重中之重。
在这一步中,需要利用特定的化学反应,如酯化、酰胺化等,将侧链和官能团准确地连接到紫杉醇的基本骨架上。
通过一系列的纯化和结晶步骤,从反应混合物中分离出纯度较高的紫杉醇。
摘要目的:探索红豆杉中紫杉醇的提取纯化工艺。
方法:将新鲜的红豆杉树皮干燥后用甲醇浸泡,陶瓷膜进行固液分离,纳滤膜浓缩,再用大孔树脂HZ818层析,洗脱液浓缩结晶,再活性炭脱色后甲醇重结晶,再硅胶正向层析,洗脱液浓缩后正已烷结晶,再真空干燥得成品。
结论:按本方法从红豆杉中提取的紫杉醇纯度为97.5%,收率为十万分之八。
关键词红豆杉,紫杉醇,提取纯化,树脂,硅胶目录一、紫杉醇目前的一些分离纯化方法。
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(一)液相萃取。
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(二)固相萃取法。
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(三)树脂层析法。
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(四)活性炭脱色。
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(五)硅胶正向层析。
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(六)结晶纯化。
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紫杉醇的提取工艺研究紫杉醇提取纯化方法的研究进展紫杉醇是最早从红豆杉属植物中分离出来的三环二菇类化合物,是继阿霉素和顺铂之后最热点的抗癌新药。
紫杉醇具有复杂的化学结构,分子由3个主环构成二菇核,分子中有11个手性中心和多个取代基团,母环部分是一个复杂的四环体系,有许多功能基团和立体化学特征。
分子式C47H51NO14,分子量853.92。
同位素示踪表明, 紫杉醇只结合到聚合的微管上, 不与未聚合的微管蛋白二聚体反应。
细胞接触紫杉醇后会在细胞内积累大量的微管,这些微管的积累干扰了细胞的各种功能,特别是使细胞分裂停止于有丝分裂期,阻断了细胞的正常分裂。
通过Ⅱ-Ⅲ临床研究,紫杉醇主要适用于卵巢癌和乳腺癌,对肺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤、脑瘤也都有一定疗效。
紫杉醇属于有丝分裂抑制剂,它的独特机制在于可以诱导和促进微管蛋白聚合,促进微管装配及阻止微管的生理解聚,由此抑制癌细胞纺锤体的形成,阻止有丝分裂的完成,使其停留在G2期和M期直至死亡,从而起到抗癌的作用。
迄今为止紫杉醇是唯一促进微管聚合的新型抗癌药。
这一新的发现引起了各国医药界的极大兴趣。
现在已有包括我国在内的十多个国家批准了紫杉醇类药物的正式生产。
目前有关紫杉醇研究的几个主要问题是:紫杉醇的提取;紫杉醇的人工合成;紫杉醇的临床应用(水不溶性问题的解决);紫杉醇的构效关系;紫杉醇的抗癌机理。
紫杉醇的抗癌机理1971年,Wani等报道了紫杉醇在一些实验体系中具有抗癌活性。
1978年,Schiff等发现紫杉醇在极低的浓度下(0.25μM)可以完全抑制Hela细胞的分裂,而且在对细胞4小时的培养过程中,对DNA、RNA和蛋白质的合成没有明显影响。
Hela细胞在与紫杉醇共同温育20小时后被阻断在G2后期和M期。
1979年Schiff等用浊度法进行了研究,发现紫杉醇能缩短微管在体外的聚合时间,使平衡向微管聚合方向移动,从而减小微管聚合临界浓度。
在有GTP时,紫杉醇可以和PC-tubulin结合,计量比为1:1。
摘要目的:探索红豆杉中紫杉醇的提取纯化工艺。
方法:将新鲜的红豆杉树皮干燥后用甲醇浸泡,陶瓷膜进行固液分离,纳滤膜浓缩,再用大孔树脂HZ818层析,洗脱液浓缩结晶,再活性炭脱色后甲醇重结晶,再硅胶正向层析,洗脱液浓缩后正已烷结晶,再真空干燥得成品。
结论:按本方法从红豆杉中提取的紫杉醇纯度为97.5%,收率为十万分之八。
关键词红豆杉,紫杉醇,提取纯化,树脂,硅胶目录一、紫杉醇目前的一些分离纯化方法。
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(一)液相萃取。
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(二)固相萃取法。
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(三)树脂层析法。
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(四)活性炭脱色。
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(五)硅胶正向层析。
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(六)结晶纯化。
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