髓过氧化物酶

髓过氧化物酶指数在57例急性冠状动脉综合征患者的临床应用髓过氧化物酶(MPO)是由中性粒细胞、单核细胞和某些组织的巨噬细胞分泌的含血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一。

分子量为150KDa。

MPO基因位于人第17号染色体，其编码蛋白翻译修饰后形成2条轻链和2条重链，构成四聚体糖基化蛋白。

在早期由北京协和洛克和美国克利夫兰医院共同研究发现出来，它具有早期预警和提前筛查心脑血管疾病一个标记物。

另一方面血液中95%的MPO来源于多形核白细胞。

尽早明确急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)的诊断、危险分层及正确地评估个体近期发生ACS的危险性,对尽早干预治疗ACS至关重要。

有研究表明,血浆髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MP0)是早期诊断ACS的重要指标,与心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)联合应用更能增加ACS诊断的灵敏度[1]。

尤其是当cTnI正常时,血浆MPO升高可预测心脏事件的发生[2]。

但血浆MPO检测方法繁琐,目前无法自动化,临床应用受到限制。

Unionluck全自动血细胞分析仪是一种基于流式细胞分析原理的仪器,现在广泛应用于大中型医院实验室,在计数全血细胞的同时可根据细胞内MPO染色的情况得出中性粒细胞过氧化物酶活性指数(myeloperoxidase index,MPXI),用于评价炎症状况和白血病[3-4]。

现将本院分析MPXI在57例ACS患者的临床应用报道如下。

1资料与方法1.1一股资料选择2011年5~8月本院收治的ACS患者57例。

其中,不稳定型心绞痛(UAP)20例为UAP组,其中,男12例,女8例,年龄(70.00±10.10)岁。

非ST段抬高心肌梗死(NSTEMI)20例为NSTEMI组,其中,男12例,女8例,年龄(67.00±18.10)岁。

ST段抬高型心肌梗死(STEMI)17例为STEMI组,其中,男8例,女9例,年龄(69.90±15.20)岁。

MPO-预测心血管事件的新一代标志物冠心病（coronary arterary disease, CAD）是严重威胁人类健康的疾病。

形成冠心病的重要病理基础是动脉粥样硬化。

近年来，髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）成为心血管疾病预测早期检测指标的研究重点。

髓过氧化物酶是来源于白细胞的一种酶，主要存在于嗜中性粒细胞和巨噬细胞中。

髓过氧化物酶通过产生自由基和多种反应性物质，促进斑块形成和不稳定性增加，加速动脉粥样硬化进展，进而引起多种并发症。

1 MPO的结构和生物学作用MPO是一种亚铁血红素酶，来源于嗜中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和小胶质细胞，是由两条重链和两条轻链组成的四聚体的糖基化蛋白。

MPO是中性粒细胞活化的自分泌和旁分泌细胞因子，发挥正反馈调节作用，同时是中性粒细胞活化的标志物正常情况下，MPO以氯和过氧化氢为底物，催化产生次氯酸等反应性物质和多种自由基，在天然免疫应答中发挥重要作用。

当机体处于炎症、氧化应激状态时，不能有效清除自由基和氧化剂，引起多种病理过程和组织损伤。

近年来，大量研究表明心血管生理功能失调与MPO消耗内皮型一氧化氮,将低密度脂蛋白转换成导致脉粥样硬化的氧化形式密切相关。

作用方式见图1。

MPO还有阻碍高密度脂蛋白抗动脉粥样硬化的作用，从而推动了动脉粥样硬化的进程。

图1 MPO在脉管系统中的不利影响：被活性氧修饰后的LDL(mmLDL)能穿透动脉内膜。

随后，mmLDL诱导单核细胞迁移至血管壁，并分化成巨噬细胞。

氧化了的LDL（oxLDL）被巨噬细胞的清道夫识别受体识别后，巨噬细胞清除了过量的oxLDL后将形成泡沫细胞。

在炎症和其他引起髓过氧化物酶衍生的活性物质（MDRS）形成的状态下巨噬细胞将会释放出MPO。

而且MDRS可能通过不同途径（蓝色箭头标记）促进动脉粥样硬化的形成。

MDRS可能更广泛的修饰氧化LDL，形成oxLDL。

通过促进氧化HDL（oxHDL）的形成导致HDL失去功能，从而削弱了HDL 对LDL的保护作用和抑制了反向胆固醇的运输。

髓过氧化物酶（MPO）在ACS的诊断价值98?MedicalLaboratoryScienceandClinics,2010,V ol2t.N0.5医学检验与临床2010年第2l卷第5期方观点,但该文件在世界范围内已成为广泛应用的指南性文件:目前临床应用的心脏标志物大致分为三大类.一类是主要反映心肌组织损伤的标志物,如CK—tClB,肌红蛋白(Mb藏MYO),心肌肌钙蛋白T和I(cTn!",cTnI);第二类是了解心脏功能的标志物,如B型尿钠肽(BNP;第三大类是作为心血管炎症疾病的标志物,如翅敏C反应蛋白(I-I~一CRP),髓过氧化物酶(MPO).其中eTnl,,eTnT被美国和欧洲心脏病协会一致坪为是诊断急性心肌梗死的高特异性和高敏感性的确诊标志物;由美国和欧杪H心脏病协会推荐使用的B型尿钠肽(B—typebrainnatrittreticpepti~,BNP)是目前唯一一个最好的用于评价心力衰竭的实验室检测指标,在欧洲心脏协会(Euro.peanSoeie~ofCardiolo~,ESC)2001年的心衰诊断指南中心.已将其作为实验室检测项目中的唯一指标;欧美等发达国家已将hs—ClIP作为预防心血管疾病的相对独立的一个新的筛查指标.NACB的I.~PG推荐将MPO,hs—CIIP,IL一6等指标作为心血管炎性的生物标志物,并指出"/VIPO是已经证明具有可能用于ACS患者危险分层的新的标志物,并有可能hs—cRP联合甚或取代l1s—cRP"【3J.3MPO一一种新的,独立的预测ACS和危险性分层的炎症生物标志物急性冠状动脉综台征(AcuteCoronarySyndrome,ACS)是指在冠状动脉粥样硬化基础上,斑块破裂,表面出现裂纹,溃疡.继而血管痉挛,血小板黏附聚集,并继发血栓形成,引起完全或不完全堵塞性血栓的急性血管病变.MPO促进As病变形成.并影响粥样斑块的稳定性,通过增大氧化应激而引起AC$.目前的研究表明,MPO是预测ACS患者发生不良心血管事件的一个新的预测因子,特别是在肌钙蛋白T(c'rnT)水平较低的患者,MPO能够识别那些将来发生心血管事件危险性较高的患者{.2003年.德国学者Baldus等ⅢJ选择1090例ACS患者,测量血浆MPO水平并进行6个月的随访. 记录患者的心肌梗死和死亡情况.结果显示,患者血浆MP0水平与血浆eTnT,可溶性CD40受体,C反应蛋白(cRP)水平以及sT段的改变无关.但随着I~IPO水平升高(>350L, 31.3%),心血管发病风险明显升高.对判断cTnT水平低的AcS患者的危险性意义更大.MPO表达和活性增加先于cT. nT和CK—MB.甚至在患者发生胸痛的2h内,其水平明显升高,所以对胸痛患者而言,用MPO预测其是否发生AcS将有更重要的临床意义.关于MPO参与ACS的主要作用机制是MPO及其催化产生的氧化产物对LDL的氧化作用以及对内皮细胞的腐蚀和破坏.总结MPO与ACS发病的机制有两大类:MPO/N一系统和I~IPO/o2/CI一系统.MPO/NO,一系统:(1)促进低密度脂蛋白(LDL)的氧化:MPO能通过NO诱导的氧化剂把具有保护作用的NO作为反应底物,分离出活性的氮基,促进LDL氧化.暴露于NO2一一LDL的巨噬细胞会加速胆固醇酯的形成,从而加速细胞内胆固醇和胆固酵酯的沉积及泡沫细胞的形成.(2)消耗NO:上述过程在氧化LDL的同时消耗了NO,导致NO7J:平降低,从而引起不正常的血管收缩反应J,导致冠状动脉痉挛,参与ACS的发病.MPo/~()'/C!一系统:(1)促进低密度脂至自(LDL)的襄化:NPO催化H2一2和C1一形成HOCI,HOCI能催化LDL,生成氧化型LDL(OX—LDL).即Cl+H,O2HOC1;LDLOX—LI)I Ox—LDL,巨噬细胞,中性粒细胞以及MPO存在于ACS的痫毽组织中,且血浆OX—LDL水平与ACS的严重程度呈正相关J (2)生成次氯酸:Sugiyama等【9j的研究发现.活化的I~IPO雨性的巨噬细胞或者外源性的HOC1能促进内皮细胞从皮基质分离I-IOCI以浓度依赖的方式引起内皮细胞死亡.当HOC!的浓度为20—50umol/ml时可迅速诱导内皮细胞皱缩和细胞核的浓缩以及内皮细胞单层的破裂;然而HOC1浓度灰于lOOumol/ml时能够立即导致内皮细胞胞浆内气泡形成,而不出现细胞的皱缩;当HOC1浓度在30—50umol/ml时能够诱导c一pase一3的活I化及多聚ADP聚台酶的降解,说明HOC1能够刺激内皮细胞的凋亡性死亡.部分是通过对线粒体的损伤而导致内皮细胞死亡.由人类冠状动脉粥样硬化的内皮下的单核细胞或MPO阳性的巨噬细胞产生的珏OC1可以通过促进斑头的腐蚀和增加血栓的形成参与AcS的发病.tdPO既可作为血管的炎性介质,又可作为血管炎症的标志.AC5是一组冠状动脉粥样硬化斑块破裂,血栓形成或血管痉挛而致急性或亚急性心肌缺血的临床综合症.Biasueei等【4]研究发现冠心病(CoronaryHeartDisease,CHD)人白细胞内MPO含量显着升高,ACS患者循环中的巨噬细胞经脱颗粒释放MPO.Zhang等_l..的早期临床研究发现,白细胞的I~IPO表达水平与AC5有着密切关系,其机制是:①MPO作为一种炎症介质参与了ACs的炎症反应过程,同时形成一个正反应回路,进一步促进中性粒细胞活化,导致MPO释放增多,从而不断加强炎症反应;②MPO在体内能产生一系列可扩散的强氧化剂.氧化低密度脂蛋白使其更容易被巨噬细胞吞噬.氧化HDL—C使其参与的臣噬细胞内胆固醇外流受阻.促进胆固醇在巨噬细胞内沉积和泡沫细胞形成;③MPO产生的次氯酸能抑制金属蛋白酶组织抑制因子一1的活性.从而激活动脉壁基质金属蛋白酶(MMP),使基质蛋白聚糖降孵从而损伤血管内膜;④MPO可以通过诱导血管内皮细胞P选择素和组织园子的表达.促使血小板聚集以及降解内度源性舒张田子.使一氧化碳活性降低,弓{起冠状动脉痉挛.Brennan等研究发现:血浆MPO水平可以预测发生心肌梗死的危险,甚至在cTnT阴性(<0.1.g/m1)的患者(P<0.001).MPO水平也可以预测CHD患者30d,6个月心血管事件的发生危险(P<0.001).同样Baldus等…j报告:与eTnT,ClIP等指标一样,MPO水平可以独立预测ACS患者心血管事件自≈发兰危险并认为血浆MPO水平可以在不考虑CRP及其它炎症标志钇的情况下独立预测心血管疾病的危险性,尤其是当c保东平时,MPO比CRP更能反映冠脉病变的程度和推测心血管事件发生的危险性MPO作为一种新的预测Acs的炎茳标物,其表达和话性升高是ACS发生的原因.即促进A筌发生,医学检验与临床2010年第21卷第5期Medjc81Laborato~'ScienceandClihie::竺: 发展;而cTnT,CK—MB等指标则是心肌发生实质性坏死后才升高,是ACS发生的结果.MPO表达和活性的升高先于eTnT,CK—MB,甚至在患者发生胸痛的2h内,MPO水平即明显升高.所以对胸痈患者而言,MPO预测其是否发生ACS将有更重要的临床意义.综上所述,MPO作为一种新的预测ACS的炎症标志物,其表达和活性升高是ACS发生的原因.即促进ACS发生,发展:而肌钙蛋白T,CKMB等指标则是心肌发生实质性坏死后才升高,是ACS发生的结果.MPO表达和活性的升高先予CnT,CKMB,甚至在患者发生胸痛的2h内,MPO水平即明显升高.所以对胸痛患者而言.MPO预测其是否发生ACS将有更重要的临床意义.参考文献[1]MoriT.TownT.TanJ.eta1.Modulationofastrooyticactivationby arundicacid(ONO一2506)mitigatesdetrimenta1.effectsofthe apolipoproteinE4isoformafterpermanentfocalischemiainapolipoprotein E"knock—insice[J:.JCerebBloodFlowMetab.2005,25(6):748—762.[2]张宗彬.鲍杰.心肌标志物的实验室检测及临床应用研究进展[Jj.中国医药指南.2008.6(15):76—78.[3]郁盛恺.美国临床生化科学院检验医学实践指南:急性冠状动脉综合症和心力衰竭的生物标志物[J:.临床检验杂志.2OO9,27(5):附l～附5l[4]BiasucciLM,D.OnofrioG.LiuzzoG,eta1.1ntraccliularneutrophli myelopercxidsseisreducedinunstableanginaandaeLlI~myocardialitLfare—finn.butitsreductionisnotrelated∞ischemia[Jj.AmCellCardio1.1996:27:611—6.[5]ZhangR,BrennanML.FuX.AvilesIL1.PearceGL.PennMS.ela1.As一elationbetweenmyeloperoxidaselevelsandriskofcorona~.-art,s,diseⅡs[J].JAMA.2001.286(17)?:2136—142.[6]苏淑红.刘志强.严松彪.等.髓过氧化物酶与急性冠厨:综台歪[Jj.北京医学,2007,29(4):235—237.[7]EiseriehJP,Balduss,BrennanML.eta1.Myeloperoxidase,a]eui:c~yte—derivedvascutarNOoxidase.Science.2002+296:239t一2394.f8]EharaS,UedaM,NarttkoT.eta1.Elevatedlevelsofoxidized]owdensl—qⅪansh州aN~itivetel矗t【蝎hipⅥ讣the郫e0facuC~I'O—n脚了syndromes.Circulation.2001-103:1955—1960.[9]SagiyamaS,KuyamaK,AikawaM.eta1.Hypochtomtr,acid.am~.phageproduct,inducesendothelia1.apoptosisandtissuefactorepressiominvolvementofmyeloperoxidase—mediatedoxidantlitplaque erosionandthrombogenesis.AnerioselerThrombV aseBio1.2{~d4-24: 13O9一l3l4.lO]BrennanML,PennMS,V an—LenteF,cta1.PrognosticvoJue myeloperoxldaseinpatientsthchestpain[J].NEnIMed.2003.349:1595—1604.11]Balduss,HeesehenCMeinertzT,eta1.Mydopemxldasesemmlevel predictriskinpatientswithacutecoronarysyudromes[.Circulation.2OO3.108:1440—1445.(上接102页)结核性腹膜炎和癌性腹水最为常见,这3种病因所激发的机体免疫功能变化是不同的.有研究采用流式细胞仪对腹水T淋巴细胞亚群进行测定,发现肝硬化腹水CD3,CIM,CD8,CIM/CD8较前两种腹水显着低下.且CD4/CD8明显倒置.3种腹水中CD3,CIM,CIM/CD8以结核性腹膜炎腹水最高.癌性腹水居中;而CD8则以癌性腹水最高.结核性腹膜炎腹水次之.腹水T淋巴细胞亚群反映了腹腔局部的免疫功能.某些研究提示:(1)肝硬化患者腹腔局部的免疫功能明显低下,这可能是患者易并发自发性腹膜炎的一个原因.(2)结核性腹膜炎患者腹膜腔局部免疫力增强,这种差异可能是基于这样的免疫和病理过程:当结核杆菌感染时,首先致敏T细胞,当机体再次受到结核杆菌感染时,首先致敏T细胞,当机体再次受到结核杆菌或抗原物质入侵时与致敏的T细胞互相作用.释放出一系列细胞因子(IL一1,TNF等)及黏附分子(P选择素等),使得淋巴细胞,单核细胞定向腹膜腔内募集.聚集于结核杆菌或抗原所在部位周围,在病理形态学上则是我们常见的淋巴细胞和单核细胞浸润.(3)癌性腹水中的CD8增高,多篇文献报道一致机体对肿瘤细胞的免疫监控过程中,抗原提呈细胞将肿瘤抗原有效地提呈给T淋巴细胞,激活肿瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)是抗肿瘤免疫的关键环节.CD8增高致CIM/CD8降低,降低了患者局部对肿瘤的免疫力.可导致肿瘤细胞不断增殖与扩散.这是因为恶性肿瘤细胞能分泌免疫抑制因子.从而影响T淋巴细胞亚群的平衡状态.抑钮免疫细胞的抗肿瘤免疫应答,肿瘤细胞则逃避了免疫监视.因此,解除肿瘤细胞的免疫抑制作用,优化机体的特异性抗肿瘤免疫的微环境,提高患者机体自身的抗肿瘤免疫应答.是治疗恶性肿瘤的一个有效方法.T淋巴细胞亚群从免爱学角度反映了不同病因腹水的异常,而流式细胞仪检测又相当准确,快捷.本研究提示T淋巴细胞亚群在结核性腹膜炎,肝硬化及癌性腹水存在明显差异,表明版水T游巴细胞亚群检测可用于腹水的鉴别诊断.机体抗结核免疫力主要是T淋巴细胞介导的巨噬绍胞免疫反应.最初入侵的结核菌如在巨噬细胞肉得以繁疆,兰长.其抗原经溶酶体的处理或因笆噬细胞死:丽释出呈递给辅助性T淋巴细胞(CIM)表面特殊的roT淋巴细胞曼仁.使之致敏,并增殖形成单克隆细胞系.刘氏实验结表肺结核患者外局血T淋巴细胞CIM/CD8明显降低,造展期与稳定期,好转期相比变化更明显,说明T淋巴细肥亚誉耍化与病情有关.而本实验发现结核性胸水中巴绍肥比--CIMT淋巴细胞显着升高,此现象可能与结核疠患者钋嗣血.胸水中T淋巴细胞细胞因子(n一1,TNF),粘子一芝择素)表达增加.从而定向肺内募集有关.与癌性胸东相比.结核性胸水|中CIMT淋巴细胞亚群明显升高,蔓可能百量==r= 良,恶性胸水的鉴别。

大鼠结肠组织髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）
活性测定
通过测定大鼠结肠组织髓过氧化物酶MPO活性来评估大鼠结肠组织中性粒细胞的浸润程度，采用分光光度法，根据Bradley的方法略加修改。

操作过程简述如下：
1、用电子天平称取50mg大鼠结肠组织进行匀浆，匀浆液为磷酸缓冲液（50mM，pH6.0，内含0.5%十六烷基溴化胺），在冰上操作，为保证匀浆充分，每个标本匀浆10min；
2、将大鼠结肠组织匀浆液超声粉碎10sec；
3、将大鼠结肠组织匀浆液进行冻融（-80℃/37℃），反复冻融3次；
4、4℃14，000*g离心20min；
5、取离心上清液100μl，再加入2.9ml（50mM，pH6.0，内含0.167mg/ml邻联茴香胺和0.0005%过氧化氢）；
6、立即在460nm处观察记录吸光度的变化，25℃时每分钟降解1μmol的过氧化氢为1个单位髓过氧化物酶活性。

髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)又称过氧化物酶，是一种重要的含铁溶酶体，存在于髓系细胞(主要是中性粒细胞和单核细胞)的嗜苯胺蓝颗粒中，是髓细胞的特异性标志，随着对MPO研究的深入，人们发现MPO基因多态性导致个体对一些疾病易感性的差异，与人类多种疾病的发生、发展密切相关，因此越来越受到国内外学者的重视。

髓过氧化物酶MPO研究1.MPO的结构髓过氧化物酶(MPO)是由中性粒细胞、单核细胞和某些组织的巨噬细胞分泌的含血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一。

MPO是I相代谢酶。

每个酶分子有两个铁素基团，顺磁共振波谱表明血红素中的铁是在甲酰基血红素部分。

MPO的合成是粒细胞进入循环之前在骨髓内合成并贮存于嗜天青颗粒内，外界刺激可导致中性粒细胞聚集，释放髓过氧化物酶(MPO)。

在成熟的粒细胞中，MPO是含量最丰富的糖蛋白，约占外周血多形核中性粒细胞(PMNs)内总蛋白质含量的5%，血液中95%的MPO来源于PMNs。

MPO的相对分子质量为150×103，是由2个亚单位聚合而成的二聚体，每个亚单位又由一条重链(α链,相对分子质量约60×103)和一条轻链(β链,相对分子质量约15×103)所构成。

2个亚单位在α链处由1个二硫键相连。

重链具有亚铁卟啉基团，说明MPO是铁依赖性的。

MPO以3种亚形存在于髓系细胞中，分别为MPOⅠ、Ⅱ、Ⅲ。

3种亚型主要是重链有差异，轻链的差异较小，导致它们在相对分子质量及疏水性等方面不同，3种亚型在功能上的差异还不明确，有待进一步研究。

2.MPO基因及其多态性人髓过氧化物酶基因位于染色体17q23?q24，含有12个外显子和11个内含子，长约14 638 bp，调控其基因表达的是生长因子。

MPO的mRNA在早幼粒细胞的表达水平最高，其次是原始粒细胞、幼稚和原始单核细胞；当细胞分化到成熟时期，MPO基因表达水平迅速下降。

抗髓过氧化物酶抗体相关肾炎的研究进展抗髓过氧化物酶抗体（MPO-ANCA）是指患者的血清中存在抗中性粒细胞质α颗粒内髓过氧化物酶的自身抗体。

MPO-ANCA相关肾炎在任何年龄段都有发病，且不存在男女差异。

本文针对MPO-ANCA相关肾炎的研究进展展开综述。

标签：MPO-ANCA相关肾炎；中性粒细胞；肾毛细血管MPO-ANCA相关肾炎的病例表现主要为肾毛细血管以及细小血管坏死或者是肉芽肿性血管炎导致的急进性肾小球肾炎。

主要临床症状包括有：慢性肾炎、血尿、慢性肾功能不全等。

尤其是在中老年患者中在出现感染症状、贫血、全身怠慢等一些前驱症状后，在发生急进性肾小球肾炎时应对MPO-ANCA相关肾炎的发生予以考虑[1]。

本文针对MPO-ANCA相关肾炎的发生机制、临床症状、临床诊断与治疗以及相关研究进展进行了具体阐述。

详见下文。

1MPO-ANCA相关肾炎的发病机制和特征经临床研究结果显示导致MPO-ANCA的致病作用包括有以下几点：①MPO属于中性粒细胞胞质颗粒中丝氨酸蛋白酶的一种。

M=146000，带有正电荷，可在肾小球基膜上进行种植。

MPO为在中性粒细胞激活过程中一种十分重要的负反馈抑制酶。

能够对中性粒细胞趋化因子以及抑制羟自由基的形成进行灭活。

所以，在MPO-ANCA同MPO进行结合之后，会对MPO功能产生抑制，大量的中性粒细胞被活化，呼吸爆发，脱颗粒，对溶菌酶以及氧自由基进行释放，造成肾小球以及间质发生损伤；②对血管内皮细胞进行激活，造成E-选择素、细胞间黏附分子-l以及血管细胞黏附分子-l等黏附分子、组织因子等的表达明显增加；③对进细胞免疫反应行参与；④直接同MPO进行结合或者是对MPO抑制物血浆铜蓝蛋白的灭活造成干扰，导致其他组织发生损伤。

所以MPO-ANCA 便能够通过对体液免疫进行干扰，又会利用干扰细胞免疫来使病理生理作用得以发挥[2]。

MPO-ANCA相關肾炎为肾小管周围毛细血管、肾脏的肾小球毛细血管、肾细小动脉为主要病变部位的一种血管炎病变。

动物医学进展,2006,27(6):54257Progress in Veterinary Medicine髓过氧化物酶检测奶牛隐性乳房炎研究进展3郭昌明,张乃生3,周昌芳,杨正涛,魏　东,张志刚(吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062)中图分类号:S857.26;S854.43文献标识码:A文章编号:100725038(2006)0620054204摘　要:奶牛隐性乳房炎的检测方法有多种,相比之下,近年来,国外报道的用检测奶样中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)来诊断奶牛隐性乳房炎的方法更符合快速、简便、高灵敏度、高特异性的现代诊断方法要求。

根据乳房炎过程中的生理生化指标的变化特点,可得出奶液中M PO是乳房炎指示物。

奶样中的体细胞数(SCC)和MPO浓度的相关系数值为0.91,奶样中随着SCC的增高, MPO的水平也增高达到2000ng/mL,同时也可分离到大量细菌。

免疫学分析MPO单克隆抗体与奶液中成分乳铁蛋白、乳过氧化物酶、牛血清白蛋白、MPO、淋巴细胞、少量体细胞的乳样之间EL ISA反应没有交叉性,表明M PO分子在乳房炎中具有很高的特异性。

通过对牛奶中M PO的检测来判断乳房内中性粒细胞(PMN)的活性状态,可对奶牛隐性乳房炎做出早期诊断。

关键词:奶牛;隐性乳房炎;髓过氧化物酶;检测奶牛乳房炎是危害奶牛养殖业的主要疾病之一,不仅影响奶牛的产奶量,且严重时使奶牛淘汰。

据报道,国外奶牛乳房炎的发病率约为20%～60%,美国每年因奶牛乳房炎引起的直接经济损失超过20亿美元,而国内奶牛乳房炎的发病率大约是20%～70%,每年造成的直接经济损失超过21亿人民币。

据资料记载,临床型乳房炎占奶牛总发病数的21%～23%,其淘汰牛占奶牛总淘汰数的9%～10%。

奶牛隐性乳房炎流行面广,为临床型乳房炎的1540倍,引起产奶量降低4%～10%,使奶质降低,并易转变为临床型乳房炎。

骨髓细胞过氧化物酶染色标准操作程序1. 检验目的急性白血病类型鉴别；诊断遗传性过氧化物酶缺乏症。

2. 检测原理（包括结果计算）pereira 建立的碘化钾MPO染色法，安全、实用，其原理未明。

一般认为髓过氧化物酶分解H2O2，产生新生态氧，后者氧化KI析出碘，碘与W-G结合，生成颗粒状沉淀定位于细胞浆中。

3. 性能特征无。

4. 标本要求4.1 病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。

凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。

4.2 标本类型：骨髓。

4.3标本容器：洁净载玻片。

4.4 标本存放:4.4.1未检测标本的存放：放于细胞室未检测标本架上。

4.4.2已检测标本的存放：骨髓存片柜，保存10年以上。

4.5 标本运输:室温条件下运输。

4.6 标本拒收标准：参照《采集手册》。

5.仪器和试剂5.1试剂名称：瑞吉氏染色液、过氧化物酶染色液。

5.2试剂成份：5.2.1 氧化瑞吉氏染色液：Wright 染色剂粉 1 gGiemsa 染色剂粉 0.5 g甘油 10 ml无水甲醇 500 ml加30% H202 50～100 ul，储存于棕色瓶，备用。

5.2.2过氧化物酶染色液：100 μl碘化钾溶液和1 ml磷酸盐缓冲液混和。

（1）磷酸盐缓冲液：0.067 mol/ L 磷酸盐，pH 5.8（2）碘化钾溶液：碘化钾 500 mg，蒸镏水50 ml，储存于棕色瓶，备用。

5.3 试剂来源：自配试剂。

6. 环境和安全此试剂为体外诊断用，存在一定的刺激性和毒性；不要入口，避免和眼睛，皮肤或衣服接触，一旦接触，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。

7. 检测前准备在玻片头端贴上标签编号。

8. 校准/定标无。

9. 质量控制无。

10. 标本检测10.1在干燥的骨髓涂片或外周血涂片体尾处用红蜡笔划两条平行线，防止染液溢出；在两条平行线间滴加氧化瑞吉氏染色液，并布满，立即滴加等量过氧化物酶染色液，染色1-2分钟；在显微镜下观察到阳性对照，即用过氧化物酶染色液冲洗；晾干，镜检。